1.

OBJETIVOS
1.1. OBJETIVO GENERAL:
 Separar, identificar y aislar los componentes del zumo de espinaca y de la tinta azul
de bolígrafo.
1.2. OBJETIVO ESPECÍFICO:
 Realizar la cromatografía en papel del zumo de espinaca.
 Realizar la cromatografía en papel de la tinta azul de bolígrafo.
 Realizar la cromatografía en capa fina de la tinta azul de bolígrafo, utilizando el
disolvente de mejor resultado en la cromatografía en papel.
 Determinar el Rf (factor de retardación) para cada soluto con los diferentes
solventes empleados.

2. FUNDAMENTO TEÓRICO

La cromatografía es la técnica que separa una mezcla de solutos basada en la velocidad de

desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al ser arrastrados por una fase
móvil a través de un lecho cromatografía que contiene la fase estacionaria.

2.1. ELEMENTOS QUE INTERVIENEN EN LA CROMATOGRAFÍA

Los elementos que intervienen son:

 Fase móvil.- Fase que se está moviendo en una dirección determinada. Puede ser
un líquido o gas. La fase móvil se mueve a través de una columna que lleva la
muestra a separar.
 Fase estacionaria.- Sustancia que se fija a la columna o en el panel, sobre cuya
superficie se separan las sustancias.
 Muestra.- Es la sustancia producto de un proceso cromatográfico.

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 2.2. ETAPAS DE LA CROMATOGRAFÍA
 Armado de placa o columna: implica la disposición espacial que adoptará la fase
estacionaria.
 Siembra: se refiere al contacto inicial de la mezcla a separar con la fase
estacionaria, para su posterior desarrollo
 Desarrollo: es el pasaje de la fase móvil a través de la fase estacionaria.
 Revelado: implica la localización de las zonas en que se encuentran los
compuestos ya separados, cuando estos no poseen color intrínseco.
 Elución: se utiliza cuando se intenta remover los solutos de la fase estacionaria.

2.3. CLASIFICACIÓN DE LOS MÉTODOS CROMATOGRAFICOS

Los métodos se clasifican tomando en cuenta el estado de agregación y de acuerdo al

proceso de separación:

 Forma física de la fase móvil.- Liquida o gaseosa

 Forma física del sistema.- Plana o en columna
 Proceso de separación.- Adsorción, partición, intercambio iónico, afinidad,
exclusión.

Fase Técnica Proceso

Fase
estacionaria móvil Cromatográfica Cromatográfico

Adsorción
Capa fina
Liquida Intercambio iónico
Solida Columna
Exclusión molecular

Gas Columna Adsorción

Papel
Liquida Capa fina Partición
Liquida
Columna

Gas Columna Partición

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 2.4. CLASIFICACIÓN DE MECANISMOS CROMATOGRÁFICOS
2.4.1. Cromatografía de adsorción

La adsorción es un proceso por el cual los átomos, iones o moléculas que son atrapadas en
la superficie de un material, en contraposición a la absorción, que es un fenómeno de
volumen.

Cuando mayor sea la tasa de adsorción y menor la de desorción, mayor será la fracción de
la superficie disponible que será cubierta por material adsorbido en el equilibrio.

La adsorción física consiste en un enlace débil originado por las fuerzas de Van Der Waals
y en principio no hay una redistribución de carga en la molécula/átomo y la superficie.

La adsorción química implica un cambio sustancial en la densidad electrónica entre

substrato y absorbato. La naturaleza del enlace puede ser intermedia entre iónico y
covalente.

La adsorción para la cromatografía de líquidos y gases se utiliza para separar los

componentes de una mezcla, esta separación se basa en los diferentes grados de
interacción de cada compuesto con el adsorbente.

2.4.2. Cromatografía de partición

Esta cromatografía consiste en una separación de componentes de una mezcla poniendo

en contacto el líquido con un segundo líquido inmiscible que selectivamente extrae uno o
más de los componentes de la mezcla.

Se caracteriza por una fase estacionaria liquida anclada en un soporte sólido y una fase
liquida móvil y ambas fases son inmiscibles. Las columnas de tipo liquido-liquido se
mantenían en su lugar mediante adsorción liquida.

