DETERMINACIÓN DE HDL COLESTEROL, LDL y VLDL

i. Introducción o Fundamento teórico

Las lipoproteínas plasmáticas son partículas esféricas que contienen cantidades variables de
colesterol, triglicérido, fosfolípidos y proteínas. Estas partículas solubilizan y transportan lípidos en
el torrente sanguíneo. La proporción relativa de proteína y lípido determina la densidad de estas
lipoproteínas
La función principal de las lipoproteínas de alta densidad o HDL en el metabolismo lipídico es la
captación y transporte de colesterol desde los tejidos periféricos al hígado en un proceso conocido
como transporte reverso de colesterol (mecanismo cardioprotectivo).
El HDL colesterol bajo, está asociado con un alto riesgo de enfermedad cardíaca. Por este motivo
la determinación de HDL colesterol es una herramienta útil en la identificación de individuos de
alto riesgo.
Fundamento del método de determinación de HDL Colesterol y principio de la
reacción
Los quilomicrones ,VLDL (lipoproteinas de muy baja densidad) y LDL(lipoprotenas de baja
densidad) se precipitan por adición de acido fosfotungstico y cloruro de magnesio.
En el sobrenadante separado por centrifugación, quedan las HDL y se realiza la determinación del
colesterol ligado a las mismas , empleando el sistema enzimático Colesterol oxidasa/peroxidas con
colorimetria según trinder(Fenol/4 aminofenazona).
ii. Objetivos
a. Determinar la concentración de HDL- colesterol en sangre
b. Realizar el cálculo de la concentración de LDL y VLDL
iii. Materiales y Reactivos
a. Micropipetas 100 ul y 1000 ul
b. Tips
c. Tubos de ensayo delgados (Espectrofotómetro)
d. Gasa
e. Marcador para vidrio
f. Cronometro
g. Kit comercial determinación de colesterol y HDL-colesterol
h. Suero o plasma
i. Espectrofotómetro
j. Calculadora

iv. Procedimiento
HDL -colesterol
1. Atemperar reactivos
2. En un tubo de ensayo agregar 500 ul de muestra y 1000ul de precipitante
3. Mezclar bien
4. Incubar por 10 minutos a temperatura ambiente
5. Centrifugar por 10 minutos a 4000 rpm o 15 minutos a 3000 rpm
6. Después de centrifugar , separar el sobrenadante claro del precipitado dentro de 1 hora y
determinar la concentración del colesterol usando el reactivo de colesterol liquicolor
Determinación de Colesterol
1. Identificar Blanco de reactivo, Estándar y Muestra
2. Depositar 100 ul de muestra (sobrenadante HDL) al tubo identificado como muestra
3. Depositar 100 ul de estándar de HDL-Colesterol (No el estándar de Colesterol) a los tubo de
ensayo identificado como estándar
4. Depositar 100 ul de agua al blanco de reactivo
5. Depositar 1000 ul de reactivo enzimático (RGT) al blanco, a la muestra y al estándar.
6. Mezclar e incubar por 5 minutos a 37 °C
7. Leer las absorbancias de la muestra y estándar a una longitud de onda de 500 nm frente a un
blanco de reactivo antes de 60 minutos.
Cálculos Suero- Plasma
Calculo con estándar :
C = 150 x Δ A muestra mg/dl
Δ A STD
Calculo LDL = Colesterol total – HDL colesterol - (TG/5) mg/ dl
Calculo VLDL= Colesterol total – HDL- LDL
Valores de referencia generales:
HDL-COLESTEROL: 35-65 mg/dl
LDL: 0-140 mg/dl
VLDL: 5-40 mg/dl
Valores de referencia para el kit de HDL colesterol y LDL
HDL-COLESTEROL
Hombres:
Pronostico favorable >55 mg/dl
Niveles de riesgo estándar 35-55 mg/dl
Indicador de riesgo < 35 mg/dl
Mujeres
Pronóstico favorable >65 mg/dl
Niveles de riesgo estándar 45-65 mg/dl
Indicador de riesgo < 45 mg/dl
LDL-COLESTEROL:
Sospechoso a partir de 150 mg/dl
Elevado a partir de 190 mg/dl
BIBLIOGRAFÍA
• Alfonso Balcells. La clínica y el laboratorio.20° Edición. ELSEVIER.2006.España