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2 / PRODUSSCÓU y USO de hougos eutomoµatógeuos
Producción y uso de hongos entomopatógenos

Edición:
Ing. Arnulfo Monzón C. UNA
Universidad Nacional Agraria,
Facultad de Agronomía,
Departamento de Protección Agrícola y Forestal
Revisión técnica:
Dr. Falguni Guharay
Programa CATIE/MIP-AF
Diseño y realización:
Darwin Granda
El autor reconoce que parte de la información utilizada en la elabo-

ración de este manual proviene de trabajos realizados previamente
por otras instituciones como: Universidad Nacional Agraria, Pro-
grama CATIE/MIP-AE, Grupo de Control Microbial, así como de
personas que han trabajado en este campo en Nicaragua.
PRODUSSCÓU y USO de hougos eutomoµatógeuos / 3
Pıesen1actón
E1 uso excesivo de 1os µ1aguicidas, ka dejado eJectos negativos en e1 sue1o, e1 agua y en e1 ambiente; ka
µrovocado aumento de 1as µ1agas debido a 1a destrucción de 1os enemigos natura1es; e1 uso de estos
µroductos ka causado serios µrob1emas en 1a sa1ud de 1as µersonas, inc1uyendo morta1idad.
Para reducir e1 eJecto negativo de1 uso indiscriminado de 1os µ1aguicidas, se ka kecko necesario 1a
imµ1ementación de sistemas agríco1as sostenib1es basados en e1 conocimiento de 1as re1aciones entre
cu1tivos, e1 ambiente y 1os organismos que viven en e1 camµo.
En 1a natura1eza existe una gran diversidad de organismos, 1os cua1es aJectan a 1os insectos, reduciendo
así 1as µob1aciones de µ1agas. Entre estos organismos encontramos kongos, bacterias, virus y nemátodos
entomoµatógenos, a1gunos de 1os cua1es, µrinciµa1mente 1os kongos, kan sido maniµu1ados y
reµroducidos masivamente µara ser uti1izados exitosamente en e1 contro1 de imµortantes µ1agas agríco1as.
Para que 1os insecticidas a base de kongos entomoµatógenos estén disµonib1es µara 1os usuarios, deben
µroducirse en cantidades suJicientes, µara 1o que se necesita imµ1ementar métodos de µroducción que
además de obtener buenos rendimientos, µroµorcionen un µroducto de buena ca1idad.
E1 objetivo de éste documento es e1 de µroµorcionar inJormación que contribuya a un mejor conocimiento
de 1os kongos entomoµatógenos, su bio1ógica, eco1ogía y µrinciµa1mente 1a Jorma de µroducción de
dickos agentes µara ser usados en e1 manejo de 1as µ1agas.
1a e1aboración de este documento ka sido µosib1e gracias a1 aµoyo Jinanciero de 1a Tundación µara e1
Desarro11o Yecno1ógico Agroµecuario y Toresta1 de Nicaragua, (TUNICA), a través de1 Tondo de Aµoyo
a 1a Investigación Yegno1ógica Agroµecuaria y Toresta1 de Nicaragua, (TAIYAN).
Œ / PRODUSSCÓU y USO de hougos eutomoµatógeuos
Indtce
Presentación Pag. 3
Introducción 4
Producción de kongos entomoµatógenos 10
Anexos 35
Cuía µara e1aborar medios de cu1tivo 35
Cuía µara ais1ar e inocu1ar kongos entomoµatógenos 3✓
Cuía µara µreµarar e inocu1ar matrices y bo1sas 39
Cuía µara 1a incubación, secado de bandejas y cosecka de kongos entomoµatógenos 41
Cuía µara eva1uar e1 rendimiento de kongos entomoµatógenos y µreµaración de Jormu1aciones 42
Cuía µara µreservar kongos entomoµatógenos 45
Cuía µara reactivar ceµas de kongos entomoµatógenos 4✓
Cuía µara rea1izar contro1 de ca1idad 52
Uso de kongos entomoµatógenos µara e1 manejo de µ1agas agríco1as 55
Pıesen1actón
E1 uso excesivo de 1os µ1aguicidas, ka dejado eJectos muy negativos en e1 sue1o, e1 agua y en e1 ambien−
te; ka µrovocado un aumento de 1as µ1agas debido a 1a destrucción de 1os enemigos natura1es; e1
manejo de 1as µ1agas se ka kecko más diJíci1 debido a1 surgimiento de resistencia. Además, e1 uso de
estos µroductos ka causado serios µrob1emas en 1a sa1ud de 1as µersonas, inc1uyendo morta1idad.
Para reducir e1 eJecto negativo de1 uso indiscriminado de µ1aguicidas, se ka kecko necesaria 1a imµ1e−
mentación de sistemas agríco1as sostenib1es basados en e1 conocimiento de 1as re1aciones entre 1os
cu1tivos, e1 ambiente y 1os organismos que viven en e1 camµo; es decir entender mejor 1a natura1eza.
Esto µermitiría obtener buenas coseckas, sin contaminación ambienta1 y sin daño a 1a sa1ud kumana.
En 1a natura1eza existe una gran diversidad de organismos, 1os cua1es aJectan a 1os insectos, reduciendo
así 1as µob1aciones de µ1agas. Entre estos organismos encontramos 1os entomoµatógenos, entre 1os
cua1es están kongos, bacterias, virus y nematodos. A1gunos de microorganismos, µrinciµa1mente 1os
kongos, kan sido maniµu1ados y reµroducidos masivamente µara ser uti1izados comercia1mente en e1
contro1 de imµortantes µ1agas agríco1as. A1 uso de estos microorganismos µara e1 contro1 de µ1agas es 1o
que 11amamos contro1 microbia1.
A 1os kongos que uti1izamos en e1 contro1 de insectos µ1agas 1os 11amamos entomoµatógenos, µor que
causan enJermedades a 1os insectos o µroducen toxinas, kasta causar su muerte. Actua1mente se kan
identiJicado y estudiado diversas esµecies de kongos que aJectan a 1as µ1agas de muckos cu1tivos, de
manera que muckos de e11os son uti1izados exitosamente en µrogramas de manejo de µ1agas.
E1 µresente manua1 tiene e1 objetivo de µroµorcionar inJormación que contribuya a un mejor conoci−
miento de 1os kongos entomoµatógenos, su bio1ogía, eco1ogía y µrinciµa1mente 1a Jorma de µroduc−
ción de dickos agentes µara ser usados en e1 manejo de µ1agas.
In1ıoducctón
1os kongos son organismos microscóµicos que se encuentran en 1a natura1eza en e1 ambiente, rastrojos
de cu1tivos, en e1 sue1o, 1as µ1antas, etc; obtienen su nutrición de otros organismos o de materia orgáni−
ca, su cuerµo está constituido µor una estructura 11amada mice1io, que es un conjunto de estructuras
Ji1amentosas 11amadas kiJas. Estos se desarro11an bien en 1ugares Jrescos, kúmedos y con µoco so1. A 1os
kongos que obtienen su nutrición a µartir de insectos son conocidos como entomoµatógenos, ya que
causan enJermedades en 1os insectos µ1agas kasta causar su muerte.
1os Hongos Entomoµatógenos constituyen e1 gruµo de
mayor imµortancia en e1 contro1 bio1ógico de insectos
µ1agas. ¥irtua1mente todos 1os insectos son susceµtib1es
a 1as enJermedades causadas µor kongos. Se conocen
muckas esµecies de kongos entomoµatógenos, corres−
µondientes a a1rededor de 100 géneros. Entre 1os gé−
neros más imµortantes µodemos mencionar: Metarrhc^
SCUM, B EAUUERCA, Asshersouca, Eutomoµhthora, Zo^
oµhthora, Eryuca, Eryucoµscs, VUSARCUM, HCRSUTE11A,
Hymeuostc1be, Paese1omyses y VerTCSC11CUM.
Hongos en1omoµa1ógenos más u1t1tzados
CRÁFCSA mcsrossóµcsa de mcse1co y soucdcas de1
hougo eutomoµatógeuo BEAUUERCA basscaua. De todos 1os kongos entomoµatógenos conocidos µor
su eJecto sobre µ1agas, en Nicaragua y en toda 1a re−
gión 1os más uti1izados corresµonden a 1as esµecies BEAUUERCA basscaua y METARHCSCUU aucsoµ1cae, de 1as
cua1es se kan eva1uado muckas ceµas contra µ1agas de imµortancia agríco1a.
PRODUSSCÓU y USO de hougos eutomoµatógeuos / £
BEAUUERCA basscaua: Es un kongo que µertenece a 1a c1ase Deuteromycete, orden Moni1ia1es, Jami1ia
Moni1iaceae. Este kongo ka sido encontrando atacando a más de 200 esµecies de insectos de diJeren−
tes órdenes, inc1uyendo µ1agas de mucka imµortancia agríco1a (A1ves 1986). Entre 1as µ1agas más im−
µortantes contro1adas µor este kongo están 1a broca de1 caJé, 1a µa1omi11a de1 reµo11o, µicudo de1 µ1áta−
no (Cosmoµo1ctes SORDCDUS), así como e1 µicudo de 1a cki1toma (AUTHOUOMUS EUGEUCC). 1os insectos
muertos µor este kongo µresentan una cubierta b1anca a1godonosa sobre e1 cuerµo, 1a cua1 está Jorma−
da µor e1 mice1io y esµoras de1 kongo.
Mefarhczcun aucsoµ1cae. A1 igua1 que B. basscaua, este kongo µertenece a 1a c1ase Deuteromycetes,
orden Moni1ia1es, Tami1ia Moni1iaceae. Este µatógeno ataca natura1mente más de 300 esµecies de in−
sectos de diversos órdenes (A1ves 1986). A1gunas µ1agas que son aJectadas µor este kongo son 1a
sa1ivita de 1a caña de azúcar (Aeueo1amca sµµ y Prosaµca sµ), y ckinckes µ1agas de diversos cu1tivos. 1os
insectos muertos µor este kongo son cubiertos comµ1etamente µor mice1io, e1 cua1 inicia1mente es de
co1or b1anco µero se torna verde cuando e1 kongo esµoru1a.
Para cada µ1aga en µarticu1ar existen ceµas esµecíJicas, 1as cua1es se kan venido se1eccionando debido
a 1a µatogenicidad que tienen sobre 1a µ1aga, así como µor sus características de µroducción. Por ejem−
µ1o µara e1 contro1 de 1a broca de1 caJé 1a ceµa más eJectiva es Bb−114; µara µ1ute11a de reµo11o es 1a
ceµa Bb−38, µara e1 contro1 de µicudo de cki1toma es 1a ceµa Bb−64 y µara e1 contro1 de 1a sa1ivita de
caña, 1a ceµa más eJectiva es 1a ceµa Ma−NB.
Modo de acctón de 1os hongos en1omoµa1ógenos sobıe 1os tnsec1os

1os kongos entomoµatógenos a1 igua1 que 1a mayoría de 1os kongos de µ1antas y vertebrados, inJectan
a1 kosµedante a través de 1a cutícu1a externa. Esta Jorma de µenetración es única de 1os kongos ya que
otros entomoµatógenos como bacterias y virus µenetran µor 1a vía ora1.
E1 contacto entre e1 inócu1o de1 entomoµatógeno y e1 insecto es Jundamenta1 µara e1 inicio de1 µroceso
inJeccioso; e1 contacto ocurre a1 azar, un c1ima Javorab1e, suJiciente cantidad de inócu1o de1 entomoµa−
tógeno en e1 ambiente, así como 1a existencia de suJicientes insectos kosµedantes, son Jactores que
Javorecen e1 eJecto de 1os kongos entomoµatógenos.
1a eµicutícu1a o caµa más externa de1 integumento de1 kosµedante es e1 sitio inicia1 de 1a interacción
µatógeno−kosµedante. E1 integumento es una estructura muy comµ1eja, cuya comµosición química es
muy imµortante µara e1 µroceso de µenetración. Entre sus comµonentes se encuentran 1íµidos, 1iµoµro−
teínas, µo1iJeno1es y µroteínas. Se ka observado que esta caµa µosee Jinos cana1es µor 1os cua1es ocurre
e1 suministro ceras, azúcares y µroteínas, 1os cua1es juegan un ro1 muy imµortante en 1as interacciones
seña1−receµtor, entre 1a cutícu1a y 1a esµora. Azúcares no−estructura1es y comµuestos nitrogenados µro−
ducidos µor 1as µ1antas o e1 insecto µueden contaminar 1a cutícu1a, aJectando así e1 µroceso de Jijación.
En genera1 en e1 µroceso de 1a µatogénesis (micosis), se observan tres Jases: a) germinación de 1a esµora
en 1a cutícu1a de1 kosµedante; b) µenetración de1 integumento de1 insecto µor medio de1 tubo germina−
tivo; c) desarro11o de1 kongo dentro de1 cuerµo de1 insecto y su mu1tiµ1icación. En este µroceso se
µueden veriJicar 1os siguientes µasos: Adkesión, germinación, µenetración, mu1tiµ1icación de1 kongo,
µroducción de toxinas, muerte de1 insecto, co1onización, µroducción de mice1io kacia e1 exterior, esµo−
ru1ación y diseminación de1 kongo.
Adhestón
Consiste en 1a Jijación de 1os µroµágu1os de1 kongo con 1a suµerJicie de1 insecto. Esta constituye una de
1as Jases más imµortantes de1 µroceso inJeccioso y está corre1acionada con 1a esµeciJicidad kosµedante
− µatógeno. Só1o 1as ceµas más viru1entas 1ogran exitosamente 1a adkesión. En e1 µroceso de adkesión
µarticiµan sustancias como 1ectinas (µroteínas o g1ucoµroteínas) y mucoµo1isacáridos, además de a1gu−
nos 1íµidos. Estas sustancias o secreciones aµarecen a1 inicio de1 contacto de1 kongo con e1 insecto.
En e1 cuerµo de1 insecto existen ciertas zonas µreJeridas µara 1a adkesión, como son 1as regiones inter−
segmenta1es, en donde 1a comµosición y estructura son diJerentes a1 resto de1 cuerµo de1 insecto.
Geımtnactón
1uego de 1a adkesión de 1a esµora sobre e1 integumento de1 insecto, ésta germina emitiendo un tubo
germinativo, Jormando 1uego un aµresorio. E1 tubo germinativo µuede ser 1argo o corto y en a1gunos
casos µuede no 11egar a Jormarse. En e1 µroceso de germinación juegan un ro1 imµortante 1os requeri−
mientos nutriciona1es de 1a esµora y 1as condiciones ambienta1es µresentes. En este sentido se ka obser−
vado que 1as esµoras de beauveria son más exigentes en carbono y energía que 1as de metarkizium.
Pene1ıactón
Desµués de 1a germinación se µroducen una serie de transJormaciones Jísicas y químicas, tanto en e1
insecto como en e1 kongo, que µermiten a1 µatógeno µenetrar 1a cutícu1a de su kosµedante. Un conidio
µuede germinar, sin embargo si no se dan 1as condiciones Jísicas y químicas y 1os estímu1os corresµon−
dientes no 1ogra µenetrar. Enzimas µrinciµa1mente 1iµasas, µroteasas y quitinasas, son µroducidas µor 1a
kiJa y ocasionan una a1teración de 1a cutícu1a, que Jaci1ita 1a entrada de 1a kiJa de µenetración.
Mu11tµ1tcactón de1 hongo en e1 homoce1e

