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3B-2
GUÍA DE PRÁCTICAS
HEMATOLOGÍA
2018-I
PRACTICA Nº 1
I. INTRODUCCION
La exactitud y precisión de un resultado no sólo dependerá de la aplicación
de una buena metodología, sino se complementa además con el
conocimiento, el uso adecuado y correcto de los distintos instrumentos y
equipos involucrados en el diagnóstico. Finalmente es de suma importancia
también las buenas prácticas de laboratorio y medidas de Bioseguridad que
empleadas adecuadamente reducen al máximo los accidentes.
II. COMPETENCIAS
Reconoce, describe, emplea correctamente los instrumentos y
equipos y los aplica para el desarrollo de procedimientos.
Identifica los factores de riesgo y aplica adecuadamente las medidas
de Bioseguridad.
III. METODOLOGIA
Materiales
Cámara de Neubauer
Pipetas de Thoma para Hematíes y Leucocitos
Tubos de Westergren, Tubos de Wintrobe
Micropipetas de 10 – 100 ul, incluyen punteras
Tubos capilares con y sin heparina sódica
Tubos con sistema al vacío. .
Centrífuga para Hematocrito
Microscopio óptico
1. Cámara de Neubauer:
6.
MicrocentrÍfuga clínica:
- Capacidad 24 tubos capilares, plato duraluminio.
- Velocidad 15000 RPM. Motor estabilizado sobre balancines de jebe.
- Control de apagado automatico
- Control de velocidad de 0 a 12000 RPM
- Interruptor general y luz indicadora.
MIKRO 220
Sistema óptico
OCULAR: Lente situada cerca del ojo del observador. Amplía la imagen
del objetivo.
OBJETIVO: Lente situada cerca de la preparación. Amplía la imagen de
ésta.
F-CV3-3B-1 Rev. marzo 2013
7
8. Micropipetas
Se emplean para tomar s cantidades con exactitud y reproducibilidad.
En las prácticas de Hematología y Bioquímica los volúmenes de las
soluciones que se necesitan medir son del orden de microlitros (10 -6 L).
Se emplean las micropipetas, ya sean de volumen fijo o variable. Los
errores de medida que se pueden cometer dependen en gran medida
del usuario y no de la micropipeta en sí.
https://play.google.com/store/apps/details?id=com.appgraid.cellcounter&hl=es
Los Contadores de Células KACIL fueron proyectados con el fin de sustituir los
antiguos modelos de contadores de células mecánicos, utilizando tecnología
digital de última generación.
Características:
o Visor digital.
o Registro de Leucocitos, informando el total general y los valores
correspondientes a cada tipo de célula.
o Totalizador de conteos diferenciales con capacidad para contar hasta 999
células.
o Conteo de ERITROBLASTOS en separado, sin afectar el totalizador de conteos
diferenciales.
o Alarma sonoro y bloqueo automático para cada 100 (cien) células contadas.
o Teclado de alta durabilidad, capaz de soportar una cantidad elevada de toques.
o Función TIMER con posibilidad de control de un tiempo cualquiera hasta el de 9
horas y 59 minutos.
o Cronometraje de hasta 9 minutos y 59 segundos.
o Alimentación 127/220V-60 Hz.
o Dimensiones aproximadas (sin embalaje): 188 x 110 x 48 mm.
https://www.youtube.com/watch?v=1LI6-ot1QTk
HISTOGRAMAS Y DISPERSOGRAMAS
El analizador hematológico informa en dispersogramas e histogramas para
revisión y tamizaje detallados de los resultados. Los dispersogramas son figuras
de los resultados de la celda de flujo para aquellos analitos analizados por
citometría de flujo (WBC/BASO, DIFF y RETI/PLT). Los histogramas son gráficos
producidos por información de la apertura de impedancia (RBC/PLT). Son de
mucha ayuda cuando se revisan y se interpretan los resultados de los pacientes.
V. EVALUACIÓN
1. Principios y fundamento del hemograma automatizado.
2. Explique el fundamento del dispersograma e histograma del hemograma
automatizado
3. Describir los parámetros de los dispersogramas.
VI. BIBLIOGRAFIA
http://www.superior.de
Instituto Nacional de salud. Manual de Procedimientos. Bioseguridad
en Laboratorios de Ensayo, Biomédicos y Clínicos. Comité de
Bioseguridad del INS.
Muñoz Zambrano M. Manual de Procedimientos de Laboratorio en
Técnicas Básicas De Hematología. Lima: Instituto Nacional de Salud;
2005.
Vives Corrons,j.Manual de técnicas de Laboratorio en Hematología.
3ra ed. Barcelona: Elsevier Masson.; 2006.
Gomes Oliveira R. Hemograma. Como hacer e interpretar. 1ª ed. Sao
Paulo: Amolca; 2011.
Henry J. El Laboratorio en el diagnóstico clínico. 20ª. Ed.Madrid:
Marbán Libros; 2007
PRACTICA Nº 2
2. OBJETIVO
Establecer y uniformizar criterios en el procedimiento de obtención de muestras
sanguíneas con un adecuado control de calidad, ya que de ello depende que el
resultado del análisis de la muestra sea el correcto. Se efectuará en ayunas o
no, dependiendo de la prueba a usar.
3. COMPETENCIAS
Reconoce, describe, emplea correctamente los materiales para la
obtención de muestras sanguíneas.
Demuestra actitud crítica y reflexiva y orden durante el desarrollo del
procedimiento.
Aplica medidas de Bioseguridad.
4. CONTENIDOS
1. Obtención de muestra sanguínea por punción venosa.
2. Obtención de muestra sanguínea por punción capilar.
3. Obtención de muestra sanguínea por punción venosa empleando sistemas
al vacío.
5. METODOLOGIA
Materiales y equipos requeridos
Algodón, Alcohol al 70%, esparadrapo, Ligadura
Láminas portaobjetos sin grasa
Tubos al vacío, Holder, con EDTA(K3) Citrato
Lancetas hematológicas, tubos capilares con y sin heparina
Capilares hematológicos con y sin heparina, Plastilina
1. Verificar que los elementos por utilizar estén listos, y que el paciente se
sienta cómodo.
2. Aplicar el torniquete aproximadamente cuatro dedos por encima de la
flexión del codo o a 10 cm del codo, sujetar con un medio nudo.
3. Limpiar la zona con alcohol al 70% en círculos de adentro hacia afuera.
PUNCIÓN CAPILAR
Reuna el material y prepare al paciente Seleccione la zona, caliente, desinfecte y deje secar al aire (ver las zonas de elección
Realice la punción: sujete con firmeza, aplique la lanceta. Enjuague la primera gota de sangre. Coloque el tubo en el lugar de
Empuje el émbolo y suelte. Retire la lanceta y deposítela en la punción y canalice la sangre para que fluya por el centro del
el contenedor. colector hacia el interior del tubo. No exprima la zona
Llene el tubo de EDTA entre las marcas 250 y Empuje el tapón de cierre hasta oír un “click” Inmediatamente mezcle la muestra
500 L. invirtiendo el tubo 10 veces. No agite.
y fino. Siempre manipular las láminas por los bordes o por una esquina para
realizar el frotis.
.
GOTA GRUESA
IDENTIFICACIÓN CON
LÁPIZ
6. APLICACIÓN PRACTICA
1. Realiza obtención de muestra por punción venosa, capilar y gota gruesa
empleando los métodos propuestos.
2. Realiza extendidos sanguíneos.
7. EVALUACIÓN
1. Indique las ventajas y desventajas en la obtención de muestra sanguínea
por punción venosa empleando jeringa, sistemas al vacío y punción capilar
2. Investigue el procedimiento a emplearse para la obtención de sangre
arterial, casos.
8. BIBLIOGRAFIA
García B. Rubio F Carrasco M. Hematología I. 3 ra ed. Madrid: Thomson;
2007Muñoz M. Morón C. Manual de procedimientos de laboratorio en
técnicas básicas de hematología. Lima, Instituto Nacional de Salud. Serie
de Normas Técnicas No 40.2005.
Instituto Nacional de Salud. Manual de Procedimientos de Laboratorio en
Técnicas Básicas De Hematología. Versión en PDF.
