Cuestionario

1. Explique las diferencias entre los instrumentos de un solo haz y de

doble haz para las mediciones de absorbancia.

Cuadro comparativo espectrofotómetro de un haz y de doble haz

Un haz Doble haz

Fuente de Fuente de luz: proporciona energía radiante
en forma de luz visible o no visible. Tipos de Dos haces de luz pasan al mismo
radiación lámparas:
-Lámparas de filamento de tungsteno: se tiempo a través de los diferentes
utilizan para longitudes de onda del espectro componentes separados en el
visible y el ultravioleta próximo. Son fuentes
de un espectro continuo de energía radiante espacio.
entre 360-950 nm.
- Lámparas de filamentos de haluros de
tungsteno: son de mayor duración y emiten
energía radiante de mayor intensidad.
-Lámparas de Hidrógeno y Deuterio:
producen un espectro continuo en la región
ultravioleta entre 220-360 nm.
- Lámparas de vapores de Mercurio: Emiten
un espectro discontinuo o espectro de líneas
que se utilizan para calibración de longitudes
de onda, se emplean solo para
espectrofotómetros y cromatografía HPLC.

Selector de
• Filtros están compuestos por un material
longitud de que transmite selectivamente una longitud de
onda onda, absorbiendo todas las demás. Existen
de absorción y de interferencia.

• Monocromadores: son capaces de dar

bandas espectrales mucho más estrechas que
los filtros y además pueden ajustarse
fácilmente dentro de la zona del espectro.
Existen de red, de prisma

Divisor de Por este pasan los haces por los mismo

componentes, pero no al mismo tiempo por la
haz acción de un instrumento rotativo del haz luminoso
llamado chopper. El chopper está colocado a
continuación de la rendija de salida y un sistema
de espejos se encarga de dirigir la porción de la
radiación hacia una cubeta de referencia o hacia la
muestra. Así el detector ve alternativamente el haz
de luz procedente de la muestra y el de referencia.
Porta
Es el recipiente donde se coloca la muestra
muestra para la medición. Pueden ser de distintos tipos
y tamaños (cuadradas, rectangulares,
redondas). Se obtienen mejores resultados
usando cubetas de bordes paralelos. Si se
utilizan cubetas redondas se deben marcar e
introducir en el aparato siempre en la misma
posición. Suelen estar fabricadas en vidrio o
en plástico.
 Detector
Puede ser de dos tipos:
· Fotocélulas o células fotovoltaicas: El detector lee alternativamente el haz procedente
Es una lámina de Cobre sobre la que se de la muestra y el de la cubeta de referencia.
extiende una capa de Selenio o de Óxido de
Cobre. A esto se le conoce como
semiconductor. Sobre el semiconductor hay
una capa de metal transparente que sirve de
electrodo. La luz incide sobre el Selenio y éste
desprende electrones, que pasan a la placa de
Cobre originando una diferencia de potencial
por existir carga negativa sobre el Cobre y
positiva sobre el Selenio. El conjunto se
conecta a un amperímetro que señala el paso
de corriente.
Características: son resistentes; económicas;
sensibles desde el ultravioleta hasta los 1.000
nm. de longitud de onda; no se requiere
batería externa, ni vacío,...; la corriente
producida es directamente proporcional a la
Energía que llega y tienen “efecto fatiga”, es
decir, que presentan una subida inicial de
corriente, que luego decrece progresivamente
hasta el equilibrio. Por eso hay que esperar
entre 30-60 segundos entre una lectura y otra.
· Fototubos multiplicadores:
Un fototubo multiplicador es un tubo que
contiene un cátodo que emite electrones de
forma proporcional a la Energía que incide
sobre él. Tiene un ánodo que recoge los
electrones y la corriente se multiplica varias
veces al chocar los electrones sobre
sucesivos ánodos que van teniendo un voltaje
superior al precedente. La señal se amplifica
en cientos o miles de veces.

Registrador
Espectrofotómetros: la mayor parte de las
mediciones de absorción atómica se hacen
con instrumentos equipados con un
monocromador de rejilla ultravioleta/visible.

