UNIVERSIDAD NACIONAL SAN ANTONIO ABAD DEL CUSCO

FACULTAD DE INGENIERÍA DE PROCESOS

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS

TEMA: “EXTRACCIÓN DE ADN DEL TOMATE”

CURSO: BIOTECNOLOGIA

INTEGRANTES:

 Delia Castro Cabrera

 Zulema Cordova Choque
 Mirela Torres Choquehuanca
 Indira Pumahuillca Vargas
 Mady
 Hernnry
 Fiorella sulca

DOCENTE:

Ing. Edgar HuillCa Jimenez

Quillabamba – La Convención – 2019

I.INTRODUCCIÓN
El ADN es la sustancia química donde se almacenan las instrucciones que dirigen el desarrollo
de un huevo hasta formar un organismo adulto, que mantienen su funcionamiento y que
permite la herencia. Es una molécula de longitud gigantesca, que está formada por agregación
de tres tipos de sustancias: azúcares, llamados desoxirribosas, el ácido fosfórico, y bases
nitrogenadas de cuatro tipos, la adenina, la guanina, la timina y la citosina. La extracción de
ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar, tienen que romperse la pared
celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación,
debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último hay que
proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite
en alcohol. La solución jabonosa y sal ayudada por la acción de la licuadora es capaz de romper
la pared celular y las membranas plasmática y nuclear. El alcohol se utiliza para precipitar el
ADN que es soluble en agua pero, cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en
la interfase entre el alcohol y el agua.
El tomate (Solanum sp) es un vegetal idóneo para realizar la extracción casera del acido
nucleico en mención ya que permite una fácil manipulación y al momento de triturarlo y su
posterior extracción de ADN

II. MARCO TEORICO

2.1. ADN
El ADN (ácido desoxirribonucleico) es el lugar donde reside la información genética de un ser
vivo, su estructura es una cadena larga de piezas planas que se proyectan hacia afuera,
denominadas bases. Esta escalera en espiral tiene la capacidad de enrollarse y desenrollarse
para que la cadena de ácido nucleico pueda duplicarse. Ese proceso de duplicación, llamado
replicación, sucede cada vez que una célula se divide (CORFIELDet al., 1992).
2.2. Extracción de ADN
La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En primer lugar, tienen que
romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder acceder al núcleo de la célula.
A continuación, debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por
último, hay que proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que
hacer que precipite en alcohol (HAGELBERGet al., 1989).
2.2.1. Extracción del ADN en las plantas
El ADN genómico de las plantas es más difícil de extraer a causa de la pared celular de la planta,
que se elimina por homogeneización o mediante la adición de celulosa para degradar la
celulosa que forma la pared celular (ZAVALA 2005).
2.2.2. Extracción de ADN animal
Los leucocitos de sangre periféricos son una fuente principal de ADN genómico en animales,
pero la recogida de muestras es difícil ya que la sangre debe ser retirada del animal. La sangre
contiene una serie de compuestos como proteínas, lípidos, glóbulos blancos, glóbulos rojos,
plaquetas y plasma, que pueden contaminar la muestra de ADN (ZAVALA 2005).
2.2.3. Diferencias
Las diferencias entre el ADN de las plantas y los animales se encuentran en la secuencia de
bases en la hélice. Los compuestos que se encuentran en las células vegetales están ausentes
en las células animales y las secuencias de bases de ADN reflejan esto, puesto que el ADN
genómico de la planta es a menudo mayor que el ADN de los animales. Estas diferencias
afectan los métodos de extracción, ya que impacta en el rendimiento y la pureza del ADN.
2.3. Métodos de extracción 2.3.1. Método CTAB
Bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB) de extracción es un método de extracción de ADN de
plantas que elimina los polifenoles de las paredes celulares de las plantas. Los polifenoles son
compuestos con cadenas largas de ADN que se asemejan y se precipitan de manera similar.
2.3.2. Método de acetato de potasio SDS
El método de acetato de potasio de dodecilsulfato de sodio (SDS) de la extracción de ADN es
otra forma común para extraer material genético de la planta. Este método utiliza el alcohol
para romper las paredes celulares.