LAB 4: CROMATOGRAFÍA Página 3

 2.4.3. Cromatografía de premiación en gel

La cromatografía de premiación en gel es un método de purificación de polímeros

naturales y sintéticos, que separa moléculas en función de la diferencia de sus tamaños
moleculares, en este tipo de cromatografía la fase móvil es líquida, normalmente acuosa y
la fase estacionaria también es líquida.

Las moléculas que tengan un tamaño relativamente pequeño podrán difundir el interior
del gel desde la solución mientras que las moléculas de un tamaño grande en relación al
tamaño de los poros del gel.

2.4.4. Cromatografía de intercambio iónico

En la cromatografía de intercambio iónico la fase estacionaria es una resina y la fase móvil

es generalmente una solución amortiguadora de pH, la afinidad de cada proteína a los
grupos cargados de la columna está influenciada por el pH y por concentración de iones
en solución.

La separación de la proteína de la matriz cargada puede obtenerse gradualmente

cambiando el pH y la concentración salina de la fase móvil, de tal forma que se genere un
gradiente de concentración.

2.4.5. Cromatografía de afinidad

Esta cromatografía permite una separación de mezclas proteicas por su afinidad o

capacidad de unión a un determinado ligando. Después de que las proteínas que no se
unen al ligando son lavadas o eluidas a través de la columna, la proteína de interés que ha
quedado retenida en la columna se eluye o libera mediante el empleo de una solución.

2.5. TÉCNICAS CROMATOGRÁFICAS

2.5.1. Cromatografía en papel

La cromatografía en papel es la técnica de separación de identificación de sustancias

químicas en la cual la fase estacionaria es el agua adsorbida y absorbida que hay en el

LAB 4: CROMATOGRAFÍA Página 4

papel (papel filtro hecho de celulosa) y el soporte es el papel. La fase móvil es una
solución que consiste en un disolvente o de una mezcla de varios líquidos que contiene
agua.

El nombre de la técnica deriva de los primeros ensayos en los que se separaron pigmentos
de plantas como la clorofila, los cuales tienen colores definidos.

Para cada muestra se tiene que calcular su factor de retención (Rf) que es la relación entre
el camino recorrido por la mancha y el camino recorrido por el solvente y se calcula
dividiendo la distancia de la mancha por la distancia del solvente.

Distancia recorrida por el soluto

𝐑𝐟 =
Distancia recorrida por el solvente

2.5.2. Cromatografía en capa fina

Es un procedimiento rápido y sencillo para separar mezclas de sustancias y poder

determinar semicuantitativamente los componentes individuales para eso se tienen que
seleccionar un buen conductor. La separación se basa en que las sustancias investigadas
se reparten de modo diferencial.

Las separaciones se realizan generalmente por el procedimiento ascendente,

introduciendo el borde inferior de la placa cromatografica en el solvente, que será
succionado por acción de las fuerzas capilares del recubrimiento de la superficie de la
placa.

2.5.3. Cromatografía en columna

Se utilizan columnas de vidrio rellenas de alúmina, oxido de magnesio o silica, la fase

estacionaria está constituida por un sólido poroso el cual se encuentra soportado en el
interior de la columna generalmente fabricada de vidrio o de plástico.

LAB 4: CROMATOGRAFÍA Página 5

La fase móvil se encuentra formada por la solución que lentamente va atravesando la fase
estacionaria y la solución que sale al final de la columna se reemplaza constante por nueva
solución que se suministra desde un contenedor.

Las sustancias se separan gradualmente formando bandas dentro de la banda total, la

separación y por lo tanto la resolución aumenta con la longitud de la columna mientras
que la banda individual de cada sustancia puede ensancharse con el tiempo debido a
procesos disfuncionales.