Medición Lo que se mide al final es la diferencia entre las

Determinar la cantidad de radiación absorbida dos mediciones (se utiliza un amplificador de
a una longitud de onda dada. diferencia). Es decir, cada medición implica una
recalibración automática.

Precisión
Este tipo de espectrofotómetro está bien Con este tipo de instrumentos se puede obtener
adecuado para mediciones de absorción de espectros de absorción de una sustancia ya que se
una sola longitud de onda. hace un barrido de las longitudes de onda.

Otras
diferencias
Espectrofotómetro de haz simple:

Espectrofotómetro de doble haz:

 2. ¿Cuál es el propósito del ajuste del 0,000 de absorbancia (100 % T)
antes de efectuar medidas con un espectrofotómetro?

La absorbancia es más útil en espectrofotometría que la transmitancia, debido a

que la representación gráfica de la concentración versus la absorbancia produce
una línea recta.

La representación gráfica de la concentración versus la transmitancia es

exponencial. El -log calcula el inverso de la transmitancia, de tal manera que la
absorbancia aumenta con la concentración creciente de colorante. La
transmitancia decrece cuando se aumenta la cantidad de colorante rojo en nuestro
ejemplo.

La relación de la absorbancia con la concentración se encontró por dos

bioquímicos que tiene la ecuación para una línea recta, y= mx +b, dónde la m es la
pendiente de la línea y b es la intercepción de la recta con el eje y. Si la medición
se realiza de tal manera que b = 0 (es decir, una solución que no contiene
colorante no tiene absorbancia), y si substituimos a absorbancia por y, entonces la
concentración por x, m, llegamos a la formulación de la Ley de Beer-Lambert:

A = ε Cl
Donde A = absorbancia
C = concentración molar
ε = el coeficiente de extinción molar para una determinada longitud de onda
l = distancia que atraviesa la luz por la muestra en centímetros.

Los equipos y las celdas están diseñados de tal manera que l siempre es 1
cm y por tanto es ignorado.

3. ¿Qué diferencia existe entre una cubeta de cuarzo y una cubeta de

vidrio?

Existen diferentes tipos de cubetas para uso general, según las

diferentes longitudes de onda utilizables:
 4. ¿Qué relación existe entra la absorbancia (A) y el % T.?

Transmitancia (T) se define como la fracción de luz incidente que es

transmitida (dejada pasar) a través de una muestra en solución. Así, T = I/Io,
donde Io es igual a la intensidad de luz que llega a la muestra, I es la
intensidad de luz que logra atravesar la muestra. La transmitancia es
frecuentemente expresada como porcentaje:

%T = (I/Io) x 100

Absorbancia (A), Densidad Óptica o Extinción, es una función logarítmica de T

y se expresa como:

A = log10 (1/T) = log10 (Io/I)

5. Indique 05 ejemplos de compuestos químicos de interés farmacéutico que

contengan grupos cromóforos.

Principalmente son:

Dobles y triples enlaces carbono-carbono, sistemas aromáticos, grupo carbonilo,

imino (C=N), diazo (N=N), nitro y enlaces C-Y (Y es un átomo con pares libres).

SISTEMAS AROMÁTICOS GRUPO CARBONILO

 DIAZO

IMINO NITRO

6. Explique porqué son importantes los máximos de absorción que se

observan en los espectros de moléculas que contienen cromóforos.

Los cromóforos son grupos funcionales que poseen electrones de valencia con
energías relativamente bajas.

En estos compuestos, ocurre superposición de transiciones vibraciones con

transiciones electrónicas.

El espectro es una banda de absorción ancha, que a menudo parece ser continua.
BIBLIOGRAFÍA

Harris D. Análisis Químico Cuantitativo. 3ra. Ed. Barcelona: Reverté; 2003.

Harvey D. Química Analítica Moderna. 1ra. Ed. Madrid: McGraw-Hill; 2002.

Skoog D., Holler F. and Nieman T. Principios de Análisis Instrumental. Editorial

Cengage Learning, sexta edición, 2008.

Wayne RP, Chemical Instrumentation, 1ra. Ed. New York: Oxford University Press;
1994.