El metabolismo del aminoácido de cadena ramificada (BCAA)

del tejido adiposo modula los niveles de BCAA en circulación

Mark A. Herman , Pengxiang She , Odile D. Peroni , Christopher J. Lynch , and
Barbara B. Kahn
Recibido para publicación, 13 de octubre de 2009 y en forma revisada, 18 de enero de 2010
Publicado, JBC Papers in Press, 21 de enero de 2010, DOI 10.1074 / jbc.M109.075184

De la División de Endocrinología, Diabetes y Metabolismo, el Centro Médico Beth

Israel Deaconess y el Departamento de Medicina de la Escuela de Medicina de
Harvard, Boston, Massachusetts 02215 y el Departamento de Fisiología Celular y
Molecular de la Facultad de Medicina de la Universidad del Estado de Pennsylvania,
Hershey, Pensilvania 17033
Mientras que el papel del tejido adiposo en la homeostasis de la glucosa y los lípidos es
ampliamente reconocido, su papel en la proteína sistémica y el metabolismo de los
aminoácidos es menos apreciado. Los experimentos in vitro y ex vivo sugieren que el
tejido adiposo puede metabolizar cantidades sustanciales de aminoácidos de cadena
ramificada (BCAA). Sin embargo, el papel del tejido adiposo en la regulación del
metabolismo de BCAA in vivo es controvertido. El interés en la contribución del tejido
adiposo al metabolismo de BCAA se ha renovado con observaciones recientes que
demuestran una regulación a la baja de las enzimas de oxidación de BCAA en el tejido
adiposo en humanos obesos y resistentes a la insulina. Usando el análisis de
enriquecimiento de conjuntos de genes, observamos alteraciones en la expresión de la
enzima BCAA del tejido adiposo causadas por alteraciones genéticas selectivas del
tejido adiposo en la expresión del transportador de glucos GLUT4. Mostramos que la
tasa de oxidación de BCAA en tejido adiposo por mg de tejido de ratones normales es
mayor que en el músculo esquelético. En ratones que sobreexpresan GLUT4
específicamente en el tejido adiposo, observamos la regulación por disminución
coordinada de las enzimas metabolizadoras de BCAA selectivamente en el tejido
adiposo. Esto disminuye las tasas de oxidación de BCAA en el tejido adiposo, pero no
en el músculo, en asociación con el aumento de los niveles de BCAA circulantes. Para
confirmar la capacidad del tejido adiposo para modular los niveles de BCAA circulantes
in vivo, demostramos que el trasplante de tejido adiposo normal en ratones que son
globalmente defectuosos en el metabolismo periférico de BCAA reduce los niveles de
BCAA circulante en un 30% (ayuno) -50% (estado alimentado). Estos resultados
demuestran por primera vez la capacidad del tejido adiposo para catabolizar los BCAA
circulantes in vivo y que la regulación coordinada de las enzimas BCAA de tejido
adiposeticular puede modular los niveles de BCAA circulantes.
Los aminoácidos de cadena ramificada (BCAA)2, leucina, isoleucina y valina, son tres
de los nueve aminoácidos esenciales y son relativamente abundantes en el suministro
de alimentos y representan el 20% de la ingesta total de proteínas (1). En contraste con
los otros 17 aminoácidos, que son predominantemente metabolizados en el hígado, los
BCAA se metabolizan mal durante el primer paso a través del hígado, ya que el hígado
expresa solo niveles bajos de la cadena mitocondrial de aminotransferasa ramificada
(BCAT2 o BCATm), la primera enzima en el catabolismo de los BCAA en la mayoría de
los tejidos periféricos (2, 3). Por lo tanto, los BCAA están en una posición única entre
los aminoácidos para señalar a la periferia y al cerebro el contenido de aminoácidos de
una comida. Los BCAA circulantes, que actúan como señales de nutrientes, regulan la
síntesis y degradación de proteínas y la secreción de insulina, y se han relacionado con
el control del sistema nervioso central de la ingesta de alimentos y el balance energético
(4–7). Nuestro conocimiento de los mecanismos fisiológicos que regulan los niveles de
BCAA en circulación sigue siendo incompleto. En este estudio, proporcionamos
evidencia de que el tejido adiposo contribuye a la regulación de los BCAA circulantes.
En las últimas dos décadas, el tejido adiposo ha emergido como un órgano endocrino
clave y un regulador de la homeostasis del combustible integrado. Si bien su papel en
la homeostasis de la glucosa y los lípidos es ampliamente reconocido, su papel en la
proteína sistémica y el metabolismo de los aminoácidos es menos apreciado. Sin
embargo, una considerable evidencia in vitro y ex vivo sugiere que el tejido adiposo es
capaz de metabolizar cantidades significativas de BCAA (8, 9). Sobre la base de
mediciones ex vivo del flujo de leucina en tejidos de ratas, Rosenthal et al. (9) estimaron
que el tejido adiposo es solo superado por el músculo esquelético en su capacidad para
catabolizar los BCAA, y que las capacidades del músculo esquelético y del tejido
adiposo son 6 a 7 veces mayores que el hígado, teniendo en cuenta las masas relativas
de diferentes tejidos. Sin embargo, un estudio que examinó específicamente la
capacidad de las dos primeras enzimas (BCAT2 y el complejo de cadena cetoácido
deshidogenasa (BCKDHC)) requerido para la oxidación de BCAA en diferentes tejidos
descartó el tejido adiposo como un sitio cuantitativamente significativo del catabolismo
de BCAA en roedores, primates y los humanos (10). De manera similar, no se pudo
detectar la captación neta de BCAA en la grasa inguinal de la rata mediante muestreo
por microdiálisis o diferencias arteriovenosas (11). Por lo tanto, la importancia
cuantitativa del catabolismo de BCAA en tejido adiposo in vivo no estaba clara. En el
presente estudio, abordamos este tema.

Los informes de niveles elevados de BCAA en suero (12, 13) y observaciones recientes
que muestran una regulación a la baja de la expresión de las enzimas metabolizadoras
de BCAA en tejido adiposo en obesidad y estados resistentes a la insulina (7, 14) han
renovado el interés en la posible importancia del metabolismo de BCAA en tejido
adiposo. Es de destacar que el tejido adiposo se ha considerado como el sitio principal
donde se almacenan los BCAA en exceso en forma de lípidos (12). El tejido adiposo
convierte de manera eficiente los esqueletos de carbono BCAA en ácidos grasos recién
sintetizados ex vivo (9). Además, la insulina aumenta la tasa de conversión de leucina
a lípidos en explantes de tejido adiposo, pero no en músculo o hígado (9). Los niveles
elevados de BCAA circulantes y la expresión reducida de las enzimas de oxidación de
BCAA en tejido adiposo en individuos obesos se normalizan después de la cirugía de
bypass gástrico y la pérdida de peso (15). 359/5000
Un estudio reciente de gemelos monocigóticos que eran discordantes para la obesidad
demostró una regulación a la baja de las enzimas de oxidación BCAA en el gemelo
obeso, que se correlacionaba con niveles elevados de insulina en ayunas y resistencia
a la insulina (14). La relación causal potencial entre la expresión de la enzima BCAA
alterada y la obesidad y la resistencia a la insulina es de gran interés
Previamente hicimos ratones con sobreexpresión específica de tejido adiposo (AG4OX)
(16) o knock-out (AG4KO) (17) del transportador de glucosa estimulado con insulina,
GLUT4, porque GLUT4 está regulado de forma selectiva en el tejido adiposo de la
obesidad y el tipo 2. humanos diabéticos (18). Estos ratones tenían alteraciones
recíprocas en la homeostasis de la glucosa. En el curso de estudios para investigar los
mecanismos fisiológicos mediante los cuales la expresión de GLUT4 en el tejido adiposo
regula la homeostasis sistémica del combustible, observamos de forma inesperada la
regulación hacia abajo y hacia arriba de las enzimas metabolizadoras de aminoácidos
de cadena ramificada de forma selectiva en el tejido adiposo de ratones AG4OX y
AG4KO. Respectivamente. En los estudios actuales, hemos aprovechado la regulación
descendente selectiva de la expresión de la enzima BCAA en ratones AG4OX para
examinar la importancia fisiológica de la oxidación de BCAA en tejido adiposo in vivo.
