FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES Y MATEMÁTICAS

LABORATORIO DE QUÍMICA ANALÍTICA

INFORME # 10

TÍTULO DE LA PRÁCTICA:
“DETERMINACIÓN DE FOSFATOS EN AGUA POR
ESPECTROFOTOMETRÍA”

ELABORADO POR:
KLEBER PUMA

PARALELO: 102

PROFESOR: ING. LUIS ANTONIO VACA SALAZAR

FECHA DE PRESENTACIÓN:
9/01/2019

GUAYAQUIL - ECUADOR
1. Título del Informe

“Determinación de fosfatos en agua por espectrofotometría”

2. Objetivos:

2.1 Objetivo General:

Determinar la concentración de fosfatos en una muestra de agua, mediante espectrofotometría

para conocer su calidad acorde a acuerdos ministeriales ecuatorianos.

2.2 Objetivos Específicos:

• Realizar una recta de calibración de absorbancia vs concentración, mediante el método

de mínimos cuadrados para obtener la concentración del analito.

• Identificar errores relacionados con la práctica mediante el análisis de la dispersión de

los datos obtenidos para sugerir recomendaciones.

3. Marco teórico:

Es posible conocer la concentración de un analito en diferentes sustancias a través de la absorción

que este en solución presenta a la luz, para ello se usan medidores espectrofotométricos con una
longitud de onda dada.

Fuentes de energía radiante

La luz tiene una característica dual, puede ser vista como onda o partícula, en el contexto de onda,
esta es especial pues no necesita de un medio para propagarse, sin embargo, si necesita de una
perturbación para transmitir energía electromagnética. En el contexto de la espectrofotometría se
necesita una fuente ideal para las medidas de absorción de luz debe emitir un espectro de luz
continuo, de intensidad elevada y uniforme en toda la gama de longitudes de onda de interés
(Pecsok & Shields, 1983).

Espectrofotómetro Spectronic 20

Opera dentro de un rango de 340 a 625 mμ, el cual cuenta con una rejilla que gira permitiendo
modificar el ancho de longitud de onda deseada (Pecsok & Shields, 1983), que en materia de
espectrofotometría es fundamental.

Espectrofotometría de absorción

La cantidad de luz absorbida en una solución permite realizar análisis cuantitativos del analito. De
esta manera, es inherente hablar de la Ley de Beer-lambert, la cual hace referencia a la absorción
de la luz por sólidos homogéneos, parte de la suposición de que cada incremento de sólido, dt, por
el cual atraviesa luz absorbe la misma fracción de luz (Barnard & Chayen, 1970). No se demostrará
el proceso de cálculo de esta ley, mas solo su resultado:

1
 𝐼 = 𝐼0 𝑒 −𝑘𝑡

Donde k es un factor constante, I es la intensidad de luz transmitida a través del medio absorbente,
I0 la intensidad de la luz incidente y t es el espesor del medio absorbente. Esta ecuación puede
modificarse a:
𝐼0
𝑙𝑜𝑔 ( ) = 𝜀𝑐𝑡
𝐼

Donde c es la concentración molar del analito y 𝜀 es el coeficiente de extinción molar.

𝐼
Si llamamos absorbancia (A) al ente 𝑙𝑜𝑔 ( 𝐼0 ) entonces se tiene:
𝐴 = 𝜀𝑐𝑡
Colorimetría

Mediante este método que se deriva de la espectrofotometría de absorción es posible hacer que el
analito se convierta en una especie coloreada que obedece a la ley de Beer además, ofrece un rango
de precisión de ±10% sobre el valor verdadero de concentraciones (Barnard & Chayen, 1970).

Para el análisis de fosfatos, se usa un método colorímetro introducido por Fiske y Subbarow en
1925, el cual consiste en la conversión de todo el fósforo presente a ortofosfato, el cual pasa a ácido
ortofosfórico en un medio ácido. La adición de molibdato permite la formación del ácido
fosfomolíbdico, que en presencia de agentes reductores como el SnCl2 usado en esta práctica se
convierte en azul de Molibdeno, que obedece a la ley de Beer, y puede medirse la absorción en un
espectrofotómetro.
No ajeno a esto debe realizarse una curva de calibrado para conocer la concentración del analito.
Esto ser realiza mediante la aplicación de mínimos cuadrados, con la herramienta de regresión
lineal, que puede reducirse a lo siguiente:

𝑦̂ = 𝑏0 + 𝑏1 𝑥

Donde 𝑦̂ es la absorbancia, 𝑏0 el valor de la absorbancia cuando la concentración es 0, m es la

pendiente de la recta y x es la concentración de fosfatos.

