Calculadora

La acción enzimática: Prueba de 6B

Actividad Catalasa

Muchos organismos pueden descomponer el peróxido de hidrógeno (H2O2) enzimáticamente.

Las enzimas son proteínas globulares, responsables de la mayor parte de las actividades químicas
de los organismos vivos. Actúan como catalizadores, sustancias que aceleran las reacciones
químicas sin ser destruido o alterado durante el proceso de. Las enzimas son extremadamente
eficientes y pueden ser usados una y otra vez. Una enzima puede catalizar miles de reacciones
cada segundo. Tanto la temperatura y el pH al que las enzimas de la función son extremadamente
importantes. La mayoría de los organismos tienen un rango de temperatura preferido en el que
sobreviven, y sus enzimas más probable es que funcionan mejor dentro de ese rango de
temperatura. Si el entorno de la enzima es demasiado ácido o demasiado básico, la enzima puede
irreversiblemente desnaturalizar, o desentrañar, hasta que ya no tiene la forma necesaria para el
funcionamiento apropiado.
H2O2 es tóxico para la mayoría de los organismos vivos. Muchos organismos son capaces de
destruir por vía enzimática del H2O2 antes de que pueda hacer mucho daño. H2O2 se puede
convertir en oxígeno y agua, como sigue:
2 H2O2 2 H2O + O2

Aunque Esta reacción se produce de forma espontánea, la enzima catalasa aumenta

considerablemente la tasa. La catalasa se encuentra en la mayoría de los organismos vivos.
Mucho se puede aprender acerca de las enzimas mediante el estudio de las velocidades de las
reacciones catalizadas por enzimas. La velocidad de una
reacción química puede ser estudiado en un número de
maneras, incluyendo
La medición de la tasa de aparición de un producto (en este
caso, O2, que se desprende en forma de gas)
la medición de la velocidad de desaparición del sustrato
(en este caso, H2O2)
la medición de la presión del producto tal como aparece (en este caso, O2).

En este experimento, se va a medir la tasa de actividad de la enzima en diversas condiciones,

tales como diferentes concentraciones de enzima, los valores de pH, y temperaturas. Es posible
medir la presión del gas oxígeno formado como H2O2 se destruye. Si se hace una trama, puede
parecer similar a la gráfica que se muestra.
Al comienzo de la reacción, no hay ningún producto, y la presión es la misma que la presión
atmosférica. Después de un breve periodo de tiempo, el oxígeno se acumula a un ritmo más o
menos constante. La pendiente de la curva en este momento inicial es constante y se llama la tasa
inicial. A medida que el peróxido se destruye, menos de la misma se encuentra disponible para
reaccionar y el O2 se produce a tasas más bajas. No más cuando se deja de peróxido, O2 ya no se
produce.

Biología con Vernier
OBJETIVOS
En este experimento, se quiere
utilizarun sensor de presión de gas para medir la producción de gas oxígeno como el
peróxido de hidrógeno es destruido por la enzima catalasa o peroxidasa a varias
concentraciones de enzimas.
medir y comparar las velocidades iniciales de reacción para esta enzima cuando diferentes
concentraciones de enzima reaccionan con H2O2.
medir la producción de gas oxígeno como el peróxido de hidrógeno es destruido por la
enzima catalasa o peroxidasa a varias temperaturas.
medir y comparar las velocidades iniciales de reacción para la enzima a cada temperatura.
medir la producción de gas oxígeno como el peróxido de hidrógeno es destruido por la
enzima catalasa o peroxidasa a diversos valores de pH.
medir y comparar las velocidades iniciales de reacción para la enzima a cada valor de pH.

1 2 3 4

Figura 1

MATERIALES
LabPro o CBL 2 interfaz suspensión de enzima
Calculadora gráfica TI cuatro 18 X 150 tubos de ensayo mm
programa de DataMate hielo
Vernier sensor de presión de gas tampones de pH
conjunto de caucho-tapón Gradilla
10-ml cilindro graduado termómetro
250 ml vaso de precipitados de agua tres pipetas cuentagotas
3% de H2O2 Análisis gráfico (opcional)
vaso de precipitados de 600 ml

PROCEDIMIENTO

1.Obtain y usar gafas.

C o n n e c t tu b in g
h e re

Figura 2

Calculadora 6B
 2.Conecte el tubo de plástico a la válvula en el sensor de presión de gas. Si el sensor tiene una
válvula de plástico azul en él, colocar la válvula en la posición mostrada en la Figura 2.

3.Enchufe el sensor de presión de gas en el canal 1 de la interfaz LabPro o CBL 2. Utilice el

cable de conexión para conectar la calculadora gráfica TI a la interfaz. Presione firmemente
en los extremos de los cables.
4. Encienda la calculadora y empezar la DATAMATE programa. prensa CLEAR para reiniciar el
programa.