III. FUNDAMENTO
La extracción de ADN de una muestra celular se basa en el hecho de que los iones salinos son
atraídos hacia las cargas negativas del ADN, permitiendo su disolución y posterior extracción
de la célula. Se empieza por romper las células mediante un detergente, vaciándose su
contenido molecular en una disolución tampón en la que se disuelve el ADN. En ese momento,
el tampón contiene ADN y todo un surtido de restos moleculares: ARN, carbohidratos,
proteínas y otras sustancias en menor proporción. Las proteínas asociadas al ADN, de gran
longitud, se habrán fraccionado en cadenas más pequeñas y separadas de él por acción del
detergente. Sólo queda, por tanto, extraer el ADN de esa mezcla de tampón y detergente,
para lo cual se utiliza alcohol isoamílico.

La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas:

1. En primer lugar tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmática para
poder acceder al núcleo de la célula.
2. A continuación debe romperse también la membrana nuclear para dejar libre el ADN.
Los jabones utilizados como lavavajillas emulsionan los lípidos de las membranas celulares y
las rompen.
3. La sal evita la unión de las proteínas al ADN.
4. Para aislar el ADN hay que hacer que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua,
pero cuando se encuentra en alcohol se desenrolla y precipita en la interface entre el alcohol
y el agua. Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes
celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.
 IV. OBJETIVO
 Extraer de forma casera ADN a partir de material vegetal (tomate, Solanum sp.)

V. MATERIALES
 2 tomates
 Medio vaso de agua fría (50 ml)
 Una batidora
 Tubos de ensayo u otros recipientes pequeños de cristal
 2 jarras
 Alcohol de limpiar o de quemar muy frío
 Papel para filtrar el café (o un tamiz muy fino)

VI. METODOLOGÍA
- El agua tiene que estar muy fría, así que deja antes que se enfríe en la nevera.
- Mete los tomates y el agua en la batidora y mezcla a gran velocidad.
- Aguanta el filtro del café sobre la entrada de otra jarra y vierte el contenido de la
batidora en ésta.
- El filtro impide que pasen a la jarra las partículas grandes que podrían ocultar el ADN.
- Añade un par de cucharadas soperas de detergente de platos y agita la jarra para que
se mezcle.
- Dejar reposar 5-10 minutos.
- Vierte la mezcla en tubos de ensayo o recipientes de cristal pequeños.
- Llénalos hasta un tercio.
- Con mucho cuidado, vierte el alcohol enfriado en el tubo de ensayo de tal forma que
forme una capa sobre el zumo de tomate.
- En cada tubo tendrás que añadir aproximadamente la misma cantidad de alcohol que
de zumo de tomate.
- Dejar reposar durante 5 minutos.
- El ADN del tomate debería agruparse en una capa entre el zumo y el alcohol.
- Mete un palillo de dientes en la unión entre el alcohol y el zumo de tomate.
- Saca el palillo y verás un hilillo fino y blanquecino colgando de él. Es el ADN del tomate.
Si lo haces lentamente, podrás extraer mucho ADN con el palillo ya que seguirá
acumulándose en la unión del tomate con el alcohol.
- Si no consigues enganchar el ADN con el palillo, inténtalo agitándolo a ver si el ADN se
acumula a su alrededor