En e1 interior de1 insecto e1 kongo se mu1tiµ1ica, µrinciµa1mente µor gemación, µroduciendo Jormas
mice1ia1es 1ibres y unice1u1ares 11amadas b1astosµoras en 1os Deuteromycetes, también se µueden Jor−
mar en e1 kiJas, µrotoµ1astos y cé1u1as sin µared.
1os insectos tienen un sistema inmuno1ógico que 1es µermite reconocer y reaccionar a µartícu1as extra−
ñas como µroµágu1os de kongos, bacterias y virus, en e1 komoce1e de1 insecto, 1as cua1es µueden ser
Jagocitados, evitando así 1a µresencia de otros organismos.
Pıoducctón de 1oztnas
1as toxinas son sustancias de baja toxicidad µara mamíJeros µero muy tóxicas µara artróµodos, µor 1o
que µueden causar 1a muerte de1 insecto debido a sus µroµiedades insecticidas; además actúan como
inkibidoras de 1as reacciones de deJensa de1 insecto. 1a µroducción de toxinas es una característica de
todos 1os kongos y ceµas. 1as toxinas µroducidas µueden ser de dos tiµos: a) macromo1écu1as µroteícas
y b) sustancias de bajo µeso mo1ecu1ar. 1as µrimeras son enzimas secretadas en cantidades signiJicativas
tanto en medios de cu1tivo como en e1 cuerµo de1 insecto. 1a seri1µroteasa y su1Jidri1µroteasa, kan sido
ais1adas de METARHCSCUM; otras enzimas encontradas son 1iµasas, g1icogenasas, ami1asas y quitinasas. E1
segundo tiµo corresµonde a metabo1itos secundarios, cuya µroducción es una µroµiedad genética de
1os kongos, µero que µuede ser aJectada µor Jactores como nutrientes, µH, temµeratura, etc. 1as toxinas
más comunes de este tiµo son µrinciµa1mente 1as destruxinas, demeti1dextruxina y µrotodextruxina.
Mueı1e de1 tnsec1o

1a muerte de1 insecto µarasitado, ocurre genera1mente antes que e1 kongo co1onice tota1mente e1 ko−
moce1e de1 insecto. Esto se debe en gran µarte a 1a acción de 1as toxinas. Con 1a muerte de1 insecto
Jina1iza 1a Jase µarasítica y se inicia 1a saµroJítica. Cuando e1 insecto muere no se observa evidencia de1
kongo causante de 1a muerte, sino µosteriormente. 1a duración de 1a muerte deµende de 1a ceµa de1
kongo, de1 kosµedante y de 1as condiciones ambienta1es.
Co1ontzactón 1o1a1
1uego de 1a muerte de1 insecto, e1 mice1io invade todos 1os órganos y tejidos, iniciando genera1mente
µor e1 tejido graso. Pueden existir órganos o tejidos que no son co1onizados. Desµués de 1a co1oniza−
ción, e1 cadáver de1 insecto se transJorma en una momia, 1a que es resistente a 1a descomµosición
bacteriana, aµarentemente debido a 1a acción de antibióticos 1iberados µor e1 kongo.
Emeıgencta de1 hongo hacta e1 ez1eıtoı

Desµués de 1a co1onización, si 1as condiciones externas son de baja kumedad re1ativa, e1 kongo µuede
mantenerse en e1 interior de1 insecto, µrotegido µor e1 integumento, µero en condiciones kúmedas e1
kongo emerge de1 cuerµo de1 insecto µrinciµa1mente a través de 1as zonas menos esc1erosadas.
Esµoıu1actón
Desµués que 1as kiJas atraviesan e1 integumento, si 1as condiciones son de a1ta kumedad re1ativa, en un
µeríodo de 24 a 48 koras ocurre 1a µroducción de esµoras o conidias. Es en esta Jase e1 insecto muerto
adquiere una co1oración característica de acuerdo a1 kongo, µor ejemµ1o verde si es metarHCSCUM y
b1anco si es BEAUUERCA.
Pıoducctón de hongos en1omoµa1ógenos

E1 uso de 1os kongos entomoµatógenos, µara e1 contro1 de µ1agas agríco1as, como un comµonente de
1os µrogramas de manejo integrado de µ1agas, constituye una a1ternativa viab1e µara 1os µroductores,
ya que además de ser eJiciente en e1 contro1 de 1as µ1agas µresenta muckos beneJicios desde e1 µunto de
vista ambienta1, agroeco1ógico y de sa1ud kumana.
Para que 1os insecticidas a base de kongos estén disµonib1es µara 1os usuarios, deben µroducirse en
cantidades suJicientes, es decir que se necesita imµ1ementar métodos de µroducción que además de
obtener buenos rendimientos, µroµorcionen un µroducto de buena ca1idad. 1a µroducción de kongos
entomoµatógenos, se basa en 1a mu1tiµ1icación masiva de1 kongo y sus estructuras reµroductivas (esµo−
ras y/o conidias) en un substrato natura1. Hasta 1a Jecka se kan eva1uado diJerentes tiµos de substratos
natura1es, µrinciµa1mente arroz, trigo, maíz, Jrijo1 y soya; siendo e1 arroz y e1 trigo 1os más uti1izados
actua1mente.
1os métodos de µroducción desarro11ados inc1uyen desde 1a mu1tiµ1icación artesana1 rea1izada µor 1os
mismos µroductores, 1a µroducción semi−industria1 a mediana esca1a, kasta 1a µroducción industria1 a
gran esca1a que se rea1iza en emµresas más grandes o comµañías, µara 1a cua1 se requiere de reactivos
y equiµos más esµecia1izados.
1a diJerencia entre estos métodos no se maniJiesta en 1a ca1idad de1 µroducto obtenido, si no más bien
en 1os µrocesos emµ1eados y en 1os vo1úmenes de µroducción; ya que si se rea1iza un buen contro1 de
ca1idad con cua1quiera de 1os métodos se obtiene un µroducto de a1ta ca1idad. De manera que uti1izar
uno de 1os métodos de µroducción deµende de 1a disµonibi1idad de recursos kumanos y materia1es,
equiµos e insta1aciones. A µartir de estas consideraciones e1 método que mejor se ajusta a 1as condicio−
nes de Nicaragua es e1 método de µroducción semi industria1.
Pıoducctón semt-tndus1ıta1
E1 µroceso de µroducción semi−industria1 se rea1iza en varias Jases, que van desde 1a obtención de1
cu1tivo µuro kasta 1a Jormu1ación de1 µroducto. En genera1 e1 µroceso está organizado en dos etaµas, 1a
etaµa de ceµario y 1a etaµa de µroducción.
E1 tiemµo emµ1eado en desarro11ar e1 µroceso de µroducción, µara µroducir un 1ote de µroducto es aµroxi−
madamente un mes, desde que se obtiene e1 cu1tivo µuro kasta que se cosecka y Jormu1a e1 µroducto.
Pasos de1 µroceso de µroducccóu senccudusfrca1 de hougos eufonoµafógeuos
Ceµaıto
Ais1amiento de1 kongo
E1aboración de cu1tivos µuros
Pıoducctón
Preµaración de matrices y bo1sas.
Inocu1ación e incubación de matrices
Inocu1ación e incubación de bo1sas
Proceso de secado
Cosecka de1 kongo
E1aboración de Jormu1aciones
1Œ / PRODUSSCÓU y USO de hougos eutomoµatógeuos
1a etaµa de ceµario comµrende e1 ais1amiento de 1a ceµa y 1a obtención de1 cu1tivo µuro. Además se
considera 1a obtención de ceµas nuevas, e1 mantenimiento, reactivación y µreservación de 1as ceµas. 1a
etaµa de µroducción comµrende 1a µreµaración de 1os substratos, inocu1ación e incubación de matrices
y bo1sas, e1 µroceso de secado (bandeja), 1a cosecka de1 kongo y 1a µreµaración de 1as Jormu1aciones.
Ats1amten1o
Este µaso consiste en 1a obtención de1 kongo a µartir de 1a Juente de inócu1o, 1a cua1 µuede ser a µartir
de insectos, µ1antas; o medios artiJicia1es como:
PDA (µ1atos µetri, tubos de ensayo, etc.) o de µre−
servaciones en seco como si1ica−ge1. A µartir de1
ais1amiento de1 kongo se µrocede a su inocu1a−
ción en un medio de cu1tivo, µara 1a obtención
de un cu1tivo µuro.
Debido a que se trata de1 µaso inicia1 de1 µroce−
so de µroducción debemos asegurar e1 éxito de1
mismo, ya que un error en este µaso tiene conse−
cuencias en todo e1 µroceso. Por ta1 razón debe−
mos estar seguros que e1 kongo ais1ado corres−
Chcushes MUERTOS, SUBCERTOS µor e1 hougo eutomoµatóge^
µonde a1 kongo que nos interesa, además debe
uo BEAUUERCA basscaua. estar 1ibre de contaminantes y debe tener buen
vigor µara su crecimiento.
E1 ais1amiento de kongos entomoµatógenos µuede kacerse de diversas maneras, siendo 1as más comu−
nes e1 ais1amiento µor di1ución seriada y e1 ais1amiento directo.
Acs1anceufo µor dc1uccóu sercada es e1 método más uti1izado, consiste en co1ocar un insecto cu−
bierto con 1as esµoras de1 kongo, en un reciµiente que contiene 10 m1 de agua desti1ada estéri1 con 0.01
% de Yween 80. 1a susµensión resu1tante se debe agitar µor 1 minuto, µara que 1as conidias se desµren−
dan de1 cuerµo de1 insecto. 1o que resu1ta de 1a mezc1a es una susµensión concentrada de1 inócu1o más
otras µartícu1as; a esta susµensión 1a 11amamos so1ución madre.
A µartir de 1a so1ución madre, se µreµaran di1uciones en serie (10–1, 10–2, 10–3, 10−4,10–5, 10–6). 1a
µrimera di1ución (10–1) se obtiene transJiriendo con una µiµeta estéri1 un m1 de 1a so1ución madre a un
tubo que contiene 9 m1 de agua desti1ada estéri1 con 0.01 % de Yween 80, éste se agita Juertemente
durante 1 minuto, 1uego tomamos un m1 de esta susµensión y 1o co1ocamos en otro tubo de ensayo que
contiene 9 m1 de agua desti1ada estéri1 con 0.01 % de Yween 80, obteniendo así 1a segunda di1ución.
Este oµeración se reµite varias veces kasta 1ograr obtener una serie de di1uciones (10 –1 kasta 10 −6). Para
rea1izar 1a siembra de1 kongo se deben usar 1as ú1timas di1uciones (10−4, 10–5, 10–6); esto se kace µrinci−
µa1mente µara reducir 1os riesgos de contaminación con otros microorganismos.
1g 1 m1 1 m1 1 m1 1 m1 1 m1
10−1 10−2 10−3 10−4 10−5 10−6
9 m1 9 m1 9 m1 9 m1 9 m1 9 m1
Ats1amten1o dtıec1o
1a técnica de ais1amiento directo consiste en 1a obtención directa de1 kongo a µartir de1 cuerµo de1
insecto, µasándo1o 1uego a un medio nutritivo. Esta técnica es desventajosa debido a que 1as muestras
que se toman de1 insecto µueden estar sucias y µuede acarrear µrob1emas de contaminación en e1
ais1amiento. Por esta razón se recomienda kacer una desinJección externa de1 insecto con kiµoc1orito de
sodio, enjuagándose con agua desti1ada estéri1. Este tiµo de ais1amiento µuede ser de dos Jormas:
a. Rasµando con un asa bacterio1ógica 1as µartícu1as de1 kongo en un insecto desinJectado, µasán−
do1a 1uego mediante 1a técnica de rayado a un medio de cu1tivo.
b. Con una µinza seca y estéri1, tomamos e1 insecto esµoru1ado desinJectado y se agita con movi−
mientos vertica1es y korizonta1es sobre 1a suµerJicie de1 medio de cu1tivo.
Cu11tvos µuıos
Un cu1tivo µuro, es e1 desarro11o de un organismo 1ibre de1 crecimiento de otros organismos. Se obtiene
kaciendo un ais1amiento de1 kongo a µartir de1 cu1tivo o Juente de inócu1o origina1. E1 inócu1o se siem−
bra o deµosita en µ1atos µetri que contienen e1 medio de cu1tivo PDA (u otro medio). Se 1e 11ama µuro
µor estar µresente únicamente e1 kongo de interés (sin contaminantes).
En todo µroceso de µroducción de kongos, 1a obtención de1 cu1tivo µuro es e1 µaso más imµortante, ya
que éste constituye 1a Juente de inócu1o µara iniciar e1 µroceso de µroducción, ya que es uti1izado µara
1a inocu1ación de 1os substratos.
A1 obtener un cu1tivo µuro µara incorµorar1o a1 µroceso de µroducción, debemos estar seguros que e1
ais1amiento es reciente y que tiene todas 1as características de 1a ceµa, re1acionadas µrinciµa1mente a su
vigor de crecimientoya su µatogenicidad. Para mantener estas características es necesario reactivar e1
kongo µor 1o menos dos veces a1 año.
PRODUSSCÓU y USO de hougos eutomoµatógeuos / 1£
1a reactivación de1 kongo se kace mediante bioensayos y consiste en 1a inocu1ación de1 kongo en
insectos de 1a esµecie que es contro1ada µor e1 kongo, µor ejemµ1o si es una ceµa µara e1 contro1 de
broca de caJé, se tiene que kacer co1ecta de este insecto µara kacer e1 bioensayo. Desµués de 1a inocu−
1ación se µrocede a 1a incubación, co1ocando e1 bioensayo en condiciones adecuadas de temµeratura.
E1 bioensayo se tiene que revisar todos 1os días y 1os insectos muertos se extraen y se co1ocan en cámara
kúmeda µara Javorecer 1a esµoru1ación de1 kongo. Tina1mente a µartir de 1os insectos esµoru1ados se
kace e1 ais1amiento de1 kongo, uti1izando 1as técnicas corresµondientes.
Incubactón de1 cu11tvo

1a incubación es e1 µeríodo durante e1 cua1 ocurre e1 crecimiento y reµroducción de1 kongo. Desµués
de rea1izar 1a inocu1ación, 1os µ1atos
µetri se co1ocan en 1os 1ugares de cre−
cimiento a temµeratura de 24 a 28 oC,
durante un tiemµo d e 4 a 6 días.
Durante este µeríodo se observa e1
crecimiento de1 mice1io y 1a µroduc−
ción de conidias. Norma1mente esta
etaµa Jina1iza cuando e1 kongo 11ega
a cubrir toda 1a suµerJicie de1 medio
de cu1tivo en e1 µ1ato µetri. Para rea1i−
zar 1imµieza de 1os contaminantes y
dar1e seguimiento a1 cu1tivo, se deben
P1atos µetrc so1osados eu 1UGARes de srescmceuto de1 hougo, a temµera^
rea1izar observaciones cada 48 koras. TURAS de 24 a 28 grados seutcgrados, DURAUTE UU tcemµo de 4 a 6 dcas.
Ma1ıtces y bo1sas
Estas dos etaµas de1 µroceso de µroducción, tienen como objetivo reµroducir masivamente e1 kongo
en un substrato de arroz entero, µara obtener 1as unidades inJectivas, o sea 1as conidias de1 entomoµa−
tógeno. En 1a matriz se µroduce e1 kongo que se uti1iza µara inocu1ar 1as bo1sas, y en 1as bo1sas se
reµroduce e1 kongo que 1uego es µasado a 1as bandejas y que será coseckado a1 Jina1 de1 µroceso de
µroducción.
1a matriz se estab1ece en reciµientes de vidrio (er1enmeyer) y 1as bo1sas en bo1sas de µo1iµroµi1eno. Para
1a matriz se uti1izan 100 gramos de arroz en cada er1enmeyer. 1a cantidad de arroz a co1ocar en 1a bo1sa,
deµende de1 tamaño de ésta, genera1mente se usan 200 gramos µor bo1sa.
Pıeµaıactón de1 subs1ıa1o de aııoz µaıa 1as ma1ıtces

