INTRODUCCION

Una extensión sanguínea consiste en recubrir parcialmente una porta con una
gota de sangre, de tal manera que las células de ésta se dispongan formando
una sola capa de ellas. Esto puede hacerse manual o automáticamente. Lo
último se realiza mediante un aparato (spinner) que centrifuga rápidamente la
porta con la sangre depositada en su centro. Con este aparato se obtienen unos
frotis que presentan una distribución celular muy homogénea.

OBJETIVO

Aprender a realizar extensiones sanguíneas, ya que van a ser una

herramienta fundamental en el estudio y diagnóstico de muchas
enfermedades y anomalías hematológicas.

FUNDAMENTO

Una extensión se conoce también por el nombre de frotis sanguíneo. La

precisión de la evaluación morfológica de lo que vamos a observar
dependerá de la corrección con que hayamos hecho el frotis, por lo que
debemos evitar que sea, ni demasiado fino ni demasiado grueso, para
que permita una uniforme distribución de los componentes celulares.

Existen tres métodos para realizar el frotis sanguíneo:

 Método de los dos cubreobjetos

 Método por centrifugación

 Método de los dos portaobjetos

El método de los dos cubreobjetos proporciona una extensión con

distribución uniforme de los leucocitos. Las desventajas de este método
son:

1. Dificultad para dominar la técnica

2. Fragilidad del cubreobjetos

3. Dificultad para teñirlo.

El método por centrifugación usa una fuerza de centrifugación para
producir una sola capa de células con leucocitos y plaquetas distribuidos
uniformemente. Este método requiere de equipo especial y tiene el
potencial de crear aerosoles que representan riesgos biológicos.

El método de los dos portaobjetos, llamado también en cuña, es el más

utilizado en la práctica diaria del laboratorio. Aunque la distribución de
los leucocitos no es tan uniforme como en el método de los dos
cubreobjetos, la técnica se domina con facilidad, los frotis son menos
frágiles y se pueden manipular más fácilmente.

Puede usarse sangre entera anticoagulada con EDTA o sangre capilar de

flujo libre. Si se emplea EDTA, los frotis deben prepararse antes de la
segunda hora siguiente a la recolección. Es necesario mezclar bien la
muestra antes de prepararlos. Para realizar el extendido se requieren
portaobjetos limpios de vidrio.

Nosotros vamos a utilizar el método de los dos portas.

MATERIAL UTILIZADO

 Capilar no heparinizado

 2 portas bien limpios

 Guantes desechables
 Rotulador de vidrio

 Lanceta, si vas a tomar una muestra propia (nosotros hemos

usado sangre del banco de hemodonación)

 Tubo de ensayo Gradilla

 Pipeta pasteur
OBTENCIÓN DE LA MUESTRA

Si la muestra va a ser propia, limpiamos la zona a pinchar con un

desinfectante y utilizamos la lanceta, con el mismo método que se ha
descrito en las prácticas anteriores.

Se desecha la primera gota, pues suele estar contaminada y con ayuda

de un capilar, extraemos la muestra que necesitemos.

Nosotros hemos utilizado sangre de una bolsa de hemodonación, por lo

que utilizaremos un tubo de ensayo para contener la muestra, el cual
dejaremos sobre una gradilla. Antes de verter la sangre, la movemos un
poco, como intentando mezclarla de forma suave. Introducimos el tubo
de la bolsa en el tubo de ensayo y elevamos la bolsa por encima del tubo,
para que caiga por gravedad por sí misma, no hace falta apretar la bolsa.
Una vez tenemos la cantidad de sangre necesaria, basta con bajar la bolsa
y cerrar el tubo con unas pinzas de mosquito.

Con ayuda del capilar depositamos una gota de sangre sobre un porta a
unos 2cm del extremo, a ser posible que sea esmerilado, para después
poder anotar el nombre o algún otro dato.
TÉCNICA DE EXTENSIÓN DE LA MUESTRA

 Con una mano sujetamos el porta soporte por los bordes.

 Colocamos un extremo del porta extensor un poco por delante de

la gota de sangre, formando un ángulo aproximado de 45º con el
porta soporte.

 Desplazar el porta extensor despacio hacia atrás, hasta que entre

en contacto con la gota de sangre.

 Dejamos que la gota se extienda por la base del porta extensor,

sin levantar éste en ningún momento y sin dejar que la sangre
llegue a los bordes.

 Deslizar el porta extensor hacia delante, de forma firme y

uniforme, a velocidad media, recorrido que no debe llegar al final
del porta soporte

 Secamos la extensión agitando el porta en el aire.

 Anotamos el nombre del donante en el extremo esmerilado del

porta soporte.

RESULTADO

Tras la realización del frotis podemos observar las células sanguíneas

sin teñir. La calidad de lo observado dependerá de la calidad del frotis
realizado.
OBSERVACIONES

1. Se han tenido que realizar muchas extensiones hasta conseguir

hacer un frotis decente para ser observado al microscopio óptico.

2. La gota de sangre que depositaba el capilar sobre el porta era

escasa para realizar la extensión. Hemos optado por utilizar una
pipeta parteur para conseguir la muestra de sangre necesaria,
aunque esta deposita una gota mayor de la necesaria y hay que
controlar la cantidad de sangre vertida.

EJERCICIOS

1. ¿Con qué sustancia se anticoagula la sangre venosa cuando se

pretende hacer una extensión? Con EDTA (ácido etilendiaminoteta
acético)

2. ¿Cuánto tiempo puede pasar, como máximo, desde la extracción de

la sangre hasta la realización del frotis? 3 horas

3. ¿Qué ángulo debe formar el porta extensor con el de

soporte? Aproximadamente 45º.