Manual de Prácticas de Biología de Procariotas

Licenciatura en Biología

Marzo/2010
M. C. Ruíz Ruíz Francisco

P R Á C T I C A 12
Pruebas Bioquímicas: Licuefacción de gelatina
INTRODUCCIÓN MATERIALES
Incorporando gelatina a diversos medios para
determinar la capacidad de un organismo de 2 Tubos de ensaye con tapa
producir enzimas de tipo proteolítico que, a su vez, 1 Matraz Erlenmeyer de 250mL
son detectadas por la digestión o licuefacción de la 1 Probeta graduada
gelatina presente se avalúa dicha capacidad. 1 Asa Bacteriológica
Estas enzimas, que son capaces de gelatinósis, se 1 Hisopo estéril
denominan gelatinasas. Mechero Bunsen
Espatula
Las proteínas que se producen naturalmente son
MEDIO DE CULTIVO
demasiado grandes para entrar a la célula Extracto de carne, Peptona, gelatina
bacteriana; por lo tanto, para que una célula utilice
estas proteínas primero debe ser degradada a
METODOLOGÍA
componentes mas pequeños, las enzimas
exocelulares de tipo proteolítico; gelatinasas, son
Actividad 1 Preparación del medio de cultivo
secretadas por ciertas bacterias para desdoblar a
de gelatina nutritiva
las proteína y dicha capacidad ayuda a la
identificación bacteriana
INGREDIENTES
El catabolismo de la proteínas por las gelatinasas
3g Extracto de carne
da el resulta de una mezcla de aminoácidos 5g Peptona
120 g Gelatina
OBJETIVO 1000 mL Agua destilada
Determinar la capacidad de un organismo de I Agregar solamente la gelatina al agua destilada y
producir enzimas de tipo proteolítico (gelatinasas) dejar reposar de 15 a 30 minutos
que lisan la gelatina
II Calentar hasta ebullición para diluir por completo
la gelatina
III Agregar el extracto de carne y la peptona y
volver a calentar hasta ebullición para disolver
todos los componentes (no calentar en exceso)
IV Ajustar el pH a 6.8 a 7.0
V Distribuir en alícuotas de 5 mL en tubos de
ensayo con tapa
VI Esterilizar en autoclave por 15 min a 15 lb
a121°C
VII Enfriar en posición vertical, ajustar las tapas y
refrigerar para su conservación (4°C)
de rutina se determina la licuefacción al termino
de dos semanas de incubación a 35°C
Actividad 4 Interpretación
POSITIVO:
a) Medio licuado
b) Tubo control: medio sólido
NEGATIVO:
a) El medio se mantiene sólido , volver a incubar
durante un periodo adicional
b) Tubo control: medio sólido

Actividad 2 Inoculación
I Del crecimiento de un cultivo puro de 18 a 24 h y
con ayuda de el asa de cultivo, tomar un inoculo
espeso y hacer una punción en el medio hasta una
profundidad de 1.5 cm a 2.5 cm
II Incubar los tubos a 35 °C de 24h a 14 dias,
realizando las siguientes revisiones periódicas

Actividad 3 Observación
a) Observar si hay crecimiento (turbiedad) y
licuefacción. Al termino de cada periodo de 24 h,
colocar los tubos en un baño de hielo durante un
periodo de 2 horas, para determinar si se ha
producido o no la digestión de la gelatina
(licuefacción)
b) Controlar los tubos diariamente, hasta 2
semanas a menos que la licuefacción suceda
antes de tiempo. Algunas veces es necesario una
incubación de hasta 30 días, en algunas pruebas