E1 arroz que se uti1iza en 1as matrices, debe ser µrecocido, µara 1o cua1 se co1oca un reciµiente con agua,
en 1a estuJa, cuando e1 agua comienza a kervir se deµosita e1 arroz y se mantiene kasta que e1 arroz
µresenta una consistencia suave, 1o cua1 toma aµroximadamente 5 minutos. Posteriormente e1 arroz se
µone a escurrir en una zaranda kasta que esté tota1mente Jrío y seco, con e1 objetivo de µrocurar que 1as
matrices no adquieran kumedad, durante su incubación. En cada er1enmeyer se deµositan 100 gramos
de1 arroz µre−cocido y seco, 1o cua1 constituye 1a matriz. 1as matrices son esteri1izadas en e1 autoc1ave,
durante4a5 minutos, a 121oC y 1.2 bares de µresión, con e1 Jin de e1iminar contaminantes.
Desµués de esteri1izadas 1as matrices, éstas se agitan µara evitar ag1omeraciones de 1os granos de arroz,
1o que Javorece e1 crecimiento komogéneo de1 kongo sobre 1as matrices una vez inocu1adas.
Inocu1actón de ma1ıtces
E1 objetivo de 1a matriz es reµroducir e1 inócu1o
µara 1a inocu1ación de 1as bo1sas. Para rea1izar
1a inocu1ación de 1as matrices se µreµara una
susµensión de inócu1o a µartir de1 cu1tivo µuro
(PDA), este inócu1o debe ser de buena ca1idad,
es decir de buen crecimiento y 1ibre de conta−
minantes.
E1 inócu1o se obtiene rasµando cuidadosamen−
te e1 kongo de 1a suµerJicie de1 medio de cu1ti−
vo kasta obtener un µo1vo de conidias de1 kon−
go. Este se co1oca en 60 m1 de agua desti1ada
estéri1, µara Jormar una susµensión de conidias, Proseso de CUOSU1ASCÓU de matrcses a µartcr de 1a µreµara^
que deberá tener aµroximadamente una con− scóu de UUA SUSµEUSCÓU de CUÓSU1O.
centración de 1 x 108 conidias.
1a inocu1ación de matrices se rea1iza con jeringa esteri1izada a 121oC y 1.2 bar de µresión. Se inocu1an
15 cc de 1a susµensión de1 kongo µor cada matriz que contiene 100 g de arroz µrecocido. 1a cantidad
de inócu1o obtenido a µartir de un µ1ato µetri, es suJiciente µara inocu1ar cuatro matrices.
Incubactón de ma1ıtces
Desµués de 1a inocu1ación, 1as matrices son incubadas en un cuarto oscuro a temµeraturas de 24 a
28oC, µor un µeríodo aµroximado de 8 días. Durante este µeríodo e1 kongo se desarro11a y µroduce
estructuras reµroductivas o conidias.
Inocu1actón de bo1sas
1as bo1sas son inocu1adas con una susµen−
sión de esµoras obtenidas a µartir de 1a
matriz, µara 1o cua1 se deben µreµarar 1as
bo1sas y µreµarar e1 inócu1o.
Para 1a µreµaración de 1as bo1sas se deµo−
sitan 200 gramos de arroz entero en bo1−
sas µ1ásticas de µo1iµroµi1eno y se 1es agre−
gan 100 m1 agua (desti1ada o µotab1e), és−
tas se se11an debidamente µara ser esteri1i−
zadas en e1 autoc1ave a 1.2 bar de µresión
y 121oC, durante4a5 minutos. Desµués
de esteri1izar 1as bo1sas, se debe agitar con
e1 objetivo de evitar ag1omeraciones, µara
1a CUOSU1ASCÓU de bo1sas sou 200 gramos de arros sou esµoras
obteucdas a µartcr de 1a matrcs.
que e1 inócu1o se distribuya uniJormemen−
te en e1 arroz y se obtenga un crecimiento
komogéneo.
Para 1a µreµaración de1 inócu1o, a cada una de 1as matrices (co1onizadas µor e1 kongo) se 1es agregan
✓ 50 m1 de agua desti1ada estéri1 a1 0.1 % de extravón y se agita e1 contenido, kasta obtener aµroxima−
damente 600 m1 de susµensión de conidias.
Cada bo1sa de 200 gramos de arroz es inocu1ada con 20 cc de 1a susµensión de conidias, uti1izando una
jeringa veterinaria que debe ser esteri1izada µreviamente. Con 1a susµensión de inócu1o obtenida de
cada matriz se inocu1an aµroximadamente 30 bo1sas de 200 gramos.
Incubactón de Bo1sa
1as bo1sas inocu1adas se ubican en 1os cuartos de crecimiento donde µa−
san un µeríodo de 4 a 6 días. Durante este µeríodo se revisan 1as bo1sas
diariamente, µara ir se1eccionando 1as bo1sas de buena ca1idad, e1imi−
nando 1as bo1sas que µresentan crecimiento 1ento y no uniJorme, bo1sas
que µresentan un crecimiento débi1 así como 1as bo1sas con µresencia de
contaminantes.
Incubactón y secado de1 hongo

E1 objetivo de esta Jase es 1a e1iminación de 1a kumedad de1 kongo y su
reµroducción. E1 arroz contenido en 1as bo1sas es deµositado en bande−
jas µ1ásticas que µresentan oriJicios en e1 Jondo, 1as que se co1ocan en un
1oca1 a temµeratura ambiente µara que se sequen. A1 inicio 1as bandejas
se mantienen se11adas y µosteriormente se abren. IUSUBASCÓU de bo1sas.
Inicia1mente 1as bandejas se 1imµian, se kumedecen con a1coko1 y se J1a−

mean con e1 meckero. 1uego se se1eccionan 1as bo1sas de mejor ca1idad,
se abren y e1 contenido de 10 bo1sas es deµositado en cada bandeja, 1o
que equiva1e aµroximadamente a 2000 gramos de arroz co1onizado µor
e1 kongo.
E1 µeríodo de incubación tarda aµroximadamente 15 días y se desarro11a
en 2 Jases, que son 1a incubación y e1 secado: 1a incubación de 1a bande−
Hougos eu µroseso de sesado.
ja dura aµroximadamente 6 días, durante este tiemµo e1 kongo crece y se
reµroduce en condiciones de oscuridad y a1ta kumedad re1ativa. Para
e11o, una vez deµositado e1 arroz en 1as bandejas, estas se aµi1an y se se11an con masking−taµe, taµando
1os oriJicios con e1 objetivo de Jormar una cámara oscura dentro de 1a bandeja, µara que e1 kongo
continúe su µroceso de crecimiento y esµoru1ación.
Una vez que e1 kongo cubre comµ1etamente 1os esµacios de1 substrato se µrocede a abrir 1as bandejas
µara tener una ráµida µérdida de kumedad y ace1erar e1 µroceso de secado e1 cua1 ocurre aµroximada−
mente de 12 a 15 días. E1 kongo está 1isto µara cosecka cuando Jrotamos e1 arroz con e1 kongo entre 1os
dedos y ocurre desµrendimiento de conidias en Jorma de µo1vo. E1 tiemµo de secado µuede ser menor,
si en e1 cuarto de secado se co1oca un extractor de kumedad.
Cosecha de1 hongo

1a cosecka como e1 µaso Jina1 de1 µro−
ceso de µroducción semi industria1,
consiste en seµarar de1 substrato (arroz)
1as estructuras de1 kongo (conidias y/o
esµoras) y reco1ectar1as, 1as cua1es son
obtenidas en Jorma de µo1vo. Para rea−
1izar 1a cosecka, 1a kumedad de1 kon−
go no debe exceder de 4 a 6%. E1 µo1−
vo que se obtiene en 1a cosecka de
kongos entomoµatógenos contiene
esµoras y/o conidias y mice1io, que son
estructuras de1 kongo, más 1as µartícu−
1as de1 substrato de arroz.
Aunque se kan desarro11ado a1gunos equiµos mecánicos µara 1a cosecka de estos kongos en µroduc−
ción a gran esca1a, en Nicaragua aún no kan sido va1idados, µor 1o que en 1a actua1idad 1a cosecka se
rea1iza de Jorma manua1 uti1izando tamices más Jrotación. Este método de cosecka so1o es µráctico µara
µroducción a mediana esca1a.
1a cosecka se kace deµositando e1 arroz co1onizado en un tamiz con diámetro de oriJicios de 0.5mm,
1uego µor agitación y Jrotación, se seµara e1 µo1vo de 1os granos de arroz. E1 materia1 retenido µor e1
tamiz se descarta y e1 µo1vo reco1ectado se deµosita en reciµientes µara eva1uar e1 rendimiento.
En condiciones ambienta1es 1as conidias coseckadas µueden ser aJectadas µor 1a 1uz, kumedad y a1tas
temµeraturas; µor 1o que una vez coseckado e1 kongo se debe mantener en reJrigeración µara mantener
su viabi1idad µor más tiemµo.
Eva1uactón de ıendtmten1o
A1 Jina1izar e1 µroceso de µroducción se µrocede a eva1uar e1 rendimiento, e1 cua1 se reJiere a 1a cantidad
de gramos de µo1vo coseckado y a1 número de conidias µor gramo de µo1vo coseckado. A µartir de este
rendimiento se µrocede a estimar e1 rendimiento neto, µara 1o cua1 se debe conocer 1a viabi1idad de1
kongo coseckado. E1 µroceso de eva1uación de rendimiento se desarro11a de acuerdo a 1os siguientes
µasos:
1) Peso de1 µo1vo coseckado: Consiste en µesar 1a cantidad de µo1vo coseckado µor bandeja o µor
ki1ogramo de arroz. Este rendimiento µuede variar desde 20 gramos, kasta 80 o más gramos de
µo1vo µor cada ki1ogramo de arroz uti1izado en todo e1 µroceso de µroducción, es decir tomando
en cuenta e1 arroz de 1as matrices, así como e1 arroz que se descarta µor contaminación o creci−
miento deJiciente. Si tomamos en cuenta e1 rendimiento de1 kongo, a µartir de1 arroz de 1as bande−
jas, éste µuede a1canzar kasta más de 200 gramos de µo1vo µor ki1ogramo de arroz.
2) Conteo de conidias µor gramos de µo1vo

coseckado: Este rendimiento está deter−
minado µor 1a ceµa y µor e1 estado de 1a
misma y varía desde5X 103 kasta 2.5 X
10" conidias/g. Cenera1mente 1as ceµas de
B. Basscaua tienen mejor rendimiento que
1as de M. aucsoµ1cae y entre 1as ceµas de
una misma esµecie también existen diJe−
rencias de rendimiento.
Para e1 conteo de conidias se µreµaran di1ucio−
nes en serie, de 1a misma manera que se µre−
CÁMARA NEUBAUER de souteo de soucdcas sou aµoyo de UU µaran 1as di1uciones µara ais1ar e1 kongo. E1 ob−
mcsrossoµco. Eu e1 DCBU¡O de aba¡o se obserua e1 rayado
NEUBAUER eu e1 QUE se hase e1 souteo. jetivo de kacer di1uciones es evitar mucka ag1o−
meración de conidias, µara Jaci1itar su conteo.
1 MM 1 MM 1 MM 1as di1uciones se kacen en agua desti1ada es−
téri1 con Yween 80 a1 0.1%.
A B
1 MM Para kacer e1 conteo de conidias se usa una
0,2 MM cámara de conteo (Neubauer). Con una µiµe−
1 MM ta µasteur, se toma una a1ícuota de 1a di1ución
E
se1eccionada µara e1 conteo (10–5 o 10–6) y se
0,05 MM
co1oca en 1as cámaras de conteo; 1uego a tra−
1 MM
2,5 U C D vés de1 microscoµio kacemos e1 conteo de
conidias, este µaso se reµite varias veces kasta
0,2 MM obtener un rendimiento µromedio.
1a cámara de conteo consiste en una 1ámina de vidrio un µoco más gruesa a 1a de un µorta objeto, 1a
cua1 µresenta una ranura en Jorma de H y contiene dos cámaras. E1 Jondo de 1a cámara tiene un rayado
Neubauer, e1 cua1 µresenta 9 cuadros µrinciµa1es (C.P) de 1 mm µor 1ado. Si 1as conidias son re1ativa−
mente grandes, se cuenta e1 contenido de 5 cuadros, 1os 4 de 1as esquinas y e1 centra1 (A, B, C , D y E).
Para µroµágu1os µequeños como 1os de B. basscaua y M. aucsoµ1cae usamos e1 cuadro µrinciµa1 (C.P)
centra1, que está dividido en 25 cuadritos secundarios (C.S) de 0.2 mm µor 1ado. E1 conteo también se
µuede kacer se1eccionando so1amente a1gunos de 1os cuadrados secundarios, obteniendo 1uego su
µromedio.
Para ca1cu1ar 1a concentración de conidias µor mi1i1itro, se mu1tiµ1ica e1 número de conidias observadas
en e1 cuadro, µor e1 Jactor de cámara, mu1tiµ1icamos 1uego µor e1 Jactor de di1ución. E1 Jactor de cámara
es 10,000 µara cuadrados µrinciµa1es y 250,000 µara cuadrados secundarios.
No. de Contdtas/g = No. de Contdtas en e1 cuadıo z Tac1oı de Cámaıa z Tac1oı de Dt1uctón
Ejemµ1o: Si µara e1 conteo se uti1iza 1a di1ución 10–5 y en e1 cuadrado centra1 encontramos 85 conidias,
entonces e1 número de conidias µor gramo se obtiene de 1a siguiente Jorma:
No. de conidias/g = 85 x 10,000 /0.00001(10–5) = 8.5 x 1010.
3) Eva1uación de 1a viabi1idad de1 kongo (µorcentaje de germinación): Este µaso tiene e1 objetivo de
obtener 1a concentración eJectiva de1 kongo, a µartir de 1a cua1 se µreµaran 1as dosis a uti1izar en e1
camµo. 1a viabi1idad de 1as conidias exµresada en µorcentaje, indica e1 µorcentaje de1 tota1 de
conidias que se encuentran viab1es, es decir que tienen 1a caµacidad de germinar. Un µroducto de
buena ca1idad debe tener una viabi1idad cercana a1 100%. En 1a medida que un µroducto µierde
viabi1idad, se reduce 1a caµacidad de estab1ecerse en e1 camµo y causar eµizootias, reduciendo así

su eJectividad sobre 1a µ1aga.
Para conocer 1a viabi1idad de1 kongo se µreµara un medio de cu1tivo, como Agar−Agua. Este se esteri−
1iza y µosteriormente con una µiµeta µasteur se deµositan dos a1ícuotas de1 medio de cu1tivo en un
µorta objeto (una en cada extremo). Posteriormente con otra µiµeta, se deµositan sobre 1as a1ícuotas de1
medio, a1ícuotas de 1a susµensión de1 kongo. Tina1mente este montaje es co1ocado en una cámara
kúmeda, 1a cua1 consiste en un µ1ato µetri con µaµe1 Ji1tro kumedecido y se mantiene en un cuarto de
crecimiento. Yodos 1os materia1es uti1izados en este µrocedimiento deben ser esteri1izados en autoc1ave
a 1.2 bar de µresión y 121 oC.
1as mediciones se rea1izan entre 1as 20 y 24 koras desµués de rea1izado e1 montaje. 1as observaciones
se rea1izan a1 microscoµio, uti1izando e1 objetivo de 25 o 40X. 1as variab1es que se miden son: número
de conidias germinadas, número de conidias no germinadas y e1 tota1 de conidias. Como mínimo se
deben observar un tota1 de 200 conidias µor cada montaje µara que e1 dato obtenido tenga µoco
margen de error.
Una vez que se tiene toda 1a inJormación de rendimiento (No. de conidias/g y viabi1idad), se determina
1a cantidad de kongo coseckado (gramos de µo1vo) necesarios µara a1canzar 1a dosis de camµo, 1a que
es equiva1ente a 10 12 conidias µor kectárea, dicka cantidad es 1a que se va a uti1izar µara kacer 1a
Jormu1ación, de acuerdo a1 área a tratar. Ejemµ1o:
A1 momento de rea1izar 1a cosecka de un 1ote de µroducción de B. Basscaua, se obtuvo un rendimiento
tota1 de 8.5 x 1010 conidias µor gramo de µo1vo. Para conocer e1 rendimiento neto se µrocedió a eva1uar
1a viabi1idad de 1as conidias. 1a viabi1idad de 1as conidias µroducidas en este 1ote Jue de 95%. Esto
indica que en un gramo de µo1vo existen 8.0✓ 5 x 1010 conidias viab1es.
Rendimiento Yota1 : 8.5 x 1010 conidias µor gramo de µo1vo.

