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Fitoquímica Cartas 6 (2013) 219-223

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Phytochemistry Cartas

jo u rn h om ep ag e: ww w.el s evier. com / lo c comió / p hyt ol

Nuevo constituyentes de la fruta seca de Piper nigrum Linn., Y su potencial larvicida en contra de Mosquito vector
del dengue Aedes aegypti

tahsin gulzar una , Nizam Uddin segundo , do , Bina Shaheen Siddiqui segundo , * , Syed NH Naqvi re , sabira Begum segundo ,
Rajput Muhammed Tariq mi
una Departamento de Aplicado Química, SOL. C. Universidad, Allama Iqbal Road, Faisalabad, Pakistán
segundo HEJ Investigación Instituto de Química, Centro Internacional de Ciencias Químicas y Biológicas, Universidad de Karachi, Karachi-75270, Pakistán
do Centro de Excelencia en Biología Marina de la Universidad de Karachi, Karachi-75270, Pakistán
re Departamento de Farmacología, Universidad de Medicina Baqai, Karachi, Karachi-74600, Pakistán
mi MAHQ, Biológico Centro de Investigación de la Universidad de Karachi, Pakistán

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO RESUMEN

Artículo historia: Seis compuestos bioactivos se aislaron a partir del extracto de semillas de Piper nigrum Linn. después de un aislamiento actividad larvicida contra guiada
recibido el 8 de De noviembre de 2012, recibidos en forma 9 cuarto instar de larvas Aedes aegypti L., un mosquito vector del dengue y un portador de la fiebre amarilla. Sus estructuras fueron determinadas usando
revisada en enero 2,013 mil Accepted 26 De enero de 2013
métodos espectroscópicos incluyendo HR-EIMS, FAB-MS, 1 H y 13 C RMN (Broad Bond desacoplado y DEPT), y 2D-RMN técnicas ( 1 H- 1 H COSY,
Disponible línea 21 febrero de 2013
NOESY, HMQC, HMBC, y 2D- J- resuelto). Estos incluyen tres nuevos componentes a saber pipilyasine ( 1),

pipzubedine ( 2) y pipyaqubine ( 3), y tres constituyentes conocidos pelitorina ( 4), pipericine ( 5) y piperina ( 6). La actividad larvicida se determinó
Palabras clave: Piper nigrum
por el método de la OMS.
Linn larvicida actividad
2013 fitoquímico Sociedad de Europa. Publicado por Elsevier BV Todos los derechos reservados.

Aedes aegypti L.
Pipilyasine
Pipzubedine
Pipyaqubine

1. Introducción enfermedad grave vectorización de plagas de insectos. Su control depende principalmente de


aplicaciones continuas de pesticidas sintéticos que son los larvicidas más eficaces ( Rozendaal, 1997 )
Piper ( familia Piperaceae) es un género muy grande que consiste en aproximadamente 2000 especies.Pero resultar en el desarrollo de la resistencia y los efectos no deseados en organismos no objetivo,
Varias especies de Gaitero se han utilizado como especia y en tradicional medicina y soportar una y causar peligros ambientales ( Brown, 1983; Hayes y Laws, 1991; Rozendaal, 1997 ). Estos
problemas requieren el descubrimiento de nuevos agentes de bajo coste fácilmente disponibles que
inmensa comercial, económico y medicinal importancia ( Dymock et al., 1891 ; Nadkarni y revisado por Nadkarni,
1996; Siddiqui et al., 1997 ). puede controlar las larvas de mosquito sin producir ninguna resistencia cruzada. Teniendo en cuenta
que las plantas constituyen una rica fuente de productos químicos bioactivos nuestro grupo se ha
Gaitero nigrum ( negro pimienta) es un acre, caliente, picante, y una escalada arbusto perpetua ( Irvine, dedicado a la búsqueda de plaguicidas botánicos desde hace varios años y se ha informado de
1961; Krishnamurthi de 1969 ). Es diferente partes se han utilizado como agentes medicinales para el varios nuevos compuestos insecticidas incluyendo amidas y dímeros de amida de los frutos de P.
nigrum Linn ( Siddiqui et al., 1997, 2004a, b, c, 2005; Wei et al., 2004 ). El presente estudio es una
tratamiento de bronquitis, enfermedades gastrointestinales, y el reumatismo ( Parmar et al., 1997 ). fitoquímico
investigaciones sobre esta especie realizadas por varios grupos han conducido al aislamiento de una continuación de estos esfuerzos para obtener nuevos constituyentes de P. nigrum L. y para investigar
su potencial frente a larvas de cuarto instar de A. aegypti son. Estos hallazgos han llevado al
serie de compuestos incluso (alcaloides Siddiqui et al., 1997, 2004a, b, c, 2005; Wei et al., 2004 ), propenylphenols,
lignanos, neolignanos, terpenos, esteroides, pironas, piperolides, chalconas, FL avonas y FL aislamiento de seis compuestos larvicidas incluyendo tres nuevos constituyentes, pipilyasine ( 1), pipzubedine
(avanones Parmar et al., 1997; Jagella y Grosch, 1999 ). El amarillo fiebre mosquito, Aedes aegypti ( L.) ( 2) y pipyaqubine ( 3) junto con tres conocidos pelitorina compuestos ( 4) ( Kiuchi et al., 1988; Siddiqui et
es una extendida y al., 2004c ), Pipericine ( 5) ( Siddiqui et al., 1997 ), Y la piperina ( 6) ( Siddiqui et al., 1997 ) ( Figura 1 ).