También utilizamos un segundo modelo de ratón genético globalmente defectuoso para
el catabolismo de BCAA periférico para investigar si el tejido adiposo es capaz de
modular los niveles de BCAA circulantes. Nuestros datos muestran por primera vez que
el tejido adiposo in vivo puede modular los niveles de BCAA en circulación.

PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTAL:
Estudios en animales: la generación y la caracterización metabólica inicial de los ratones
con sobreexpresión de GLUT4 específicos de tejido adiposo (AG4OX) y los ratones
knockout para GLUT4 específico de tejido adiposo (AG4KO) se describieron
anteriormente (16, 17).
Los ratones se alojaron en el Centro Médico Beth Israel Deaconess con un ciclo de luz
tenue de 14/10 y se alimentaron con alimento estándar (Fórmula 5008) a voluntad.
Todos los estudios se realizaron en compañeros de camada de edad y sexo. Todas las
colecciones de sangre se realizaron por sangrado de la vena de la cola.
Se midieron los niveles seriales de aminoácidos en plasma en AG4OX de 4 meses de
edad, y controles de tipo salvaje (n 10). Las hemorragias se realizaron al inicio (8 AM) y
2 hy 6 h después de la eliminación de los alimentos. Para la evaluación de la
señalización de mTOR, se inyectó por vía intraperitoneal rapamicina (10 mg / kg de peso
corporal, LC Labs) o vehículo (2% de EtOH en solución salina tamponada con fosfato)
en AG4OX hembra de 2 meses y hembras de camada 5 h después eliminación de
alimentos. Una hora más tarde, se inyectó insulina (10 unidades / kg de peso corporal)
o solución salina normal a través de la vena de la cola. Los ratones se sacrificaron por
decapitación 5 min después de la inyección de insulina. Se recogió el plasma y se
recogieron los tejidos, se congelaron instantáneamente en nitrógeno líquido y se
almacenaron a 80ºC para su procesamiento. BCAT2 / ratones se alojaron en Penn State
University College of Medicine. Antes de la cirugía, los ratones / ratones BCAT2 se
asignaron al azar a un grupo de control de operación simulada o a un grupo de trasplante
de tejido adiposo (n 6–8 por grupo). El trasplante de 750 mg de grasa perigonadal de
compañeros de camada de tipo salvaje o cirugía simulada se realizó bajo anestesia con
halotano como descrito anteriormente a los 2 meses de edad (19). Los ratones se
alojaron individualmente después de la cirugía y se dejaron recuperar durante 2
semanas antes de la experimentación adicional. Tanto el ratón simulado como el
transplantado obtuvieron acceso libre tanto al chow normal (NC, Harlan 2018) como a
una dieta libre de BCAA de aminoácidos purificados (-BCAA, Dyets 510081). Los BCAA
de plasma, la ingesta de alimentos y la composición corporal se midieron 2 semanas
después de la cirugía (10 semanas de edad). Los estudios con ratones se realizaron de
acuerdo con las pautas federales y fueron aprobados por el Comité Institucional de
Vehículos y Uso de Animales.
Análisis de micromatrices: se extrajo el ARN total del tejido adiposo del epidídimo
utilizando el RNeasy Mini Kit de Qiagen de tres ratones de cada uno de los cuatro
genotipos: compañeros de camada transgénicos aP2-Cre (controles para ratones
AG4KO), ratones AG4KO; Compañeros de la camada de FVB (controles para AG4OX)
y AG4OX. El ARN de cada ratón se hibridó en una micromatriz Affechetrix MG-U74-A.v2
Genechip. La hibridación y el análisis del chip del gen Affymetrix se realizaron en la
Instalación Genómica Básica del Centro Médico Beth Israel Deaconess. Los resultados
de la matriz se analizaron utilizando el software DChip (20). El análisis de la expresión
del genoma de los datos de micromatrices se realizó utilizando el análisis de
enriquecimiento de conjuntos de genes (GSEA) (21).
Extracción de ARN y PCR cuantitativa en tiempo real: Los tejidos se recolectaron de
ratones hembra de 5 semanas de edad en el estado alimentado (8 a.m.), se congelaron
instantáneamente en nitrógeno líquido y se almacenaron a 80 ° C para su
procesamiento. El ARN total se extrajo de tejido congelado con reactivo TRI (Molecular
Research Center, Inc.). La PCR en tiempo real se realizó utilizando la mezcla maestra
RT-PCR de un solo paso de TaqMan (Applied Biosystems) en un termociclador
Mx3000P (Stratagene). El software Mx3000P se utilizó para calcular el umbral del ciclo
para cada reacción. Los niveles de expresión relativos se determinaron utilizando el
método Ct comparativo con la normalización de los niveles de expresión del gen objetivo
a 18s. Los conjuntos de cebadores y sondas de Assay-on demand (Applied Biosystems)
son: Bcat2 Mm00802192_m1; BckdhaMm00476112_m1; DbtMm00501651_ m1; Dld
Mm00432831_m1; BCKDK Mm00437777_m1.
Análisis de la composición corporal: La composición corporal en serie se midió en
ratones AG4OX hembra de 7 meses de edad y compañeros de camada de tipo salvaje
mediante absorciometría de rayos X de energía dual (DEXA) entre las 8 y las 10 a.m.
durante tres días consecutivos con anestesia halotánica. La comida se retiró siguiendo
la medición inicial de la composición corporal y durante las siguientes 48 h. Se
proporcionó acceso gratuito al agua durante todo el ayuno. Para BCAT2 / ratones, la
composición corporal se midió por RMN (Echo Medical Systems).
Oxidación de valina en explantes de tejido: La oxidación de valina y la acumulación de
KIV en explantes de tejido se midieron utilizando un protocolo adaptado de Joshi et al.
(22). Se extirparon, pesaron y colocaron en el matraz Erlenmeyer (10 ml) 1,5 ml de
Krebs-Ringer-phosphate- Krebs-Ringer-phosphate- Tampón HEPES (pH 7,4). El
tampón se complementó con glucosa 5 mM, valina 1 mM que contenía 160 Ci / mmol
[1-14C] valina. Para muestras de tejido adiposo, el tampón también se complementó con
adenosina 200 nM y BSA al 2% (p / v) (libre de ácidos grasos). Para las muestras de
músculos, el tampón se complementó con BSA al 0,2% (p / v). Las muestras de tejido
adiposo se cortaron en trozos de 1 mm. Los matraces se sellaron con tapones de goma
equipados con pocillos centrales colgantes (Kontes, Vineland, NJ) y se incubaron con
agitación a 37 ° C. La reacción se terminó después de 1 h con inyección de 100 l de
ácido perclórico al 60% (p / v) en la mezcla de reacción y 300 l de hidróxido de
benzotenio 1 M en los pocillos centrales para recoger el 14CO2 producido. Después de
20 minutos, los matraces se volvieron a sellar con tapones de goma nuevos equipados
con pocillos centrales colgantes. Se inyectó peróxido de hidrógeno (350 l, 30% p / v) en
la mezcla de reacción y 300 l de hidróxido de benzotenio 1 M en los pocillos centrales
para recoger el 14CO2 generado por la descarboxilación de -coisovalerato.