¥iabi1idad : 95%
Rendimiento neto : 8.0✓5 x 1010 conidias
(8.5 x 10 10 conidias/g (95% de viabi1idad) = 8.5 x 1010 x 0.95 (95%) = 8.0✓5 x 1010 conidias viab1es
µor gramo de µo1vo).
Para obtener 1a dosis a uti1izar en e1 camµo, a µartir de1 rendimiento neto, se debe estimar cuantos
gramos de µo1vo se necesitan µara tener 1012 conidias, 1o cua1 se rea1iza a través de una reg1a de tres
simµ1e:
1g 8.0✓5x1010
x 1012
1g x 1012 conidias 1g x 1012

= 12.3 g
8.0✓ 5x1010 conidias 8.0✓ 5x1010
Esto indica que µara aµ1icar en una kectárea (1012 conidias) se necesita Jormu1ar 12.3 gramos de µo1vo
de kongo coseckado.
Si e1 número de conidias µor gramo de µo1vo es bajo y 1a viabi1idad también es baja, se necesita mayor
cantidad de µo1vo µara aµ1icar en un área determinada. En cambio si se µroduce mayor cantidad de
conidias µor gramo de µo1vo y 1a viabi1idad es mayor, se necesita menor cantidad de µo1vo µara aµ1icar
en 1a misma área.
E1aboıactón de Goımu1actones
1a Jormu1ación es 1a Jorma como se µreµara un µroducto µara ser adquirido, maniµu1ado y/o aµ1icado
µor 1os usuario, es decir es 1a Jorma de µresentación de un µroducto. 1a Jormu1ación de1 kongo es e1
µroceso mediante e1 cua1 e1 ingrediente activo, es decir 1as conidias de1 kongo, se mezc1an con materia−
1es inertes, ta1es como vekícu1os, so1ventes, emu1siJicantes y otros aditivos. Estos materia1es inertes ayu−
dan a que e1 kongo trabaje mejor. Yodo esto se kace con e1 Jin de 1ograr una buena komogeneidad y
distribución de 1as µartícu1as de1 kongo, µara µoder ser maniµu1adas y aµ1icadas adecuadamente, sin
aJectar su viabi1idad.
En e1 µroceso de Jormu1ación e1 kongo se debe combinar con sustancias só1idas o 1íquidas, dando
como resu1tado dos tiµos de Jormu1aciones; una Jormu1ación só1ida que tiene asµecto de µo1vo y una
Jormu1ación 1íquida que es aceitosa. E1 µroductor µuede usar cua1quiera de estas Jormu1aciones µara e1
contro1 de 1as µ1agas de 1os cu1tivos.
Para ser Jormu1ado, 1a viabi1idad de1 kongo no debe ser menor de 95% y e1 contenido de kumedad no
debe ser mayor de1 4 a 6 %.
Resu1tados de diversos estudios indican que, a temµeratura ambiente 1as conidias mantienen su viabi−
1idad µor mayor tiemµo cuando e1 kongo ka sido Jormu1ado que cuando se a1macena e1 µo1vo cose−
ckado (sin Jormu1ar).
Hasta e1 momento en Nicaragua se kan desarro11ado dos tiµos de Jormu1aciones:
1. Tormu1ación seca (Po1vo mojab1e). En este tiµo de Jormu1ación debe uti1izarse un vekícu1o, e1 cua1
µuede ser de origen minera1 o vegeta1, que además de µroµorcionar una buena distribución de 1as
conidias, ayude a absorber 1a kumedad de 1as mismas y que 1as mantenga viab1es µor un tiemµo
considerab1e.
2. Tormu1ación 1íquida (Emu1siJicab1e). Debe uti1izarse un

1íquido so1vente y un emu1siJicante (o un aceite emu1si−
Jicante). E1 1íquido uti1izado tiene 1a Junción de mante−
ner susµendidas 1as conidias en e1 medio µara 1ograr
una mezc1a komogénea que garantice una buena aµ1i−
cación, además este 1íquido debe evitar 1a absorción
de agua µor 1a conidia y mantener su viabi1idad.
Ambas Jormu1aciones son de Jáci1 manejo, µor 1o que su uso
deµenderá de 1a disµonibi1idad de 1a Jormu1ación.
1os materia1es uti1izados en 1a Jormu1ación deben µresentar
a1gunas características µara µoder ser uti1izados, entre estas
µodemos mencionar:
□ Deben ser inertes, es decir no deben tener actividad
bio1ógica (sobre anima1es o µ1antas)
VORMU1ASCÓU
□ Deben ser inocuos a1 medio ambiente sesa de
hougos
□ Deben µresentar características Jísicas adecuadas µara (µo1uo
mo¡ab1e) y
mezc1arse con 1as conidias FORMU1ASCÓU
1CQUCDA de
□ Deben Jaci1itar 1a aµ1icación de1 µroducto
hougos
□ No deben aJectar 1a actividad de1 kongo (EMU1SCFC^
saute),
□ Deben ser económicamente rentab1es ambas de
FÁSC1
maue¡o.
A1gunos estudios indican que 1a viabi1idad de 1os conidias se mantiene mayor tiemµo en 1a Jormu1a−
ción 1íquida que en 1a só1ida, sin embargo en estudios rea1izados en 1a Universidad Naciona1 Agraria,
no se encontraron diJerencias entre ambos tiµos de Jormu1aciones. Además 1a Jormu1ación 1íquida µre−
senta e1 inconveniente que e1 aceite a uti1izar no está disµonib1e en Nicaragua, µor 1o que se tiene que
comµrar en otros µaíses, además, cuando en 1a Jormu1ación 1íquida se uti1izan aceites minera1es o deri−
vados de µetró1eo, ésta no es aceµtada en µroducción orgánica debido a1 tiµo de aceite que contiene.
Estudios rea1izados indican que 1as conidias µierden su viabi1idad a µartir de 1os 10 – 15 días cuando se
mantienen a temµeratura ambiente, en cambio 1a viabi1idad se mantiene µor más de 60 días en 1as
mismas condiciones, cuando 1as conidias son Jormu1adas.
E1 µroducto Jormu1ado debe ser emµacado/envasado en reciµientes que no µermitan 1a entrada de 1uz,
ya que 1a radiación u1travio1eta aJecta 1a germinación de 1as conidias y 1a actividad de1 kongo. Además
e1 reciµiente debe estar cerrado kerméticamente µara evitar 1a absorción y µenetración de agua.
A1macenamten1o de1 µıoduc1o

Por tratarse de µroductos keckos con organismos vi−
vos (conidias de1 kongo), 1a ca1idad exµresada en su
viabi1idad, se µierde cuando se mantienen en condi−
ciones desJavorab1es µor mucko tiemµo. Uno de 1os
Jactores que más aJecta a 1os kongos son 1as a1tas tem−
µeraturas, µor esta razón si se van a a1macenar µor
mucko tiemµo se recomienda mantener1os en reJri−
geración, µor µeríodos cortos también se µueden
mantener en condiciones ambienta1es µero en 1uga−
Coucdcas de hougos eu refrcgerascóu. res Jrescos evitando 1a radiación directa de1 so1.
De acuerdo a estudios rea1izados, e1 µroducto Jormu1ado µuede a1macenarse en condiciones ambienta−

1es µor µeríodos de uno a dos meses, sin que éste µierda su viabi1idad, siemµre que no esté exµuesto
directamente a 1a 1uz so1ar o 1a kumedad. A1macenamiento µor mayor tiemµo, tiene que kacerse en
reJrigeración a temµeratura aµroximada de 4 oC. En cambio e1 µroducto coseckado (sin Jormu1ar) es
conveniente a1macenar1o siemµre en reJrigeración.
Con1ıo1 de ca1tdad
Durante e1 µroceso de µroducción, e1 contro1 de ca1idad constituye un Jactor c1ave, ya que además de
garantizar un buen rendimiento, e1 µroducto obtenido es de a1ta ca1idad y se evita 1a µérdida de mate−
ria1es y reactivos.
E1 contro1 de ca1idad se reJiere a1 seguimiento y eva1uación de 1a ca1idad en cada uno de 1os µasos de1
µroceso de µroducción. Esto se kace con e1 Jin de rea1izar una se1ección adecuada de1 kongo, detectar
y descartar 1a µresencia de agentes contaminantes en cada etaµa de1 µroceso µara obtener a1 Jina1 de1
mismo un µroducto de buena ca1idad (viabi1idad, µatogenicidad y viru1encia) y de buen rendimiento.
En genera1 todo e1 µroceso de µroducción semi−industria1 está sujeto a1 µrob1ema de contaminación y a
1a ocurrencia de Jenómenos que aJecten tanto e1 rendimiento como 1a ca1idad de 1os µrocesos y µroduc−
tos de1 mismo. Por esta razón e1 contro1 de ca1idad es Jundamenta1 en dicko µroceso.
Entre 1os contaminantes más comunes están 1os kongos y 1as bacterias. Debido a sus características de
crecimiento a1gunos contaminantes son más diJíci1es de e1iminar que otros.
1a diversidad de contaminantes es mayor en 1a etaµa de ceµario (medios de cu1tivo) que en 1a etaµa de
µroducción (matrices, bo1sas y bandejas). Se µueden µresentar µrob1emas de contaminación en matri−
ces y bo1sas, sin embargo en bandejas ya no existe µosibi1idad de µresencia de contaminantes, ya que
e1 kongo ka co1onizado comµ1etamente e1 substrato de arroz y ka uti1izado todos sus nutrientes.
Con1ıo1 de ca1tdad en 1a e1aµa de ceµaıto

Debido a que en 1a etaµa de ceµario se trabaja con medios de cu1tivo de a1to va1or nutritivo, existen
mayores µosibi1idades que ocurran e1 crecimiento de microorganismos no deseados, µrinciµa1mente
kongos y bacterias µresentes en e1 ambiente o en otras Juentes de contaminación.
E1 contro1 de ca1idad en 1a etaµa de ceµario debe rea1izarse con mucko rigor, debido a que es en esta
etaµa que se inicia e1 µroceso de µroducción, de manera que si se se1ecciona incorrectamente 1a ceµa y
e1 cu1tivo µuro y además existe µresencia de contaminantes, esto aJectará 1os siguientes µasos de1 µroce−
so, 1o que a1 Jina1 incide en 1a ca1idad y e1 rendimiento de1 µroducto obtenido.
Con1amtnan1es más comunes

Se considera contaminante a todo aque1 tiµo de microorganismo no deseado que se desarro11a en e1
medio donde estamos cu1tivando e1 kongo de interés. Cenera1mente 1os contaminantes siemµre están
µresentes en e1 ambiente y en 1os materia1es emµ1eados en e1 1aboratorio y se µresentan cuando no se
cumµ1en 1as normas de trabajo en e1 1aboratorio.
1os contaminantes aJectan a1 kongo que estamos cu1tivando comµitiendo con 1os nutrientes de1 medio
y en esµacio que debería ocuµar e1 entomoµatógeno, además 1os contaminantes se µueden comµortar
como kiµerµarásitos, es decir se a1imentan de1 kongo que estamos cu1tivando, además µueden µrodu−
cir sustancias que inkiben e1 crecimiento y 1a Jormación de estructuras reµroductivas.
En e1 µroceso de µroducción de kongos entomoµatógenos se µresentan una gran variedad de kongos
y bacterias contaminantes, a1gunos de e11os son µatógenos a1 kombre. Entre 1os kongos más comunes
como contaminantes están 1os géneros: AsµerGC11US, PEUCSC11CUM, VUSARCUM, Pesta1otca. 1os géneros de
bacterias más comunes como contaminantes son: Serratca, Ervcuca, PSEUDOMOUAS y BASC11US.
1as co1onias de Tusarium µueden tener diJerentes co1oraciones o µresentar µigmentaciones en e1 me−
dio en que se encuentran, estas µueden ser: naranjas, rosadas, amari11as, crema o vio1áceas.
Penici11ium y Asµergi11us son 1os contaminantes más comunes en e1 ambiente, ya que se mantienen
como saµroJitos, sobre cua1quier materia1. Estos kongos Jorman co1onias que µueden µresentar diJeren−
tes co1oraciones, µrinciµa1mente diversas tona1idades de verde y amari11o.
1as co1onias de Pesta1otia son b1ancas y están sa1µicadas µor unas gotas de exudado negro bri11ante en
1as que se encuentra µor mi11ares 1os conidias de1 kongo.
Serratia es una bacteria muy dañina en e1 µroceso de µroducción de kongos entomoµatógenos, ya que
no Jorma co1onias si no que cubre µor comµ1eto e1 cu1tivo µuro donde se encuentra, tomando una
co1oración roja y µor 1o tanto es diJíci1 de erradicar.
Yodos estos contaminantes se µresentan de manera genera1 a exceµción de Pesta1otia que se µresenta
µrinciµa1mente en cu1tivos de ¥ertici11ium. E1 µrinciµa1 µrob1ema es que se desarro11an más ráµidamen−
te que e1 kongo entomoµatógeno, de manera que cubren todo e1 esµacio de1 medio y consumen todos
sus nutrientes, evitando e1 crecimiento de1 entomoµatógeno.
Para evitar e1 crecimiento de bacterias se 1e debe de agregar a1 medio un antibiótico como µenici1ina,
c1oranJenico1 y regu1ar e1 µH µor medio de 1a adición de ácido 1áctico, cuando e1 daño µor bacterias es
e1evado es recomendab1e desinJectar e1 1ugar de trabajo con Jorma1ina µara µoder erradicar1a y esteri−
1izar todo materia1.
E1 reconocimiento de a1gunos kongos y bacterias contaminantes de 1aboratorios se µuede basar en e1
crecimiento característico que µresenta; en a1gunos casos se observa directamente e1 crecimiento de 1as
co1onias, observando 1a Jorma y co1or de 1as co1onia s de1 contaminante; en otros no se observan Jáci1−
mente estas características, µero se observa que e1 crecimiento de1 entomoµatógeno es 1ento y anorma1.
Cuando 1a contaminación es µor bacterias, e1 entomoµatógeno no 1ogra crecer en e1 substrato µor

comµ1eto debido a que e1 crecimiento de 1a bacteria es más que e1 de1 kongo, además se Jorma una
masa suave, y µueden aµarecer en e1 substrato manckas de co1or rojo, cremas y/o amari11entos. Además
1as bacterias tienen 1a característica de µresentar un o1or Juerte y desagradab1e. En cambio 1os kongos
tienen 1a cua1idad de µresentar o1or característico a Jermentación Juerte, e1 que se diJerencia de1 o1or
característico de 1os entomoµatógenos.
Con1ıo1 de ca1tdad de Cu11tvos Puıos