2.6. NOMENCLATURA IUPAC PARA CROMATOGRAFÍA

 Cromatografía: Es un método físico de separación en el que los componentes a

separar se distribuyen entre dos fases, una de las cuales está en reposo.
 Cromatografo: El instrumento empleado para realizar una separación
cromatografica.
 Cromatograma: Una gráfica u otro tipo de presentación de la respuesta de un
detector.
 Fase ligada: Una fase estacionaria que está unida de forma covalente a las
partículas de soporte o a la pared interior de la columna.
 Fase inmovilizada: Una fase estacionaria que esta inmovilizada sobre las partículas
del soporte o sobre la pared interior de la columna.
 Fase móvil: Fluido que filtra a través o a lo largo del lecho estacionario en una
dirección definida, puede ser un líquido o un gas o un flujo supercrítico.
 Eluir: El proceso de elución se puede detener mientas todos los componentes de la
muestra están aún en el lecho cromatográfico o continuación hasta que lo hayan
abandonado.
 Efluente: La fase móvil que abandona la columna.
 Muestra: Mezcla consistente en cierto número de componentes, cuya separación
se pretende en el lecho cromatográfico.
 Componentes de la muestra: Pueden ser retenidos parcialmente o retenidos
permanentemente.

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3. REGISTRO DE DATOS EN LABORATORIO

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL: ZUMO DE ESPINACA

Tabla 1

DISTANCIA RECORRIDA DISTANCIA RECORRIDA

SOLVENTE
POR EL SOLUTO [cm] POR EL SOLVENTE [cm]

C6H14 HEXANO 0,4 11,9

CH3OH METANOL 6,1 11,9

C2H5OH ALCOHOL ETÍLICO 4,9 6,12

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL: TINTA AZUL DE BOLÍGRAFO

Tabla 2

DISTANCIA RECORRIDA DISTANCIA RECORRIDA

SOLVENTE
POR EL SOLUTO [cm] POR EL SOLVENTE [cm]

C6H14 HEXANO 0 11,5

CH3OH METANOL 4,4 12,6

C2H5OH ALCOHOL ETÍLICO 4,3 6,4

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA: TINTA AZUL DE BOLÍGRAFO

Tabla 3

DISTANCIA RECORRIDA DISTANCIA RECORRIDA

SOLVENTE
POR EL SOLUTO [cm] POR EL SOLVENTE [cm]

C2H5OH ALCOHOL ETÍLICO 3,2 3,8

LAB 4: CROMATOGRAFÍA Página 7

4. CÁLCULOS

𝐷𝑒𝑡𝑒𝑟𝑚𝑖𝑛𝑎𝑚𝑜𝑠 𝑒𝑙 𝑅𝑓 𝑝𝑎𝑟𝑎 𝑐𝑎𝑑𝑎 𝑐𝑎𝑠𝑜:

𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜

𝑅𝑓 =
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒

Con TABLA 1: CROMATOGRAFÍA EN PAPEL -ZUMO DE ESPINACA

0,4 𝑐𝑚
𝐶6 𝐻14 (𝐻𝑒𝑥𝑎𝑛𝑜): 𝑅𝑓 = → 𝑹𝒇 = 𝟎, 𝟎𝟑𝟒
11,9 𝑐𝑚

6,1 𝑐𝑚
𝐶𝐻3 𝑂𝐻 (𝑀𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙): 𝑅𝑓 = → 𝑹𝒇 = 𝟎, 𝟓𝟏𝟐
11,9 𝑐𝑚

4,9 𝑐𝑚
𝐶2 𝐻5 𝑂𝐻 (𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 𝑒𝑡í𝑙𝑖𝑐𝑜): 𝑅𝑓 = → 𝑹𝒇 = 𝟎, 𝟕𝟗𝟎
6,2 𝑐𝑚

Con TABLA 2: CROMATOGRAFÍA EN PAPEL – TINTA AZUL DE BOLÍGRAFO

0 𝑐𝑚
𝐶6 𝐻14 (𝐻𝑒𝑥𝑎𝑛𝑜): 𝑅𝑓 = → 𝑹𝒇 = 𝟎
11,9 𝑐𝑚

4,4 𝑐𝑚
𝐶𝐻3 𝑂𝐻 (𝑀𝑒𝑡𝑎𝑛𝑜𝑙): 𝑅𝑓 = → 𝑹𝒇 = 𝟎, 𝟑𝟒𝟗
12,6 𝑐𝑚

4,3 𝑐𝑚
𝐶2 𝐻5 𝑂𝐻 (𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 𝑒𝑡í𝑙𝑖𝑐𝑜): 𝑅𝑓 = → 𝑹𝒇 = 𝟎, 𝟔𝟕𝟐
6,4 𝑐𝑚