Western Blotting: se homogeneizaron alícuotas de tejidos congelados en hielo en un
tampón de ensayo de radioinmunoprecipitación suplementado con agentes
conservantes de fosfo y antiproteasa (fluoruro de sodio, pirofosfato de sodio,
ortovanadato de sodio, PMSF, aprotinina y leupeptina). La concentración de proteína se
ensayó utilizando el ensayo BCA. Se cargaron cantidades iguales de proteína y se
transfirieron a membranas de nitrocelulosa. Las membranas se probaron con
anticuerpos contra BCKDHC (proporcionado por el Dr. Robert Harris), fosfo BCKDH E1
(como se publicó anteriormente (23)), p70 S6 quinasa (proporcionada por el Dr. John
Blenis) y PI3 quinasa p85 (Upstate). Los resultados se cuantificaron utilizando el aparato
y el software de imágenes quimioluminiscentes GeneGnome (Syngene).
Ensayo de actividad de la quinasa ribosomal S6: los tejidos se homogeneizaron en un
tampón de lisis que contenía Tris 20 mM. pH 7.4, Nonidet P-40 al 1%, glicerol al 10%,
EDTA 2 mM, pirofosfato de sodio 10 mM, fluoruro de sodio 50 mM, DTT 1 mM,
ortovanadato de sodio 1 mM, PMSF 1 mM y mezcla de inhibidores de la sigma proteasa.
La concentración de proteína se determinó utilizando el ensayo de proteína DC con BSA
como estándar (Bio Rad). El lisado (200 g) se inmunoprecipitó utilizando un anticuerpo
anti-p70 quinasa S6 (proporcionado por el Dr. John Blenis) y la proteína A Sepharose.
Los inmunoprecipitados se lavaron con 0,5 ml de tampón de lisis, tampón A (NaCl 1 M,
Tris 10 mM, pH 7,4, Nonidet P 40 al 0,1%, DTT 2 mM, fluoruro de fenilmetilsulfonilo 1
mM (PMSF)) y tampón B (150 mM). NaCl, Tris 50 mM (pH 7,4, DTT 2 mM, PMSF 1 mM).
La actividad de la cinasa hacia un péptido GST-S6 recombinante (32 aminoácidos
finales de S6 ribosomal) en inmunoprecipitados lavados se ensayó en una reacción que
contenía Tris 200 mM, pH 7.4, 100 mM de MgCl2, 1 mg / ml de BSA, 0,3 g / l de péptido
GST-S6, 50 M ATP sin marcar, 0,1 Ci [- 32P] ATP / l de volumen de reacción durante
10 minutos a 30 ° C. La reacción se detuvo adición de 2 \ mu l de tampón Laemmli que
contenía DTT 200 mM. Las reacciones se sometieron a SDS-PAGE al 18%. Los geles
se tiñeron en azul de Coomassie}, se destinaron, se secaron y la cantidad de 32P
incorporada en GSTS6 se cuantificó por fosforilación de imagen (Molecular Dynamics
Storm 860).
Procedimientos analíticos: los niveles de aminoácidos en plasma se midieron mediante
HPLC en el Centro de fenotipado metabólico del ratón Vanderbilt o mediante un ensayo
enzimático como se describió anteriormente (15).
Análisis estadísticos: todos los valores se dan como medios S.E. Las diferencias entre
dos grupos se evaluaron utilizando las pruebas t de Student de dos colas no pareadas,
a menos que se indique lo contrario en el texto y las leyendas de las figuras.
RESULTADOS:
Regulación de las enzimas metabolizadoras de BCAA en el tejido adiposo:
Inicialmente, intentamos comprender los mecanismos por los cuales los cambios en el
flujo de glucosa en el tejido adiposo afectan la función de los adipocitos y el metabolismo
sistémico del combustible. Realizamos análisis globales de expresión génica en tejido
adiposo perigonadal de ratones AG4KO (que son resistentes a la insulina) y AG4OX
(que tienen una mayor tolerancia a la glucosa) (24). El análisis de enriquecimiento de
conjuntos de genes reveló que las enzimas de oxidación de BCAA se regulan
coordinadamente de forma descendente (Fig. S1A suplementaria) y se regulan de forma
ascendente (Fig. S1B suplementaria) en AG4OX y AG4KO en tejido adiposo,
respectivamente (21). De hecho, este fue el conjunto de genes más altamente regulados
en el tejido adiposo de ratones AG4OX y AG4KO entre los 522 conjuntos de genes en
la base de datos (datos no mostrados).
BCAT2 cataliza la conversión reversible en equilibrio de los BCAA en sus respectivos
cetoácidos (gen 1, Fig. 1A y B). El complejo de la cadena ramificada cetoácido
deshidrogenasa (BCKDHC) (Fig. 1, A y B, genes 2 a 5) es un gran complejo
multisubunitario que cataliza el segundo paso, la descarboxilación oxidativa de los
cetoácidos a sus acil CoA ésteres. La descarboxilación es irreversible y se considera
limitante de la velocidad (25). Los cambios en la expresión de las enzimas oxidantes de
BCAA en el tejido adiposo de ratones AG4OX son relativamente pequeños
individualmente, pero se distribuyen a lo largo de la ruta y en conjunto son
estadísticamente significativos por el análisis de enriquecimiento de conjuntos de genes.
Q-PCR (Fig. 1C) demostró reducciones de 40 a 60% en BCAT2 y las subunidades
BCKDHC, BCKDHA y Dbt, en el tejido adiposo AG4OX. Dld, que codifica la subunidad
dihidrolipoamida deshidrogenasa de la BCDKHC y es compartida por los complejos
piruvato deshidrogenasa y cetoglutarato deshidrogenasa, se mantuvo sin cambios,
demostrando especificidad para enzimas únicas para la ruta de metabolización de
BCAA. La expresión de la enzima BCAA en el músculo gastrocnemio y el hígado no se
modificó (Fig. 1C). Encontramos que la expresión de la enzima BCAA fue mayor en la
grasa perigonadal en comparación con el gastrocnemio y el hígado. En el hígado, la
expresión de BCAT2 fue muy baja, en consonancia con la ausencia casi informada de
esta actividad enzimática en el hígado (2, 26).
La cadena ramificada ceto ácido deshidrogenasa cinasa (BCKDK) fosforila e inhibe el
complejo BCKDH. La regulación de la expresión de BCKDK es un mecanismo clave
para la regulación nutricional y hormonal del flujo oxidativo de BCAA, particularmente
en los músculos y el hígado (28). La figura 1D muestra que la expresión de BCKDK en
el músculo gastrocnemio es 6 veces más alta que en la grasa perigonadal y es casi
indetectable en el hígado, lo que es consistente con estudios previos que indican que el
BCKDHC, el objetivo de BCKDK, está prácticamente inactivo en el músculo y casi
completamente activo en el hígado. De los animales picados (25). Es importante
destacar que la expresión de BCKDK no se modificó (Fig. 1D) en la grasa, hígado y
músculo perigonadales AG4OX. Estos resultados indican que la regulación del flujo
oxidativo de BCAA en el tejido adiposo (ver Fig. 2A) puede ocurrir independientemente
de los cambios en la expresión de BCKDK, que se cree que es el mecanismo clásico
mediante el cual los nutrientes y las hormonas regulan el flujo oxidativo de BCAA en
otros tejidos.