* Autor correspondiente. Tel .: +92 21 99261716; fax: +92 21 99261713 14.


Email dirección: siddiqui_bina@yahoo.com (BS Siddiqui).

1874-3900 / $ - see front matter 2013 Sociedad fitoquímico de Europa. Publicado por Elsevier BV Todos los derechos reservados.
http://dx.doi.org/10.1016/j.phytol.2013.01.006
220 T. Gulzar et al. / Phytochemistry Cartas 6 (2013) 219-223

Higo. 1. Estructuras de compuestos aislados de las semillas extraen de Piper nigrum Linn.

2. resultados y discusión observado en el 13 espectro C RMN a re do 28,6-29,9 y re do 23.2 que fueron asignados a CH 2- 7-11, CH 2-
2 0 y CH 2- 12 respectivamente ( tabla 1 ) Sobre la base de comparación con los datos de estructuras
Compuestos 1 - 6 fueron aislado a partir del extracto de etanol de la seca semillas de pag. nigrum L., parciales similares ( Breitmaier et al., 1979; Moriyama et al., 1986 ). Un grupo metileno adyacente a un
a través de disolvente fraccionamiento y cromatográfico técnicas. doble enlace en la cadena era evidente a partir de las señales en re H 2,28 (2H, q, J = 6,7 Hz),

Pipilyasine ( 1) estaba obtuvo como un polvo amorfo blanco. Sus molecular fórmula, C 18 H 33 No fue determinado
a partir de su masa exacta en m / z 279.2571 (calc 279.2562) en el HR-EI-MS que reveló Tres insaturacionesre do 33,1, CH 2- 6 en el espectro HMQC. Los fragmentos de MS en m / z
en la molécula. El espectro IR de 86.0979 (C 5 H 12 N) + indica la presencia de una N- Yo asi resto pentilamida y los fragmentos en m / z 208.1707
(C 13 H 22 NO) +,
1 mostró absorciones a 3289 de NH de amida, 1659 para amida RC 55 ONHR 0, y 1635 cm 1 para la 193.1585 (C 13 H 21 O) +, 165.1654 (C 12 H 21) + y el pico de base
alifático C 55 C. absorción características banda en 256,5 ( e = 19.200) en el espectro UV sugirió la presencia
m / z 114.0925 (C 6 H 12 NO) + mostraron que la N- Yo asi resto pentilamida está unido al carbono de acilo
de una resto amida conjugado ( Kikuzaki et Alabama., 1993 ). los 1 H RMN con espectro fi rmó la ( Figura 2 ). Estos datos coinciden bien con los valores reportados para los compuestos con estructuras
presencia de una parciales similares ( Kikuzaki y col., 1993; Kiuchi et al., 1988 ). La hidrólisis ácida de 1 con HCl conc: HCl
y trabajar hasta ( Manosroi et al., 1999 ) Proporcionó la amina 3-metilbutilo, como fi identificados por
trans- a, b, g, d- dobles enlaces conjugado con un grupo carboxilo por la presencia de una doblete a re H GC (coinyección de muestras auténticas de aminas de manera similar ramificados; véase