García Espinoza B. Hematología 2. Hemostasia. Banco de Sangre. Control
de calidad. 4ta ed. Madrid: Paraninfo; 2004.
PRACTICA Nº 3
I. INTRODUCCION
Los anticoagulantes se utilizan para obtener plasma o muestras de sangre
total para estudiar las características morfológicas y realizar los recuentos
celulares. Deben intentar que las células sanguíneas a estudiar se encuentren
en el estado más parecido al fisiológico, como cuando se encuentran
circulando por el torrente sanguíneo. Para ello los anticoagulantes no deben
alterar la morfología de los leucocitos, el tamaño eritrocitario, no producir
II. OBJETIVO
Establecer y uniformizar criterios para el empleo adecuado de los distintos
anticoagulantes que garanticen la mejor conservación sanguínea.
Conocer las diferentes presentaciones de los anticoagulantes en los sistemas
al vacío.
Aprender a usar adecuadamente los colorantes y establecer criterios de calidad
para evaluar el producto final coloreado.
III. COMPETENCIAS
Identifica, selecciona y utiliza correctamente los diferentes
anticoagulantes en los sistemas al vacío.
Identifica el orden correcto de tomas de muestra en los sistemas al
vacío.
Prepara y realiza coloraciones sistematizando los tiempos para
mejores resultados.
Realiza el control de calidad de los procedimientos.
Describe la fase pre analítica e identifica los puntos críticos del
mismo.
Aplica medidas de Bioseguridad.
IV. CONTENIDOS
4. Características de los anticoagulantes
5. Tipos de colorantes, fundamento y procedimiento de coloración.
6. Realizar el control da calidad.
V. METODOLOGIA
Materiales
Colorante de Wright.
Solución amortiguada tamponada / agua destilada fresca
COLORANTE DE WRIGHT
Reactivos
Colorante de Wright …………………0,3 g
Metanol (CH3 OH)………………… 97,0 mL
Glicerol ……………………………….3,0 mL
Agua tamponada
El pH del agua que se emplea debe estar en 6.4. se preparan previamente los
tampones.
Tampón A: disolver 27.6 g. de fosfato ácido de sodio (NaH 2PO4H2O) en un litro
de agua destilada
Tampón B: disolver 28.3 de fosfato alcalino disódico anhidro (Na 2HPO4) en un
litro de agua destilada.
Para preparar agua a pH 6.4 se utiliza la siguiente proporción:
Tampón A: 73.5 ml.
Tampón B: 26.5 ml
Mezclar y completar a 200 ml con agua destilada.
Nota: una forma práctica de preparar agua tamponada es verter 0.4 – 0.5 ml
de carbonato de sodio al 10% (disolver 10 g. de carbonato de sodio en agua
destilada diluyendo hasta 100 ml) en 1 litro de agua destilada y ajustar el pH
Procedimiento
Disolver en un mortero el colorante con el glicerol. Una vez disuelto se adiciona
el metanol trasvasándolo a un frasco oscuro (color caramelo), luego agite.
Filtrar antes de usar.
Coloración:
1. Se coloca el frotis en un soporte y se cubre con el
colorante de Wright.
3.
TINCIÓN DE GIEMSA:
Reactivos
Colorante Giemsa (polvo)……………… 1.0 g
Glicerina calentada………………………66.0 ml (*50° C por 2 horas)
Alcohol metílico…………………………..66.0 ml
Disolver el colorante com glicerol
Adicionar el metanol, mesclar bien y dejar a temperatura ambiente 7 a
14 días (maduración)
Filtrar antes de su empleo (conservar em frasco color caramelo)
Agua tamponada
Ortofosfato disódico anhidro (Na2HPO4) 4 g
Ortofosfato monopotásico (KH2PO4) 5 g
Tomar 1 g de la mezcla de las sales y disolver en 1 litro de agua destilada,
agitar y ajustar a pH 7,2
Recomendaciones
Las sustancias amortiguadoras actúan como un elemento químico inactivador
de cantidades variables de ácido o álcali. En términos generales la reacción de
los diluyentes que había dado mejores resultados se acercaba al punto de
neutralidad (pH 7,0). En la práctica, la escala oscila generalmente entre un pH
6,6 - 7,4 que es por coincidencia, la escala del indicador rojo de fenol.
El ortofosfato disódico y el ortofosfato monopotásico son las sales
amortiguadoras que se usan con más frecuencia. En la práctica, se puede
preparar rápidamente soluciones amortiguadoras eficaces agregando 1 g de
mezcla de sales de sodio y de potasio por cada litro de agua destilada en la
proporción de 4:5 ó en cualquier otra proporción que haya resultado
satisfactoria. Se mezclan perfectamente dichas sales en las proporciones
seleccionadas, se pesa el polvo homogéneo en lotes de un gramo y se puede
envolver en papel glasine o bien disolver en pequeñas cantidades de agua.
Preparación de colorante diluido
Procedimiento
Utilizar una probeta de vidrio para diluir el colorante.
Preparar la solución de trabajo diluyendo la solución "madre" 1/10, con agua
destilada o solución amortiguadora de pH 7,2 (puede ser reemplazada por
agua de Iluvia o agua hervida fría).
1. Secar el frotis.
2. Fijar con alcohol metílico durante 3 minutos. En caso de que la preparación
del colorante ya posea metanol, este paso queda obviado.
Con esta técnica se destruyen los hematíes, observándose sólo los parásitos
teñidos, de citoplasma de color azulado y la cromatina rojiza.
Control de calidad de las coloraciones:
Una extensión de sangre bien teñida debe caracterizarse por una buena
diferenciación de las estructuras subcelulares en los leucocitos, una coloración
rosada de los hematíes y la ausencia de precipitados.
Los defectos más frecuentes observados en la tinción del frotis sanguíneo son:
Coloración excesivamente azul, debido a:
Frotis excesivamente grueso, Lavado insuficiente, Tinción muy prolongada,
Empleo de colorante excesivamente alcalino.
Coloración con una tonalidad rosada:
El colorante, el tampón o el agua de lavado tienen un pH demasiado ácido.
Presencia de precipitados:
se puede evitar con la filtración.
VI. APLICACIÓN PRÁCTICA
1. Selecciona y utiliza anticoagulantes de acuerdo a la necesidad.
Hemoglobina
Hematocrito
Recuento de Plaquetas
Recuento de Reticulocitos
T.T.P.A.
Fibrinógeno
Anticoagulante Lúpico
Fragilidad Osmótica
VIII. BIBLIOGRAFIA
San Miguel J. Hematología. Manual básico razonado. 3 ra ed. Barcelona:
Elsevier;
Instituto Nacional de Salud. Manual de Procedimientos de Laboratorio en
Técnicas Básicas De Hematología. Versión en PDF.
PRACTICA Nº 4
II. OBJETIVO
Realizar el recuento de Hematíes en cámara de Neubauer y Velocidad de
sedimentación Globular
La Velocidad de Sedimentación Globular es una sencilla prueba
empleada universalmente como índice de la presencia de enfermedades
activas de muchas clases, tiene por tanto un alto valor pronóstico.
III. COMPETENCIAS
Emplea correctamente los instrumentos para la práctica
Prepara las diluciones y realiza el recuento de hematíes
Calcula el número de hematíes a partir de los valores obtenidos
Interpreta los valores obtenidos
IV. CONTENIDOS
Preparación de las diluciones para el recuento de hematíes.
Recuento de hematíes en cámara de Neubauer.
Identificar los errores procedimentales y aplicar las correcciones del caso.
Prueba de Velocidad de Sedimentación globular.
V. METODOLOGIA
Resultados
N° de g. rojos x mm3= N° de g. rojos en 5 cuadrados pequeños
Área contada x altura de la cámara x dilución de la sangre
= Glóbulos rojos contados
1/5 x 1/10 x 1/200
Valores de referencia
(Unidades Internacionales)
Edad Sexo Intervalo de referencia
Fundamento
El test de velocidad de sedimentación globular (VSG) mide la sedimentación de
eritrocitos en su plasma nativo.