4. Materiales, equipos y reactivos:

Materiales: • Sorbona marca Quimis.

• Espátula. • Plancha calentadora marca CIMAREC.
• Matraz Erlenmeyer 50 ± 5mL. • Espectrofotómetro marca Spectronic.
• Vasos de precipitado 100 ± 5mL.
• Bureta 25± 5mL. Reactivos:
• Agitador. • Fenolftaleína.
• Tubos de ensayo. • KH2PO4 (s).
• Gotero. • H2O (d).
• H2SO4 (c).
Equipos: • (NH4)6Mo7O24.4H2O (s).
• Balanza Analítica marca OHAUS con • Muestra problema.
4 decimales de precisión. • Glicerina.

2
5. Procedimiento:

Preparación de reactivos:

a) Molibdato de amonio: Disolver 1,25 g de molibdato de amonio, (NH4)6Mo7O24.4H2O, en

8,75 ml agua destilada. Con mucha precaución, agregar 14 ml de H2SO4 concentrado a 20
ml de agua destilada. Enfriar y añadir la solución de molibdato. Diluir a 50 mL.
b) Cloruro estañoso: Disolver 1.25 g de SnCl2.2H2O en 10 ml de glicerina en baño maría.
c) Solución estándar de fosfatos: Preparar 100 ml de disolución de 50 ppm de fosforo en
fosfatos (P-PO4-) a partir de KH2PO4.
d) Solución de 10 ppm de fosfatos: A partir de c) preparar 100 ml de solución de fosforo 10
ppm.
e) Soluciones para curva de calibración: A partir de d), preparar 100 ml de cada una de las
diluciones para la curva de calibración del analito (P-PO4-) con concentraciones de 0.1,
0.3, 0.5, 0.8 y 1.0 ppm.
f) Muestra problema: Tratamiento preliminar de la muestra problema con HCl o digestión,
usando fenolftaleína, si presenta alcalinidad a ésta.

Procedimiento para los estándares de calibración y la muestra problema.

1. Mida 25 ml de cada una de las soluciones estándar y colóquelas en diferentes tubos de

ensayo rotulados previamente.
2. Agregar 1 ml de la solución de molibdato de amonio a cada tubo.
3. Adicionar 3 gotas de la mezcla de cloruro estañoso en glicerol a cada tubo y agitar hasta
su homogeneización total.
4. Dejar reaccionar las soluciones, hasta coloración azul, en la oscuridad durante 12 minutos
exactos.
5. Realizar las lecturas de absorbancia de los estándares y de la muestra problema en el
espectrofotómetro a 690 nm.
6. Realizar la curva de calibración empleando la herramienta estadística de regresión lineal.
7. En base a la curva de calibración, determine la concentración de la muestra problema en
ppm de P-PO4-.

6. Reacciones involucradas:

𝐻3 𝑃𝑂4 + 12(𝑁𝐻4 )2 𝑀𝑜𝑂4 + 21𝐻 + → (𝑁𝐻4 )5 𝑃𝑂4 . 12𝑀𝑜𝑂8 + 21𝑁𝐻4 + 12𝐻2 𝑂

7. Resultados:

7.1 Datos iniciales

Tabla n.-1. Absorbancia y concentración.

3
 Concentración (ppm) Absorbancia
0.1 0.113
0.3 0.275
0.5 0.438
0.8 0.638
1.0 0.784
Muestra problema 0.721

7.2 Cálculos relacionados:

Preparación de 100 ml Solución estándar de fosfato 50 ppm:

50 𝑚𝑔 𝑃 135.97 𝑚𝑔 𝐾𝐻2 𝑃𝑂4
0.1 𝐿 𝑠𝑜𝑙x x = 21.96 𝑚𝑔 𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 → 0.0219 𝑔 𝐾𝐻2 𝑃𝑂4
1𝐿 30.97 𝑚𝑔 𝑃

Valor pesado: 0.0222 g KH2PO4

Solución de 10 ppm de fosfatos a partir de la solución 50ppm de fosfatos:

10𝑝𝑝𝑚 ∗ 100 𝑚𝑙 𝑆10𝑝𝑝𝑚

𝑉= = 20 𝑚𝑙 𝑆50 𝑝𝑝𝑚
50 𝑝𝑝𝑚

Soluciones 0.1, 0.3, 0.5, 0.8, 1.0 ppm a partir de solución 10 ppm:

Sol. 0.1 ppm

100 ∗ 0.1
𝑉𝑆𝑜𝑙. 10 𝑝𝑝𝑚 = = 1 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙. 10 𝑝𝑝𝑚
10
Sol. 0.3 ppm
100 ∗ 0.3
𝑉𝑆𝑜𝑙. 10𝑝𝑝𝑚 = = 3 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙. 10𝑝𝑝𝑚
10
Sol. 0.5 ppm
100 ∗ 0.5
𝑉𝑠𝑜𝑙. 10 𝑝𝑝𝑚 = = 5 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙. 10 𝑝𝑝𝑚
10
Sol. 0.8 ppm
100 ∗ 0.8
𝑉𝑠𝑜𝑙. 10 𝑝𝑝𝑚 = = 8 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙. 10 𝑝𝑝𝑚
10
Sol. 1.0 ppm

4
 100 ∗ 1
𝑉𝑠𝑜𝑙. 10 𝑝𝑝𝑚 = = 10 𝑚𝑙 𝑠𝑜𝑙. 10 𝑝𝑝𝑚
10
Regresión lineal:

Modelo matemático por usar:

𝑦̂ = b0+b1x

𝑛 ∑𝑛𝑖=1 𝑥𝑖 𝑦𝑖 − (∑𝑛𝑖=1 𝑥𝑖 )(∑𝑛𝑖=1 𝑦𝑖 )

𝑏1 =
𝑛 ∑𝑛𝑖=1 𝑥𝑖 2 − (∑𝑛𝑖=1 𝑥𝑖 )2

∑𝑛𝑖=1 𝑦𝑖 𝑏1 ∑𝑛𝑖=1 𝑥𝑖
𝑏0 = −
𝑛 𝑛
1
𝑏0 ∑𝑛𝑖=1 𝑦𝑖 + 𝑏1 ∑𝑛𝑖=1 𝑥𝑖 𝑦𝑖 − 𝑛 (∑𝑛𝑖=1 𝑦𝑖 )2
𝑅2 =
1
∑𝑛𝑖=1 𝑦𝑖 2 − (∑𝑛𝑖=1 𝑦𝑖 )2
𝑛
donde:

𝑦̂ = absorbancia

x = concentración

b1 = pendiente de la recta

b0 = intersección con el eje Y

n= número de observaciones o ensayos.

𝑅2 = Coeficiente de correlación.
𝑛

∑ 𝑥𝑖 𝑦𝑖 = 0.1 ∙ 0.113 + 0.3 ∙ 0.275 + 0.5 ∙ 0.438 + 0.8 ∙ 0.638 + 1.0 ∙ 0.784
𝑖=1
= 1.6072
𝑛

∑ 𝑥𝑖 = 0.1 + 0.3 + 0.5 + 0.8 + 1.0 = 2.7

𝑖=1
𝑛

∑ 𝑦𝑖 = 0.113 + 0.275 + 0.438 + 0.638 + 0.784 = 2,248

𝑖=1
𝑛

∑ 𝑥𝑖 2 = 0.12 + 0.32 + 0.52 + 0.82 + 1.02 = 1.99

𝑖=1
𝑛

(∑ 𝑥𝑖 )2 = 2.72 = 7.29
𝑖=1

5
 𝑛

∑ 𝑦𝑖 2 = 0.1132 + 0.2752 + 0.4382 + 0.6382 + 0.7842 = 1.30

𝑖=1
𝑛

(∑ 𝑦𝑖 )2 = 2.2482 = 5.05
𝑖=1

5 ∗ 1.6072 − (2.7)(2.248)
𝑏1 = = 0.7392
5 ∙ (1.99) − (2.7)2
2.248 2.7
𝑏0 = − 0.7392 = 0.050
5 5
Por la tanto la ecuación de la recta queda definida como:
Y=0.7392x+0.050
Con un coeficiente de correlación R2 de:
1
0.050∙2.248+.7392∙1.6072−5∙1.3
𝑅2 = 1 = 0.9983
1.30−5∙5.05

Finalmente, la concentración de la muestra sería:

0.721 − 0.050
𝑥𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑝. = = 0.908 𝑝𝑝𝑚
0.7392
7.3 Resultados obtenidos

Tabla n.-2. Resultados finales.

Concentración de fosfatos (ppm) 0,908

Coeficiente de correlación 0.9983

8. Observaciones

• Al añadir el ácido sulfúrico al Molibdato la solución se calentó, mostrando una reacción

exotérmica.

• Al añadir la fenolftaleína a la muestra esta no cambió de color, mostrando que no había

alcalinidad y por ende evitando la digestión.