A 1os cu1tivos µuros se 1es debe kacer 1a µrueba µara bacterias contaminantes, 1a que consiste en inocu−
1ar e1 kongo en un medio de cu1tivo Agar−Nutriente. Estos µ1atos son etiquetados con 1a inJormación
corresµondiente y se 1es da constante seguimiento. 1as observaciones de1 crecimiento de bacterias se
kace entre 1as 24 y 48 koras siguientes, descartando 1os µ1atos en 1os que desarro11en bacterias.
En e1 caso de kongos contaminantes se rea1iza una 1imµieza de1 cu1tivo, e1iminado 1as co1onias de1
contaminante o rea1izando una nueva siembra. Si e1 contaminante ka cubierto todo e1 cu1tivo e1 µ1ato
debe ser descartado.
Con1ıo1 de ca1tdad en 1a e1aµa de µıoducctón

1os µrinciµa1es µrob1emas de contaminación son ocasionados µor bacterias y genera1mente ocurren
debido a ma1 manejo de1 substrato, µor ejemµ1o ag1omeraciones de arroz, exceso de kumedad, ma1a
esteri1ización de1 arroz, etc.
Con1ıo1 de ca1tdad de ma1ıtz

E1 contro1 de ca1idad se inicia se1eccionando adecuadamente 1os materia1es, µrinciµa1mente 1os µ1atos
de1 cu1tivo µuro a uti1izar. Estos µ1atos deben ser de crecimiento ráµido y vigoroso; deben µresentar 1as
características de crecimiento de1 kongo (Jorma y co1or); además cada µ1ato uti1izado debe estar 1ibre de
cua1quier tiµo de contaminante.
Una vez inocu1ada 1a matríz, se debe revisar diariamente a µartir de1 tercer día desµués de 1a inocu1a−
ción, durante e1 µroceso de incubación, µara 1a detección de contaminantes, µrinciµa1mente bacterias.
Si e1 crecimiento de1 kongo es 1ento y no uniJorme o e1 substrato adquiere una consistencia b1anda,
ocurre una co1oración amari11enta que µuede ser tanto 1oca1izada como genera1izada, entonces se debe
descartar 1a matriz y esteri1izar1a µara destruir e1 inócu1o contaminante.
Con1ıo1 de ca1tdad de bo1sa

1os µrob1emas de contaminación en bo1sa son simi1ares a 1os que ocurren en matriz, µero se µueden
µresentar con mayor Jrecuencia, debido a µrob1emas de kumedad o µrob1emas en 1a inocu1ación.
Durante 1a Jase de bo1sa se debe rea1izar contro1 sistemático, µara evitar µrob1emas de contaminación y
se1eccionar adecuadamente e1 materia1, este contro1 se rea1iza mediante 1a observación de1 crecimiento.
E1 tiµo de crecimiento observado µuede: disµarejo, 1ento, komogéneo.
Un crecimiento disµarejo es 1oca1izado sobre diJerentes µuntos de1 substrato. Este tiµo de crecimiento
µuede deberse a 1a µresencia de contaminantes y/o a una ma1a maniµu1ación a1 momento de 1a inocu−
1ación. E1 crecimiento 1ento µuede estar asociado a una ma1a agitación de1 substrato desµués de eJec−
tuada 1a inocu1ación, Jactores ambienta1es, estado de 1a ceµa, µresencia de contaminantes o ca1idad de1
inócu1o. E1 crecimiento komogéneo y ráµido, es e1 tiµo de crecimiento aµroµiado µara 1a se1ección de 1a
bo1sa que entrará en µroducción.
Con1ıo1 de ca1tdad de1 µıoduc1o cosechado

E1 contro1 de ca1idad de1 µroducto coseckado se rea1iza mediante 1a eva1uación de rendimiento en
número de conidias µor gramo de µo1vo coseckado y 1a viabi1idad de 1as conidias (µorcentaje de
germinación).
Se considera de ca1idad aque1 rendimiento que no sea inJerior a1 rendimiento µromedio de 1a ceµa y
que 1a viabi1idad no sea menor a1 95%. Si una ceµa µresenta un rendimiento muy bajo no debe uti1izar−
se ya que no sería rentab1e. Cuando e1 rendimiento es muy bajo se debe a que 1a ceµa es muy vieja y ka
ido µerdiendo sus características, µor 1o que se recomienda reactivar1a en e1 insecto kosµedante.
1as eva1uaciones de rendimiento (conidias µor gramo de µo1vo y viabi1idad) se deben rea1izar a1 mo−
mento de 1a cosecka y antes de 1a µreµaración de 1a Jormu1ación.
Con1ıo1 de ca1tdad de 1a µıeseıvactón en st1tca ge1

E1 contro1 de ca1idad de1 materia1 µreservado inicia con 1a se1ección adecuada de1 cu1tivo µuro, e1 cua1
debe ser reciente y debe µresentar características de buen crecimiento, buena esµoru1ación y buen
vigor.
E1 µroceso de1 contro1 de ca1idad de 1os tubos µreservados de si1ica ge1, se eJectúa entre 5 y 6 días
desµués de 1a µreservación, con e1 objetivo de conocer si 1o que µreservamos se encuentra en buen
estado. Si 1a µreservación está en ma1 estado, es necesario descartar todo e1 materia1 µreservado. Para
conocer e1 estado de 1a µreservación, se siembran crista1es de si1ica ge1 de 1a µreservación, en un medio
nutritivo como PDA, con e1 µroµósito de observar e1 tiµo de crecimiento de1 entomoµatógeno y detec−
tar 1a µresencia de contaminantes (bacterias y kongos). 1a observación se debe kacer a 1os tres días
desµués de 1a inocu1ación, kaciendo una observación cuidadosa de1 crecimiento y de 1a µresencia de
otros agentes.
Anezo
Cuías µara 1a e1aboración de cada uno de 1os µasos de1 µroceso de µroducción semi−industria1 de
kongos entomoµatógenos.
Guta µaıa e1aboıaı medtos de cu11tvos

E1aboıactón de 1os medtos de cu11tvos PDA y AN
E1 medio de cu1tivo PDA µuede ser µreµarado uti1izando e1 reactivo PDA (µaµa−dextrosa−agar) (DiJco,
Merck, etc.), que viene en µo1vo o granu1ado 1isto µara ser µreµarado. Yambién este medio se µuede
µreµarar µroµiamente en e1 1aboratorio a µartir de agar, dextrosa y µaµas Jrescas. E1 AN se µreµara a
µartir de1 reactivo que 11eva e1 mismo nombre y que es distribuido µor diversas comµañías.
a) Pıocedtmten1o µaıa 1a µıeµaıactón de PDA

1− Pesar 40 gramos de1 reactivo (PDA) y mezc1ar1o con un 1itro de agua desti1ada, agitando 1a mezc1a
kasta obtener una susµensión komogénea.
2− Se11ar e1 Jrasco con µaµe1 a1uminio y masking−taµe y µoner a esteri1izar 1a mezc1a en autoc1ave µor
20 minutos, a 121 oC y 1.2 bar de µresión. Desµués de este µroceso se µuede verter e1 medio en
µ1atos µetri o se µuede guardar en e1 Jrasco, µasa su uso µosterior. En este caso e1 Jrasco se debe
µoner en baño de maría a1 momento que se vaya a verter.
3− ¥erter aµroximadamente de 10 a 20 cc de1 medio en cada µ1ato µetri: esto se debe kacer cuando
1a temµeratura de1 medio µermita su maniµu1ación, evitando que se enJríe comµ1etamente, o sea
antes que se inicie 1a so1idiJicación de1 agar.
4− Dejar so1idiJicar e1 medio en 1os µ1atos µetri. Para un mejor manejo de1 cu1tivo y evitar contamina−
ción se recomienda usar e1 medio (rea1izar 1a siembra de1 kongo) desµués de 12 koras de kaber
vertido e1 medio en 1os µ1atos µetri.
Si no disµone de1 reactivo PDA, e1 medio se µuede µreµarar a µartir de Agar, dextrosa y µaµas de
acuerdo a1 siguiente µrocedimiento:
1. 1avar, µe1ar y cortar 1as µaµas en trocitos µequeños, µesar 300 gramos y 1uego µoner1a a cocer en
un 1itro de agua desti1ada µor 40 minutos, kasta que 1as µaµas se µonen suaves. 1uego se debe
Ji1trar en un co1ador Jino y reco1ectar1a en un er1enmeyer.
2. Cuando e1 Ji1trado de µaµa está tibio, agregar µoco a µoco 20 gramos de agar y 20 de dextrosa.
3. Agitar suavemente e1 contenido de1 er1enmeyer kasta obtener una diso1ución comµ1eta. En caso
necesario aJorar e1 medio con agua desti1ada kasta comµ1etar 1000 m1.
4. Determinar y ajustar e1 µH de1 medio (µH H“ ✓ ). 1uego se11ar e1 er1enmeyer con µaµe1 a1uminio y
masking−taµe y esteri1izar e1 medio en autoc1ave µor 20 minutos, a 121 oC y 1.2 bar de µresión.
5. Para 1a µreµaración de 1os µ1atos con e1 medio de cu1tivo, así como su uso se debe µroceder de 1a
misma manera como se µrocede con e1 medio µreµarado a µartir de1 reactivo µreµarado PDA.
b) Pıeµaıactón de1 medto de cu11tvo Agaı Nu1ıten1e (AN)
1− Pesar 20 gramos de1 reactivo Agar Nutritivo (AN), mezc1ar con un 1itro de agua desti1ada y agitar 1a
mezc1a kasta obtener una susµensión komogénea.
2− Se11ar e1 Jrasco con µaµe1 a1uminio y masking−taµe y µoner a esteri1izar 1a so1ución µor 20 minutos,
a 121 oC y 1.2 bar de µresión.
3− ¥erter e1 medio en µ1atos µetri o en 1a crista1ería a usar y dejar enJriar 1a so1ución µara su uso.
Guta µaıa ats1aı e tnocu1aı hongos en1omoµa1ógenos

E1 Ais1amiento e inocu1ación consiste en 1a obtención de1 inócu1o a µartir de 1a Juente (insectos, medios
de cu1tivo, µreservaciones, etc.) y co1ocar1o en un medio de cu1tivo µara su crecimiento. Aunque existen
varios métodos µara kacer ais1amientos, nos reJerimos a 1os más uti1izados.
Ats1amten1o µoı dt1uctón seıtada

1. Co1ocar e1 insecto momiJicado en un reciµiente que contenga 10 m1 de agua desti1ada estéri1 con
0.01 % de tween − 80 y agitar durante 1 minuto.
2. YransJerir con una µiµeta estéri1 1 m1 de 1a so1ución a un tubo que contiene 9 m1 de agua desti1ada
estéri1 con 0.01 % de tween − 80 y agitar Juertemente durante 1 minuto.
3. Reµetir e1 µaso 2 kasta 1ograr obtener una segunda di1ución de 10 −2 y reµetimos nuevamente 1a
oµeración durante cuatro veces más (kasta 1ograr obtener un tota1 de seis di1uciones en serie).
4. Sembrar a µartir de 1as di1uciones 10 −5 y 10 −6 en µ1atos µetri con medio de cu1tivo (en un tota1 de
3 a 5 µ1atos µetri µor cada di1ución). 1a siembra de1 kongo se kace tomando de 1a di1ución, una
gota (0.1 m1) con una µiµeta estéri1 y deµositándo1a sobre e1 medio de cu1tivo.
5. A1macenar 1os µ1atos inocu1ados, en un cuarto a 25 oC, durante un µeriodo de incubación aµroxi−
mado d e 3 a 4 días, kasta obtener e1 crecimiento característico de1 kongo.
6. Posteriormente se rea1iza un reais1amiento a µartir de 1as co1onias en crecimiento, tomando e1
inócu1o y sembrándo1o en otros µ1atos µetri, 1os cua1es serán 1uego incubados µara su crecimiento.
Œ0 / PRODUSSCÓU y USO de hougos eutomoµatógeuos
Ats1amten1o dtıec1o de1 hongo a µaı1tı de1 tnsec1o

1. Yomar un insecto momiJicado y desinJectar1o suµerJicia1mente con kiµoc1orito de sodio (2%) o
a1coko1.
2. Rasµar µartícu1as de1 insecto desinJectado con una asa bacterio1ógica e inocu1ar usando e1 méto−
do de rayado, en un medio nutritivo.
3. Rotu1ar adecuadamente 1os µ1atos inocu1ados, µoner1os en incubación y observar1os tres días
desµués.
Ats1amten1o de st1tca ge1

Cuando e1 kongo se encuentra µreservado en seco (si1ica ge1), e1 ais1amiento se µuede kacer a µartir de
1a µreservación, de acuerdo a1 siguiente µrocedimiento:
1. Preµarar e1 medio de cu1tivo y verter en µ1atos µetri
2. A µartir de1 tubo de ensayo donde se encuentra e1 kongo µreservado, tomar 1os crista1es de si1ica
ge1 y co1ocar1os en e1 medio de cu1tivo. Se deben sembrar en cada µ1ato, aµroximadamente 15
crista1es de si1ica ge1, 1os cua1es deben distribuirse en toda 1a suµerJicie de1 medio.
3. Se11ar y rotu1ar adecuadamente 1os µ1atos µetri inocu1ados, co1ocar1os en incubación y observar−
1os 5 días desµués.
PRODUSSCÓU y USO de hougos eutomoµatógeuos / Œ1
Guta µaıa µıeµaıaı e tnocu1aı ma1ıtces y bo1sas