Con TABLA 3: CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA – TINTA AZUL DE BOLÍGRAFO

3,2 𝑐𝑚
𝐶2 𝐻5 𝑂𝐻 (𝐴𝑙𝑐𝑜ℎ𝑜𝑙 𝑒𝑡í𝑙𝑖𝑐𝑜): 𝑅𝑓 = → 𝑹𝒇 = 𝟎, 𝟖𝟒𝟐
3,8 𝑐𝑚

LAB 4: CROMATOGRAFÍA Página 8

5. ANÁLISIS DE RESULTADOS

 Al realizar la cromatografía en papel del zumo de espinaca, se obtuvo los Rf de los

disolventes: hexano - Rf= 0,034, metanol - Rf= 0,512 y alcohol etílico - Rf= 0,790;
comparando los valores se observa que el alcohol etílico tiene el mayor Rf por lo
tanto es el mejor disolvente para el zumo de espinaca.
 Realizando la cromatografía en papel de la tinta azul de bolígrafo, se obtuvo los Rf
de los disolventes: hexano - Rf= 0, metanol – Rf = 0,349 y del alcohol etílico -
Rf= 0,672; comparando los valores se observa que el alcohol etílico tiene el mayor
Rf por lo tanto es el mejor disolvente para la tinta azul de bolígrafo.
 En la cromatografía en capa fina la tinta azul de bolígrafo tuvo un desarrollo
óptimo con un Rf= 0,842 al utilizar como disolvente al alcohol etílico.

6. OBSERVACIONES

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL:

 La muestra sembrada de zumo de espinaca estaba muy diluido, lo que dificulto su

desarrollo en el papel.
 La cantidad de muestra sembrada en algunos casos fue excesiva, lo que pudo
influir en el desarrollo de la misma.
 La disposición de solo 3 solventes nos limitó el poder tener una mejor corrida de la
muestra.
 Al ser un poco denso la tinta de bolígrafo se dificulto su sembrado en el papel.

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA:

 La falta de vidrio reloj al comienzo de la corrida de la muestra pudo afectar a el

desempeño del mismo.

LAB 4: CROMATOGRAFÍA Página 9

  Al disponer solo de una tira de capa fina solo se pudo realizar la cromatografía de
la tinta de bolígrafo, no así el del zumo de espinaca.

7. CONCLUSIONES
 Al comparar los Rf del alcohol etílico con la tinta en la cromatografía en papel
(Rf=0,672) y en la cromatografía en capa fina (Rf= 0,842); se concluye que la
separación de la muestra se lo identifica mejor con la capa fina, donde el soluto se
adsorbe sobre el adsorbente (cromatografía de adsorción).
 El alcohol etílico tuvo el Rf de mayor valor con la muestra de espinaca y la tinta en
la cromatografía en papel; lo contrario fue el disolvente hexano que tuvo el Rf de
menor valor.
 Al ser el valor del Rf del alcohol etílico se lo utilizo como disolvente en la
cromatografía en capa fina con la tinta azul de bolígrafo, que se desarrolló bien,
mostrándonos distintos colores.

8. BIBLIOGRAFÍA

 http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm

 Liliana Eunice. (3 de Octubre de 2011). SlideShare. Recuperado el 7 de Octubre de

2017, de SlideShare: https://es.slideshare.net/honey61187/cromatografa-de-papel

 http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_altres.html
 Fundamentos Teóricos - Prácticos de química orgánica de Alicia Lamarque –
Cromatografía Pág. 55 a 72.
 Química orgánica- Fundamentos prácticos para el laboratorio-Lidia Galagovsky-
Cromatografía Pág. 125 a 212

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9. ANEXOS

CROMATOGRAFÍA EN PAPEL (POR PARTICIÓN)

Zumo de Tinta azul de

espinaca bolígrafo

CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA (POR ADSORCIÓN)

LAB 4: CROMATOGRAFÍA Página 11