5,75 (1H, re, J = 15,8 Hz), re do


121,3, CH-2, dos doble dobletes en re H 7,16 (1H, dd, J = 15.8,
9.9 Hz), re do 142,7, CH-3, y re H 6,16 (1H, dd, J = 16.2, 9,9 Hz), re do experimental). A la luz de la discusión anterior, la estructura de 1
128,2, CH-4, y una doble triplete a re H 6,05 (1H, dt, J = 16.2, fue identificado como 1 - [(2 MI, 4E) -tridecadienoyl] - N-iso pentilamida.
6.7 Hz), re do 141,1, CH-5 ( tabla 1 ). los la conjugación de trans- Pipzubedine ( 2) se obtuvo como un polvo amorfo de color blanco y su fórmula molecular, C 22 H 41 NO,
a, b, g, d- doble enlace resto con el carboxilo se confirmó por HMBC conectividades de H-2 y H-3 con se obtuvo de la masa exacta en m / z 335.3193 (calculado. 335.3188) en el HR-EI-MS. Análisis de la
C-1 ( Figura 2 ). Típico UV, IR, RMN, DEPT, HSQC y HMBC datos ( Tabla 2 y Fig. 3 ) Y su comparación con los de 1 revelaron
1 H RMN señales en re H 3,14 (2H, q, J = 6,6 Hz), re do 46,7, CH 2- 1 0, re H que los dos compuestos son similares, excepto que el grupo alquenoilo consta de diecisiete carbonos
1.81 (1H, metro), re do 28,1, CH 2- 3 0 y re H 0,93 (6H, re, J = 6,6 Hz), re do en vez de trece átomos de carbono en 1. Por lo tanto, la estructura de 2 fue identificado como 1 - [(2 MI, 4E)
19,7, CH 3- 4 0 y CH 3- 5 0, y HMBC correlación entre CH-3 0 a - heptadecadienoyl] - Niso pentilamida.
re H 1.81 y 13 do De señal para CH 2 a 28,6-29,9 aparece un
Yo asi pentilo unido a la átomo de nitrógeno ( Kiuchi et al., 1988 ). Un terminal metilo grupo también se
indica por la 1 H y 13 C RMN señales en re H 0,87 (3H, t, J = 6,7 Hz) re do 14,5, CH 3- 13. Además, una ancho singlete
de catorce protones estaba presente en la región re H 1,29-1,41 (14 H, br s) y los carbonos Pipyaqubine ( 3) fue obtenido como un polvo amorfo de color blanco y se obtuvo su fórmula
correlacionados eran molecular como C 22 H 39 NO por HR-EI-MS, que dio la masa exacta en m / z 333.3034 (calc 333.3031).
los

tabla 1
RMN datos espectroscópicos una ( 500 MHz, CDCl 3) de pipilyasine ( 1).

Posición re H ( Multiplicidad, J ( Hz)) re do HSQC

1 - 165,1 do

2 5,75, d (15,8) 121,3 CH


3 7,16, dd (15.8, 9.9) 142,7 CH
4 6,16, dd (16.2, 9.9) 128,2 CH
5 6,05, dt (16.2, 6.7) 141,1 CH
6 2,28, q (6,7) 33.1 CH 2
7-11 1,29-1,41, br. s 28,6-29,9 CH 2
12 1,29-1,41, br. s 23.2 CH 2
13 0,87, t (6,7) 14.5 CH 3
10 3,14, q (6,6) 46.7 CH 2
20 1,29-1,41, br. s 28,6-29,9 CH 2
30 1,81, m 28.1 CH
40 0,93, d (6,6) 19.7 CH 3
50 0,93, d (6,6) 19.7 CH 3
NUEVA HAMPSHIRE 5,45, ancho. s - -

una valores de desplazamiento químico están en ppm y las asignaciones se basan en DEPT, HSQC, COSY, y HMBC experimentos. Higo. 2. ( a) patrón de fragmentación de masa y (b) HMBC importante ( 1) correlaciones observadas para pipilyasine ( 1).
T. Gulzar et al. / Phytochemistry Cartas 6 (2013) 219-223 221

Tabla 2
RMN datos espectroscópicos una ( 500 MHz, CDCl 3) de pipzubedine ( 2). datos espectroscópicos RMN una ( 500 MHz, CDCl 3) de pipyaqubine ( 3).

Posición re H ( Multiplicidad, J ( Hz)) re do HSQC Posición re H ( Multiplicidad, J ( Hz)) re do HSQC

1 - 165,1 do 1 - 163.3 do

2 5,76, d (15,9) 121,2 CH 2 5,94, d (16,3) 119,7 CH


3 7,16, dd (15.9, 10.1) 142,6 CH 3 7,25, dd (16.3, 10.2) 141,1 CH
4 6,13, dd (16.1, 10.1) 127,9 CH 4 6,11, dd (11.8, 10.2) 125,0 CH
5 6,04, dt (16.1, 6.6) 141,2 CH 5 6,04, m 140,3 CH
6 2,29, q (6,6) 32.9 CH 2 6 2,30, q (6,8) 27.6 CH 2
7-13 1,29-1,38, br. s 29,1-31,4 CH 2 7-16 1,25-1,34, br. s 28,3-31,7 CH 2
14-16 01.24 a 01.27, br. s 22,8-24,6 CH 2 17 1,35, m 24.1 CH 2
17 0,87, t (6,8) 14.7 CH 3 18 0,89, t (6,7) 14.4 CH 3
10 3,10, q (6,4) 47.0 CH 2 1 0, 4 0 3,41-3,52, m 44,6-46,1 CH 2
20 1,29-1,38, br. s 29,1-31,4 CH 2 2 0, 3 0 1,80-1,99, m 24,9-26,2 CH 2
30 1,77, m 28.3 CH una valores de desplazamiento químico están en ppm y las asignaciones se basan en DEPT, HSQC, COSY, y los experimentos HMBC.
40 0,92, d (6,5) 19.6 CH 3
50 0,92, d (6,5) 19.6 CH 3
NUEVA HAMPSHIRE 5,43, ancho. s - -

una valores de desplazamiento químico están en ppm y las asignaciones se basan en DEPT, HSQC, COSY, y HMBC experimentos. Tabla 4
LC 50 de extracto, fracciones y compuestos puros ( 1-6) contra el cuarto instar de larvas A. aegypti, un mosquito del dengue vector
y un vehículo de la fiebre amarilla.

