Transg�nesis de animales

La transg�nesis se puede definir como la introducci�n de ADN extra�o en un genoma,

de modo que se mantenga estable de forma hereditaria y afecte a todas las c�lulas
en los organismos multicelulares. Generalmente, en animales, el ADN extra�o,
llamado transgen, se introduce en cigotos, y los embriones que hayan integrado el
ADN extra�o en su genoma, previamente a la primera divisi�n , producir�n un
organismo transg�nico; de modo que el transg�n pasar� a las siguientes generaciones
a trav�s de la l�nea germinal (gametos).

Entre las aplicaciones de los animales transg�nicos se pueden destacar:2?

La posibilidad de estudiar a nivel molecular el desarrollo embrionario y su

regulaci�n.
Manipular de forma espec�fica la expresi�n g�nica in vivo.
Estudiar la funci�n de genes espec�ficos.
Poder utilizar a mam�feros como biorreactores para la producci�n de prote�nas
humanas.
La correcci�n de errores innatos de metabolismo mediante terapia g�nica.
La transg�nesis puede efectuarse siguiendo tres estrategias distintas:

Transg�nesis por microinyecci�n de cigotos

Desde que en 1995 se obtuviera una rata transg�nica , la producci�n de animales
transg�nicos es cada vez m�s cotidiana, existiendo ya animales transg�nicos de las
siguientes especies: rat�n, rata, conejo, cerdo, vaca, cabra y oveja. La t�cnica se
realiza, fundamentalmente por microinyecci�n y se realiza de la siguiente forma:2?

En la primera fase, se a�slan un n�mero grande de �vulos fertilizados. Se consigue

sometiendo a las hembras a un tratamiento hormonal para provocar una
superovulaci�n. La fertilizaci�n puede hacerse in vitro o in vivo. En la segunda
fase, los cigotos obtenidos se manipulan uno a uno y con una micropipeta a modo de
aguja, se introduce una soluci�n que contiene ADN.

En la tercera fase, estos �vulos son reimplantados en hembras que actuar�n como
nodrizas permitiendo la gestaci�n hasta t�rmino. Por �ltimo, tras el destete de los
reci�n nacidos, �stos se chequean, para ver si ha ocurrido la incorporaci�n del
transg�n.

Transg�nesis por manipulaci�n de c�lulas embrionarias

Una estrategia m�s poderosa para la transg�nesis implica la introducci�n de ADN
extra�o en c�lulas embrionarias totipotentes(c�lulas ES) o c�lulas embrionarias
madres (c�lulas EM). Estas c�lulas se toman del interior de la bl�stula en
desarrollo y se pasan a un medio donde se tratan con distintos productos con lo que
se conseguir� que las c�lulas no se diferencien, y se mantiene su estado
embrionario.

El ADN extra�o se introduce en las c�lulas ES mediante diversas t�cnicas,

posteriormente las c�lulas transfectadas son reintroducidas en una bl�stula y �sta
reimplantada en una hembra.

Con esta t�cnica los neonatos son quimeras, o sea, tienen c�lulas de origen
distinto, parte con el material gen�tico original y parte transfectadas ; mediante
el cruce de con aquellas quimeras que hayan incorporado el transg�n en su l�nea
germinal se consiguen animales transg�nicos.3?

Animales transg�nicos basados en cromosomas artificiales

La tecnolog�a actual para transferir genes a trav�s de la l�nea germinal de
mam�feros requiere la integraci�n de ADN ex�geno desnudo en un sitio aleatorio
dentro del genoma del hospedador. Sin embargo, este proceso puede generar efectos
de posici�n indeseables as� como mutaciones perjudiciales. Los cromosomas
artificiales de mam�feros son buenos vectores para la producci�n de transg�nesis,
as� como para la producci�n de prote�nas celulares y aplicaciones en la terapia
g�nica. Esto es as� porque tienen la ventaja de:

Transportar grandes mol�culas de ADN

La posibilidad de replicarse paralelamente al genoma del hospedador, pero sin
integrarse en �l.
Se transmiten a trav�s de la l�nea germinal.
Los cromosomas artificiales basados en ADN sat�lite (SATAC) contienen:

Or�genes de replicaci�n no virales

Tel�meros
Centr�mero
Todo ello para permanecer estables en el cromosoma de la c�lula hu�sped. 60 Mb son
el prototipo de un SATAC e incluyen secuencias de heterocromatina no codificante
entremezcladas con genes marcadores como lac Z (�- galactosidasa) y hph
(higromicina fosfotransferasa).

El procediento para la transg�nesis y el posterior seguimiento de la presencia del

cromosoma artificial ser�a enesencia como sigue:

Aislamiento de SATACs y concentraci�n, mediante citometr�a de flujo, y

posteriormente se recogen por centrifugaci�n.
Se cultivan los embriones receptores, por ejemplo de rat�n
Se realiza una microinyecci�n de los SATACs en los pron�cleos de rat�n, utilizando
micropipetas de vidrio borosilicadas.
Se extrae el ADN gen�mico total y se amplifica por PCR para probar la presencia de
higromicina. Luego se realiza una tinci�n de B-galactosidasa para probar la
actividad del gen lac Z (ambos genes est�n presentes en el SATAC).
Por �ltimo se realiza una hibridaci�n in situ fluorescente (FISH) de los embriones
cultivados con un medio en colcemida (detiene las c�lulas en fase M), con sondas de
ADN sat�lite, lac Z y hph.
Se ha observado que los cromosomas artificiales se pueden transmitir correctamente
durante las mitosis y a la descendencia del individuo transg�nico, permitiendo la
supervivencia de un porcentaje aceptable de individuos. La creaci�n de ratones
transg�nicos con SATAC tambi�n abre amplias aplicaciones en �reas como la gen�mica
funcional y la creaci�n de animales modelo para enfermedades humanas. Y DE GRAN
ACCI�N MUNDIAL Tambi�n se han usado nucle�tidos artificiales sin ninguna de las
bases comunes, que ingresan a E coli por medio de una diatomea. La bacteria
sobrevive y se reproduce manteniendo el nuevo ADN .