VII. OBSERVACIONES
 Se pudo comprobar el contenido de ADN, que las células animales como vegetales que
lo contienen dentro de su estructura la cual es la cantidad de información genética de
ADN.
 El ADN se precipita en alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto.
 Además de permitirnos ver el ADN el alcohol separa el ADN de otros componentes los
cuales son dejados en la solución acuosa.
VIII. RESULTADOS Y DISCUSIONES
 El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que, entremezclado con
él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional" se realiza añadiendo enzimas que
fragmentan las moléculas de ARN e impiden que se unan al ADN.
 Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene lauril sulfato de sodio, el
cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste actúa de la misma manera en
el protocolo de extracción de ADN, separando las grasas (lípidos) y las proteínas que
constituyen las membranas que rodean la célula y el núcleo. Una vez que estas membranas se
han roto, el ADN es liberado de la célula
 El calor suaviza los fosfolípidos (grasas) en las membranas que rodean la célula y el núcleo.
También desactiva (desnaturaliza) a las enzimas desoxirribonucleicas (ADNasas) las cuales, si
están presentes, pueden cortar el ADN en pedazos tan pequeños que lo haría imposible de
ver. Si las enzimas se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, éste pierde su forma y se vuelve
inactivo. Las enzimas se desnaturalizan a 60° Celsius y el ADN se desnaturaliza a 80° Celsius.
 El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto. Además de
permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros componentes celulares, los cuales
son dejados en la solución acuosa.
 El proceso de extracción de ADN desde una célula es el primer paso para
muchos procedimientos (protocolos) de los laboratorios de biotecnología. Los científicos
deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias no deseadas que se
encuentran en las células, evitando que el ADN se desnature (que se rompa).
 El material que se necesita para ello es fácil de encontrar y el procedimiento es sencillo .Cada
uno de los ingredientes tiene su propia función. La solución de sal y jabón sirve para romper la
membrana plasmática y nuclear e incluso la pared celular. El líquido de lentillas elimina las
proteínas que degradan el ADN. El alcohol etílico sirve para precipitar el ADN

 El ADN constituye el material hereditario de un individuo. En él están escritas las

instrucciones que deben seguir las células para construir un organismo y mantenerlo
vivo. Todas las células que forman un individuo contienen una copia idéntica de ADN.
Cada una de ellas, sin embargo, lee una parte de estas instrucciones y por eso hay
células con diferentes formas y funciones. Está formado por desoxirribonucleotidos (A,
G, C, T). Que a su vez están formados -D desoxirribosa y un ion fosfato. La proporción
y secuencia de las bases nitrogenadas diferencia a los poli nucleótidos.

El ADN presenta dos niveles de plegamiento que dan lugar a:

Estructura primaria:
Los polinucleótidos se forman entre las bases nitrogenadas de adenia, guanina,
citosina y timina por enlaces covalentes de tipo fosfodiester. Así se forma un esqueleto
de polidesoxiribosa-fosfato, de forma que queda un extremo con -OH 3´ libre y un
extremo 5´ con un grupo fosfato libre.