VSG es un test no específico que puede ser utilizado para detectar un amplio
rango de enfermedades y para monitorear el curso evolutivo de ciertas
enfermedades crónicas como los procesos inflamatorios crónicos (artritis
reumatoidea, tuberculosis) o la respuesta a la terapia. Sin embargo en ocasiones
cuadros tan graves como neoplasias y la cirrosis pueden presentar una VSG
normal. Constituye uno de los tests más utilizados como screening en el
laboratorio clínico. Se trata de un método sencillo para realizar y que requiere
equipamiento simple.
MÉTODO DE WESTERGREN
Es el método de referencia para medir la VSG. Fue propuesto como método de
referencia por el International Council for Standardization in Hematology (ICSH).
Materiales reactivos
2. Tubos de Westergren.
3. Soporte para tubos de Westergren.
4. Citrato trisódico 109 mM en solución acuosa. Si utiliza citrato trisódico
dihidratado (Na3C6H5O7.2H2O) prepare una solución acuosa de 32,08 g/l.
Procedimiento
1. La sangre se obtiene por punción venosa, evitando contaminación con
materiales utilizados para la higiene de la piel. La sangre se agrega en
proporción de 4 Vol de sangre a 1 Vol de solución de citrato de sodio, por
ejemplo 2 ml de sangre en 0,5 ml de anticoagulante. El test debe ser realizado
dentro de las 2 hs si la sangre es mantenida a temperatura ambiente, o dentro
de las 6 hs. si es mantenida a 4C.
2. Se vierte mediante una pipeta Pasteur o una jeringa de metal en el tubo de
Westergren, el cual tiene una graduación de 0 a 200 mm de arriba hacia abajo
presenta ambos extremos abiertos.
3. La sangre debe llenarse hasta la marca cero, se coloca en posición vertical
sobre una gradilla especial que obtura ambos extremos a temperatura
ambiente (18-25C), sin exposición a la luz del sol directa, libre de vibraciones
y corrientes de aire, manteniéndolo exactamente 60 min.
Resultados
Medir los milímetros descendidos de glóbulos rojos mediante la columna de
plasma por encima del paquete globular.
Valores De Referencia
I. EVALUACIÓN
1. Explique el proceso del recuento de hematíes automatizado, establezca
los beneficios diferenciales con el método manual.
2. Explique os procedimientos de control de calidad en el recuento de
hematíes.
3. Explique el proceso de velocidad de sedimentación globular
automatizado, establezca los beneficios diferenciales con el método
manual.
VIII. BIBLIOGRAFIA
PRACTICA Nº 5
HEMATOCRITO – HEMOGLOBINA
1. INTRODUCCION
2. OBJETIVO
Realizar la determinación de Hematocrito, Hemoglobina.
3. COMPETENCIAS
Describe, aplica y desarrolla los procedimientos para la determinación de
Hemoglobina, Hematocrito.
Identificar las posibles causas de error metodológico.
Interpreta los resultados.
4. CONTENIDOS
Determinación de Hematocrito.
Determinación de Hemoglobina por el método de Drabkin.
5. METODOLOGIA
1. DETERMINACIÓN de HEMATOCRITO
Mide la fracción que comprende a los glóbulos rojos (masa globular), respecto al
volumen total de la muestra de sangre venosa o capilar. Puede expresarse en
porcentaje o como valor decimal. Está directamente relacionado con la
concentración de hemoglobina, por lo que su determinación constituye el
procedimiento más simple para el diagnóstico de anemia. Así, un descenso del
Hto es indicativo de anemia, mientras que el aumento lo es de poliglobulia.
MICROMÉTODO O MICROHEMATOCRITO
El método de referencia para la determinación del Hto es la centrifugación de
sangre total en tubo capilar (micrométodo),
Materiales y equipos requeridos:
Equipo de toma de muestra
Capilares rojos (sangre capilar) o azules (sangre total) (75 mm x 1,5 mm).
Plastilina.
Microcentrífuga
Procedimiento:
1. Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del pulpejo del
dedo (Eliminar la primera gota después de la punción), o utilizar capilares
azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante. Debe llenarse
aproximadamente 70% - 80% del capilar (tres cuartas partes). No deberá
contener aire.
2. Sellar (tapar) el extremo del capilar por donde ingresó la sangre con plastilina.
3. Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de una centrífuga de
microhematocrito, con el extremo sellado adherido al reborde externo de la
plataforma.
4. Centrifugar por 5 minutos 12 000 rpm.
La
determinación del Hto debe realizarse por duplicado y la diferencia entre los
dos valores obtenidos no debe ser nunca superior a 0,01.
Resultados (lectura)
La lectura se realiza con una escala estandarizada que expenden en el comercio.
Uso de la escala:
1. Sostenga el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la columna de
eritrocitos (no el extremo inferior del tubo) quede exactamente al mismo nivel
de la línea horizontal correspondiente al cero.
2. Desplace el tubo a través de la escala hasta que la línea marcada con el
número 1,0 quede al nivel del tope de la columna de plasma. Vigile que el
fondo de la columna de eritrocitos continúe sobre la línea cero. El tubo debe
encontrarse completamente en posición vertical.
3. La línea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicará la
fracción de volumen de éstos. No considerar la capa de leucocitos y plaquetas.
Causas de error
Las fugas de muestra al no quedar bien sellado los capilares producen una
disminución en el valor, al perderse mayor proporción de células que de
plasma.
El uso de anticoagulantes líquidos provoca un error por dilución de la muestra.
En muestras capilares no descartar la primera gota, produce una mezcla con
los líquidos tisulares que provoca hemodilución.
En muestras de sangre venosa, el lazo colocado durante un cierto tiempo
produce hemoconcentración.
DOSAJE DE HEMOGLOBINA
Significación clínica
El cuadro más comúnmente relacionado con la disminución de hemoglobina sérica
es la anemia, que en la mayoría de los casos ocurre como signo o complicación
de otra enfermedad, a veces no relacionada directamente con trastornos en el
sistema sanguíneo.
Existen situaciones en las que, por el contrario, la concentración de hemoglobina
se encuentra anormalmente elevada debido a una superproducción de glóbulos
rojos. La única condición natural y fisiológica que afecta los niveles de
hemoglobina es la altitud, puesto que frente a bajas presiones de oxígeno
atmosférico se produce una compensación mediante el incremento en el número
de glóbulos rojos y, por ende, en la concentración de hemoglobina circulante.
Fundamento del método
Este método tiene como fundamento la transformación previa de la hemoglobina
en cianmetahemoglobina (HiCN), que es muy estable y posee un color
característico cuya absorbancia a 540 nm es proporcional a la cantidad de
hemoglobina que contenga la sangre. Los distintos compuestos de hemoglobina,
excepto la sulfohemoglobina que casi nunca es significativa, se transforman en
HiCN según el siguiente proceso:
Fuente: OMS
3. Errores de dilución
1. Empleo de pipetas automáticas descalibradas u otras pipetas sucias o
húmedas
2. No eliminación del exceso de sangre adherida a las paredes externas del
capilar antes de introducirlo en el reactivo
3. Dilución incompleta de la sangre en el reactivo
PRACTICA Nº 6
1. INTRODUCCION
2. OBJETIVO
Realizar la determinación de Volumen corpuscular Medio, Hemoglobina
corpuscular medio y Concentración de Hemoglobina Corpuscular Medio.
3. COMPETENCIAS
Describe, aplica y desarrolla los procedimientos de Hemoglobina, Hematocrito
y Recuento de Hematíes para la determinación de las Constantes
corpusculares.
Interpreta los resultados y realiza la clasificación de las anemias de acuerdo a
los casos presentados.
Aplica medidas de Bioseguridad durante el desarrollo del trabajo.
4. CONTENIDOS
Determinación de Volumen corpuscular Medio, Hemoglobina corpuscular
medio y Concentración de Hemoglobina Corpuscular Medio.
5. METODOLOGIA
Materiales y equipos requeridos
Algodón.
Alcohol al 70%.
Ligadura o torniquete de 25 a 30 cm de largo.
Tubos con anticoagulante EDTA.
Gradillas
Plastelina
Tubos al vacío, Holder, con EDTA(K3) Citrato
Lancetas hematológicas
Capilares hematológicos con y sin heparina
Solución salina.
Reactivo de Drabkin para hemoglobina.
