ACTIVIDAD ENZIMATICA

.Asignatura: Biología celular

RESUMEN
Las enzimas son proteínas globulares que actúan específicamente en reacciones determinadas sin
efectuar la naturaleza de esta, pero si la velocidad en que se da. A partir de esto, se realizó esta
práctica, con el fin de observar la acción de la enzima de la amilasa sobre el almidón, acelerando
la ruptura de los enlaces polisacáridos para la degradación de estos en glucosa, teniendo en cuenta
factores como concentración de enzimas, sustrato y temperatura como el más importante ya que si
se calentaba en exceso se podría desnaturalizar, pero al optimizarse permitió una hidrolisis
adecuada del almidón.

Palabras clave: enzimas, amilasa, desnaturalizar, hidrolisis, reacción.

ABSTRACT
Enzymes are globular proteins that act specifically on certain reactions without effecting the nature
of this, but the speed at which it occurs. From this, this practice was performed, in order to observe
the action of the amylase enzyme on starch, accelerating the breakdown of polysaccharide bonds
for the degradation of these into glucose, taking into account factors such as concentration of
enzymes , substrate and temperature as the most important since if it was heated in excess it could
be denatured, but when optimized it allowed an adequate hydrolysis of the starch.

Keywords: enzymes, amylase, denaturing, hydrolysis, reaction.

INTRODUCCION

Las enzimas son moléculas de naturaleza a una velocidad muy baja, sea
proteica y estructural que catalizan reacciones cinéticamentefavorable, es decir, transcurra a
químicas, siempre que sean una mayor velocidad respecto a la ausencia de
termodinámicamente posibles: una enzima la enzima.
hace que una reacción química que es
Como sucede con todos los catalizadores, las
energéticamente posible, pero que transcurre
enzimas tienen las siguientes propiedades: a)
sólo se precisan en pequeñas cantidades; b)
no sufren cambios irreversibles durante la
reacción, por lo que cada molécula de enzima
puede participar de manera repetida en
reacciones individuales, y c) no tienen efecto
en la termodinámica de la reacción. Este
último punto es muy importante. Las enzimas
no aportan energía para una reacción química,
por lo que no determinan si una reacción es
favorable (exergónica) o desfavorable
(endergónica) desde el punto de vista
termodinámico (Karp 2009)
Con particularidad estas trabajan de una
forma eficaz, se entrelazan y se pliegan una o
más cadenas poli peptídicas, que forman un
pequeño grupo de aminoácidos para elaborar
el sitio activo o lugar donde se adhiere
sustrato para así tener como resultado la
reacción, enzima-sustrato cerrándose así el
ciclo catalítico (Flórez, 2009).
Algunas enzimas solo requiere estructura
aminoácidica para desarrollar su actividad
mientras otras necesitan un cofactor ya que
estos son generalmente estables frente al
calor dado que algunas enzimas pierden su
actividad por calefacción.
Los catalizadores que emplean los químicos
orgánicos en el laboratorio, como el ácido,
platino metálico y magnesio, casi siempre
aceleran las reacciones 100 a 1 000 veces
respecto de la velocidad sin catalizador. En
cambio, por lo general las enzimas
incrementan la velocidad de una reacción 108
a 1013 veces (Karp 2009). Igualmente, la
actividad es afectada por la temperatura
(produce un brusco descenso de la actividad
cuando se alcanza una temperatura crítica), el
pH (influye en la ionización de los grupos
funcionales de los aminoácidos que forman la
proteína enzimática), la concentración de la
propia enzima, del sustrato, y la presencia de
activadores e inhibidores. (Koolman &
Heinrich 2005)
OBJETIVOS
General
 Identificar modelos de una acción
enzimática.
Específicos
 Reconocer la importancia de las
enzimas como catalizadores.
 Demostrar experimentalmente al
acción de las enzimas.
METODOLOGIA
Para empezar se realizó una extracción y
utilización de amilasa, se inició licuando la
cebada pre-germinada (semillas embebidas
por 24horas a T° ambiente), después se RESULTADOS Y DISCUSIÓN
licuo y filtro con una gasa, donde se
Tabla 1: acción de la enzima amilasa casi a
distribuyó este filtrado en cantidades iguales
punto de ebullición
en tubos de centrifuga; por 5 minutos a 2500
r.p.m, las enzimas hidrosolubles aparecen en Tubo Muestra sustrato color producto

el sobrenadante obtenido, luego se tomó dos 1 Amilasa Almidón Marrón Positivo act
0.5%
tubos de ensayo se marcó en A y B, en enzimática

seguida se agregó en c/u ½ ml de 2 Amilasa Almidón Marrón Positivo act

1.0%
sobrenadante, se calienta el tubo B en el enzimática
mechero hasta ligera ebullición (caliente por 3 Amilasa Almidón Mostaza Negativo act
2.0%
paredes cerca al extracto y no desde el fondo) enzimática
Luego a tres tubos de ensay se les adiciono
diferentes concentraciones (0.5% 1.0% 2.0%) Tubo 1 y 2: el lugol es una disolución de yodo
de almidón soluble, después se dejó en reposo molecular I2 y yoduro potásico KI en agua
10 minutos, se aplicó 2-3 gotas de la mezcla destilada con un enlace iónico y soluble en
del tubo A en una lámina portaobjetos y se agua que creo un pH óptimo para la
(fig1)
adiciono 2-3 gotas de lugol. actividad enzimática directamente
Actividad enzimática de la invertida de relacionado con la velocidad de la reacción al
levadura. ser calentada.