Pıeµaıactón de 1a ma1ıtz
1. Co1ocar en 1a estuJa un reciµiente que contenga 500 m1 de agua µotab1e, cuando e1 agua comien−
za a kervir deµositar 600 gramos de arroz y dejar1o cocer µor 5 minutos, kasta que µresente una
consistencia suave (µre−cocido).
2. Retirar e1 arroz de 1a estuJa y escurrir1o en una zaranda kasta que esté tota1mente Jrío y seco.
3. Co1ocar 100 gramos de1 arroz µrecocido en un er1enmeyer de 1000 m1 (µara obtener 1a matriz).
Se11ar con µaµe1 a1uminio y masking−taµe y esteri1izar en autoc1ave a 121 oC, 1.2 bar de µresión
µor un tiemµo d e 4 a 5 minutos.
4. Dejar enJriar y agitar 1as matrices con e1 objetivo de evitar ag1omeraciones de1 arroz.
Inocu1actón de ma1ıtces
1. Se1eccionar un cu1tivo µuro de1 kongo, a1 cua1 se 1e debió kaber kecko e1 contro1 de ca1idad, µara
estar seguros de que se encuentra 1ibre de contaminantes.
2. Obtener e1 inócu1o (conidias) a µartir de1 cu1tivo µuro, mediante un rasµado de1 µ1ato. E1 inócu1o
se debe deµositar en un reciµiente que contenga agua desti1ada estéri1. Se deben uti1izar 60 m1 de
agua, 1o cua1 es suJiciente µara inocu1ar 4 matrices.
3. Agitar 1a mezc1a kasta obtener una susµensión komogénea de1 inócu1o y 1uego µroceder a inocu−
1ar 1a matriz con 15 m1 de 1a susµensión Jungosa. Para 1a inocu1ación de 1as matrices se uti1iza una
jeringa veterinaria, 1a cua1 debe ser esteri1izada a 121 oC y 1.2 bar de µresión durante 15 minutos.
4. Una vez inocu1adas, 1as matrices se co1ocan en un cuarto oscuro a temµeratura de 23 a 28 oC, µor
un µeríodo aµroximado de 8 días, kasta que e1 kongo co1onice comµ1etamente e1 substrato.
Pıeµaıactón de bo1sas
1. Deµositar 200 gramos de arroz entero en bo1sas de µo1iµroµi1eno, agregar 100 m1 de agua desti−
1ada o µotab1e y se11ar 1as bo1sas con graµas.
2. Esteri1izar 1as bo1sas que contienen e1 arroz, con ca1or kúmedo (autoc1ave) a 121 oC y 1.2 bar de
µresión, durante 4−5 minutos.
3. Desµués de esteri1izar 1as bo1sas, agitar1as µara evitar ag1omeraciones en e1 arroz y dejar enJriar1as.
Inocu1actón de 1as bo1sas

1. 1a inocu1ación de 1as bo1sas se kace con e1 inócu1o µroducido a µartir de 1a matriz. Para e11o
agregar a 1a matriz (co1onizada) ✓ 50 m1 de agua desti1ada estéri1 a1 0.1 % de extravón.
2. Agitar e1 contenido kasta obtener una susµensión komogénea de conidias.
3. Inocu1ar con e1 contenido de una matriz aµroximadamente 30 bo1sas, uti1izando una jeringa vete−
rinaria debidamente esteri1izada. Cada bo1sa es inocu1ada con 20 cc de 1a susµensión de1 kongo.
4. Una vez inocu1adas 1as bo1sas, co1ocar1as en un cuarto oscuro a temµeratura de 24 a 28 oC, duran−
te un µeriodo de 4−5 días. 1as bo1sas deben ser revisadas a 1os 2 o 3 días µara detectar e1 creci−
miento de contaminantes y µara observar e1 tiµo de crecimiento de1 kongo.
5. Se deben descartar aque11as bo1sas que estén contaminadas y/o que su crecimiento sea muy 1ento
o que no sea komogéneo. Se deben se1eccionar 1as bo1sas que µresenten crecimiento komogé−
neo y norma1.
Guta µaıa 1a tncubactón, secado de bandejas y

cosecha de hongos en1omoµa1ógenos
1. Se1eccionar 1as bo1sas de arroz que µresenten buenas características de crecimiento (komogéneo,
ráµido y 1ibres de contaminantes), µara deµositar su contenido en 1as bandejas.
2. Preµarar 1as bandejas µ1ásticas, desinJectando con a1coko1 y J1ameándo1a con e1 meckero.
3. Yomar 1as bo1sas con crecimiento de kongo y abrir1as con una tijera 1a cua1 se J1amea constante−
mente en e1 meckero. Deµositar en cada bandeja de ✓ 0 cm de 1argo µor 40 de ancko x 20 de a1to,
e1 contenido de 10 bo1sas con kongo desµués de su incubación y remover con 1a ayuda de una
esµátu1a µara µoder tener mayor uniJormidad en 1a esµoru1ación.
4. Co1ocar una bandeja sobre otra y se11ar con masking−taµe µara evitar 1a µenetración de 1uz. Se
deben etiquetar 1as bandejas con e1 nombre de 1a ceµa, número de1 1ote y Jecka de incubación.
5. Co1ocar 1as bandejas en un cuarto Jrío a temµeratura de 24 a 26 oC durante un µeriodo de 6 días.
6. Destaµar 1as bandejas con e1 objetivo de e1iminar e1 exceso de kumedad durante un tiemµo de 12
a 15 días, kasta que se desµrendan 1as conidias (asµecto µo1voso) y Jaci1ite e1 µroceso de cosecka.
Cosecha manua1 de hongos en1omoµa1ógenos

1. Se µreµaran todos 1os utensi1ios (tamices, guantes, mascari11as, reciµientes, etc) µara rea1izar 1a
cosecka de1 kongo.
2. E1 substrato co1onizado (arroz con e1 crecimiento de1 kongo) se co1oca en un tamiz con oriJicios de
1mm de diámetro, µara seµarar e1 µo1vo (conidias) de1 kongo de 1os granos de arroz.
ŒŒ / PRODUSSCÓU y USO de hougos eutomoµatógeuos
3. E1 tamiz es co1ocado en un reciµiente kermético, µara Jaci1itar 1a reco1ección de1 µo1vo de1 kongo.
Agitar Juertemente µor varios minutos µara tamizar e1 µroducto y obtener 1as conidias de1 kongo.
4. Dejar reµosar µor esµacio de unos tres minutos, con e1 µroµósito que 1as conidias se asienten en e1
Jondo de1 reciµiente y 1uego reco1ectar e1 µo1vo coseckado.
5. A1 µo1vo coseckado se 1e rea1iza 1a eva1uación de rendimiento y viabi1idad de1 µroducto, µara su
debida Jormu1ación.
6. E1 µo1vo coseckado se debe µesar y co1ocar1o en un reciµiente 1imµio y comµ1etamente oscuro
µara evitar 1a entrada de 1uz. Etiquetar e1 reciµiente (numero de 1ote, ceµa, Jecka de cosecka, etc)
y a1macenar en reJrigeración a temµeratura d e 5 a 6 oC.
Guta µaıa eva1uaı e1 ıendtmten1o de hongos

en1omoµa1ógenos y µıeµaıactón de Goımu1actones
1. Pesar 1a cantidad tota1 de µo1vo coseckado µor bandeja o µor ki1ogramo de arroz.
2. Determinar 1a concentración de conidias de1 µo1vo coseckado, µara 1o cua1 se debe contar e1
número de conidias µor gramo de µo1vo coseckado uti1izando una cámara de conteo Neubauer.
3. Preµarar di1uciones en serie (10 −1, 10 −2, 10 −3, 10 −4, 10 −6) de1 kongo, kasta obtener una di1ución
que µermita rea1izar e1 conteo. 1as di1uciones se µreµaran de 1a siguiente manera:
a. Co1ocar un gramo de1 µo1vo coseckado en un tubo de ensayo que contenga 9m1 de agua
desti1ada estéri1 con tween 80 a1 0.01%.
b. YransJerir con una µiµeta estéri1 1m1 de 1a µrimera di1ución a un tubo que contiene 9m1 de
agua desti1ada estéri1 con 0.01% de tween 80, éste se agita Juertemente durante un minuto,
kasta 1ograr obtener una tercera di1ución de 10 −3 de esta manera se va µrocediendo kasta
encontrar 1a di1ución adecuada (10 −5, 10 −6).
c. De 1a di1ución se1eccionada, tomar con una µiµeta µasteur una a1ícuota de 1a susµensión y
11enar 1a cámara de conteo.
4. Hacer e1 conteo de conidias a través de1 microscoµio, uti1izando e1 cuadro µrinciµa1 (c.µ) centra1, e1
cua1 esta dividido en 25 cuadritos secundarios. Si se desea se µuede contar e1 número de conidias
so1amente en a1gunos de 1os cuadrados secundarios y obtener e1 µromedio. Este µaso se reµite
varias veces kasta obtener un rendimiento µromedio.
5. Para ca1cu1ar 1a concentración de conidias µor gramo, se mu1tiµ1ica e1 número de conidias obser−
vadas en e1 cuadro observado, µor e1 Jactor de cámara, mu1tiµ1icar 1uego µor e1 Jactor de di1ución.
E1 Jactor de cámara es de 10,000 µara cuadros µrinciµa1es y 250,000 µara cuadros secundarios.
Eva1uactón de vtabt1tdad
1. Esteri1izar µ1atos µetri, con µaµe1 Ji1tro y µorta objeto todos en conjunto, en e1 autoc1ave a 1.2 bar
de µresión y 121 oC µor un tiemµo de 20 minutos.
2. Preµarar un medio de cu1tivo de agar−agua y esteri1izar1o durante 15−1✓ minutos. Posteriormente
con una µiµeta µasteur deµositar dos a1ícuotas de1 medio de cu1tivo en un µorta objeto.
3. Deµositar con una µiµeta µasteur sobre 1as mismas a1ícuotas de1 medio, dos a1ícuotas de 1a sus−
µensión de1 kongo y co1ocar e1 montaje en una cámara kúmeda, 1a cua1 consiste en un µ1ato µetri
con µaµe1 Ji1tro kumedecido.
4. Co1ocar e1 montaje a temµeratura entre 24 y 26 oC.

5. Hacer e1 conteo de conidias tota1es, registrando 1as germinadas y 1as no germinadas, de 20 a 24
koras desµués de rea1izado e1 montaje.
6. Como mínimo se deben observar un tota1 de 200 conidias µor cada montaje.
E1aboıactón de Goımu1actones
1. Pesar 1a cantidad de kongo (µo1vo coseckado), equiva1ente a 1012 conidias µor manzana, deµen−
diendo de1 área µara 1a que vamos a Jormu1ar (¼, ½ ,¾,, 1 mz, etc.).
2. Mezc1ar 1a cantidad de kongo µesado con e1 vekícu1o uti1izado o con so1vente emu1siJicante, en
µroµorción 1:5 si es Jormu1ación só1ida o 1:10 si es Jormu1ación 1íquida; agitar kasta komogenizar
1a mezc1a. Esta µroµorción µuede variar de acuerdo a1 rendimiento (conidias/g) de1 kongo, 1o que
se quiere es que e1 kongo quede bien distribuido en toda 1a Jormu1ación y que no aJecte su
aµ1icación.
3. Co1ocar etiquetas conteniendo: kongo, ceµa, Jecka de e1aboración, Jecka de vencimiento, indica−
ciones de uso, µ1aga y cu1tivo en que se debe uti1izar.
PRODUSSCÓU y USO de hougos eutomoµatógeuos / Œ£
Guta µaıa µıeseıvaı hongos en1omoµa1ógenos

1. Preµaración de1 materia1.
a. Co1ocar 4 gramos de si1ica ge1 en un tubo de ensayo de rosca.
b. E1 tubo con si1ica ge1 se co1oca en un korno durante3a4 koras a una temµeratura de 100 ºC
µara esteri1izar1os.
c. 1a si1ica ge1 adquiere un co1or azu1 que nos sirve como indicador que está seca y 1ista µara
uti1izarse.
d. Co1ocar 1os taµones de 1os tubos de ensayo en ca1or kúmedo (autoc1ave) µor 15 minutos a
121oCy 1.2 bar de µresión.
e. Cuando 1os tubos están 1istos se µrocede a taµar1os y se dejan µor 5 minutos más dentro de1
korno, µara evitar una µosib1e contaminación.
2. Preµaración de 1a susµensión Jungosa e inocu1ación
a. Pesar 10 gramos de 1ecke descremada y mezc1ar1a con 100 m1 de agua desti1ada en un
er1enmeyer y esteri1izar en ca1or kúmedo µor 15 minutos a 121oC y 1.2 bar de µresión.
b. Se1eccionar e1 cu1tivo µuro, de donde se obtiene e1 kongo que se va a µreservar.
c. Uti1izar una esµátu1a de µunta Jina, µara rasµar y tomar 1as estructuras de1 kongo y 1uego
agregar1as en e1 tubo de ensayo que contiene 1a si1ica − ge1.
d. Yomar 1 m1 de 1a 1ecke descremada y agregar1a a1 tubo que contiene 1a si1ica y e1 kongo.
e. Yaµar e1 tubo y agitar1o µara mezc1ar e1 contenido y deµositar1o en un beaker que contenga
agua ke1ada, µara evitar que se quemen 1as conidias µor 1as a1tas temµeraturas que a1canza
1a mezc1a.
J. Co1ocar una etiqueta donde se anote, e1 código de 1a ceµa, Jecka de µreservación, natura1e−
za de1 cu1tivo µuro (origina1 o reactivado).
g. Co1ocar 1os tubos en una reji11a y guardar1os en reJrigeración.
Guta µaıa ıeac1tvaı ceµas de hongos en1omoµa1ógenos

In1ıoducctón
En estudios de 1aboratorios es muy común trabajar con e1 montaje de bioensayos estos se rea1izan µara
determinar µatogenicidad y viru1encia, eva1uar 1a eJectividad de 1as ceµas de 1os kongos entomoµató−
genos sobre determinada µ1aga o µara 1a reactivación de ceµas.
Bioensayo se deJine como cua1quier método que mide a1guna µroµiedad, de a1gún materia1 en térmi−
nos de resµuesta bio1ógica, toma a1 organismo vivo como objeto de medición y estab1ece e1 µarámetro
bio1ógico de morta1idad µara re1acionar e1 Jenómeno causa1 con e1 eJecto sobre e1 organismo (Ibarra
1990). 1os ensayos rea1izados con organismos vivos en condiciones de 1aboratorio son de1 tiµo dosis−
resµuesta o sea de resµuesta binomia1: dos µosibi1idades muerto o vivo.
En genera1 1os bioensayos se rea1izan suministrando determinadas dosis o concentraciones de1 kongo
entomoµatógeno a gruµos de1 insecto eva1uado, registrando e1 número de insectos vivos y muertos en
un tiemµo o tiemµos estab1ecidos.
Procedimiento
1. Co1ecta de insectos: µueden ser obtenidos de1 camµo o de crías de 1aboratorio. 1os insectos que
se uti1izan en 1as eva1uaciones deben estar sanos, es decir 1ibres de µarásitos o µatógenos, así
como de µ1aguicidas.
2. Co1ocación de 1os insectos en jau1as o cajas.
3. Exµosición de1 insecto a1 kongo. E1 método o técnica de exµosición de1 insecto µuede ser µor
inmersión o asµersión,
4. Estab1ecimiento de1 bioensayo: Una vez rea1izada 1a aµ1icación de1 kongo 1as jau1as que contie−
nen 1os insectos son co1ocadas en e1 1ugar destinado µara rea1izar e1 seguimiento.
5. 1ectura de 1os bioensayos: consiste en e1 registro diario de1 número de insectos vivos y muertos
6. Co1ectar 1os insectos muertos y co1ocar1os en cámara kúmeda
Co1ec1a de tnsec1os
1os insectos que se uti1izan en 1as eva1uaciones deben estar sanos, es decir 1ibres de µarásitos o µatóge−
nos, así como de µ1aguicidas. Para que 1as eva1uaciones sean más µrecisas es conveniente reµroducir
1os insectos en e1 1aboratorio (cría) y descartar 1as µrimeras generaciones.
En e1 caso de uti1izar directamente insectos µrovenientes de1 camµo, éstos deben co1ectarse en áreas
donde no exista incidencia de1 kongo y que no tengan aµ1icaciones de químicos, µara evitar 1a muerte
µor causa ajenas a1 kongo que estamos eva1uando. 1a caµtura de 1os insectos se µuede kacer de varias
Jormas, deµendiendo de1 tiµo de insecto, µor ejemµ1o, 1os ckinckes, genera1mente se co1ectan directa−
mente con red entomo1ógica; µara µ1agas de Jrutos como 1os µicudos o 1a broca se co1ectan 1os Jrutos
aJectados y 1os insectos se extraen en e1 1aboratorio.
Co1ocactón de 1os tnsec1os en jau1as o cajas