Espectrofotómetro.
Cámara de Neubauer.
Microcentrífuga.
Micropipetas 10 y 100 ul
Punteras.
6. Constantes corpusculares
HCT
VCM = -------- x 10
RBC
Su valor normal está comprendido entre 80 y 100 m3 (1 m3 = 1 femtolitro =
10-15 litros).
Si es menor de 80 fl, se dice que hay una microcitosis, y si es mayor de 100 fl,
se habla de macrocitosis.
La microcitosis se da en la ferropenia y en la talasemia, y la macrocitosis en
las carencias de B12 o ácido fólico, en las hepatopatías crónicas y en la
reticulocitosis.
Hb
HCM = --------- x 10
RBC
Su valor normal está comprendido entre 27 y 31 picogramos (1 pg = 10-12g).
Si es menor de 27 pg, se dice que hay una hipocromía, y si es mayor de 31
pg, se habla de hipercromía relativa.
La hipocromía suele asociarse a la microcitosis y la hipercromía relativa a la
macrocitosis.
SD-GR
IDH = ----------------- x 100
VCM
Su valor normal debe ser igual o inferior al 15%. Indica la variación existente
entre los tamaños de los hematíes. Cuando ésta es muy grande, el IDH es
superior al 15% y se dice que hay una anisocitosis.
Hay anisocitosis en los períodos iniciales del tratamiento de las ferropenias y
también puede haberla en las fases inmediatas a la administración de
transfusiones.
Su valor normal está comprendido entre 2,2 y 3,2 g/dl. La disminución del
ADH indica la presencia de hematíes hipocrómicos; el aumento del ADH
expresa la existencia de hematíes hipercrómicos.
La separación del ADH de sus valores normales es, por tanto, un signo de
anisocromía.
8. APLICACIÓN PRACTICA
1. Con los datos que se le brinda en clase halle las constantes
corpusculares e interprete los resultados.
2. Resuelva el caso clínico presentado
9. EVALUACIÓN
1. Establezca la relación entre el valor de hematíes, VCM y RDW-CV del
resultado adjunto.
2. Fundamente y explique los resultados de las constantes corpusculares
del caso presentado con las alarmas que presentan en relación a los
hematíes, excepto, Reticulocitos.
10. BIBLIOGRAFIA
Sonnenwirth, Alex. Métodos y Diagnóstico del Laboratorio Clínico. Buenos
Aires. 12ma edición. Editorial Panamericana. 2001.
Vives, Joan. Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología.
Barcelona. 4ta edición. Editorial Masson, 2006.
PRACTICA Nº 7
I. INTRODUCCION
La observación de los eritrocitos a partir de una extensión de sangre de
calidad es una exploración imprescindible en el estudio etiológico de toda
anemia. Así, la observación de la morfología eritrocitaria es de gran utilidad
diagnóstica en numerosas anemias, en las que se suelen presentar
alteraciones características (Esferocitosis hereditaria, anemia hemolítica
autoinmune y mecánica, Hemoglobinopatía S, Eliptocitosis congénita y
Acantocitosis). Asimismo, ante cualquier anemia de origen desconocido,
resulta útil valorar la intensidad de la policromasia (índice de reticulocitosis), la
anisopoiquilocitosis con dacriocitosis y la presencia de algún eritroblasto
circulante (metaplasma mieloide), punteado basófilo (saturnismo, talasemia) y
anillos de Cabot o cuerpos de Howell-Jolly (diseritropoyesis, esplenectomía)..
La interpretación de las alteraciones morfológicas eritrocitarias se puede hacer
clasificándolas en cuatro grandes grupos: a) alteraciones del tamaño, b)
alteraciones de la forma, c) alteraciones del color y d) presencia de
inclusiones.
II. OBJETIVO
Identificación microscópica en el frotis de sangre periférica las alteraciones
morfológicas de los hematíes
III. COMPETENCIAS
Analiza microscópicamente las muestras e identifica las diferentes
alteraciones morfológicas de los hematíes.
Identifica parásitos hemáticos.
Relaciona las alteraciones morfológicas de los hematíes con
diferentes patologías.
IV. CONTENIDOS
1. Análisis microscópico de frotis de sangre periférica
2. Identificación de alteraciones morfológicas e inclusiones eritrocitarias.
INCLUSIONES INTRAERITROCITARIAS
(A) punteado basófilo, (B) cuerpos Howell Jolly, (C) anillo de Cabot y (D) cuerpos
de Heinz
VII. EVALUACIÓN
1. Explique la relación de las diferentes alteraciones morfológicas de los
hematíes con patologías de la sangre.
2. Fundamente tres causas que explican la formación de células en diana.
3. Explique los pasos correctos en la evaluación microscópica del frotis
sanguíneo.
PRÁCTICA N° 7-1
RECUENTO DE RETICULOCITOS
I. INTRODUCCION
II. OBJETIVO
Identificación y recuento de reticulocitos mediante coloración de Azul de Cresil
Brillante.
III. COMPETENCIAS
Aplicar correctamente la coloración supravital de Azul de Cresil
brillante para la identificación y recuento de Reticulocitos
Demuestra actitud crítica y reflexiva y orden durante el desarrollo del
procedimiento.
Aplica medidas de Bioseguridad.
IV CONTENIDOS
7. Tinción Supravital de Azul de Cresil Brillante
8. Interpretación de Resultados
9. Realizar el control da calidad de ambos procedimientos.
V. METODOLOGIA
Colorante:
Azul de Cresil Brillante………………1.0 gr (* se puede emplear azul de metileno fresco)
Solución salina (ClNa al 9%0)………100 ml
Citrato de sodio……………………….0.4 gr
Mezclar bien y filtrar antes de usar.
Procedimiento:
a) Colocar 3 gotas de colorante filtrado en un tubo
Resultados:
Niveles de Hemoglobina (g/dl) 15.0 13.3 11.7 11.0 8.3 6.6 5.0
Recuento de reticulocitos (%) 1 2 5 10 15 20 30
Recuento de reticulocitos 1 1,8 4 7 8,3 9 10
corregido (%)
Tiempo de maduración estimado 1 día 2 día 3 días
Índice de reticulocitos 1 2 5 5 7,5 10 10
VALORES DE REFERENCIA
11. BIBLIOGRAFIA
12. García B. Rubio F Carrasco M. Hematología I. 3 ra ed. Madrid: Thomson;
2007.
13. McDonald G. Atlas de Hematología.5ta ed. Barcelona: Panamericana; 2004.
PRACTICA Nº 9
I. INTRODUCCION
La médula ósea es el tejido donde se forma la sangre. La punción ósea tiene
como finalidad primordial realizar un examen morfológico de los elementos
celulares presentes en la médula ósea. Éste se realiza normalmente a partir
de una extensión del material medular obtenida por aspiración después de
practicada la punción en el hueso. La punción ósea suele realizarse casi
II. OBJETIVO
Identificar en láminas coloreadas de médula ósea y sangre periférica las
diferentes líneas celulares de la sangre.
III. COMPETENCIAS
Identificar, describe, diferencia los precursores celulares que conforman la
médula ósea normal.
Ordena y clasifica las series: mieloide y eritoride.
Identifica, describe, diferencia las células maduras en frotis de sangre
periférica.
IV. CONTENIDOS
10. Observación y reconocimiento microscópico de los precursores celulares en
frotis de médula ósea normal.
11. Observación y reconocimiento microscópico de células maduras en frotis de
sangre periférica.
V. METODOLOGIA
Materiales y equipos
Laminas teñidas con Wright de médula ósea normal
Láminas teñidas con Wright de sangre periférica normal.
Microscopios
Aceite de inmersión.
Colorante Wright
Bandeja de coloración
Agua destilada
Láminas portaobjetos.
Procedimiento:
MIELOPOYESIS
FORMACIÓN DE GRANULOCITOS (GRANULOPOYESIS):
El mieloblasto es el estadio más precoz que se puede reconocer. Los
mieloblastos originas a los promielocitos, que se caracterizan por su
contenido en gránulos azurófilos primarios. Desde el estadio de mielocito,
la proporción relativa de gránulos primarios desciende mientras que se
incrementa la de gránulos específicos o secundarios. A partir del mielocito,
pasando por el metamielocito, el núcleo celular se segmenta
progresivamente hasta el segmentado maduro. La granulación secundaria o
específica es la responsable de que el granulocito sea un neutrófilo,
eosinófilo o basófilo.