Se colocó en un mortero 3 g de levadura y se Tubo 3: El aumento del sustrato acelera la

adiciono 40 ml de agua, posteriormente se
inició con el macerado, una vez terminado se
empezó con el centrifugado por 5 minutos a
1500 r.m.p, después de este lapso de tiempo
se depositó 2 ml del sobrenadante en un tubo
de ensayo A y se agregó de 2 ml de solución
de sacarosa al 1.0% luego se agito suave el
tubo realizando la prueba de fehling a 0, 10,
20 minutos, después se hizo el mismo
procedimiento con la sacarosa
velocidad de la reacción hasta cierto punto
(pasado este punto las enzimas no son
capaces de reaccionar con el soluto sobrante
y se presenta una sobresaturación) o pudo
obtenerse desnaturalización de la enzima en
cuanto a altas temperaturas se refiere, al
momento de pasarla muy cerca al mechero.
 (positivos para actividad enzimática) pero un
poco más lento que los que fueron calentados.

Tubo 3: Hubo una sobresaturación con el

soluto lo que provoco que las enzimas no
fueran capaces de reaccionar con el soluto
sobrenadante.

Tabla 3: prueba de fehling

(fig1)

Tubo Muestra sustrato color producto

A Levadura Fehling Azul Positivo
Tabla 2: acción de la enzima amilasa a A
act
temperatura ambiente
enzimática
Tubo Muestra sustrato color producto B Levadura Fehling Rojo Positivo
B
1 Amilasa Almidó Marrón Positivo act
n 0.5% oscuro enzimática
act
enzimática
2 Amilasa Almidó Marrón Positivo
Tubo A: este tubo contenía sacarosa y agua
n 1.0% oscuro act
destilada, se obtuvo una coloración azul en
enzimática
este tubo debido a uno de los reactivos de
3 Amilasa Almidó Café Negativo
fehling adicionados; no hubo reacción
n 2.0% claro act
enzimática en este ensayo ya que el agua solo
enzimática
es un ingrediente el cual ayuda para llevar a
cabo la actividad enzimática en presencia de
otro elemento

Tubo B: La glucosidasa es una enzima que

cataliza la hidrolisis de enlaces glucosidicos
Tubo 1 y 2: El calentamiento solo influye en
para generar glúcidos menores, esta se lleva a
la velocidad de reacción (excepto en casos en
cabo mediante la disociación de una molécula
que la temperatura es muy elevada y
de agua del medio; el hidrogeno del agua se
desnaturaliza la enzima) al no ser calentada se
une al oxigeno del extremo de una de las
obtuvieron los resultados esperados
moléculas de azúcar; el OH se une al carbono
libre del otro residuo de azúcar, este ensayo
contenía sacarosa, agua destilada y extracto
de levadura, en este tubo se da una actividad
enzimática debido a que la levadura contiene
una enzima (glucosidasa) la cual reduce la
glucosa de la sacarosa mediante la acción del
reactivo de fehling, observándose una
coloración rojiza, según la literatura la
hidrolisis de sacarosa se realiza con la adición
de un ácido (HCl) ya que esta no es reductora,
la acción del ácido la hidroliza parcialmente
la cual descompone la sacarosa en glucosa y
fructuosa (son reductores) donde al adicionar
el reactivo de fehling genera una coloración
rojo ladrillo.
CONCLUCION
Las enzimas pueden hacer en un segundo lo
que tardaría tres a 300 mil años si no las
hubiera. Un hecho aún más notable es que
realizan esta hazaña a temperatura ambiente
y en el pH del interior de la célula. Además,
a diferencia de los catalizadores inorgánicos
que emplean los químicos, las enzimas son
muy específicas en relación con los reactivos
a los que se unen y la reacción que catalizan.
Los reactivos unidos con una enzima se
llaman sustratos.
BIBLIOGRAFIA
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Bioquímica. Editorial Omega. Barcelona
España.
 Gerald Karp, 2009, biología celular y
molecular, 5ª edición, editorial Mc Wrag
Hill
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3ra edición, editorial panamericana
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nacional de México, cuidad de México,
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 Manuela marin, & M M, G P, 2012,
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 descubrimiento y aplicaciones didácticas,
México, universidad nacional autónoma
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