Para determinar si los cambios coordinados en la expresión de la enzima BCAA resultan
en cambios en las tasas de oxidación de BCAA, medimos la oxidación de valina en
explantes de tejido de AG4OX (30). Aunque la proteína E1 total es más baja en el tejido
adiposo AG4OX, la proporción de fosforilación de E1 con respecto a E1 total no se altera
(Fig. 2B). No se observaron cambios en la proteína E1 total, E1 fosforilada, o la
proporción de fosforilación de E1 a E1 total en el músculo sóleo o EDL (Fig. 2, C y D).
Si BCKDHC es un límite de velocidad para el flujo a través de la vía de oxidación de
BCAA, se esperaría que el aumento de la acumulación del sustrato de BCKDHC
acompañara una disminución en la actividad de BCKDHC. Sin embargo, la acumulación
de KIV se redujo 4 veces en los explantes de tejido adiposo AG4OX en comparación
con el control en ausencia de IC (Fig. 2A). Esto sugiere que los pasos anteriores a
BCKDHC son parcialmente determinantes de la tasa de oxidación de valina en el tejido
adiposo. Estos resultados indican un nuevo mecanismo para la regulación de la
oxidación de BCAA en el tejido adiposo, es decir, alteraciones en la expresión de las
enzimas BCAA, en contraste con la fosforilación de BCKDHC alterada, que es el
principal mecanismo que regula la oxidación de BCAA en el músculo y el hígado.
La sobreexpresión de GLUT4 en el tejido adiposo regula el metabolismo de las
proteínas, los niveles de BCAA y la señalización de mTOR: en los ratones AGOX, el
nivel inicial de glucosa alimentada es menor y en los ratones y controles. El ácido
cloroisocaproico (IC) es un inhibidor irreversible de BCKDK que conduce a una rápida
desfosforilación y activación de BCKDHC (29). La oxidación de valina en ausencia de
IC refleja la oxidación basal de valina, mientras que IC provoca una estimulación máxima
de la oxidación de valina. En comparación con los controles, la oxidación de la valina
basal y la estimulación máxima fue 6,6 y 4 veces menor, respectivamente, en el tejido
adiposo perigonadal de ratones AG4OX (Fig. 2A). La tasa basal de oxidación de valina
en el tejido adiposo por mg de peso del tejido húmedo fue 2 veces mayor que en el
músculo oxidativo (sóleo) y 6 veces mayor que en el músculo glicolítico (EDL). No vemos
regulación de la oxidación de la valina en el músculo sóleo o EDL de ratones AG4OX,
excepto por una pequeña disminución en el sóleo en presencia de IC. Incluso teniendo
en cuenta las cantidades relativas de masa muscular y adiposa in vivo, estos resultados
sugieren que el tejido adiposo puede contribuir una cantidad cuantitativamente
significativa a la oxidación de BCAA de todo el cuerpo.
Intentamos determinar si el metabolismo de BCAA sufre la misma regulación en el tejido
adiposo que en el músculo y el hígado. Se ha informado que la fosforilación de la
subunidad E1 de BCKHDC por BCKDK es el sitio principal para la regulación nutricional
u hormonal de la actividad de BCKDHC y la glucemia BCAA disminuye más rápidamente
2 y 6 h después de la eliminación de alimentos (Fig. 3A). Los niveles de insulina no son
diferentes entre los grupos en ningún momento (Fig. 3A). Dada la susceptibilidad a la
hipoglucemia en ayunas en ratones AG4OX y la importancia de la movilización de grasa
y proteínas para defenderse de la hipoglucemia, investigamos si el ayuno prolongado
conduce a cambios en la composición corporal en este modelo. Los ratones AG4OX son
moderadamente obesos en comparación con los compañeros de camada de tipo salvaje
(Fig. 3B). Los ratones AG4OX perdieron significativamente más peso que los controles
durante un ayuno de 48 h (Fig. 3C). La pérdida de masa magra representó todo el
exceso de pérdida de peso en ratones AG4OX. Los animales de control mantuvieron su
porcentaje de masa magra (Fig. 3D) y el porcentaje de masa lipídica en niveles
constantes durante todo el ayuno. En contraste, en los ratones AG4OX, la masa magra
disminuyó (de 68 a 64% (p 0.001)) y la masa de lípidos aumentó (de 34% a 37% (p
0.001)) como porcentajes de la masa corporal total. Por lo tanto, la sobreexpresión de
GLUT4 específicamente en el tejido adiposo dio lugar a trastornos en el metabolismo
sistémico del combustible asociado con la preservación de la masa grasa a expensas
de la masa corporal magra durante un ayuno prolongado.

FIGURA 1. Expresión de las enzimas oxidantes de BCAA en el tejido adiposo. A,

los resultados de la micromatriz del tejido adiposo de AG4OX frente al control y AGKO
frente al control de ratones hembra a las 5 semanas de edad que se sacrificaron en el
estado alimentado (n 3 por grupo). RE, expresión relativa (la expresión en el grupo
experimental en relación con su grupo de control). B, diagrama de la vía de oxidación
de BCAA que indica los genes incluidos en el análisis utilizando la numeración en A.
KIC, -cido quoisocaproico; KIV, ácido quisoovalérico; KMV, ácido ceto-metilvalérico. C
y D, los resultados de Q-PCR para enzimas seleccionadas de la vía de oxidación de
BCAA en grasa perigonadal (grasa PG), músculo gastrocnemio (Gastroc) e hígado de
ratones hembra alimentados de 5 semanas de edad. (*, p 0.05 contra WT).
Luego preguntamos si las disminuciones en la expresión de la enzima BCAA en el
tejido adiposo y la mayor degradación de la proteína durante el ayuno en AG4OX
afectan los BCAA circulantes. Los niveles de los tres BCAA se elevaron en el estado
alimentado y 2 y 6 h después de la eliminación de alimentos (Fig. 3E). Si esto se
debiera a un aumento en la descomposición de la proteína neta, como lo indica la
mayor pérdida de masa magra en AG4OX, los niveles de otros aminoácidos
circulantes también deberían estar elevados (31). Nos sorprendió no encontrar un
aumento en los niveles circulantes de otros aminoácidos esenciales como la
fenilalanina, la treonina y la metionina en AG4OX (Fig. 3F). Debido a que los cambios
en la descomposición de la proteína neta afectan a la mayoría de los aminoácidos de
manera proporcional, los aumentos específicos en los niveles de BCAA circulantes
sugieren una disminución selectiva en el aclaramiento de BCAA (31).

FIGURA 2. Oxidación de valina y fosforilación de E1 en músculo esquelético y tejido

adiposo. A, la oxidación de valina y la acumulación de KIV se midieron con y sin la
adición de ácido cloroisocaproico (IC) en tejido adiposo (n = 10 por grupo), sóleo (n = 6
por grupo) y explantes de EDL (n = 6 por grupo) de los alimentos alimentados, 7 Ratones
hembra de un mes de edad, AG4OX y de control de tipo salvaje. Comparaciones dentro
de los tejidos realizadas por ANOVA de 2 vías utilizando la prueba de Tukey para el
análisis post-hoc entre grupos; *, p < 0.05 comparando el efecto del genotipo dentro de
IC; #, p < 0.05 comparando el efecto de IC dentro del genotipo; Comparación a través
de tejidos en animales de tipo salvaje sin IC realizado por ANOVA de una sola vía, â €
¡, p < 0.05. B y C, cuantificación de transferencias de Western para BKDH E1 total, fosfo-
BCKDH y la relación de total a fosfo-BCKDH E1 para (B) grasa perigonadal con
transferencia representativa, y para (C) soleus y (D) EDL músculo de tejidos
recolectados en el experimento descrito en A. (n = 5–6 por grupo, *, p < 0.05 versus WT
por prueba t).