GRANULOCITOS:
Son leucocitos de 10-14 micras de diámetro. Su núcleo presenta diversas
lobulaciones, por esa razón también se conocen como polimorfonucleares,
y su citoplasma contiene granulación. En función del tipo de granulación se
diferencian los tres subtipos de granulocitos: neutrófilos (granulación fina
neutrófila), eosinófilos (granulación eosinófila: de color rosado oscuro) y
basófilos (granulación basófila: color azul oscuro). Los precursores
inmediatos se llaman cayados o bandas y se caracteriza por un núcleo
menos segmentado.
GRANULOCITOS SEGMENTADOS:
Según el tipo de granulación específica se identifican:
NEUTRÓFILOS: son células redondeadas, de tamaño entre 12 y 14 micras.
Su núcleo está segmentado en 2 a 5 lóbulos, unidos por unos finos puentes
cromatínicos. El citoplasma contiene numerosos gránulos neutrófilos que se
tiñen de color marrón con las coloraciones panópticas habituales, así como
cierto número de gránulos primarios o azurófilos difícilmente visibles al
quedar enmascarados por los neutrófilos.
EOSINÓFILOS: tienen un tamaño semejante a los neutrófilos, se
caracterizan por contener en su citoplasma gránulos acidófilos. Tienen
forma redondeada, ocupan todo el citoplasma de la célula y se tiñen de
color naranja o marrón anaranjado con las coloraciones panópticas. A
diferencia de los gránulos basófilos nunca se disponen por encima del
núcleo.
BASÓFILOS: son células redondeadas cuyo tamaño oscila entre 10 y
13micras. El núcleo de cromatina densa, posee generalmente dos o tres
lóbulos unidos por puentes cromatínicos, en ocasiones difíciles de visualizar
dada la presencia de las numerosas granulaciones basófilas propias de
esta célula. Los gránulos basófilos se disponen encima del núcleo. la
granulación basófila adquiere una coloración rojo-violácea oscura con las
tinciones panópticas y tiene una forma poligonal.
LINFOPOYESIS:
Durante el desarrollo de los linfocitos se reconocen los estadios de
linfoblasto y prolinfocito. La característica principal de la linfopoyesis es la
disminución progresiva del tamaño celular y el incremento de la relación
núcleo citoplasma. A diferencia de los que ocurre con el resto de células
sanguíneas, los linfocitos se multiplican y diferencias también fuera de la
médula ósea. Este proceso tiene lugar en los tejidos del sistema inmunitario
como respuesta a condiciones y estímulos inmunológicos determinados.
VII. EVALUACIÓN
VIII. BIBLIOGRAFIA
McDonald G. Atlas de Hematología.5ta ed. Barcelona: Panamericana; 2004.
Rodak BF. Atlas de Hematología Clínica. Maryland. 3ra edición. Editorial
Panamericana. 2009.
Abbott Laboratorios. La morfología de sangre periférica y médula ósea
teñidos con el colorante Wright. 1977.
PRACTICA Nº 10
I. INTRODUCCION
Las alteraciones benignas de los leucocitos pueden ser hereditarias o
adquiridas, y no poseen las características de la displasia o la malignidad. Los
cambios adquiridos se observan como respuesta a un conjunto de
circunstancias específicas y se interpretan como indicadores de esos estados
de enfermedad.
II. OBJETIVO
Identificación microscópica de las alteraciones cualitativas de los leucocitos
en extendidos de sangre periférica y/o médula ósea teñidos con Wright.
Interpretación y reporte según los protocolos establecidos.
III. COMPETENCIAS
Identificar, describe, diferencia los precursores celulares que conforman la
médula ósea normal.
Identifica las alteraciones cualitativas de los leucocitos en muestras teñidas
con Wright
Demuestra actitud crítica y reflexiva y orden durante el desarrollo del
procedimiento.
V. METODOLOGIA
Microscopios
Aceite de inmersión.
Colorante Wright
Bandeja de coloración
Agua destilada
Papel filtro.
Procedimiento:
Anomalía de Perget-Huet
Aberración nuclear de los granulocitos
con hiposegmentación del núcleo.
Esta anomalía es autosómica
dominante. Las claves de
identificación son:
Cromatina dispuesta en
racimos
Hipersegmentación
“desviación a la derecha”
hipersegmentación observada en las
anemias megolobláticas (deficiencia de
Ácido Fólico) o deficiencia de B12). Los
núcleos de los neutrófilos pueden ser
retorcidos y deformados, en ocasiones
esféricos - abultaos
La disminución de la degradación
mucopolisacárida provoca el depósito
de mucoplisacáridos (lípidos) en el
citoplasma de los neutrófilos que
teñidos con Wright se asemejan a
gránulos metacromáticos (violeta
oscuro a violeta) y puede ser difícil
distinguirlos de las granulaciones
tóxicas. Se agrupan en racimos
Granulaciones tóxicas
Son gránulos primarios
hipertrofiados que le dan
aspecto hipergranular a los
citoplasmas especialmente de
los neutrófilos. Es la respuesta
al estrés causado por un
cuadro infeccioso o
inflamatorio. Tienen
importancia clínica porque
refleja un mal pronóstico.
Cuerpo de Dohle
Se desarrollan en el citoplasma de los neutrófilos de pacientes con
infecciones o cuadros de estrés
son esféricos u ovalados con 1-5
u de diámetro y están
compuestos de cadenas
paralelas de ARN ribosómico. Su
color varía de gris a celeste. Se
asocian con una gran variedad
Vacuolización
Las vacuolas fagocíticas se
encuentran en los neutrófilos
en diversas situaciones. Se
observan ante la exposición
prolongada a medicamentos,
antibióticos, degradación de
bacterias.
Datos diagnósticos
(MEDIO%) %
PROMEGALOBLASTO 0 0
MEGALOBLASTO BASOFILO 0 0
MEGALOBLASTO POLICROMÁTICO 0 0
MEGALOBLASTO ORTOCROMATICO 0 0
VII. EVALUACIÓN
Describa el proceso completo
VIII. BIBLIOGRAFIA
Sonnenwirth, Alex. Métodos y Diagnóstico del Laboratorio Clínico. Buenos
Aires. 12ma edición. Editorial Panamericana. 2001.
Vives, Joan. Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología.
Barcelona. 4ta edición. Editorial Masson, 2000.
Rodak BF. Atlas de Hematología Clínica. Maryland. 3ra edición. Editorial
Panamericana. 2009.
PRACTICA Nº 11
I. INTRODUCCION
II. OBJETIVO
Realizar el recuento de Leucocitos en cámara.
III. COMPETENCIAS
Emplea correctamente los instrumentos para la práctica
Prepara las diluciones y realiza el recuento de leucocitos.
Calcula el número de leucocitos a partir de los valores obtenidos
Interpreta los valores obtenidos
Aplica medidas de Bioseguridad durante el proceso.
IV. CONTENIDOS
1. Preparación de las diluciones para el recuento de leucocitos.
2. Recuento de leucocitos en cámara de Neubauer.
3. Identificar los errores procedimentales y aplicar las correcciones del caso.
V. METODOLOGIA
RECUENTO LEUCOCITARIO
Principio
La sangre anticoagulada se deposita en un líquido hipotónico que permite
evidenciar los leucocitos, manteniéndolos visibles, mientras que los eritrocitos son
hemolizados. El recuento del número de leucocitos o glóbulos blancos se expresa
por mm3 (milímetro cúbico).
Microscopio.
Tubos con EDTA
Agujas y holder
Equipo de toma de muestra
Hemocitómetro (Cámara de Neubauer).
Pipeta de glóbulos blancos (de Thoma): Presenta cerca del extremo superior
una marca de 11, inmediatamente continúa una dilatación (bulbo) que contiene
una perla de color blanco mezcladora, luego sigue el tallo (extremo más largo),
el cual está dividido en 10 partes con 2 marcas: 1 acabando el bulbo y 0,5 a la
mitad del tallo.