Extracto en bruto / fracciones y compuestos puros LC 50 ( ppm)

IR espectro Expuesto en bandas 1655.8 y 1615.2 cm 1 para amida RC 55 ONHR 0 y C 55 C. El UV espectro extracto de EtOH 35.0
muestra un máximo de absorción a 262,3 nm ( e = 22,600). los 1 espectro de H RMN ( Tabla 3 ) de 3 puesto fracción soluble PE 29.5
fracción insoluble PE 20.0
de manifiesto la presencia de una anillo de pirrolidina por dos multipletes en
Pipilyasine ( 1) 28.0
Pipzubedine ( 2) 22.0
re H 3,41-3,52 (4H, metro), re do 44,6 a 46,1, CH 2- 1 0 y CH 2- 4 0, y el otro en re H 1,80-1,99 (4H, metro) re do 24,9
Pipyaqubine ( 3) 31.0
a 26,2, CH 2- 2 0 y CH 2- 3 0. es más mostró señales relacionadas con cuatro protones nic olefina, uno con pelitorina ( 4) 20.0

una Pipericine ( 5) 25.0


La piperina ( 6) 10.0
trans y el otro con una cis geometría. Así, estos protones muestran señales en re H 5. 94 (1H, re, J = 16,3
azadiractina 50.0
Hz), re do 119,7, CH-2, y
re H 7.25 (1H, dd, J = 16.3, 10,2 Hz), re do 141,1, CH-3 demostrando una
y segundo protones situado en la trans doble enlace conjugado con el carboxilo grupo y en re H 6,11

(1H, dd, J = 11.8, 10,2 Hz), re do 150.0912 (C 9 H 12 NO) +, 183.2112 (C 13 H 27) +, 235.2436 (C 17 H 31) + y
125,0, CH-4, y re H 6,04 (1H, metro), re do 140,3, CH-5 debido a los protones de la segundo doble enlace 263.2381
Tabla 3 (C 18 H 31 O) + en el HR-EI-MS ( Fig. 4 ). Los datos espectrales discutidos anteriormente
con una cis geometría y conjugado con el primera doble enlace. H-2 y H-3 también mostraron llevado a elucidar la estructura de pipyaqubine como N [(2 MI, 4 Z) - octadecadienoil pirrolidina] ( 3). los 13
conectividades HMBC con C-1. Estos datos indicaron la presencia de una datos C RMN ( Tabla 3 ) Son consistentes con la estructura asignada y combinar bien con los valores
reportados para los compuestos con estructuras parciales similares ( Kikuzaki y col., 1993; Kiuchi et
trans-a, b- y cis- g, d- doble enlace conjugado con el grupo carboxilo ( Tabla 3 ). UNA protones de al., 1988 ). La toxicidad del extracto etanólico, fracciones y constituyentes puros 1 - 6, se determinó
metileno de señal adyacentes al doble enlace estaba observado en re H 2,30 (2H, q, J = 6,8 Hz, H-6), re do contra larvas de cuarto instar de
27,6, CH 2-
6. el hasta campo 13 C RMN turnos de C-6 debido a cis blindaje confirmado la geometría del doble
enlace en C-4 como Z ( Crombie, 1955 ). los A. aegypti L. por el método de la OMS ( OMS, 1970 ). Los resultados ( Tabla 4 ) Mostraron que el
1 H RMN promover mostró que restante parte de la cadena era igual de 1 y 2. los cesiones de estos
extracto, tanto el hexano soluble y fracciones insolubles obtenidos a partir del extracto ( véase experimental)
protones se establecieron por el análisis de 1 H, 1 H-COSY, HMBC, HMQC y J- espectro resuelto. Adicional eran activos contra la fiebre amarilla y el dengue vector mosquito en la etapa larval. Los compuestos

apoyo se obtuvo por los iones de fragmentos en la HR-EI-MS en m / z 70.0655 (C 4 H 8 N) +, 98.0602 (C 5 H 8puros 1 y 2 obtenido de la fracción soluble en hexano y 3 - 6 obtenido de la fracción insoluble en hexano

NO) +, también eran tóxicos contra las larvas mencionado.