5.Set la calculadora y una interfaz para un sensor de presión de gas.

a. Seleccione SETUP en la pantalla principal.
b. Si la calculadora muestra PRESS (kPa) en CH 1, vaya directamente al paso 6. Si no lo
hace, continuar con este paso para configurar su sensor manualmente.
c. prensa ENTER para seleccionar CH 1.
d. Seleccione PRESIÓN en el menú SENSOR SELECT.
e. Seleccione el captador de presión correcta en el menú PRESIÓN.
f. Seleccione el listado de calibración de (KPA).
6.Set el modo de recopilación de datos.
a. Para seleccionar el modo, pulse (La tecla de flecha hacia arriba) de una vez y pulse
ENTER .

b. Seleccione TIME GRAPH en el menú MODE SELECT.

c. Cambiar los ajustes de tiempo desde el menú de ajustes para gráficos de tiempo.
d. Introducir “3” como el tiempo entre muestras en cuestión de segundos.
e. Introduzca “60” como el número de muestras (datos serán recogidos durante 3 minutos).
f. Seleccione Aceptar para volver a la pantalla de configuración.
g. Seleccione Aceptar para volver a la pantalla principal.

Parte I probar el efecto de la enzima Concentración

7.Place cuatro tubos de ensayo en un bastidor y etiquetarlos 1, 2, 3, y 4.

8.Add 3 ml de 3,0% H2O2 y 3 ml de agua a cada tubo de ensayo.

9.Using una pipeta cuentagotas limpio, añadir 1 gota de suspensión de la enzima al tubo de ensayo
1. Nota: Asegúrese de no dejar caer la enzima contra el lado del tubo de ensayo.

10.Stopper el tubo de ensayo y agitar suavemente para mezclar completamente los contenidos. La
reacción debe comenzar. El siguiente paso debe ser completado tan rápidamente como sea
posible.
11.Conecte el extremo libre del tubo de plástico al conector en el tapón de goma como se muestra
en la Figura 3. Seleccionar START para comenzar la recopilación de datos. La recolección de
datos terminará después de 3 minutos.

12.monitor las lecturas de la presión que aparecen en la pantalla de la calculadora. Si la presión

excede de 130 kPa, la presión dentro del tubo será demasiado grande y el tapón de goma es

figura 3
Biología con Vernier La acción enzimática: Prueba de Actividad Catalasa
 probable que sobresalen de. Desconectar el tubo de plástico del sensor de presión de gas si la
presión excede de 130 kPa.
recopilación de datos 13. Cuando ha terminado, un gráfico de auto-escalado de presión vs. el
tiempo se mostrará en la pantalla de la calculadora. A medida que mueve los valores de
presión (Y) de cada punto de datos cursor derecho o izquierdo, el tiempo (X) y se muestran
debajo del gráfico.
14.Desconecte el conector de tubo de plástico desde el tapón de goma. Quitar el tapón de goma de
tubo de ensayo y desechar el contenido en un vaso de precipitados de residuos.
15.Determine la tasa de actividad de la enzima para la curva de la presión vs. hora. Para ayudar
a hacer comparaciones entre corridas experimentales, elegir los puntos de datos en los
mismos valores de tiempo.
a.
Examine el gráfico y determinar la región más lineal
b. Mover el cursor parpadeante hasta el primer punto de la
región. Introduzca la presión inicial, Pi, y el tiempo inicial,
Ti, en la Tabla 2.
c. Mover el cursor parpadeante hasta el último punto de la
región. Introduzca la presión final, Pf, y el tiempo final, tf, en
la Tabla 2.
16.Press ENTER para volver a la pantalla principal.
17.Find la tasa de actividad de la enzima para tubos de ensayo 2, 3 y 4:
a. Añadir 2 gotas de la solución de enzima a tubo de ensayo 2. Repetir los pasos 10 - 16.
b. Añadir 3 gotas de la solución de enzima a tubo de ensayo 3. Repetir los pasos 10 - 16.
c. Añadir 4 gotas de la solución de enzima a tubo de ensayo 4. Repetir los pasos 10 - 16.
Parte II Prueba de la Efecto de la Temperatura
18.Place cuatro tubos de ensayo limpios en un bastidor y etiquetarlos T 0-5, T 20-25, T 30-35, y T
50-55.
19.Add 3 ml de 3,0% H 2O2 y 3 ml de agua a cada tubo de ensayo.
20.Measure la actividad de la enzima a 0-5 DO:
a. C
mediante la colocación de hielo y agua en un vaso de precipitados de 600 mL. El uso de
un cheque termómetro que la temperatura se mantiene en este intervalo a lo largo de esta
prueba. Véase la Figura 4.
b. Coloque tubo de ensayo T de 0-5 en el baño de agua fría durante 5 minutos para que
llegue a una temperatura en el 0-5gama C. Registre la temperatura real de los contenidos
en tubos de ensayo en el espacio en blanco en la Tabla 3.
c. Añadir 2 gotas de la solución de enzima para poner a prueba tubo T 0-5. Repita
Figuralos4pasos
10 - 16.
21.Measure la actividad de la enzima a 30-35 DO:
a. Preparar un baño de agua a una temperatura en el intervalo de 30-35C colocando agua
caliente en un vaso de precipitados de 600 mL. El uso de un cheque termómetro que la
temperatura se mantiene en este intervalo a lo largo de esta prueba.