FIGURA 3. Cambios en la glucemia, el metabolismo de las proteínas y los niveles
de aminoácidos en circulación después de la eliminación de los alimentos. A, la
glucosa en serie y los niveles de insulina se midieron en AG4OX de 4 meses de edad,
y controles de tipo salvaje (n = 10 por grupo). Las hemorragias de la vena de la cola se
realizaron al inicio del estudio (8 a.m.) y 2 h y 6 h después de la extracción de los
alimentos (*, p < 0.05 para WT versusAG4OX en cada momento). Ratones hembra de
control AG4OX y de tipo salvaje al inicio del estudio y después de 24 horas y 48 horas
de ayuno (n 9 por grupo). Se realizaron comparaciones para los cambios en (B) peso
corporal total, peso de lípidos, peso magro (C) pérdida de peso total acumulada y (D)%
de masa magra y% de masa de lípidos (E, WT, f, AG4OX). El peso corporal, el peso de
los lípidos y el peso magro difirieron entre los genotipos (*, p < 0.05). El peso corporal,
el peso de los lípidos y el peso magro difirieron dentro de los genotipos a las 24 y 48 h
de prueba en comparación con el tiempo 0 (p < 0.05, el estado del estudiante pareado).
* St prueba), pero se mantuvo sin cambios en ratones de tipo salvaje. E y F, los niveles
seriales de aminoácidos en plasma se midieron en las condiciones descritas en A (*, p
< 0.05forWT versus AG4OX en cada momento).
Nos sorprendió no encontrar un aumento en los niveles circulantes de otros aminoácidos
esenciales como la fenilalanina, la treonina y la metionina en AG4OX (Fig. 3F). Debido
a que los cambios en la descomposición de la proteína neta afectan a la mayoría de los
aminoácidos de manera proporcional, los aumentos específicos en los niveles de BCAA
circulantes sugieren una disminución selectiva en el aclaramiento de BCAA (31).
Tomados conjuntamente con la disminución selectiva de la oxidación de BCAA en el
tejido adiposo en ratones AG4OX y la alta tasa de oxidación de BCAA en explantes de
tejido adiposo en comparación con el músculo esquelético, estos datos sugieren que el
tejido adiposo es un sitio importante para la oxidación de BCAA de todo el cuerpo y, por
lo tanto, afecta la circulación Niveles de BCAA. Los cambios en la oxidación de BCAA
en otros tejidos también podrían contribuir.
Debido a que los BCAA circulantes se han implicado como señales de nutrientes,
examinamos la vía de señalización de mTOR en el modelo AG4OX. Hubo una tendencia
a una estimulación de 2 veces la actividad de la quinasa S6 (S6K) por la insulina en el
tejido adiposo de ratones WT (Fig. 4A). En AG4OX, la actividad S6K basal (inyección
salina) fue la misma que la WT. Sorprendentemente, la insulina estimuló la actividad
S6K 6,5 veces en WAT de ratones AG4OX. No hubo aumento en la actividad de S6K
en el hígado, el músculo gastrocnemio o el músculo tibial anterior (Fig. 4A) de AG4OX
en comparación con WT. La inyección de insulina en ratones WT indujo un cambio de
movilidad del gel en S6K en el tejido adiposo y, en consonancia con la actividad de S6K,
el cambio estimulado por la insulina en S6K fue más pronunciado en el tejido adiposo
de ratones AG4OX (Fig. 4B). En contraste, la insulina estimuló un grado similar de
cambio de movilidad en el gastrocnemio de AG4OX en comparación con los ratones
WT. El pretratamiento con rapamicina impidió el cambio estimulado por la insulina en la
movilidad del gel de la quinasa S6 en ratones WT y AG4OX en ambos tejidos. El
aumento en los BCAA circulantes puede contribuir al aumento de la actividad de la
quinasa S6 estimulada por la insulina en el tejido adiposo en ratones AG4OX o puede
ser el resultado directo del aumento del flujo de glucosa para mejorar la señalización de
mTOR. Sin embargo, estos resultados indican que el aumento en los BCAA circulantes
en ratones AG4OX en ayunas no es suficiente para aumentar la activación de mTOR
estimulada por insulina en otros tejidos diana de insulina.
El trasplante de grasa reduce los BCAA en ratones defectuosos para el metabolismo de
BCAA periférico: los ratones que carecen de BCAT2 tienen niveles de BCAA circulantes
muy elevados debido a la incapacidad de oxidar los BCAA en los tejidos periféricos, y
son hipermetabólicos (7). Para determinar si la oxidación de BCAA en el tejido adiposo
es suficiente para afectar la homeostasis de BCAA sistémica y los niveles de BCAA en
circulación, transplantamos 750 mg de tejido adiposo de compañeros de camada de tipo
salvaje a BCAT2 / ratones. BCAT2 / ratones se asignaron al azar a cirugía simulada o
trasplante. Antes de la cirugía, los pesos corporales (simulacro: 23.5 ± 0.6 g versus
trasplante: 23.4-0.9; p = 0.92) y los niveles de BCAA alimentados (simulacro: 7.0-1.5
mM versustransplant: 6.7- 0.9; p = 0.86) fueron similares entre los dos grupos BCAT2 /
ratones. Dos semanas después del trasplante o la cirugía simulada (Fig. 5A), el peso
corporal y la composición corporal no fueron diferentes entre los dos grupos. El
trasplante de grasa de tipo salvaje en BCAT2 / ratones disminuyó los BCAA plasmáticos
alimentados con un 46% y los BCAAs 6 h después de la eliminación de alimentos un
31% en comparación con los controles / controles de BCAT2 (Fig. 5B). Los niveles de
alanina en plasma aumentaron 58% después del trasplante de grasa de tipo salvaje en
BCAT2 / ratones (Fig. 5C). Los niveles de glutamina en plasma alimentado también
tendieron a aumentar (16%) en los ratones trasplantados. El aumento de la alanina
circulante y la tendencia al aumento de glutamina pueden reflejar un aumento de la
oxidación de BCAA en el tejido adiposo transplantado, ya que el tejido adiposo puede
utilizar nitrógeno derivado de BCAA para sintetizar alanina y glutamina (8, 32).
Tanto a los ratones simulados como a los transplantados se les proporcionó acceso
gratuito al chow normal y a una dieta sin BCAA para prevenir la toxicidad asociada con
elevaciones extremas en los BCAA plasmáticos en BCAT2 / ratones (7). La ingesta de
alimentos totales, comida normal o dieta sin BCAA (Fig. 5D) no fue diferente, aunque se
observó una tendencia hacia un aumento en la ingesta de dieta sin BCAA en el grupo
trasplantado (p 0.057). Los BCAA plasmáticos en el grupo trasplantado tienden a ser
más bajos que en el grupo operado de forma simulada para cualquier cantidad de
ingesta de comida normal (Fig. 5E). La proporción de chow normal (g / día) respecto a
los niveles de BCAA en plasma tiende a ser mayor en el grupo trasplantado (0,34 +/-
0,12) en comparación con el grupo operado de forma simulada (0,20 +/- 0,04, p = 0,13).
Por lo tanto, la reducción de los BCAA circulantes en el grupo de trasplante no se debe
a una ingesta reducida de BCAA, sino que se debe a un aumento del aclaramiento de
BCAA, muy probablemente a través del catabolismo en la grasa normal transplantada.