Higo. 3. ( a) Masa patrón de fragmentación y (b) HMBC importante ( 1) correlaciones observadas para pipzubedine ( 2). Higo. 4. ( a) patrón de fragmentación de masa y (b) HMBC importante ( 1) correlaciones observadas para Pipyaqubine ( 3).
222 T. Gulzar et al. / Phytochemistry Cartas 6 (2013) 219-223

Un importante observación es que compuestos 1 - 5 con una cadena lineal alquenoılo tiene toxicidades hexano-acetato de etilo (8: 2) dio dos bandas principales. Estos fueron adicionalmente purificada en el
casi similares (LC 50 20,0-31,0 ppm) mientras 6 que tiene una anillo de benceno metilendioxi al final de mismo sistema disolvente el suministro de dos compuestos pipilyasine ( 1; 12,8 mg), y pipzubedine ( 2;
la pentadienoyl grupo es significativamente más tóxico (LC 50 10,0 ppm). Por otra parte, toda estas constituyentes
mostraron una actividad larvicida mayor en contra larvas de cuarto instar de A. aegypti de azadiractina 18,5 mg) con el fin de la polaridad. Una porción de la fracción insoluble en hexano (29,3 g)
(LC 50 50.0 ppm; ( Siddiqui et al., 2009 ).), Que se conoce como un más activos natural insecto crecimiento mencionada anteriormente se sometió a fl CC ceniza usando hexano, hexano-acetato de etilo, y
informó el regulador de Azadirachta indica ( Vietmeyer, 1992 ) acetato de etilo-metanol (en orden de polaridad creciente). En la mezcla de varios eluatos sobre la
base de TLC, 9 fracciones se obtuvieron (Fr-I-FR-IX). Fr-I (0,13 g) que se eluyó con hexano y
hexano-acetato de etilo (100: 0-90: 10) fue purifica a través de PTLC en el sistema de disolvente
(hexano-acetato de etilo, 8,0: 2,0) para proporcionar pipyaqubine ( 3; 11,8 mg; hexano-acetato de etilo, 8,3:
1,7). FrIII (hexano-acetato de etilo, 7,0: 3,0 eluido; 3.9 g) se sometió a cromatografía en columna para

3. Experimental obtener 27 fracciones (1 0 -27 0) usando hexano, hexano-acetato de etilo, acetato de etilo,
diclorometano, y diclorometano-metanol. Fr-7 0 ( hexano-acetato de etilo, 8,0: 2,0 eluido; 149 mg) en la

3.1. General métodos purificación sobre PTLC en el sistema de hexano-acetato de etilo disolvente (9,0: 1,0) proporcionó
pelitorina ( 4; 6,2 mg) mientras Fr-11 0

UV Spectra: Hitachi U-3200 espectrofotómetro; l máx en nm. IR Spectra: Jasco-A-302 espectrofotómetro;


norte en cm 1. EI-MS: masa Finnigan Mat-311A espectrómetro; fuente a 250 8 y 70 eV; m / z ( rel.%). HR-EI-MS:
Jeol JMS--HX-110 espectrómetro de masas; IE, fuente a 250 8 y 70 eV; m / z ( rel.%). cromatografía
líquida de vacío (VLC): 60 pF gel de sílice 254 ( Merck). cromatografía en columna ultrarrápida (FCC): columna
(Hexano-acetato de etilo, 7,0: 3,0 eluido; 934 mg) amueblado pipericine puro ( 5; 3,5 mg) en PTLC
fl ash Aldrich cromatógrafo; sílice gel 9385 (Merck, 0,040-0,063 mm). Deberes. TLC (PTLC): gel de sílice 60 usando acetato de etilo el sistema disolvente hexano (8,0: 2,0). Fr-IV en PTLC con el sistema de
pF 254 ( Merck). 1 H RMN, COSY, NOESY, y J- Resuelto: espectrómetros Bruker operando a 400 y 500 disolvente diclorometano-metanol (19: 1) proporcionó 6 ( 20,2 mg).
MHz para 1 H RMN y en 100 y 125 MHz para 13 C RMN; desplazamientos químicos ( re) en ppm,
consants de acoplamiento ( J) en Hz. los los desplazamientos químicos fueron referenciados a la
residual solvente señales. los asignaciones de 1 H y 13 C núcleos se basan en 1 H-, COSY-45, J- resuelto, 13 3.2.1. Pipilyasine ( 1)
C- (banda ancha y DEPT), HMQC y HMBC espectros. polvo amorfo blanco; IR (KBr) 3289, 2950, 1635, 1609, 1561,
1240, 1137 cm 1; UV (MeOH) l máx 256,5 nm ( e = 19200); para 1 H (CDCl 3, 500 MHz) y 13 C (CDCl 3, 125
MHz) datos espectroscópicos de RMN, véase tabla 1 . EI-MS m / z 279 (M +; 39), 208 (25), 194 (9), 193
(39), 180 (15), 166 (22), 165 (36), 140 (7), 139 (5), 114 (100), 113 ( 22), 99 (16), 86 (31), 85 (14), 71
(51); HR-EI-MS m / z 279.2571 ( M +, do 18 H 33 NO: calculado. 279.2562), 208.1707 (C 13 H 22 NO) +, 194.1549
(C 12 H 20 NO) +,
GC análisis - gas Shimadzu-GC-9A cromatógrafo con FID a 260 8 do estaba usado. norte 2 como gas
portador se pasó a una velocidad de flujo de 1,0 ml / min utilizando SPB-5 1 columna capilar (30 m 0,53 193.1585 (C 13 H 21 O) +, 180.1395 (C 11 H 18 NO) +, 166.1239 (C 10 H dieciséis NO) +,
mm ID; 0.3 metro df). los división relación era de 01:30 y el inyector temperatura era 240 8 C. La columna temperatura
165.1654 (C 12 H 21) +, 140.1074 (C 8 H 14 NO) +, 139.1486 (C 10 H 19) +,
era mantenido a 50 8 C para el primer 5 min y luego elevado a 240 8 C a una velocidad de 3 8 C / min con 5 114.0925 (C 6 H 12 NO) +, 113.1339 (C 8 H 7) +, 99.1162 (C 7 H 15) +, 86.0979 (C 5 H 12 N) +, 85.1015 (C 6 H 13) +, 71.0865
min fi tiempo nal. GCEI-MS: Hewlett-Packard 5890 gas cromatógrafo, combinado con un Jeol, JMS-HX-110 (C 5 H 11) +.
de masas espectrómetro con fuente en 270 8 a 70 eV. Inyector se fijó en 270 8 con relación de división
1:30. El análisis se realizó en el programa anteriormente mencionado en una columna equivalente HP-5 1 3.2.2. Pipzubedine ( 2)
( 25 m 0,22 mm y 0.25 metro m df). Se llevó a cabo la encuesta de espectro de masas NIST utilizando polvo amorfo blanco; IR (KBr) 3275, 2950, 1651, 1627,
espectros de masas Programa de Búsqueda 1998. Hexano utilizado era de la intervalo de ebullición 1563, 1231, 1139 cm 1; UV (MeOH) l máx 261,4 nm ( e = 18600); para 1 H (CDCl 3, 500 MHz) y 13 C (CDCl 3, 125
60-80 8 DO. MHz) datos espectroscópicos de RMN, véase Tabla 2 . EI-MS m / z 335 (M +; 32), 278 (15), 264 (27),
249 (38), 221 (46), 195 (10), 180 (13), 169 (18), 166 (22), 155 (16), 140 ( 9), 114 (100), 86 (51), 71
(26); HR-EI-MS m / z