Boquilla para aspirar.
Diluyente de Glóbulos blancos:
Solución de Turk
Ácido Acético Glacial…………..2.0 ml
Agua destilada…………csp…..100 ml.
Azul de metileno……………….. 1.0 ml
Procedimiento
1. Una vez obtenida la sangre con anticoagulante o sangre capilar del dedo, se
procede a aspirar la sangre con la pipeta de glóbulos blancos hasta la marca
de 0,5 y a limpiar la punta con papel absorbente.
2. Introducir la pipeta en el tubo que contenga solución de Turk y absorber hasta
la marca de 11 (no debe haber burbujas).
3. Tapar ambos extremos y proceder a mezclar manualmente (agitar
vigorosamente para provocar hemólisis) o en un rotador automático por 2 ó 3
minutos.
4. Monte la laminilla de vidrio en la cámara para recuento que debe estar limpia y
seca.
5. Agitar la pipeta y descartar las cuatro primeras gotas para luego colocar una
gota pequeña de esta solución en la cámara.
6. Deje reposar por espacio de 3 minutos para que las células se sedimenten.
7. Enfocar con objetivo de 10x y contar en 4 cuadrados grandes angulares.
Opcional:
1 3
7 9
Resultados
Cálculo:
La concentración del número de normoblastos (por litro) es:
Número de normoblatos contados x número de leucocitos
100 + Nº de normoblastos contados
Ejemplo:
Si se cuentan 50 normoblastos y la concentración del número de leucocitos es
16 x 109 /L, la concentración del número de normoblastos será:
50 x 16 = 5,3 x 109 /L
100 + 50
y la concentración de leucocitos corregida será: 16 - 5,3 = 10,7 x 10 9 /L
1. APLICACIÓN PRACTICA
1. Realizar cada uno de los alumnos el recuento de leucocitos de un paciente
en simultáneo (ambas cuadrículas) y comparar los valores obtenidos.
2. Interpreta los valores obtenidos.
3. Identificar los errores procedimentales y proponer soluciones.
2. EVALUACIÓN
1. Explique el proceso del recuento de leucocitos automatizado, establezca los
beneficios diferenciales con el método manual.
2. Explique la forma como se presenta el estudio de leucocitos en los
procedimientos automatizados.
VIII. BIBLIOGRAFIA
García B. Rubio F Carrasco M. Hematología I. 3ra ed. Madrid: Thomson; 2007.
Gomes O. Hemograma: cómo hacer e interpretar. 1 ra ed. Sao Paulo:
AMOLCA; 2011
Vives, Joan. Manual de Técnicas de Laboratorio en Hematología.
Barcelona. 4ta edición. Editorial Masson, 2000.
PRACTICA Nº 12
FÓRMULA LEUCOCITARIA
I. INTRODUCCION
La fórmula leucocitaria o recuento diferencial leucocitario (RDL) consiste en la
determinación del porcentaje que representa cada uno de los tipos de
leucocitos con respecto al total de ellos.
II. OBJETIVO
Realizar la fórmula leucocitaria en un frotis de sangre periférica.
III. COMPETENCIAS
Realizar correctamente el frotis la coloración.
Demuestra actitud crítica y reflexiva y orden durante el desarrollo del
procedimiento.
Interpreta los resultados
Trabaja en equipo promoviendo un mejor entendimiento.
IV. CONTENIDOS
Desarrollo de la fórmula leucocitaria e interpretación de los resultados
V. METODOLOGIA
Procedimiento:
f) Preparar el microscopio para que tenga el condensador alto y el diafragma
abierto.
g) Enfocar la preparación con el objetivo de 10x
h) Comprobar que la preparación es buena y elegir una zona en la que os
hematíes no estén superpuestos y los leucocitos se encuentren
uniformemente distribuidos.
i) Enfocar esa zona de la preparación con el objetivo de inmersión.
j) Observar esa zona de la preparación mientras se describe un recorrido en
forma de almenas o de greca.
1Fórmula Leucocitaria
En la sangre estudiada:
La proporción de leucocitos es normal
Hay una:
a. Neutrofilia
b. Neutropenia
c. Desviación a la izquierda
d. Desviación a la derecha
e. Eosinofilia
f. Eosinopenia
g. Basofilia
h. Basopenia
i. Monocitosis
j. Monocitopenia
k. Linfocitosis
l. Linfopenia
VII. EVALUACIÓN
1. Explique el proceso pre analítico y analítico de la fórmula
leucocitaria.
2. Determine los errores detectados durante el procedimiento e indique
los correcciones aplicadas para cada caso.
3. Explique la fórmula leucocitaria automatizada, establezca los beneficios
diferenciales frente al método manual.
VIII. BIBLIOGRAFIA
McDonald G. Atlas de Hematología.5ta ed. Barcelona: Panamericana; 2004.
Rodak BF. Atlas de Hematología Clínica. Maryland. 3ra edición. Editorial
Panamericana. 2009.
PRACTICA Nº 13
I. INTRODUCCION
La hemostasia es un proceso constituido por mecanismos biológico
interdependientes cuya finalidad es prevenir la extravasación sanguínea
espontánea, evitar la hemorragia excesiva a nivel de los vasos lesionados y
mantener la fluidez de la sangre circulante.
En esquema, el proceso de la hemostasia puede resumirse como sigue. Al
producirse una lesión vascular, el vaso afectado se contrae transitoriamente
disminuyendo el paso de la sangre a su través (reacción vascular). A
continuación, las plaquetas circulantes se adhieren rápidamente a la colágena
del tejido subendotelial, que se ha exteriorizado como consecuencia de la
lesión, y liberan adenosin-difosfato (ADP), el cual facilita la agregación de
aquellas y la formación de un trombo plaquetario (función plaquetaria). El
trombo plaquetario detiene momentáneamente la hemorragia, mientras es
reforzado por la formación de fibrina (coagulación sanguínea)
II. OBJETIVO
Realizar el recuento de plaquetas en cámara de Neubauer.
F-CV3-3B-1 Rev. marzo 2013
91
III. COMPETENCIAS
Emplea correctamente los instrumentos para la práctica
Prepara las diluciones y realiza el recuento de plaquetas.
Calcula el número de plaquetas a partir de los valores obtenidos
Interpreta los valores obtenidos
Aplica medidas de Bioseguridad durante el proceso.
IV. CONTENIDOS
3. Preparación de las diluciones para el recuento de plaquetas.
4. Recuento de plaquetas en cámara de Neubauer.
5. Estimación del número de plaquetas en frotis de sangre periférica.
6. Identificar los errores procedimentales y aplicar las correcciones del caso.
V. METODOLOGIA
Valores de referencia
Valores de
referencia
150 000 - 450 000
Plaquetas/mm3
Principio
Mediante esta prueba se estudia la adhesión de las plaquetas al endotelio
vascular y su capacidad para formar el trombo plaquetario que detiene la
hemorragia a nivel de un vaso de pequeño calibre. Consiste, por tanto, en
realizar una pequeña herida y medir el tiempo que tarde en dejar de sangrar.
Materiales
Esfingomanómetro (tensiómetro).
Lanceta (dispositivo descartable estandarizado para tiempo de sangría).
Cronómetro.
Papel Wathman Nº 1, cortado en círculos.
Vendita compresiva.
Algodón y alcohol.
Técnica
1. Exponer el antebrazo del paciente y escoger una zona libre de vénulas,
hematomas, heridas y otros.
2. Limpie con alcohol la zona escogida.
3. Coloque el tensiómetro en el brazo del paciente y regúlelo a 40 mm Hg.
4. Se extrae la lanceta de su reservorio estéril y se quita el seguro. No deben
pasar más de 30 a 60 segundos entre la inflada del tensiómetro y la
producción de la incisión.
5. Se presiona el disparador al mismo tiempo que el cronómetro y un
segundo después retire el dispositivo.
Limitaciones
Si existe trombocitopenia menor de 50 000/mm3 el tiempo debe ser
prolongado.
Debe tenerse cuidado de que el paciente no haya ingerido medicamentos que
interfieran la función plaquetaria, como aspirina u otros, hasta 7 a 8 días antes
de la prueba.