FIGURA 4. Cambios en la señalización mTOR. A, actividad de la p70 S6 quinasa en

tejido adiposo perigonadal, hígado, músculo gastrocnemio y músculo tibial anterior de
ratones hembra, WT y AG4OX de 2 meses de edad. Los ratones despiertos fueron
inyectados con solución salina o insulina (10 unidades / kg ip) y se sacrificaron 5 minutos
más tarde (n = 7–9 por grupo). Los tejidos fueron congelados para ensayos. Las
comparaciones estadísticas se realizaron mediante ANOVA de dos vías con las pruebas
post hoc de Tukey; *, p < 0.001 para el efecto de la insulina dentro del genotipo; â €, p
< 0.001 en comparación con el grupo de insulina WT; &, p = 0.057 en comparación con
el grupo salino WT. B, transferencia representativa que demuestra la movilidad del gel
de la quinasa p70 S6 medida por transferencia Western en grasa perigonadal y músculo
gastrocnemio en animales descritos en A. Los ratones fueron tratados previamente con
rapamicina (10 mg / kg ip) o vehículo 1 h antes de la inyección de solución salina o
insulina.
Las reducciones en los BCAA plasmáticos en el grupo de trasplante se produjeron en
ausencia de cambios en los niveles de glucemia, insulina o leptina alimentados o en
ayunas (Tabla 1). Estos resultados apoyan firmemente la conclusión de que, in vivo, el
tejido adiposo es un sitio importante de oxidación de BCAA y es capaz de contribuir
significativamente a la regulación de los niveles de BCAA en circulación.
TABLA 1
Alimentación y metabolitos sanguíneos en ayunas después del trasplante de
grasa.
Tres semanas después de la cirugía, se extrajo sangre de 8 a 10 a.m. de los controles
operados de forma simulada y Bcat2 / ratones trasplantados con grasa en el estado
alimentado y después de un ayuno nocturno. Los valores son medias S.E. n 6â € “8 por
grupo. La significación estadística a un valor de p de 0.05 no se logró para ninguna
comparación entre los grupos de control de simulación y de trasplante de grasa.

FIGURA 5. Trasplante de grasa

BCAT2.
A y B, el peso corporal, la composición
corporal y los BCAA plasmáticos en
estado alimentado y después de 6 h de
eliminación de alimentos se midieron en
BCAT2 machos / ratones trasplantados
con 750 mg de grasa de tipo salvaje
versus controles operados de manera
simulada (n = 6 - 8 por grupo; *, p <
0.05). C, la alanina plasmática y la
glutamina se midieron en los ratones
alimentados descritos anteriormente (n =
4 - 7 por grupo; *, p < 0.05). Los ratones
tuvieron acceso gratuito a una opción de
dieta chow normal (NC) o sin BCAA y la
ingesta de alimentos se midió durante 1
semana a las 10 semanas de edad,
después del período de recuperación de
2 semanas. D, la ingesta de alimentos se
presenta como valores medios diarios. E,
alimentó los niveles de BCAA en plasma
para ratones individuales frente a la
ingesta diaria promedio de chow normal.
DISCUSIÓN:
Observamos la regulación coordinada y recíproca de la expresión de enzimas
involucradas en la oxidación de BCAA utilizando GSEA de tejido adiposo de ratones con
alteraciones selectivas de tejido adiposo en la expresión de Glut4. En ratones AG4OX,
la regulación negativa de las enzimas oxidativas BCAA causó una disminución
significativa en la oxidación de BCAA en explantes de tejido adiposo. Esta disminución
podría contribuir al aumento de los niveles de BCAA circulantes en ratones AG4OX.
Los resultados de los ratones AG4OX proporcionan información sobre los mecanismos
por los cuales se puede regular el flujo oxidativo de BCAA. La actividad de BCKDHC en
el músculo y el hígado está regulada potentemente por la fosforilación inhibitoria por
BCKDK en respuesta a señales nutricionales y hormonales (30). Las alteraciones
dramáticas en las tasas de oxidación de BCAA en explantes de tejido adiposo AG4OX
ocurrieron independientemente de los cambios en la expresión de BCKDK y la
fosforilación de BCKDHC, lo que sugiere que puede haber diferencias importantes en
los mecanismos que regulan el metabolismo de BCAA en el tejido adiposo en
comparación con el músculo y el hígado.
Numerosos investigadores han considerado que BCKDHC es la enzima determinante
de la velocidad en la oxidación de BCAA (33-37). De acuerdo con la teoría del control
metabólico, si el BCKDHC fuera determinante de la velocidad, se esperaría que la
regulación por disminución de su actividad resultara en la acumulación de sus sustratos
(38). A pesar de las reducciones significativas en la expresión de BCKDHC en el tejido
adiposo AG4OX, la acumulación de KIV disminuyó 4 veces en los explantes de tejido
adiposo AG4OX en comparación con los controles. Por lo tanto, en los explantes de
tejido adiposo, el BCKDHC no parece limitar la velocidad. De acuerdo con la teoría
moderna del control metabólico (38) y como se ha documentado para otras vías
metabólicas como la vía de síntesis de ácidos grasos (39), los cambios pequeños pero
coordinados en el nivel de expresión de las enzimas distribuidas a lo largo de una vía
pueden traducirse en cambios sustanciales en la La tasa de flujo a través de ese camino.
Los resultados de los ratones AG4OX proporcionan información adicional sobre los
mecanismos por los cuales se puede regular el flujo oxidativo de BCAA. Observamos
una disminución profunda en la oxidación de BCAA en el tejido adiposo como resultado
de la sobreexpresión de GLUT4 específica para el adiposo. Nuestros resultados podrían
sugerir que el aumento del flujo de glucosa en los adipocitos AG4OX puede alterar el
flujo oxidativo de BCAA per se. Sin embargo, el tratamiento del tejido adiposo ex vivo
con glucosa, ya sea con o sin insulina, aumenta en lugar de disminuir las tasas de
oxidación de BCAA de forma aguda (8, 40). La glucosa probablemente ejerce su efecto
positivo sobre la oxidación de BCAA al aumentar la disponibilidad de los cofactores
requeridos para la transaminación y / o descarboxilación (41). Sin embargo, nuestro
estudio ahora demuestra que la regulación hacia abajo coordinada de la expresión de
la enzima oxidativa BCAA y la disminución resultante en el flujo oxidativo BCAA es
dominante sobre los efectos positivos de la glucosa para aumentar el flujo oxidativo
BCAA.
Es de interés utilizar estas mediciones ex vivo para estimar la contribución potencial de
la oxidación de BCAA en el tejido adiposo a la oxidación de BCAA de todo el cuerpo. En
nuestros ratones de tipo salvaje, el tejido adiposo pesa 7,5 gy la masa magra pesa 20,8
g.
Suponiendo que el músculo esquelético representa la mayoría de la masa magra y
extrapolando nuestras mediciones ex vivo del flujo de BCAA que promedian las
mediciones de sóleo y Edl para obtener un flujo representativo del músculo esquelético,
el tejido adiposo podría explicar la oxidación de 950 nmol de BCAA / hora, comparables
a los 830 nmol BCAAs / hora en el músculo esquelético. A pesar del aumento moderado
de la adiposidad en ratones AG4OX (10.8 g), la tasa de oxidación de BCAA se
mantendría un 80% más baja en AG4OX (205 nmol / h) en comparación con el control
a nivel de todo el órgano del tejido adiposo. Estas estimaciones deben interpretarse con
las grandes advertencias de que otros órganos como el hígado, el riñón y el cerebro se
incluyen en la medición de la masa magra. Además, asumimos que la tasa de oxidación
en la grasa perigonadal es representativa de todas las almohadillas de grasa y el
promedio de soleus y Edl es representativo de todo el músculo esquelético. Por último,
estos cálculos se basan en mediciones ex vivo en las que la disponibilidad del sustrato
es constante. In vivo, las tasas de flujo reales pueden verse afectadas significativamente
por las diferencias en el flujo sanguíneo y el suministro de sustrato a diferentes tejidos.
