UNIVERSIDAD DEL ATLÁNTICO

FACULTAD DE QUÍMICA Y FARMACIA

PROGRAMA DE FARMACIA

METODOS DE EXTRACCION DEL ADN

PEREZ PANZA DIEGO

FRAGOZO CUETO CARLOS ENRIQUE
ROA FONTALVO MARED VALENTINA
RUEDA RUIZ ANDREA PAOLA

LOURDES VARELA
BIOLOGIA MOLECULAR
II SEMESTRE
BARRANQUILLA, 2016-II

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TABLA DE CONTENIDOS

1. INTRODUCCIÓN

2. FUNDAMENTO TEORICO

2.1. LISIS CELULAR

2.2. ELIMINCACION DE PROTEINAS
2.3. ELIMINACION DE ARN
2.4. REMOCION DE CONTAMINANTES
2.5. PRECIPITACION DEL ADN
2.6. REDISOLUCION DEL ADN

3. METODOS DE EXTRACCION

3.1. EXTRACCION CON GRADIENTES ClCs

3.2. METODO DE SALTING-OUT
3.3. METODO DE EXTRACCION DEL ADN CON YODURO DE SODIO

4. BIBLIOGRAFIA

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 1. INTRODUCCIÓN

El ácido desoxirribonucleico, frecuentemente abreviado como ADN, es un ácido nucleico

que contiene instrucciones genéticas usadas en el desarrollo y funcionamiento de todos los
organismos vivos conocidos y algunos virus, y es responsable de su transmisión hereditaria.
El papel principal de la molécula de ADN es el almacenamiento a largo plazo de
información. Su secuencia de nucleótidos contiene la información necesaria para poder
controlar el metabolismo de un ser vivo.
La extracción de ADN es de gran utilidad en muchas aplicaciones de la medicina ya que
gracias a la extracción podemos saber el material genético de una persona o de un
organismo vivo y de esta manera analizar bien sea enfermedades, mutaciones, entre otros.
La medicina del futuro es la genética y el estudio de la genética comienza analizando el
genoma por ello es importante conocer diferentes métodos que nos permitan extraerlo para
poderlo analizar. La extracción de ADN se maneja en un contexto de etapa analítica, es
decir en una investigación existe una fase pre-analítica que involucra a la extracción de
muestra, su manejo, su transporte (es necesario tomar todos los factores en relación a la
muestra, ya que el medio de conservación dependiendo la muestra puede contaminar el
ADN); hasta una fase post-analítica que engloba a la interpretación y documentación de
resultados. Entonces dependiendo de la materia que se va procesar y su medio de
conservación se deben realizar pre-tratamientos dependiendo de la muestra (fase analítica).
2. FUNDAMENTO TEORICO.

Para poder llevar a cabo la extracción de ADN debemos recurrir a ciertos pasos los cuales
nos permitirán tener solamente el material genético con el que podremos analizar lo que
queremos estudiar, estos pasos a seguir son los siguientes:

 LISIS CELULAR
Para poder obtener el material genético principalmente se debe hacer una
degradación del contenido celular es por esto que ocurre la lisis celular, el cual nos
permitirá ir destruyendo capas como la pared celular, la membrana celular y nuclear
permitiendo así que los ácidos nucleicos se liberen. Para este proceso se coloca la
célula en un medio hipotónico (esto depende del tipo de célula al cual se le quiere
obtener el material genético), se utilizan soluciones básicas o detergentes y por
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 ultimo también se pueden utilizar enzimas el cual nos llevaran al siguiente paso que
es la eliminación de las proteínas.
 ELIMINACION DE PROTEINAS
En este paso debemos separar el ADN de las proteínas y lípidos el cual se hace
mediante enzimas proteolíticas, el paso de lisis celular y el de eliminación de
proteínas se puede optimizar mediante la proteinasa K separando así las proteínas y
los lípidos. Un último proceso enzimático es la utilización de pronasas pero tiene
contaminantes como las nucleasas, entonces para poder llevar a cabo este proceso se
debe mantener el ADN a 37°C unas horas antes de llevar a cabo este proceso. De
esta manera damos inicio a nuestro siguiente paso que es la eliminación del ARN
.
 ELIMINACION DE ARN
La eliminación del ARN se da gracias a que en algunos momentos como en el de la
hibridación por sondas se pueden cometer errores de reconocimiento por que el
ARN está presente. Para eliminar el ARN se utiliza una enzima llamada ARNasa el
cual aísla el ARN del ADN dejándolo libre y dando así paso a la remoción de
contaminantes.
 REMOCION DE CONTAMINANTES
En este paso se tiene el ADN en un micro túbulo en el cual se haya dos capas una
orgánica y una acuosa en donde se encuentra la separación entre el ADN y aquellos
contaminantes que separamos anteriormente, entonces en este paso se descartaran
contaminantes y preservaremos el ADN.
Para que en el micro túbulo nos quedaran las dos fases tanto la acuosa como la
orgánica debimos haber utilizado una solución orgánica que en este caso es el fenol
o el cloroformo el cual atraerá los lípidos y demás contaminantes y quedara
solamente el ADN en la fase acuosa. Para poder separar estas fases debemos hacer
una precipitación del ADN.
 PRECIPITACION DEL ADN
Para poder separas las dos capas debemos someter a centrifugación la solución del
paso anterior, cuando se hace la centrifugación se debe tener en cuenta el agregar
etanol ya que este permitirá que el ADN se mantenga en el fondo del micro túbulo,
pero el etanol debe estar en presencia ya sea de acetato de amonio o de acetato de
sodio en altas concentraciones para que aquellos residuos de la fase orgánica se
separen totalmente y así no vuelvan a unirse con el ADN.
Por último tendremos el ADN pero gracias a todos los procesos anteriormente
explicados no está en sus mejores condiciones por lo que nos lleva al último paso
que es la redisolución del ADN.
 REDISOLUCION DEL ADN
En este último paso tendremos que hidratar el ADN para que este en sus mejores
condiciones y así poder analizar bien el ADN. Para esta hidratación del ADN se

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 utiliza una base amortiguadora en mínimas concentraciones y en mínimas
cantidades ya que si no se tiene cuidado se puede degradar el ADN y de tal manera
perder todo el proceso que se ha hecho hasta ahora. La base que se utiliza
normalmente es una base TRIS o EDTA con un pH de 8.

Hay organelos los cuales también tiene ADN como lo son las mitocondrias y los
cloroplastos el cual son muy distintos en comparación al ADN nuclear, estos se diferencia
gracias a la densidad ya que uno es más grande que el otro y la presencia de nucleótidos no
es la misma.
3. METODOS DE EXTRACCION

 EXTRACCION CON GRADIENTES ClCs

En esta extracción aprovecharemos las características del ADN, en este caso la
densidad.
Para empezar con este método de extracción principalmente se debe hacer una lisis
celular mediante métodos mecánicos o químicos y la mezcla se someterá a
centrifugación durante varias horas en presencia de bromuro de etidio siendo este un
colorante que permitirá que el ADN tome un color fluorescente y así podemos
observarlo. Se obtienen varias capas que pueden separarse y recuperar el ADN
purificado.
 METODO DE SALTING-OUT
En este método extraeremos el ADN con grandes concentraciones de sal, una vez
provocada la lisis celular se eliminaran las proteínas y otros contaminantes del ADN
mediante la adición de sal la cual nos permitirá que la solubilidad de las moléculas
orgánicas cambie con respecto a la fase acuosa y así no se podrán unir nuevamente.
En este método se utiliza frecuentemente la proteinasa K, el TRIS-Cl. para regular
el pH y otros reactivos químicos que aseguren la total inactivación de las enzimas
que pueden actuar sobre las moléculas de ADN. El precipitado que se formara se
separara por centrifugación y extraer el ADN de la fase acuosa mediante la adición
de alcohol por medio de la precipitación.

 MÉTODO DE EXTRACCIÓN DE ADN CON YODURO DE SODIO

Este es uno de los métodos más fáciles y rápidos de utilizar ya que no es necesario
hacer tantos pasos como el del fundamento teórico y todo el procedimiento se
utiliza en un solo micro túbulo. Este método utiliza principalmente el yoduro de
sodio el cual provoca la lisis celular, rompe la capa de hidratación que rodea el
ADN y logra que las cargas negativas de los grupos fosfatos del ADN queden más
expuestas. Cuando el tratamiento haya terminado solo se deben agregar enzimas
como la proteinasa K para eliminar los lípidos y la centrifugación se hace en el
mismo micro túbulo.

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4. BIBLIOGRAFIA

 http://www.wakolatinamerica.com/blog-reactivos/post/10-metodos-de-extraccion-
de-adn/
 https://www.youtube.com/watch?v=aHO981sff-M&t=1185s