Interpretación
El tiempo de sangría por este método es la mejor valoración de la función
plaquetaria. La prolongación del tiempo en esta prueba se encuentra en
trombocitopenias o las enfermedades de alteración funcional de las plaquetas,
como son la enfermedad de Von Willebrand, la tromboastenia de Glasmann, el
Síndrome de Bernard-Soulier, la enfermedad de Storage Pool y otras. Mide in
vivo la adhesión, la agregación y la liberación plaquetaria como respuesta del
organismo a la lesión vascular.
Al realizar esta prueba, debe tenerse siempre en cuenta que la ingesta previa
de ácido acetilsalicílico puede alterar los resultados.
Materiales
Método
Previa asepsia,
Espere
haga
Cuando
la
otroslas
30 segundos
gotas de y sangre
recoja
Resultados incisión en el lóbulo
la segunda
dejen
de la de
gotafluir,
de sangre
detener
con el
Comunique el tiempo de sangrado redondeándolooreja al con
medio
cierta minuto más
cronómetro.
papel secante ,
cercano. profundidad,
Observaciones
Si el tiempo de sangrado se prolonga examine una extensión de sangre teñida
según el método de Wright para observar si las plaquetas son escasas.
Interpretación del resultado
El valor de referencia del tiempo de sangría según este método es de 1 a 4
minutos.
VII. EVALUACIÓN
1. Explique el proceso del recuento de plaquetas automatizado, establezca
los beneficios diferenciales con el método manual.
2. Determine los errores detectados durante el procedimiento e indique las
correcciones aplicadas para cada caso.
3. Defina y explique las constantes incorporadas en los equipos
automatizados para el estudio de las plaquetas: Plaquetocrito. VPM, y
otros.
4. Esquema del fundamento de del tiempo de Sangría (Ivy)
VIII. BIBLIOGRAFIA
1.García B. Rubio F Carrasco M. Hematología I. 3 ra ed. Madrid: Thomson;
2007.
2.Gomes O. Hemograma: cómo hacer e interpretar. 1 ra ed. Sao Paulo:
AMOLCA; 2011
3.Gonzales De Buitrago J. Técnicas y métodos de Laboratorio Clínico. 3 ra. Ed.
Barcelona: Masson; 2010.
PRACTICA Nº 14
HEMOSTASIA
Principios Generales
Cuando se realizan pruebas de hemostasia se debe considerar los cuidados
comunes a toda prueba de laboratorio. Entre estos tenemos:
1. Uso de anticoagulantes indicados: El tipo y la proporción del anticoagulante
deben ser evaluados para cada muestra.
2. Luego de centrifugar la sangre, el plasma obtenido es activado por contacto
con el vidrio. Esto puede alterar algunas pruebas, por ello se sugiere usar
recipientes de superficies “no humedecibles“, como el plástico o el vidrio
siliconizado.
3. El material debe estar escrupulosamente lavado, ya que residuos de proteínas
pueden contener sustancias tromboplásticas, enjuagarse con agua destilada
varias veces
4. Las pruebas deben realizarse lo antes posible y, si hay demora, las muestras
se podrán en congelación a 4 ºC. La conservación prolongada del plasma
antes de realizar la prueba conduce a un descenso de la actividad de los
factores 99lábiles (V y VIII), por tanto, el plasma debe ser analizado dentro de
las dos o cuatro horas de practicada la extracción.
5. Las pruebas se realizan siempre en duplicado y usando controles. Las
muestras controles serán obtenidas usando la misma técnica empleada para
obtener las muestras problema (pool de plasmas) o en forma comercial.
II. OBJETIVO
Desarrollar el Perfil de Coagulación para evaluar la Hemostasia primaria y
secundaria.
III. COMPETENCIAS
Utiliza correctamente los anticoagulantes para la obtención de
muestras sanguíneas; realiza los procedimientos correctos durante la fase
pre analítica.
Demuestra actitud crítica y reflexiva y orden durante el desarrollo del
procedimiento.
Realiza el control de calidad de los procedimientos.
Aplica medidas de Bioseguridad.
IV. CONTENIDOS
Materiales
Utensilios y materiales para punción venosa.
Un baño maría a 37 ºC,
Dos tubos de ensayo limpios, de 10 x 75 mm, del mismo calibre, marcados
en el nivel de 1 mL.
Un cronómetro.
Método
1. Mediante una jeringa de material plástico extraiga poco
más de 3 ml de sangre venosa, puncione la vena
rápidamente, de la manera adecuada. Cronometrar el
tiempo desde el momento que la sangre entre a la
jeringa.
2. Llenar cada uno de los tubos de
ensayo con 1 ml de sangre. Taponar con parafilm.
Colocar en baño maría a 37 ºC.
3. Después de 3 a 5 minutos sacar el primer tubo del baño
maría. Inclinar hacia un plano de 90º en
rotación a intervalos de 30 segundos
hasta que la sangre coagule (la sangre
no fluye cuando el tubo está en posición horizontal)
4. Examine el segundo tubo inmediatamente después que
haya coagulado la sangre del primero, lo que por lo
general es inmediato. Cronometrar. Se notifica como el
tiempo de coagulación la media de los dos tubos.
Resultados
El tiempo normal de coagulación en tubo es de 5 a 15 minutos a 37 º C.
Interpretación
Principio
Materiales:
Método:
Estudiar el plasma del paciente y control por duplicado. Varias pruebas pueden
ser realizadas simultáneamente a intervalos de dos minutos.
Resultados
Interpretación
Valores de referencia
De 30 a 45 segundos.
Observación
Principio
Materiales
Método
1. El tubo conteniendo la tromboplastina cálcica (Ortho) debe ser incubado a
37 º C (dependiendo del volumen 5 a 10 minutos).
2. En un tubo de 10 x 75 mm añadir 0,1 ml de plasma del paciente.
3. Incubar a 37 º C por 1 ó 2 minutos.
4. Añadir 0,2 ml de tromboplastina previamente calentada en el tubo con el
plasma del paciente; simultáneamente, disparar el cronómetro. Mover el
tubo para mezclar los reactivos. Dejar el tubo en reposo a 37 º C por
aproximadamente 8 ó 10 segundos.
5. Remover el tubo del baño maría y mover el tubo por inclinación hasta que el
coágulo se forme. Anotar el tiempo.
6. Repetir duplicado del paciente y control.
Resultados
Se anota el tiempo que tarda en coagular.
Interpretación
El tiempo de protrombina es expresado en segundos con el valor del control
(cada cual es la media de pruebas duplicadas). El valor del control (y paciente)
depende de la tromboplastina y de la concentración del citrato y hematocrito. Un
tiempo de protrombina prolongado indica deficiencia de los factores II, V, VII o X
también está prolongado en la hipofibrinogenemia y heparinemia. El tiempo de
protrombina es utilizado como una prueba de despistaje y también como control
para pacientes anticoagulados con drogas antagonistas de la vitamina K.
Valores de referencia
12 a 14 segundos.
VII. EVALUACIÓN
VIII. BIBLIOGRAFIA
Sonnenwirth, Alex. Métodos y Diagnóstico del Laboratorio Clínico. Buenos
Aires. 12ma edición. Editorial Panamericana. 2001.
San Miguel, Jesús. Cuestiones en Hematología. Barcelona. Editorial
Harcout Brace. 2002.
Cuellar, Francisco. Fundamentos de Medicina. Hematología. Medellín 6 ta
edición. CIB, 2004.
Soluplastin
Tromboplastina cálcica para la determinación del Tiempo
de Protrombina o Tiempo de Quick en una etapa
SIGNIFICACION CLINICA
El fenómeno de la coagulación puede desencadenarse por una “vía extrínseca” (lesión tisular) o por
una “vía intrínseca” contacto de la sangre con epitelios distintos del vascular normal).
La determinación del Tiempo de Protrombina o Tiempo de Quick es una prueba global para evaluar
la coagulación extrínseca, siendo sensible a: factor II o protrombina, factor V o proacelerina, factor
VII o proconvertina y factor X o Stuart-Prower.
Por lo tanto, la determinación se aplica a:
- estudios de rutina en los análisis prequirúrgicos;
- detección de alteraciones en los niveles de uno o más factores involucrados en la vía extrínseca;
- control de la terapéutica con anticoagulantes orales.