Transg�nesis de plantas
Cultivos transg�nicos y resistencia a herbicidas
A nivel mundial, los da�os producidos por las malas hierbas destruyen casi el 10%
de los cultivos, y para evitarlo los agricultores utilizan herbicidas, con el
consiguiente gasto econ�mico y contaminaci�n de aguas y suelos. El generar plantas
resistentes a estos compuestos mejorar�a esta situaci�n, y para lograrlo se
transfieren vectores que transportan genes de resistencia a herbicidas. Un ejemplo
es la resistencia al herbicida glifosato en la soja y ma�z. Esta sustancia es
efectiva con bajas concentraciones, pero es t�xico para el ser humano y los
microorganismos descomponedores del suelo. La acci�n del glifosato es sobre la
enzima EPSP sintetasa, importante en la bios�ntesis de amino�cidos, y por tanto al
inhibir dicha enzima la planta muere. Resulta un gran problema el uso de estos
organismos, ya que significar�a el desarrollo de supermalezas, debido a la
aplicaci�n masiva de este herbicida, lo que con el paso del tiempo genera
resistencia en malezas, adem�s de posibles cruzamientos con plantas similares no
transg�nicas. Muchos pueblos latinoamericanos se encuentran en lucha, debido a la
p�rdida de su ma�z criollo y variedades cultivadas de tiempos remotos, debido a la
gran tasa de cruzamiento de esta especie, ya que el medio de dispersi�n del polen
es el viento.

Actualmente ya se encuentra ma�z y soja resistente a glifosato en mercados de

EE.UU. y otros pa�ses desde su aparici�n en 1996. Desde su introducci�n en 1996, la
soja transg�nica ha tenido un aumento espectacular en cuanto a los cultivos que se
han desarrollado, con consiguientes p�rdidas de suelo y erosi�n, debido al laboreo
y falta de cobertura post-cosecha. Algo parecido ha ocurrido con el ma�z, el
algod�n y la colza, que tambi�n han tenido un elevado desarrollo casi a nivel
paralelo, pero inferior a la soja. De todos estos cultivos, los EE.UU. son los que
producen dos terceras partes de la producci�n mundial de plantas de cultivo
gen�ticamente modificadas.

Incremento nutritivo de los cultivos

Durante los �ltimos 50-100 a�os, la mejora gen�tica de las plantas de cultivo ha
resultado en una mejora importante de la productividad e incremento en las
capacidades nutritivas, pero en los �ltimos a�os se han percibido descensos e
inclusive estancamiento en los niveles productivos, lo que puede ser debido a falta
de pol�ticas de protecci�n de suelos. Un ejemplo de cultivos a los que les han sido
subsanados alguna deficiencia nutricional por biotecnolog�a es el caso del arroz
dorado, con niveles incrementados de B-caroteno, un precursor de la vitamina A.
Para ello se introdujeron tres genes que codificaban enzimas de la ruta
biosint�tica que conduce a la s�ntesis de carotenoides en el genoma de arroz usando
m�todos de recombinaci�n. Dos genes proceden del narciso y uno bacteriano. Tras su
implementaci�n se descubrieron variedades locales de arroz en la india que ten�an
mayor contenido en vitamina A que el propio arroz transg�nico, por lo que se
desestim� su uso. As� mismo existen alimentos m�s ricos en vitamina A que pueden
ser cultivados en regiones secas y pobres, como calabazas.

La deficiencia de esta vitamina se da en muchas partes de Asia y �frica, y cada a�o

son muchos los ni�os que adquieren ceguera permanente debido a esta deficiencia.
Otros estudios est�n encaminados a incrementar los niveles de �cidos grasos, de
antioxidantes y de otras vitaminas y minerales en las plantas de cultivo.

Inquietudes en la utilizaci�n de transg�nicos

La mayor�a de los productos modificados gen�ticamente contienen un gen introducido
que codifica una prote�na que confiere el car�cter deseado (resistencia a
herbicida, a insectos�). �Presenta este hecho consecuencias medioambientales o para
nuestra salud? En general, si las prote�nas no son t�xicas ni al�rgicas no tienen
ning�n efecto fisiol�gico negativo. Por ejemplo, en el caso de consumir el gen EPSP
de resistencia a herbicida junto con la planta, �ste se degradar� r�pidamente. En
Europa, a diferencia de EE.UU. es obligatorio etiquetar los alimentos transg�nicos.
En cuanto a los riesgos, existe un debate constante al existir una gran disidencia
con respecto de si existe o no riesgos. Hasta la fecha no se ha podido unificar una
teor�a ya que no se ha conseguido probar cient�ficamente que los cultivos
transg�nicos posean un riesgo o no.