335.3193 (M +, C 22 H 41 NO: calculado. 335.3188), 278.2491 (C 18 H 32 NO) +,


3.2. Extracción, aislamiento y purificación 264.2321 (C 17 H 30 NO) +, 249.2220 (C 17 H 29 NO) +, 221.2279 (C dieciséis H 29) +,
195.2119 (C 14 H 27) +, 180.1381 (C 11 H 18 NO) +, 169.1959 (C 12 H 25) +,
los seco semillas de P. nigrum ( 10 kg) fueron adquiridos de los locales mercado en el Karachi, triturado166.1238 (C 10 H dieciséis NO) +, 155.1789 (C 11 H 23) +, 140.1071 (C 8 H 14 NO) +,
y se extrajo ( 5) con etanol a habitación temperatura. Después concentración del extracto combinado en 114.0911 (C 6 H 12 NO) +, 86.0961 (C 5 H 12 N) +, 71.0868 (C 5 H 11) +.
vacío, una almibarado residuo se obtenidos (2 kg). Se dejó durante la noche a temperatura cuando una residuo
semicristalino separa cual estaba se filtra y se re-cristalizó a partir de metanol para dar blanquecino cristalino3.2.3. Pipyaqubine ( 3)
agujas de piperina (750 sol). Las aguas madres se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase de polvo amorfo blanco; IR (KBr) 2948, 1655, 1615, 1603,
1045, 955, 817 cm 1; UV (MeOH) l máx 262,3 nm ( e = 22600); para
acetato de etilo (378 g) se se trató con una solución acuosa al 4% de Na 2 CO 3 para eliminar ácido componentes.
1 H (CDCl 3, 500 MHz) y 13 C (CDCl 3, 125 MHz) datos espectroscópicos de RMN, véase Tabla 3 . EI-MS m
El residuo (315 g) obtenido en el lavado (agua), secado (Na 2 ASI QUE 4), decolorante (lecho de carbón
/ z 333 (M +; 26,5), 263 (14,1), 262 (13,5), 235 (12,6), 209 (3,9), 206 (11,9), 183 (23,4), 150 (24,6), 127
vegetal activado) y la eliminación del disolvente de la capa de acetato de etilo se divide dentro hexano soluble
(50,0 g) e insoluble hexano (205,0 g) fracciones. Una parte (25.0 g) de la fracción soluble de hexano se (15,4), 124 (2,8), 98 ( 75,8), 85 (42), 71 (30,2), 70 (100), 57 (97,0); HR-EIMS m / z 333.3034 (M +, C 22 H
39 NO: calculado. 333.3031), 263.2381 (C 18 H 31 O) +, 262.2177 (C 17 H 18 NO) +, 235.2436 (C 17 H 31) +, 209.2278
somete a VLC utilizando hexano, hexano-acetato de etilo, acetato de etilo, diclorometano, y diclorometano-metanol
(C 15 H 29) +, 206.1544 (C 13 H 20 NO) +, 183.2112 (C 13 H 27) +, 150.0912 (C 9 H 12 NO) +, 127.1486 (C 9 H 19) +, 124.0768
(en orden creciente de polaridad). los fracciones se combinaron sobre la base de su TLC a pagar 13 fracciones
(Fr-1-FR-13). Fr-9 (Hexano-acetato de etilo, 7.8: 2.3-7.5-2.5 eluido; 5.3 g) en la purificación sobre PTLC (C 7 H 10 NO) +, 98.0602 (C 5 H 8 NO) +, 71.0861 (C 5 H 11) +, 70.0655 (C 4 H 8 N) +, 57.0702 (C 4 H 9) +.