Aunque las estimaciones calculadas de la capacidad del tejido adiposo para la oxidación
de BCAA indican que el metabolismo de BCAA en el tejido adiposo puede ser
fisiológicamente significativo, faltan pruebas experimentales que confirmen esto in vivo.
Ex vivo, las almohadillas de grasa del epidídimo de rata liberan glutamina y alanina en
respuesta al aumento de la exposición a BCAA (8, 32) y se formuló la hipótesis de que
los BCAA proporcionaban el nitrógeno para la síntesis neta de alanina y glutamina. El
muestreo arteriovenoso a través de almohadillas de grasa inguinal de rata y almohadillas
de grasa subcutánea humana confirmó la liberación neta de alanina y glutamina del
tejido adiposo, y Frayn et al. (11, 42) sugirieron que los BCAA eran la fuente más
probable de nitrógeno. Un estudio en ratas anestesiadas no pudo detectar diferencias
arteriovenosas en las concentraciones de BCAA a través de la almohadilla de grasa
inguinal, aunque se sugirió que los BCAA derivados de la proteólisis intracelular se
catabolizaron en el tejido adiposo y contribuyeron a la síntesis y liberación de glutamina
(11).
Nuestros datos ahora demuestran que, in vivo, el tejido adiposo puede metabolizar con
avidez los BCAA circulantes al menos cuando los niveles de BCAA están marcadamente
elevados. Demostramos que trasplantar solo 750 mg de grasa (menos de 10 a 20% de
la masa grasa total en un ratón magro) de ratones de tipo salvaje a BCAT2 / ratones es
suficiente para disminuir drásticamente los niveles de BCAA circulantes. Además, los
niveles de alanina en plasma aumentan después del trasplante, lo que es compatible
con el papel potencial de la oxidación de BCAA en el tejido adiposo para proporcionar
una fuente nitrogenada para la síntesis de alanina (y / o glutamina). La insulina puede
reducir los BCAA circulantes (43), pero la reducción de los BCAA plasmáticos en nuestro
estudio de trasplante se produce en ausencia de cualquier cambio en la insulina
circulante. El aumento del catabolismo de BCAA en la grasa transplantada
probablemente explica la dramática disminución de los BCAA circulantes en los ratones
transplantados, aunque no podemos excluir los efectos indirectos del trasplante de
grasa para afectar el metabolismo de BCAA en otros tejidos. Sin embargo, estos
resultados demuestran de manera concluyente por primera vez la posibilidad de que el
tejido adiposo altere los niveles de BCAA circulantes in vivo.
Las elevaciones marcadas en los BCAA circulantes en BCAT2 / ratones tienen efectos
profundos sobre el crecimiento, el metabolismo y la viabilidad (7). No es sorprendente
que no hayamos observado la normalización de estos parámetros metabólicos en el
BCAT2 / ratones trasplantados, ya que a pesar de una reducción del 30 al 50% en los
niveles de BCAA circulantes con el trasplante, los niveles de BCAA circulantes se
mantienen varias veces más altos que en los ratones de tipo salvaje.
Las posibles consecuencias adicionales de los BCAA circulantes elevados son a través
de la señalización de mTOR, ya sea como una señal de nutriente para aumentar la
síntesis de proteínas o contribuyendo a la regulación negativa de la señalización de la
insulina. La leucina en sinergia con la insulina activa la vía de señalización de mTOR
(44). La activación prolongada de mTOR se retroalimenta negativamente en la vía de
señalización de la insulina a través de la fosforilación de serina inhibitoria de IRS1 por
S6K (45, 46). En nuestro estudio, la actividad S6K estimulada por la insulina en el tejido
adiposo AG4OX aumenta notablemente en comparación con los controles, pero la
actividad en el músculo y el hígado no es diferente de los controles. Estos resultados
concuerdan con otros estudios que han demostrado que el aumento de la leucina
circulante sola no es suficiente para aumentar la señalización de mTOR en todos los
tejidos (47). En el tejido adiposo AG4OX, el aumento del flujo de glucosa o el aumento
de los BCAA circulantes pueden contribuir al aumento de la actividad de SK6 estimulada
por la insulina.
Si bien la función fisiológica de la oxidación de BCAA en el tejido adiposo sigue siendo
incierta, nuestras observaciones respaldan la conclusión de que la regulación por
disminución coordinada de las enzimas oxidativas de BCAA puede alterar drásticamente
el flujo oxidativo de BCAA en el tejido adiposo. Esto es de interés porque la regulación
a la baja de las enzimas oxidativas BCAA del tejido adiposo también se ha observado
recientemente en humanos obesos y la expresión se correlaciona inversamente con la
resistencia a la insulina (14, 15, 48). La expresión de la enzima BCAA en el tejido
adiposo aumenta con la pérdida de peso inducida quirúrgicamente (15) o el tratamiento
con tiazolidindiona (48) y mejoras paralelas en la sensibilidad a la insulina. Además, en
un enfoque de perfil basado en metabolómica imparcial, una resistencia a la insulina
pronosticada por BCAA metabólica relacionada con BCAA circulante elevada en sujetos
humanos (13).
La regulación a la baja de las enzimas oxidativas de BCAA en ratones AG4OX puede
proporcionar una nueva perspectiva sobre la importancia fisiológica de la oxidación de
BCAA en el tejido adiposo. Los estados fisiológicos en los que la capacidad del tejido
adiposo para catabolizar los BCAA disminuye rápidamente son el ayuno (8, 27, 49) o la
alimentación con una dieta deficiente de proteínas (8). Se ha sugerido que la rápida
disminución de la capacidad del tejido adiposo para degradar los BCAA con el ayuno
preserva los BCAA para la producción de glucosa o cetogénesis y previene su
conversión irreversible en lípidos para el almacenamiento (27). Hay un apoyo indirecto
para esto en un estudio que sugiere que la proporción de esqueletos de leucina
marcados radioactivamente almacenados como lípidos disminuyó con el ayuno (8). La
regulación por disminución de la oxidación de BCAA en el tejido adiposo AG4OX puede
representar una adaptación fisiológica para proteger contra la hipoglucemia en ayunas
(Fig. 3) al preservar el carbono BCAA para la gluconeogénesis y la cetogénesis en el
hígado en lugar de la lipogénesis en el tejido adiposo.
Goodman y Frick (41) sugirieron que la regulación a la baja de las enzimas BCAA con
ayuno o deficiencia de proteínas puede ser señalada por la disminución de la insulina o
leucina per se. En los ratones AG4OX, la regulación por disminución de las enzimas de
oxidación BCAA del tejido adiposo se produce a pesar del hecho de que los niveles de
leucina y de insulina circulantes son normales o aumentan. Por lo tanto, las alteraciones
en los niveles de insulina o leucina en plasma no pueden explicar la regulación de las
enzimas oxidativas de BCAA en este modelo, aunque esto no excluye la posibilidad de
un nuevo factor de circulación.