Estructura secundaria:
Tiene un empaquetamiento espacial pero no se altera.
Dentro de la estructura secundaria hay 3 modelos:
1. El modelo de la estructura secundaria del ADN en forma de doble hélice
dextrógira (forma B). Las dos hebras son anti paralelas es decir si una presenta
la dirección 5´->3´, la otra posee la dirección 3´->5´.
2. El conjunto se pliega sobre sí mismo obligado por los puentes de hidrógeno entre
diferentes regiones de la molécula, hasta adoptar la conformación más estable, que
 es la de doble hélice. Este enrollamiento entre las 2 hebras de la doble hélice es
dextrógiro es decir gira a derechas y de tipo plectonémico, como si estuvieran
trenzadas.
3. Las secuencias de bases son complementarias, pues hay una correspondencia entre
las bases de ambas cadenas .La adenina sólo puede estar frente a la timina y la guanina
frente a la citosina. Así las bases púricas están enfrentadas a las bases pirimidínicas y
la unión se realiza por puentes de hidrógeno en los pares A=T y tres en los pares G-C
La correspondencia entre las bases es la causa de que las dos cadenas de la doble
hélice de ADN posean secuencias complementarias.Además los pares de bases
están horizontales y el eje los atraviesa por el centro.
Modelo hélice A: En este modelo los pares de bases nitrogenadas están inclinados
hacia el exterior pero la hélice al igual que la del ADN B es dextrógiro
Modelo hélice z: En este modelo las cadenas de ADN no se enrollan en forma de
doble hélice sino en forma de zig-zag.
ADN es la abreviatura del ácido desoxirribonucleico (en inglés, DNA). Constituye el
material genético de los organismos. El ADN es una molécula que se encuentra en
todas las células de los seres vivos y se encarga de codificar todo lo que nosotros
formamos o somos, desde nuestro color del pelo hasta las proteínas que tenemos
en nuestra sangre. El ADN es una molécula cargada que está asociada a proteínas
y en el caso de los organismos eucariontes está encerrado dentro de un núcleo.
 Factores que afectan el rendimiento, calidad y pureza del ADN:
-Cantidad de material de partida
-Número de copias de las moléculas de ADN
-Cantidad de tejido.
-Condiciones en las que se encuentra el material de inicio(fresco, congelado, fijado)
Contaminantes e interferentes en el material biológico
 Se pudo observar que se formó en tres fases, en la fase 1 se observó el agua y en la
fase 2 partículas y en la 3 las proteínas de ADN suspendidas en otros compuestos.
Según MALAJOVICH (2012), esta separación de fase se debe a la diferencia de
densidades
 A través de este experimento pudimos analizar que cada uno de los ingredientes tiene
su propia función. La solución de sal y jabón sirve para romper la membrana plasmática
y nuclear e incluso la pared celular. El detergente elimina las proteínas que degradan
el ADN. El alcohol etílico sirve para precipitar el ADN.

IX. CONCLUSIONES
- Despues de haber realizado todo el procedimiento y colocar la solución del tomate pudimos
observar las fibrillas de ADN las cuales se formaron en el interior del tubo de ensayo
tomándose de color blanco, precipitado sobre el alcohol entonces esta es una mezcla
heterogenea.
- En caso de que el ADN de la Muestra Vegetal no se pueda apreciar muy claramente.
Tenemos que agitar el tubo un poco para poderlo apreciarlo mejor. Si se tiene
problemas con el filtro, que no está bien hecho y que no filtra bien, por lo tanto hay
que hacer otro. También puede haber complicaciones con la forma de poner el alcohol
de manera que cayera por las paredes del tubo de ensayo.
- Con esto pudimos conocer el procedimiento para la extracción de ADN requiere de
una serie de etapas básicas
- En primer lugar tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática para
poder acceder al nucleo de la celula. A continuación debe romperse también la
membrana nuclear para dejar libre el ADN. También tenemos que proteger el ADN de
enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer que precipite en alcohol.
- La sal ayuda para que el filamento de células se unan; es decir la unión de las proteínas
del ADN.

X. ANEXOS
XI. BIBLIOGRAFÍA
 FLAVELL, R.B.; TWELL, D. 1996. Plant genome constituents and their organisation. In:
G.D. Foster; D. Twell. (Eds.). Plant Gene Isolation. John Wiley & Sons, London.

 ROCHA, P. 2002. Teoría y práctica para la extracción y purificación del ADN de palma
de aceite (Theory and Practice for the Extraction and Purification of the Oil Palm DNA).
Rev. PALMAS - Vol. 23 No. 3.

 MALAJOVICH (2012). Biotecnología. Guías de actividades: enseñanza y divulgación. 2a

ed. Bernal - Universidad Nacional de Quilmes. http://www.bteduc.bio.br.

 KARP, G. 1996 Biología celular y molecular. Editorial Mc Graw Hill, Interamericana.

España.

 http://www.jpimentel.com/ciencias_experimentales/pagwebciencias/pagweb/la_cie
ncia_a_tu_alcance_II/quimica/Experiencias_quimica_extraccion_de_adn.htm (01 de
noviembre de 2008).

 http://www.correodelmaestro.com/anteriores/2005/noviembre/2nosotros114.htm(
01 de noviembre de 2008).

 http://www.joseacortes.com/practicas/extraccionADN.htm (01 de noviembre de

2008)