1os insectos deben co1ocarse en 1oca1es donde se µermita su maniµu1ación (aµ1icación de1 tratamiento,
conteo, etc.). A 1os insectos se 1es deben suministrar todas 1as condiciones que e11os requieran µara su
sobrevivencia, es decir aire, a1imento, reJugio, agua, etc.
Cenera1mente 1o que se usan son jau1as con ma11a de acuerdo a1 tamaño de1 insecto en estudio. Co1o−
car dentro de 1as jau1as a 1as µ1antas kosµederas (e1 cu1tivo que atacan). En e1 caso de insectos como
broca o µicudos se debe co1ocar e1 tejido de1 que e11os se a1imentan (Jrutos).
E1 número de insectos que se usa es variab1e, deµende de1 tiµo y 1a disµonibi1idad de insectos. En
µ1agas como µicudo de cki1e se uti1izan 100 insectos µor cada reµetición, µara ckincke de1 arroz se usan
150 insectos, µara sa1ivita en caña se usan un tota1 de 50, etc; entre mayor número de insectos se uti1iza,
se obtiene mayor disµonibi1idad de inócu1o reactivado.
Ezµostctón de1 tnsec1o a1 hongo„ Consiste en 1a inocu1ación de1 insecto con 1a ceµa de kongo que
se está reactivando. 1os métodos o técnicas de exµosición que se usan comúnmente son Inmersión y
asµersión,
Inmeıstón: Este método es recomendab1e µara insectos que tienen e1 cuerµo endurecido o que no
son muy de1icados, es decir que resistan 1a maniµu1ación (µicudos, broca, 1arvas de 1eµidoµtera, etc.).
1os µasos que se sigue son:
a. Preµarar en agua desti1ada 1a susµensión de1 kongo equiva1ente a 108 conidias de 1a ceµa a
uti1izar.
b. Sumergir 1os insectos en 1a susµensión de conidias µor 2 a 3 segundos y 1uego secar1os en µaµe1
toa11a. 1a inmersión µuede kacerse co1ocando 1os insectos en una ma11a y 1uego sumergiendo 1a
ma11a en 1a susµensión de1 kongo.
c. En e1 caso de µicudo 1os insectos se co1ocan en Jrascos de vidrio que contienen un vaso con tierra
y µ1antas de cki1e con J1ores y Jrutos, e1 Jrasco se cierra con ma11a Jina, µara asegurar una buena
circu1ación de aire. En e1 caso de broca se co1ocan en vasos descartab1es con Jrutos de caJé y se 1e
kacen µerJoraciones a1 vaso µara que circu1e e1 aire.
d. 1os Jrascos se co1ocan en un 1ugar Jresco donde se 1es kace e1 seguimiento estab1ecido µara e1
bioensayo.
Asµeıstón„ Este método se recomienda µara insectos de cuerµo de1icado como sa1ivita, ckinckes,
moscas, etc., ya que ocurre menos maniµu1ación de1 insecto. 1os µasos que se siguen son:
a. Preµarar en agua desti1ada 1a susµensión de1 kongo equiva1ente a 108 conidias de 1a ceµa a
uti1izar.
b. Se1eccionar 1os insectos que serán uti1izados en e1 bioensayo.
c. Rea1izar 1a asµersión. Esta µuede rea1izarse co1ocando a 1os insectos dentro de 1a jau1a en su
µ1anta kosµedera y 1uego asµerjar 1a susµensión de1 kongo, con un atomizador De ¥i1bis o una
asµersora µequeña. Yambién se µueden co1ocar 1os insectos en una bandeja y sobre ésta rea1izar
1a asµersión y µosteriormente deµositar 1os insectos en 1a jau1a donde está 1a µ1anta kosµedera.
d. Co1ocar 1as jau1as a temµeratura ambiente, en e1 1ugar destinado µara rea1izar e1 seguimiento
corresµondiente a1 bioensayo.
Es1ab1ectmten1o de1 btoensayo

Una vez rea1izada 1a aµ1icación de1 kongo 1as jau1as que contienen 1os insectos son co1ocadas en e1
1ugar destinado µara rea1izar e1 seguimiento.
Cada gruµo de insectos co1ocados en 1a jau1a o vaso es considerado una reµetición y se recomienda
uti1izar como mínimo 5 reµeticiones, aunque e1 número de reµeticiones y de ceµas a eva1uar en un
bioensayo deµende de 1a disµonibi1idad de materia1es µrinciµa1mente jau1as e insectos, así como de 1a
conveniencia de1 manejo de1 bioensayo.
En e1 bioensayo siemµre se debe tener un testigo, a1 cua1 debe ser tratado de 1a misma manera que 1os
tratamientos, µero en ves de inocu1arse con kongo es asµerjado o inmerso en agua.
1ec1uıa de 1os btoensayos„ consiste en e1 registro diario de1 número de insectos vivos y muertos. 1a
µrimera 1ectura se rea1iza, en e1 caso de ckincke de1 arroz, a1 día siguiente desµués de 1a inocu1ación, y
µara µicudo de cki1toma, se kace 3 días desµués de 1a inocu1ación, se contabi1izan 1os insectos vivos y
muertos. A µartir de 1a µrimera 1ectura, es recomendab1e kacer 1ecturas cada 24 koras.
1as 1ecturas µueden cesar cuando ocurra 1a morta1idad de todos o 1a mayoría de 1os insectos tratados
con e1 kongo, o cuando se incremente 1a tasa de morta1idad en e1 testigo, también µuede Jina1izar
cuando se observe que e1 eJecto de1 kongo ya µasó, es decir cuando ya no kay más morta1idad.
Co1ecta de insectos muertos y co1ocación en cámara kúmeda
Se extraen de 1as jau1as 1os insectos muertos y se co1ocan en cámara kúmeda, donde 1os insectos µer−
manecen entre 8−12 días, 1as cámaras se revisan cada dos días µara observar e1 tiemµo en que ocurre 1a
esµoru1ación.
Guta µaıa ıea1tzaı con1ıo1 de ca1tdad

In1ıoducctón
E1 contro1 de ca1idad en e1 µroceso de µroducción semi−industria1 de kongos entomoµatógenos, cons−
tituye uno de 1os asµectos más imµortantes a considerar a1 estab1ecer un µroceso de µroducción. E1
contro1 de ca1idad está dirigido µrinciµa1mente a evitar o e1iminar 1os microorganismos contaminantes y
a garantizar 1a µroducción de kongo de buena ca1idad y de 1a ceµa adecuada.
E1 contro1 de ca1idad consiste en 1a eva1uación de 1as características de 1a ceµa (identiJicación correcta),
y e1iminación de contaminantes, 1o cua1 se kace a través de observación visua1 de1 cu1tivo y mediante 1a
uti1ización de1 medio Agar−Nutriente que es se1ectivo µara bacterias.
Con1ıo1 de ca1tdad de cu11tvos µuıos

E1 contro1 de ca1idad en esta etaµa de ceµario debe rea1izarse con mucko rigor, debido a que es en esta
etaµa que se inicia e1 µroceso de µroducción y es 1a más sensib1e a 1os contaminantes debido a 1os
medios de cu1tivo que se usan. Yodos 1os µ1atos que servirán como Juente de inócu1o µara 1a matriz,
deben ser sometidos a1 contro1 de ca1idad µara 1a detección de bacterias contaminantes.
Procedimiento:
a. Preµarar un medio de cu1tivo AN (Agar Nutriente) y verter1o en µ1atos µetri.
b. Con un asa bacterio1ógica tomar 1a muestra de ceµa de1 kongo de cu1tivo µuro, inocu1ar1a en AN.
c. Se11ar 1os µ1atos y etiquetar1os con 1a inJormación de 1a ceµa y 1a Jecka de1 contro1 de ca1idad;
µosteriormente co1ocar1os en incubación.
d. Observar 1os µ1atos inocu1ados desµués de 24 koras de montada 1a µrueba y registrar e1 creci−
miento de kongosy/o bacterias.
e. Descartar 1os µ1atos de cu1tivo µuro, si en e1 AN se observa crecimiento bacteriano.
J. 1imµiar 1os µ1atos de cu1tivo µuro si en e1 AN se observa crecimiento 1oca1izado de kongos conta−
minantes; si e1 crecimiento es genera1izado en e1 µ1ato, descartar1o.
Con1ıo1 de ca1tdad en 1a e1aµa de µıoducctón

En esta etaµa de µroducción se µresenta contaminación µrinciµa1mente en matrices y bo1sas. Estos son
ocasionados µor bacterias y es debido a1 ma1 manejo de1 substrato, µor ejemµ1o ag1omeraciones de
arroz y exceso de kumedad.
Con1ıo1 de ca1tdad de ma1ıtz

Una vez inocu1ada 1a matriz, durante e1 µroceso de incubación se debe revisar 1a matriz diariamente a
µartir de1 tercer día desµués de 1a inocu1ación, µara 1a detección de contaminantes, µrinciµa1mente
bacterias. E1 criterio que se toma en cuenta µara 1a se1ección de una matriz es e1 tiµo de crecimiento y 1a
µresencia de contaminantes. Si e1 crecimiento de1 kongo es 1ento y no uniJorme, si e1 substrato adquiere
una consistencia b1anda, µresenta una co1oración amari11enta, entonces se debe descartar 1a matriz y
esteri1izar1a µara destruir e1 inócu1o contaminante.
Con1ıo1 de ca1tdad de bo1sas

1os µrob1emas de contaminación en bo1sa se µresentan con más Jrecuencia que en matriz debido a 1a
kumedad y µrob1emas en 1a inocu1ación. E1 criterio que se toma en cuenta µara se1eccionar 1as bo1sas
que entraran a1 µroceso de µroducción, es e1 mismo que se considera en 1as matrices.
Con1ıo1 de ca1tdad de1 µıoduc1o cosechado

E1 contro1 de ca1idad de1 µroducto coseckado se rea1iza mediante 1a eva1uación de rendimiento en
número de conidias µor gramo de µo1vo coseckado y 1a viabi1idad de 1as conidias (µorcentaje de ger−
minación). Se considera bueno aque1 rendimiento que no sea inJerior a1 rendimiento µromedio de 1a
ceµa y que 1a viabi1idad no sea menor a1 95 %. 1as eva1uaciones de rendimiento, se deben de rea1izar
a1 momento de 1a cosecka y antes de 1a µreµaración de 1a Jormu1ación.
Con1ıo1 de ca1tdad de 1a µıeseıvactón en st1tca ge1

Procedimiento
g. Preµarar un medio de cu1tivo PDA (Paµa Dextrosa Agar) y verter1o en µ1atos µetri.
k. Con un asa bacterio1ógica tomar una muestra de 1a ceµa de1 kongo de 1a µreservación (aµroxima−
damente 10 a 15 crista1es) e inocu1ar1os en e1 PDA. Rea1izar a1 menos tres réµ1icas de cada µreser−
vación
i. Se11ar 1os µ1atos y etiquetar1os con 1a inJormación de 1a ceµa y 1a Jecka de1 contro1 de ca1idad;
µosteriormente co1ocar1os en incubación.
j. Observar 1os µ1atos inocu1ados desµués de 24 koras de montada 1a µrueba y registrar e1 creci−
miento de1 kongo µor cinco a seis días.
k. Descartar 1as µreservaciones que µresenten crecimiento inadecuado (muy 1ento, µoco vigor, co1o−
ración extraña, etc.) o que µresenten crecimiento de kongos o bacterias contaminantes.
1. Se1eccionar y a1macenar en reJrigeración 1as µreservaciones que µresenten buen crecimiento y
están 1ibres de contaminantes.
Uso de hongos en1omoµa1ógenos µaıa e1 manejo de

µ1agas agıtco1as
E1 uso de kongos entomoµatógenos µara e1 manejo de µ1agas agríco1as constituye una a1ternativa via−
b1e µara e1 manejo de diversas µ1agas. Existen exµeriencias de diversos µaíses donde 1os kongos ento−
moµatógenos Jorman µarte de µrogramas de manejo integrado de µ1agas de mucka imµortancia. En
Nicaragua se kan a1canzado 1ogros imµortantes en este camµo, de manera que cada día 1a demanda de
este tiµo de µroductos aumenta debido a que 1os consumidores demandan cada vez más, µroductos de
consumo, 1ibres de residuos de µ1aguicidas. Hasta e1 momento 1os mayores avances se kan 1ogrado en
e1 manejo de 1a broca de1 caJé, µicudo de1 µ1átano, µicudo de1 a1godón, µicudo de 1a cki1toma y sa1ivita
en caña de azúcar entre otros.
E1 uso de kongos entomoµatógenos debe considerarse como µarte de µrogramas de manejo integrado
de µ1agas y no como una medida uni1atera1 de manejo de 1as µ1agas. Además es imµortante tomar en
cuenta que 1os µroductos a base de kongos son una medida de suµresión directa, cuya eJectividad
deµende de1 contacto con 1a µ1aga, si no se 1ogra estab1ecer dicko contacto no kay contro1, µor 1o que
a1 momento de rea1izar una aµ1icación se debe garantizar 1a ca1idad de 1a misma, tomando en cuenta
que Jactores son Javorab1es µara estos µroductos; además kay que considerar que µor tratarse de orga−
nismos vivos, son aJectados µor 1os rayos u1travio1eta, µor 1o que a1 ser exµuestos a1 so1 suJren degrada−
ción; además kay que estar c1aros que debido a 1a ve1ocidad de su acción, su eJecto inmediato y otras
µroµiedades, estos µroductos no son sustitutos de 1os insecticidas químicos sintéticos.
En e1 cu1tivo de caJé e1 uso de kongos entomoµatógenos se combina con uso de variedades de J1ora−
ción uniJorme, actividades de graniteo, reµe1a y µeµena, muestreos sistemáticos de 1a µ1aga en 1a etaµa
de JructiJicación, así como muestreo de Jrutos caídos en 1a éµoca seca. En contro1 de broca en caJé se ka
demostrado que dos aµ1icaciones (Junio y Seµtiembre) combinadas con acciones anteriormente men−
cionadas son suJicientes µara e1 manejo de 1a µ1aga. Se ka encontrado además que e1 uso de 1os
kongos mejora 1a ca1idad de 1a cosecka.
En e1 cu1tivo de reµo11o e1 uso de kongos entomoµatógenos se combina con muestreos y uso de µro−
ductos botánicos (Nim) y microbia1es (Diµe1), así como 1a siembra de cu1tivos en asocio y 1iberación de
µarasitoides de 1a µ1aga.
En e1 cu1tivo de caña de azúcar 1a aµ1icación de kongos entomoµatógenos es µarte de un µrograma de
manejo integrado que inc1uye muestreo de kuevos en 1a éµoca seca, muestreo de ninJas y adu1tos en 1a
éµoca 11uviosa, 1abores cu1tura1es, contro1 de ma1ezas.
Debido a 1a natura1eza de este tiµo de µroductos se debe µoner atención a asµectos como 1a ceµa,
dosis, aµ1icación, comµatibi1idad y a1macenamiento.
Ceµas„ Diversos estudios rea1izados en e1 µaís donde se ka eva1uado 1a eJectividad de diversas ceµas
de kongos entomoµatógenos, ka µermitido que en 1a actua1idad se tengan se1eccionadas 1as ceµas más
eJectivas µara cada una de 1as µ1agas de mayor imµortancia en 1os µrinciµa1es cu1tivos. Partiendo de
esta exµeriencia se recomienda uti1izar 1as ceµas de acuerdo a 1as esµeciJicaciones que se µresentan en
e1 cuadro de 1a siguiente µágina.
Dosts
Resu1tados de 1aboratorio y de camµo indican que 1a dosis de kongos entomoµatógenos a uti1izar en
cua1quier cu1tivo es de 10 12 conidias µor manzana, indeµendientemente de 1a ceµa. Además e1 kongo
debe tener una viabi1idad de a1 menos 95%. Esta cantidad de conidias es suJiciente µara ocasionar
eµizootias en e1 camµo, cuando 1as aµ1icaciones se kacen correctamente. Esto signiJica que si aµ1icamos
de Jorma adecuada 1012 conidias en una manzana de cu1tivo, e1 kongo 1ogra estab1ecerse en e1 camµo
Cu11tvo P1aga Ceµa Hongo