en disolvente sistema hexano-acetato de etilo (8: 2-7: 3) produjo varias bandas, en que repetido purificación
en el sistema de disolvente

3.3. La actividad pesticida

3.3.1. técnica de crianza


El cuarto estadio las larvas de A. aegypti L. (OT cepa salvaje), la fiebre y el dengue vector
mosquito amarillo se recogieron a partir de
T. Gulzar et al. / Phytochemistry Cartas 6 (2013) 219-223 223

Marrón, AWA, 1983. Resistencia a los insecticidas como un factor en el control integrado de
seminatural estanque, especialmente establecido para este trabajo de investigación. los tamaño de este
Culicidae. En: Laird, M., Miles, JW (Eds.), Integrados mosquito del control de Metodologías. Académica, Nueva
estanque fue de 8 4 pies con una profundidad de 2 pies. Las tiras de huevo de identi fi ed mosquito es decir A.
York, pp. 161-235. Crombie, L., 1955. Las amidas de origen vegetal. Parte IV. La naturaleza de pelitorina y
aegypti se sumergió en el estanque. los larvas en el estanque se alimenta de gambas secas y molidas como
una polvo. El estanque estaba cubierta con un mosquitero, para que la entremezcla de otra especies de anacyclin. J. Chem. Soc. 999 a 1.006. Dymock, W., Warden, CJH, Hooper, RE., 1891. Pharmacographia Indica. el
Ins-
mosquitos pueden evitarse y la liberación de mosquitos desde el estanque en el ambiente se puede
tuto de Salud y Tibbi Investigación, Karachi (Reeditado bajo los auspicios de la Fundación Nacional Hamdard de
comprobar. los pupas de la laguna se recogieron diariamente y mantenerse en mosquitos jaulas para adultos aparición. Pakistán, pag. 398).
Estos adultos fueron alimentados por Albino ratas dos veces a la semana y las tiras de papel de filtro se Hayes, WJ, Leyes, ER, 1991. Handbook of Toxicology pesticida. Académica, San
Diego, CA. Irvine, FR, 1961. Las plantas leñosas de Ghana, plantas leñosas de Ghana. Oxford Uni-
mantuvieron en copas de 6 en. diámetro. Las tiras de huevo se secaron durante un día y luego sumergido en
el estanque para la eclosión de larvas. Estas larvas en la fase de cuarto instar se utilizaron para este trabajo sidad Press, Londres pag. 40.

de investigación. Jagella, T., Grosch, W., 1999. compuestos de sabor y avour fl off- de blanco y negro
pimienta ( Piper nigrum L.) I. Evaluación de potentes odorantes de pimienta negro por técnicas de dilución y de
concentración. EUR. Res alimentos. Technol. 209, 16-21. Kikuzaki, H., Kawabata, M., Ishida, E., Akazawa, Y., Takei, Y.,
Nakatani, NORTE., 1993. LC-
análisis MS y la determinación estructural de las nuevas amidas de pimienta larga de Java ( Piper retrofractum). Biosci.
Biotechnol. Biochem. 57, 1329-1333. Kiuchi, F., Nakamura, N., Tsuda, Y., Kondo, K., Yoshimura, H., 1988. Estudios
sobre el crudo
3.3.2. prueba biológica (cribado procedimiento) fármacos eficaces en larva migrans visceral. IV. El aislamiento y la identi fi cación de los principios de larvicidas en el
Diez joven y cuarto estadio larvario de A. aegypti se recogieron en 250 ml cubilete que tiene 5 ml de pimiento. Chem. Pharm. Toro. 36, 2452-2465. Krishnamurthi, UNA., 1969. La riqueza de la India. Consejo of Scientific and
Industrial
agua del grifo por separado y el vaso de precipitados se llenan hasta el nivel de 200 ml. Los extractos,
Investigación, Nueva Delhi pag. 99.
fracciones y compuestos se ensayaron a 28 2 8 C en cinco ppm dosis final. El control y la También se
Manosroi, A., Abe, M., Manosroi, J., 1999. Comparación de la actividad antioxidante de
establecieron cheque. los observación se registró después de 24 h. extraer de las semillas de pimienta blanca ( Piper nigrum, Linn.) A los antioxidantes comerciales en crema al 2% de
hidroquinona. J. Cosmet. Sci. 50, 221-230. Moriyama, T., Mandai, T., Kawada, M., Otera, J., Trost, BM, 1986. Síntesis de

trichonine a través de una reacción de eliminación doble y su nueva investigación estructural. J. Org. Chem. 51, 3.896
a 3.897. Nadkarni, KM, 1996. India Materia Medica. Prakashan populares, Bombay (revisada