REACTIVO PROVISTO
Soluplastin: viales conteniendo tromboplastina de cerebro de conejo, cloruro de calcio para una
concentración final de 0,0125 mol/l y cloruro de sodio para una concentración final de 0,1 mol/l.
REACTIVO NO PROVISTO
Agua bidestilada o deionizada.
- Tapar y agitar suavemente hasta obtener una suspensión homogénea. Volver a homogeneizar cada
vez que se emplee.
PRECAUCIONES
El reactivo es para uso diagnóstico "in vitro".
MUESTRA
Plasma
a) Recolección: obtener sangre cuidadosamente (evitando estasis o trauma) y colocar en un tubo
con anticoagulante en proporción 9 + 1 exacta (ejemplo: 4,5 ml de sangre + 0,5 ml de
anticoagulante). Si se emplea Anticoagulante TP de Wiener lab., se requerirán 7 gotas para 4,5 ml de
sangre). Mezclar suavemente. Centrifugar y separar el plasma antes de los 30 minutos.
b) Aditivos: para obtener el plasma se debe emplear Anticoagulante TP de Wiener lab. o citrato de
sodio 0,130 mol/l.
c) Sustancias interferentes conocidas:
- las contaminaciones, visibles o no, son causa de tiempos falsamente prolongados;
- la presencia de heparina o EDTA invalida los resultados;
- hemólisis visibles dificultan la medición foto-óptica de los resultados.
Referirse a la bibliografía de Young para los efectos de las drogas en el presente método.
d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento:
el plasma debe mantenerse en el refrigerador (2-10oC) hasta el momento de efectuar el ensayo. En
caso de no procesarse dentro de las 4 horas contadas desde la obtención, la muestra se debe
congelar (a -20oC); de tal forma, puede conservarse durante un mes. Este último procedimiento debe
ser realizado con rapidez, al igual que el descongelamiento (sumergiendo en baño a 37 oC) previo a la
determinación.
PROCEDIMIENTO
1- Colocar el plasma (desconocido o control) en baño de agua a 37 oC durante 2-3 minutos (no más
de 10 minutos).
2- En un tubo de hemólisis, colocar 0,2 ml de Soluplastin reconstituido y preincubar a 37 oC durante
2-3 minutos (no más de 10 minutos).
3- Pipetear 100 ul del plasma preincubado y agregar rápidamente al tubo conteniendo 0,2 ml de
Soluplastin, disparando simultáneamente el cronómetro.
4- Mantener el tubo dentro del baño y cerca de una fuente de luz. Previo al tiempo estimado de
coagulación, sacar el tubo del baño, inclinar suavemente una o dos veces por segundo y detener el
cronómetro en el momento de la aparición del coágulo.
5- Calcular el tiempo promedio de coagulación de la determinación por duplicado para cada plasma
(desconocido o control). Si la diferencia entre los replicados de una misma muestra es mayor del
5%, se aconseja repetir el procedimiento desechando los valores anteriores. En caso de emplear un
instrumento de medición, deben seguirse las instrucciones del fabricante del mismo.
VALORES DE REFERENCIA
El rango de valores obtenidos en pacientes normales oscila entre:
- Tiempo de Protrombina o Tiempo de Quick: 10 - 14 seg
- Porcentaje de Actividad Protrombínica: 70 - 100%
Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios intervalos o valores de referencia. Para
pacientes bajo tratamiento con antivitaminas K se ha establecido un rango terapéutico que se
puede expresar como:
- Porcentaje de Actividad Protrombínica: 25 - 35%
- R.I.N.: 2,4 - 2,5
-
LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
Otras causas de resultados erróneos son:
- Extracción defectuosa de sangre venosa.
- Las variaciones en la relación anticoagulante/muestra o en la concentración de citrato utilizada
afectan los Tiempos de Quick por lo que se recomienda controlar la dosis de anticoagulante
empleada al tomar la muestra.
- La preincubación en el 2 o paso del PROCEDIMIENTO no debe exceder los 10 minutos indicados
como límite máximo. Por otra parte, es conveniente que el reactivo reconstituido se retire del
refrigerador inmediatamente antes de iniciar la prueba y vuelva a guardarse al finalizarla, ya que la
exposición por varias horas a temperatura ambiente en forma reiterada, deteriora el reactivo
produciendo el alargamiento de los tiempos de protrombina.
PERFORMANCE
a) Reproducibilidad: procesando replicados de las mismas muestras en un mismo día, se
obtuvieron los siguientes datos:
b) Comparación con método de referencia: procesando distintas muestras con Soluplastin y con
otro método tomado como referencia, se observa:
PRESENTACION
- Equipo para 100 determinaciones (10 x 2 ml) (Cód. 1705001).
- Equipo para 10 x 20 determinaciones (10 x 4 ml) (Cód. 1705005).
- Equipo para 320 determinaciones (8 x 8 ml) (Cód. 1705003).
BIBLIOGRAFIA
- Quick, A.J. - “Fisiología y Patología de la Hemostasis” - Ed. El Ateneo, Buenos Aires (1952).
- Araldi, H.T., et al. - “Primer Reactivo Nacional Argentino de Referencia de Tromboplastina de
Cerebro Humano” – Acta Bioquím. Clín. Latinoam. XVI/1:131 (1982).
- Comité de Expertos de la O.M.S. en Patrones Biológicos - Inf. Nº 28: Normalización de la Vigilancia
del Tratamiento Anticoagulante (oral) - Serv. Inf. Tec. Nº 610:49-56 (1977).
- Comité de Expertos de la O.M.S. en Patrones Biológicos - Inf. Nº 31: Requerimientos para
Tromboplastinas y Plasmas usados en la terapia anticoagulante oral - Serv. Inf. Téc. Nº 658:202-223
(1981).
- Suñer Casadevall, F. - “Nuevas Normas Internacionales para la Expresión del Tiempo de Quick” -
Análisis Clínicos X/40:240-245 (1985).
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests", AACC Press, 3rd ed., 1990.
PRACTICA Nº 15
I. INTRODUCCION
El alumno aplicará procedimientos de laboratorio tanto en la fase pre analítica
y analítica para desarrollar un Perfil Hematológico completo y un Perfil de
coagulación, interpretará los resultados. Finalmente emitirá un resultado.
II. OBJETIVO
Realizar un Perfil Hematológico completo y Perfil de coagulación.
III. COMPETENCIAS
Realizar correctamente el Perfil Hematológico completo y Perfil de
coagulación.
Demuestra actitud crítica y reflexiva y orden durante el desarrollo del
procedimiento.
Interpreta los resultados
Asume su labor profesional con sentido ético.
IV. CONTENIDOS
Perfil Hematológico completo y Perfil de coagulación.
V. METODOLOGIA
MIELOCITO 0% 0 / mm3
METAMIELOCITO 0% 0 / mm3
ABASTONADOS 0– 5 % 0 - 700 / mm3
SEGMENTADOS 55 – 75 % 1,800 - 7,000 / mm3
EOSINOFILOS 0- 4 % 0 - 450 / mm3
BASOFILOS 0- 2 % 0 - 200 / mm3
MONOCITOS 0-8 % 0 - 800 / mm3
LINFOCITOS 25 - 35 % 1,000 - 4,800 /mm3
0%
ANISOCITOSIS
POIQUILOCITOSIS
HIPOCROMIA
APLICACIÓN PRÁCTICA
Aplicar los diferentes procedimientos para el desarrollo del Perfil Hematológico y
Perfil de coagulación
VII. EVALUACIÓN
1. Explique el proceso pre analítico y analítico del análisis realizado.
2. Determine los errores detectados durante el procedimiento e indique
las correcciones aplicadas para cada caso.
VIII. BIBLIOGRAFIA
Mazza J. Hematología Clínica. 3ra ed. Madrid: Marbán; 2004.
Gil J. Hematología sin microscopio. El hemograma en la práctica clínica.
Barcelona: Masson; 2004.
Cuellar F. Fundamentos de Medicina. Hematología. 6 ta ed. Medellín: CIB;
2004
García Espinoza, Benjamín. Hematología. Madrid. Tercera edición. Editorial
Paraninfo.2003.