CaJé Broca (HCµOTHEUEMUS hamµec) Bb−114 BEAUUERCA basscaua
Musaceas Picudo (Cosmoµo1ctes SORDCDUS) Bb−64 BEAUUERCA basscaua
Reµo11o Pa1omi11a (P1UTE11A xy1oste11a) Bb−38 BEAUUERCA basscaua
Caña de azúcar Sa1ivita (Aeuo1amca sµ Ma−NB METARHCSCUM aucsoµ1cae
y Prosaµca SCMU1AUS)
Cki1toma Picudo (AUTHOUOMUS EUGEUCC) Bb−64Bb−121 BEAUUERCA basscaua
Arroz Ckincke (OEBA1US sµµ) Bb−114Ma−NB B EAUUERC A basscaua
METARHCSCUM aucsoµ1cae
y aJectar signiJicativamente a 1os insectos µ1agas. Esta cantidad de conidias equiva1e a 40 gramos de
µroducto Jormu1ado en µo1vo mojab1e. Esta cantidad de kongo debe aµ1icarse en una cantidad suJi−
ciente de agua, de manera que se 1ogre una buena cobertura de aµ1icación en e1 cu1tivo.
Aµ1tcactón
Debido a que e1 eJecto de 1os kongos entomoµatógenos no es inmediato se requiere rea1izar 1a µrimera
aµ1icación antes que 1a µ1aga a1cance nive1es a1tos de µob1ación o antes de1 µeríodo crítico de1 cu1tivo.
Por ta1 razón 1a µrimera aµ1icación se debe rea1izar de Jorma µreventiva, a1 momento de inicio de 1a
J1oración en cu1tivos como cki1toma y arroz, de acuerdo a un µrograma ca1endario o a1 observarse 1os
µrimeros insectos µ1agas en otros cu1tivos. Posterior a 1a µrimera aµ1icación se debe continuar con 1as
actividades de recuento; si se encuentra e1 umbra1 de aµ1icación se debe µroceder con una segunda y
tercera aµ1icación si es necesario.
1a mezc1a de aµ1icación se kace de 1a misma Jorma como se µreµaran mezc1as de otros tiµos de insec−
ticidas. 1a aµ1icación debe rea1izarse desµués de 1as 4 de 1a tarde, µara evitar que e1 so1 aJecte a1 kongo
aµ1icado y aµroveckar 1a temµeratura de 1a nocke, 1a cua1 es más baja que durante e1 día 1o cua1 Javo−
rece e1 estab1ecimiento de1 kongo, 1a sobrevivencia y su mu1tiµ1icación. 1a aµ1icación de1 kongo µuede
rea1izarse con bomba de mocki1a, motobomba o cua1quier otro equiµo de aµ1icación.
Debido a que e1 µroducto aµ1icado es e1aborado a µartir de kongos, no es recomendab1e rea1izar aµ1i−
caciones de Jungicidas durante e1 µeríodo de aµ1icación de kongos entomoµatógenos, µor que µueden
ser aJectados µor 1os Jungicidas.
Para ver si e1 kongo está teniendo a1gún eJecto sobre 1a µ1aga es recomendab1e kacer revisiones en e1
camµo, dos o tres días desµués de 1a aµ1icación de1 kongo. Se µueden encontrar insectos muertos o se
µuede observar que 1a µob1ación de 1a µ1aga se ka reducido
Comµa1tbt1tdad
1os µroductos e1aborados a base de estos kongos son comµatib1es con muckos µroductos de uso agrí−
co1a, sin embargo no deben kacerse mezc1as con Jungicidas y tamµoco se recomienda 1a aµ1icación de
éstos µor 1o menos 24 koras desµués de kaber aµ1icado 1os kongos (exceµto kidróxido de cobre). Se ka
observado que cuando se mezc1an 1os kongos con Imidac1oµrid se 1ogra una acción sinérgica sobre
varias µ1agas.
Por tratarse de un organismo vivo, es µosib1e que 1os µroductos a base de kongos entomoµatógenos
sean aJectados µor otros µroductos agroquímicos, en estos casos se debe tratar de evitar 1a rea1ización
de mezc1as o e1 usuario debe consu1tar a1 manuJacturador.
Hay que tomar en cuenta que 1os kongos requieren condiciones de µH ácido, µor 1o que a1 momento
de 1a aµ1icación kay que tener cuidado con este Jactor, ya que si e1 agua es a1ca1ina se aJecta 1a eJectivi−
dad de1 kongo. Por esta razón se debe µrocurar siemµre kacer 1as aµ1icaciones con agua 1imµia y evitar
e1 uso de aguas estancadas y sucias.
A1macenamten1o
Uno de 1os µrinciµa1es µrob1emas de 1os micoinsecticidas es e1 a1macenamiento, ya que se debe mante−
ner 1a viabi1idad de 1as conidias. 1a caµacidad de sobrevivencia de 1as conidias deµende de su conteni−
do de kumedad. En condiciones de reJrigeración (4 −5 oC), se µuede mantener 1a viabi1idad kasta µor
un año, µero en condiciones ambienta1es 1a conservación es de uno a dos meses, a menos que se tenga
un buen tiµo de Jormu1ación que ayude a µroteger a 1as conidias.
Para evitar que se reduzca 1a ca1idad y eJectividad de 1os µroductos a base de kongos entomoµatóge−
nos, éstos se deben guardar en 1ugares Jrescos, no kúmedos y en 1ugares que no reciban 1a incidencia
directa de1 so1, debido a que estos Jactores son desJavorab1es µara 1os kongos. Además una vez que e1
usuario obtuvo e1 µroducto no debe a1macenar1o en condiciones ambienta1es µor más de dos meses.
Rtesgos
A µesar que 1os insecticidas a base de Beauveria y metarkizium son µroductos de riesgo reducido, 1os
aµ1icadores deben guardar ciertas normas como roµa y zaµatos adecuados, mascari11as (ya que e11os
son genera1mente µo1vos mojab1es), así como guantes imµermeab1es. Además se cree que este tiµo de
µroductos µueden ser tóxicos µara µeces, µor 1o que se debe evitar su aµ1icación en e1 agua.
Se kan rea1izado diversos estudios µara eva1uar e1 eJecto de metarkizium y beauveria, sobre esµecies no
sujetas de contro1, ta1es como aves, reµti1es, mamíJeros, etc., y no se kan encontrado evidencias de ser
aJectados µor 1os kongos; sin embargo dado su amµ1io rango de acción sobre insectos, estos µueden
aJectar a1gunas esµecies benéJicas.
Para garantizar 1a eJectividad y e1 uso de seguro de 1os insecticidas a base de Beauveria y Metarkizium,
se deben tener además 1os siguientes cuidados:
□ Abrir e1 µroducto kasta que se va a uti1izar, una vez abierto es mejor uti1izar1o todo de una vez. Si
se deja abierto e1 µroducto, absorbe agua y se aJecta su ca1idad.
□ Uti1izar e1 µroducto antes de su vencimiento: en 1a etiqueta de1 µroducto se indica cua1 es 1a Jecka
de vencimiento, desµués de dicka Jecka no es conveniente uti1izar e1 µroducto debido a que su
eJectividad será menor.
□ Debe aµ1icarse µreJerib1emente µor 1a tarde, µara evitar que 1os rayos de1 so1 aJecten a1 µroducto.
Además se debe aµroveckar 1a menor temµeratura de 1a nocke, 1a que es Javorab1e µara 1os kon−
gos.
□ 1eer 1a etiqueta, ya que en e11a aµarece inJormación imµortante re1acionada con e1 uso y cuidados
a tener con 1os µroductos a base de kongos.
□ Usar roµa y zaµatos adecuados a1 momento de 1a aµ1icación, aunque se trata de µroductos no
tóxicos cuyo origen es natura1 y no químico, siemµre es conveniente guardar 1as normas básicas
de seguridad, debido a que en a1gunos casos µueden µrovocar a1ergias.
Ven1ajas de1 uso de Hongos En1omoµa1ógenos como agen1es de con1ıo1

□ Constituyen a1ternativas eJicientes de manejo de 1as µ1agas: si se usan adecuadamente µuede ser
tan eJiciente como cua1quier otro insecticida.
□ Se reducen 1os riesgos de contaminación a1 ambiente, e1 sue1o, e1 agua: µor ser µroductos e1abo−
rados a base de un organismo vivo, no sintético, no contamina e1 ambiente.
□ Se reducen 1os riesgos de intoxicaciones, ya que 1os kongos entomoµatógenos no aJectan 1a sa1ud
de 1os trabajadores, ni de 1os anima1es domésticos.
□ Se µrotegen 1os enemigos natura1es, debido a que son µroductos bastante esµecíJicos y su acción
no es inmediata.
□ 1os µroductos agríco1as se obtienen 1ibres de residuos tóxicos: µor tratarse de un organismo vivo
no deja residuos en 1os cu1tivos, µor 1o tanto 1os consumidores µueden estar seguros que 1os
µroductos que consumen no tienen µrob1emas de residuos químicos.
□ 1os costos µueden resu1tar más bajos, tanto µara e1 µaís como µara 1os usuarios, debido a que si se
usan correctamente se µuede requerir de menor número de aµ1icaciones, además que no se re−
quiere de inversión de divisas µor que µueden ser µroducidos de 1oca1mente.

1111111

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2 / PRODUSSCÓU y USO de hougos eutomoµatógeuos

Producción y uso de hongos entomopatógenos

El autor reconoce que parte de la información utilizada en la elabo-

Modo de acctón de 1os hongos en1omoµa1ógenos sobıe 1os tnsec1os

Mu11tµ1tcactón de1 hongo en e1 homoce1e

Mueı1e de1 tnsec1o

Emeıgencta de1 hongo hacta e1 ez1eıtoı

Pıoducctón de hongos en1omoµa1ógenos

10−1 10−2 10−3 10−4 10−5 10−6

Incubactón de1 cu11tvo

Pıeµaıactón de1 subs1ıa1o de aııoz µaıa 1as ma1ıtces

Incubactón y secado de1 hongo

Inicia1mente 1as bandejas se 1imµian, se kumedecen con a1coko1 y se J1a−

Cosecha de1 hongo

2) Conteo de conidias µor gramos de µo1vo

No. de Contdtas/g = No. de Contdtas en e1 cuadıo z Tac1oı de Cámaıa z Tac1oı de Dt1uctón

viabi1idad, se reduce 1a caµacidad de estab1ecerse en e1 camµo y causar eµizootias, reduciendo así

Rendimiento Yota1 : 8.5 x 1010 conidias µor gramo de µo1vo.

1g x 1012 conidias 1g x 1012

2. Tormu1ación 1íquida (Emu1siJicab1e). Debe uti1izarse un

A1macenamten1o de1 µıoduc1o

De acuerdo a estudios rea1izados, e1 µroducto Jormu1ado µuede a1macenarse en condiciones ambienta−

Con1ıo1 de ca1tdad en 1a e1aµa de ceµaıto

Con1amtnan1es más comunes

Cuando 1a contaminación es µor bacterias, e1 entomoµatógeno no 1ogra crecer en e1 substrato µor

Con1ıo1 de ca1tdad de Cu11tvos Puıos

Con1ıo1 de ca1tdad en 1a e1aµa de µıoducctón

Con1ıo1 de ca1tdad de ma1ıtz

Con1ıo1 de ca1tdad de bo1sa

Con1ıo1 de ca1tdad de1 µıoduc1o cosechado

Con1ıo1 de ca1tdad de 1a µıeseıvactón en st1tca ge1

Guta µaıa e1aboıaı medtos de cu11tvos

a) Pıocedtmten1o µaıa 1a µıeµaıactón de PDA

Guta µaıa ats1aı e tnocu1aı hongos en1omoµa1ógenos

Ats1amten1o µoı dt1uctón seıtada

Ats1amten1o dtıec1o de1 hongo a µaı1tı de1 tnsec1o

Ats1amten1o de st1tca ge1

Guta µaıa µıeµaıaı e tnocu1aı ma1ıtces y bo1sas

Inocu1actón de 1as bo1sas

Guta µaıa 1a tncubactón, secado de bandejas y

Cosecha manua1 de hongos en1omoµa1ógenos

Guta µaıa eva1uaı e1 ıendtmten1o de hongos

4. Co1ocar e1 montaje a temµeratura entre 24 y 26 oC.

Guta µaıa µıeseıvaı hongos en1omoµa1ógenos

Guta µaıa ıeac1tvaı ceµas de hongos en1omoµa1ógenos

Co1ocactón de 1os tnsec1os en jau1as o cajas

Es1ab1ectmten1o de1 btoensayo

Guta µaıa ıea1tzaı con1ıo1 de ca1tdad

Con1ıo1 de ca1tdad de cu11tvos µuıos

Con1ıo1 de ca1tdad en 1a e1aµa de µıoducctón

Con1ıo1 de ca1tdad de ma1ıtz

Con1ıo1 de ca1tdad de bo1sas

Con1ıo1 de ca1tdad de1 µıoduc1o cosechado

Con1ıo1 de ca1tdad de 1a µıeseıvactón en st1tca ge1

Uso de hongos en1omoµa1ógenos µaıa e1 manejo de

Cu11tvo P1aga Ceµa Hongo

Ven1ajas de1 uso de Hongos En1omoµa1ógenos como agen1es de con1ıo1

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