• Las soluciones en los tubos de ensayo se tornaron desde un azul pálido hasta uno bastante
oscuro a medida que se sacaban del cuarto oscuro, debido al aumento de concentración de
los fosfatos.

9. Análisis de Resultados

6
 Se obtuvieron 0.908 ppm de fosfatos en la muestra de agua, usando la ecuación de la recta.
Además, el coeficiente de correlación de 0.9983 muestra una fuerte correlación entre las
variables concentración y absorbancia. En este contexto es coherente señalar que el
resultado es bastante próximo a la realidad. Sin embargo, es de bastante importancia señalar
que los tres primeros valores de concentración y absorbancia son bastante similares y
asemejan una recta identidad, mientras que para los 2 restantes se observa una dispersión
mayor, empero en conjunto los datos no están demasiado dispersos respecto a la recta de
regresión. Estas dispersiones pueden explicarse desde el ámbito de errores sistemáticos en
la preparación de los reactivos, en el pesaje de materiales, pues como se mencionó en la
sección 7.2 se produjo un error de pesaje, el cronometraje pudo no ser el óptimo en algunas
muestras, especialmente en las dos últimas, así como la presencia de luz en el laboratorio,
además errores aleatorios como los cambios de clima que alteran la medición de
volúmenes, los campos electromagnéticos presentes por dispositivos electrónicos, que
pueden interferir con la correcta lectura del espectrofotómetro.

10. Recomendaciones

• Usar guantes de nitrilo durante toda la práctica, para evitar el contacto de ácidos, así como
de la muestra con el practicante.

• Se recomienda mantener siempre las muestras lo más oscuro posible, para evitar
fotodescomposición del SnCl2.

• Se recomienda calentar la solución con la plancha de calentamiento, de ninguna manera

intentar usar mechero.

• Usar mascarilla para evitar la inhalación directa de la muestra de agua, puede resultar
bastante desagradable para el practicante.

11. Conclusiones

• Se obtuvo una absorbancia de 0.721 de la muestra a través del espectrofotómetro, dato que
al introducirse en la ecuación de regresión obtenida arrojó un resultado de 0.908 ppm, y
que de acuerdo con el anexo 1 del libro VI del texto unificado de legislación secundaria
del ministerio del ambiente: norma de calidad ambiental y de descarga de efluentes al
recurso agua (véase anexos) está dentro del rango permisible en el caso de descarga al
alcantarillado público cuya cota es 15ppm, así mismo para descarga a agua dulce cuya cota
es 10 ppm.

• La aplicación del método de mínimos cuadrados arrojó una correlación de 0.9983 muy
cercana a la unidad, indicando gran correlación entre los datos y una dispersión bastante
aceptable. Por la tanto se concluye una buena fiabilidad en el proceso de laboratorio.

• Si bien los primeros tres datos se mostraron bastante uniformes, los dos últimos estuvieron
moderadamente dispersos respecto a la recta de regresión, los errores se describieron en la

7
 sección de Análisis de resultados y es de responsabilidad de futuros practicantes tomarlas
en cuenta para un mejor resultado. Se concluye entonces que un mal cronometraje, un mal
control de la luz en el laboratorio, así como una incorrecta preparación de reactivos puede
llevar a tener errores gruesos y obtención de datos muy dispersos.

12. Bibliografía
Barnard, J. A., & Chayen, R. (1970). Métodos modernos de análisis químico. Bilbao: URMO. Págs:
62-67, 83-100.

Gary, C. (2009). Química Analítica (Sexta ed.). México D.F, México: McGraw-Hill. Págs: 170,791.

Pecsok, R. L., & Shields, L. D. (1983). Métodos modernos de Análisis Químicos. México D.F:
Limusa. Págs: 170, 171, 190.

13. Anexos

8
Ilustración 1: Límites de descarga al sistema de alcantarillado público. Fuente:
http://www.industrias.ec/archivos/CIG/file/CARTELERA/Reforma%20Anexo%2028%20feb%202014%20FINAL.pdf?fbclid=IwAR2I
AdBJAlpKMHCYnVQDBv69AHE9V9vtvEbU7UKZfxOkoTAZ87kkTRpaAOY

9
Ilustración 2: Límites de descarga a un cuerpo de agua dulce. Fuente: Límites de descarga a un cuerpo de agua dulce. Fuente:
http://www.industrias.ec/archivos/CIG/file/CARTELERA/Reforma%20Anexo%2028%20feb%202014%20FINAL.pdf?fbclid=IwAR2I
AdBJAlpKMHCYnVQDBv69AHE9V9vtvE

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