3.3.3. pruebas precisas


por Nadkarni ALASKA).
los QUIEN método (1970) se siguió para la aplicación. Un grupo de 7 vasos de precipitados se
Parmar, VS, Jain, SC, Bisht, KS, Jain, R., Taneja, P., Jha, A., Tyagi, OD, Prasad, AK, Wengel, J., Olsen, CE, 1997.
creó, cinco para los diferentes concentraciones y uno cada uno de control y de verificación, por Fitoquímica del género Gaitero. fitoquímica
separado para A. aegypti. cada experimento estaba repetidos cinco veces. El experimento se descarta 46, 597-673. Raymond, M., Prato, G., Ratsira, RE., 1993. análisis probit de ensayos de mortalidad

si la la mortalidad se encuentra más de 10% en el control o en comprobar, pero en el presente experimentos


mostrando la respuesta cuántica. Versión 33 Licencia 193019.
de la mortalidad fue cero en control y comprobar. los mortalidad se registró después de 24 h y lecturas fueron
Rozendaal, JA, 1997. Los mosquitos y otros Morder Diptera, Vector Control: Métodos
sometido a la fórmula de Abbot ( Abbott, 1925 ). para uso de personas y comunidades. Organización Mundial de la Salud, Ginebra, Suiza pp. 5-177. Siddiqui, BS,
Ali, SK, Ali, ST, Naqvi, SNH, Tariq, RM, 2009. Variación de la mayor

limonoides en Azadirachta indica frutos en diferentes estados de maduración y la toxicidad contra Aedes aegypti. Nat.
Pinchar. Commun. 4, 473-476. Siddiqui, BS, Begum, S., Gulzar, T., Noor, F., 1997. Una amida de frutos de Gaitero

3.3.4. Cálculo de LC 50
nigrum. fitoquímica 45, 1617-1619. Siddiqui, BS, Gulzar, T., Begum, S., Afshan, F., 2004a. Piptigrine, un nuevo
los letal concentraciones (LC 50) se calcularon utilizando análisis probit para A. aegypti ( Raymond et
insecticida
al., 1993 ). amida a partir de Piper nigrum Linn. Nat. Pinchar. Res. 18, 473-477. Siddiqui, BS, Gulzar, T., Begum, S., Afshan, F.,
Sattar, FA, 2004b. dos nuevos
dímeros amida insecticidas de las frutas de Piper nigrum Linn. Helv. Chim. Acta
Expresiones de gratitud 87, 660-666. Siddiqui, BS, Gulzar, T., Mahmood, A., Begum, S., Khan, B., Afshan, F., 2004c. Nuevo

amidas insecticidas de extracto de éter de petróleo de secan Piper nigrum L. frutas enteras. Chem. Pharm. Toro. 52,
Esta investigación fue Apoyado por Indígena 5000 Ph.D. compañerismo programa de la Comisión
1349-1352. Siddiqui, BS, Gulzar, T., Begum, S., Afshan, F., Sattar, FA, 2005. amidas insecticidas
de Educación Superior de Pakistán.
de frutos de Piper nigrum Linn. Nat. Pinchar. Res. 19, 143-150. Vietmeyer, DAKOTA DEL NORTE, 1992. Consejo Nacional de
Investigación, Informe de un grupo ad hoc de la
Junta de Ciencia y Tecnología para el Desarrollo Internacional, Neem: un árbol para la solución de los problemas
referencias globales, Washington, DC, EE.UU.. Wei, K., Li, W., Koike, K., Pei, Y., Chen, Y., Nikaido, T., 2004. Los nuevos alcaloides de
amida
Abbott, WS, 1925. Un método de cálculo de la eficacia de un insecticida. J. Econ. Entomol. 18, 265-267. Breitmaier, E., las raíces de Piper nigrum. J. Nat. Pinchar. 67, 1005-1009. QUIEN, 1970. Resistencia a los insecticidas y el control
Haas, G., Voelter, W., 1979. Atlas de Carbon-13 RMN de datos. Heyden y de vectores. Informe del XVII
OMS de Expertos en Insecticidas, Serie de Informes Técnicos Organización Mundial de la Salud, 443, pp. 1-279.
Son Ltd, Londres.

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