En conclusión, el presente estudio demuestra la capacidad potencial del tejido adiposo
para regular los BCAA circulantes in vivo. Además, muestra una relación importante in
vivo entre la regulación de la glucosa adiposa y el metabolismo de BCAA. La
comprensión de las relaciones mecánicas entre el tejido adiposo BCAA, la glucosa y el
metabolismo de los lípidos puede proporcionar nuevas vías para el tratamiento de
afecciones asociadas con el metabolismo alterado del combustible.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:
1. Layman, D. K. (2003) J. Nutr. 133, 261S–267S
2. Ichihara, A., and Koyama, E. (1966) J. Biochem. 59, 160–169
3. Wahren, J., Felig, P., and Hagenfeldt, L. (1976) J. Clin. Invest. 57, 987–999
4. Fajans, S. S. (1965) N. Engl. J. Med. 272, 1224–1227
5. Hay, N., and Sonenberg, N. (2004) Genes Dev. 18, 1926–1945
6. Cota, D., Proulx, K., Smith, K. A., Kozma, S. C., Thomas, G., Woods, S. C., and
Seeley, R. J. (2006) Science 312, 927–930
7. She, P., Reid, T. M., Bronson, S. K., Vary, T. C., Hajnal, A., Lynch, C. J., and
Hutson, S. M. (2007) Cell Metab. 6, 181–194
8. Tischler, M. E., and Goldberg, A. L. (1980) J. Biol. Chem. 255, 8074–8081
9. Rosenthal, J., Angel, A., and Farkas, J. (1974) Am. J. Physiol. 226, 411–418
10. Suryawan, A., Hawes, J. W., Harris, R. A., Shimomura, Y., Jenkins, A. E., and
Hutson, S. M. (1998) Am. J. Clin. Nutr. 68, 72–81
11. Kowalski, T. J., Wu, G., and Watford, M. (1997) Am. J. Physiol. 273, E613–622
12. Felig, P., Marliss, E., and Cahill, G. F., Jr. (1969) N. Engl. J. Med. 281, 811–816
13. Newgard, C. B., An, J., Bain, J. R., Muehlbauer, M. J., Stevens, R. D., Lien, L.
F., Haqq, A. M., Shah, S. H., Arlotto, M., Slentz, C. A., Rochon, J., Gallup, D.,
Ilkayeva, O., Wenner, B. R., Yancy, W. S., Jr., Eisenson, H., Musante, G., Surwit,
R. S., Millington, D. S., Butler, M. D., and Svetkey, L. P. (2009) Cell Metab. 9,
311–326
14. Pietila¨inen, K. H., Naukkarinen, J., Rissanen, A., Saharinen, J., Ellonen, P.,
Kera¨nen, H., Suomalainen, A., Go¨tz, A., Suortti, T., Yki-Ja¨rvinen, H., Oresic,
M., Kaprio, J., and Peltonen, L. (2008) PLoS Med. 5, e51
15. She, P., Van Horn, C., Reid, T., Hutson, S. M., Cooney, R. N., and Lynch, C. J.
(2007) Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 293, E1552–1563
16. Shepherd, P. R., Gnudi, L., Tozzo, E., Yang, H., Leach, F., and Kahn, B. B. (1993)
J. Biol. Chem. 268, 22243–22246
17. Abel, E. D., Peroni, O., Kim, J. K., Kim, Y. B., Boss, O., Hadro, E., Minnemann,
T., Shulman, G. I., and Kahn, B. B. (2001) Nature 409, 729–733
18. Shepherd, P. R., and Kahn, B. B. (1999) N. Engl. J. Med. 341, 248–257
19. Gavrilova, O., Marcus-Samuels, B., Graham, D., Kim, J. K., Shulman, G. I.,
Castle, A. L., Vinson, C., Eckhaus, M., and Reitman, M. L. (2000) J. Clin. Invest.
105, 271–278
20. Li, C., and Wong, W. H. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 31–36
21. Subramanian, A., Tamayo, P., Mootha, V. K., Mukherjee, S., Ebert, B. L., Gillette,
M. A., Paulovich, A., Pomeroy, S. L., Golub, T. R., Lander, E. S., and Mesirov, J.
P. (2005) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102, 15545–15550
22. Joshi, M. A., Jeoung, N. H., Obayashi, M., Hattab, E. M., Brocken, E. G., Liechty,
E. A., Kubek, M. J., Vattem, K. M., Wek, R. C., and Harris, R. A(2006) Biochem. J.
400, 153–162
23. Lynch, C. J., Halle, B., Fujii, H., Vary, T. C., Wallin, R., Damuni, Z., and Hutson,
S. M. (2003) Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 285, E854–E863
24. Yang, Q., Graham, T. E., Mody, N., Preitner, F., Peroni, O. D., Zabolotny, J. M.,
Kotani, K., Quadro, L., and Kahn, B. B. (2005) Nature 436, 356–362
25. Harper, A. E., Miller, R. H., and Block, K. P. (1984) Annu. Rev. Nutr. 4, 409–454
26. Sweatt, A. J., Wood, M., Suryawan, A., Wallin, R., Willingham, M. C., and Hutson,
S. M. (2004) Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 286, E64–E76
27. Odessey, R. (1986) in Problems and Potential of Branched Chain Amino Acids
in Physiology and Medicine (Odessey, R., ed) pp. 49–79, Elsevier, New York
28. Harris, R. A., Joshi, M., and Jeoung, N. H. (2004) Biochem. Biophys. Res.
Commun. 313, 391–396
29. Harris, R. A., Kuntz, M. J., and Simpson, R. (1988) Methods Enzymol. 166, 114–
123
30. Popov, K. M., Zhao, Y., Shimomura, Y., Jaskiewicz, J., Kedishvili, N. Y., Irwin, J.,
Goodwin, G. W., and Harris, R. A. (1995) Arch Biochem. Biophys 316, 148–154
31. 31. Crofford, O. B., Felts, P. W., and Lacy, W. W. (1964) Proc. Soc. Exp. Biol.
Med. 117, 11–14
32. Snell, K., and Duff, D. A. (1977) Biochem. Biophys. Res. Commun. 77, 925–931
33. Hutson, S. M. (1987) J. Biol. Chem. 262, 9629–9635
34. Block, K. P., Richmond, W. B., Mehard, W. B., and Buse, M. G. (1987) Am. J.
Physiol. 252, E396–E407
35. Mitsubuchi, H., Owada, M., and Endo, F. (2005) J. Nutr. 135, 1565S–1570S
36. Harris, R. A., Kobayashi, R., Murakami, T., and Shimomura, Y. (2001) J. Nutr.
131, 841S–845S
37. Norton, L. E., and Layman, D. K. (2006) J. Nutr. 136, 533S–537S
38. Fell, D. A. (2005) J. Exp. Bot. 56, 267–272
39. Horton, J. D., Goldstein, J. L., and Brown, M. S. (2002) J. Clin. Invest. 109, 1125–
1131
40. Goodman, H. M. (1977) Am. J. Physiol. 233, E97–E103
41. Goodman, H. M., and Frick, G. P. (1986) in Problems and Potential of Branched
Chain Amino Acids in Physiology and Medicine (Odessey, R., ed) pp. 173–198,
Elsevier, New York
42. Frayn, K. N., Khan, K., Coppack, S. W., and Elia, M. (1991) Clin. Sci. 80, 471–
474
43. Zinneman, H. H., Nuttall, F. Q., and Goetz, F. C. (1966) Diabetes 15, 5–8
44. Greiwe, J. S., Kwon, G., McDaniel, M. L., and Semenkovich, C. F. (2001) Am. J.
Physiol. Endocrinol. Metab. 281, E466–E471
45. Tremblay, F., and Marette, A. (2001) J. Biol. Chem. 276, 38052–38060
46. Um, S. H., Frigerio, F., Watanabe, M., Picard, F., Joaquin, M., Sticker, M.,
Fumagalli, S., Allegrini, P. R., Kozma, S. C., Auwerx, J., and Thomas, G. (2004)
Nature 431, 200–205
47. Lynch, C. J., Hutson, S. M., Patson, B. J., Vaval, A., and Vary, T. C. (2002) Am.
J. Physiol. Endocrinol. Metab. 283, E824–E835
48. Sears, D. D., Hsiao, G., Hsiao, A., Yu, J. G., Courtney, C. H., Ofrecio, J. M.,
Chapman, J., and Subramaniam, S. (2009) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 106,
18745–18750
49. Meikle, A. W., and Klain, G. J. (1972) Am. J. Physiol. 222, 1246–1250