Calculadora 6B
 b. tubo de prueba Place 30-35 T en el baño de agua caliente durante 5 minutos para que
llegue una temperatura en el 30-35gama C. Registre la temperatura real de los contenidos
en tubos de ensayo en el espacio en blanco en la Tabla 3.
c. Añadir 2 gotas de la solución de enzima para poner a prueba tubo T 30-35. Repita los
pasos 10 - 16.
22.Measure la actividad de la enzima a 50-55 DO:
a. Preparar un baño agua a una temperatura en la gama de 50-55C colocando agua caliente
en un 600 ml vaso de precipitados (agua del grifo caliente probablemente trabajará muy
bien). Compruebe que la temperatura se mantiene en este rango durante toda la prueba.
b. Place tubo de ensayo T 50-55 en el baño de agua caliente hasta que la temperatura de la
mezcla alcanza una temperatura en el 50-55gama C. Registre la temperatura real de los
contenidos en tubos de ensayo en el espacio en blanco en la Tabla 3.
c. Añadir 2 gotas de la solución de enzima para poner a prueba tubo T 50-55. Repita los
pasos 10 - 16.
23.Measure la actividad de la enzima a 20-25 C (temperatura ambiente):
a. Registrar la temperatura de tubo de ensayo T 20-25 en la Tabla 3.
b. En el tubo etiquetado T 20-25, añadir 2 gotas de la solución de enzima. Repita los pasos
10 - 16.

Parte III probar el efecto de pH

24.Place tres tubos limpios de ensayo en un bastidor y etiquetarlos pH 4, pH 7 y pH 10.
25.Add 3 ml de 3% H 2O2 y 3 ml de cada tampón de pH a cada tubo de ensayo, como en
la Tabla 1.
tabla 1
pH de tampón Volumen de H2O2 al 3% (mL) Volumen de tampón (mL)
pH 4 3 3
pH 7 3 3
pH 10 3 3

26.In el pH tubo etiquetado 4, añadir 2 gotas de la solución de enzima. Repita los pasos 10 - 16.
27.In el pH tubo etiquetado 7, añadir 2 gotas de la solución de enzima. Repita los pasos 10 - 16.
28.In el pH tubo etiquetado 10, añadir 2 gotas de la solución de enzima. Repita los pasos 10 - 16.

Biología con Vernier La acción enzimática: Prueba de Actividad Catalasa
DATOS
Tabla 2
Punto 1 El punto 2
Etiqueta Pi (kPa) Ti (s) Pf (kPa) tf (s)

1 gota

2 gotas

3 gotas

4 gotas

A0-5°C

20 - 25 ° C

30 - 35 ° C

50 - 55 ° C

pH 4

pH 7

pH 10

Tabla 3
etiqueta del tubo de prueba Slope, o la tasa (kPa / min)
1 gota
2 gotas
3 gotas
4 gotas
A 0 - 5 gama C:
do
20 - 25 gama C:
do
30 - 35 gama C:
do
50 - 55 gama C:
do
pH 4
pH 7
pH 10

Calculadora 6B
PROCESAMIENTO DE LOS DATOS
1. Calcular la tasa de actividad de la enzima para cada parte de este experimento registran en la
Tabla 2. El porcentaje de actividad de la enzima es igual a la pendiente. Multiplicar su tipo
calculado por 60 para convertir a kPa / min. Registrar las tasas en la Tabla 3.

2. Para la Parte I de este experimento, hacer un gráfico de la tasa de actividad de la enzima

vs. concentración de la enzima a mano o mediante el uso de análisis gráfico. Representar
gráficamente los valores de la velocidad de la Tabla 3 en el eje y, y el número de gotas de
enzima en el eje x.

3. Para la Parte II de este experimento, hacer un gráfico del índice de actividad de la enzima
vs. temperatura. Representar gráficamente los valores de la velocidad de la Tabla 3 en el
eje y, y la temperatura en el eje x.

4.For Parte III de este experimento, hacer un gráfico de la velocidad de la actividad enzimática
vs. pH. Representar gráficamente los valores de la velocidad de la Tabla 3 en el eje y, y el
pH en el eje x.

PREGUNTAS
Parte I Efecto de la Concentración de Enzima
1.How hace el cambio de la concentración de la enzima afecta a la velocidad de descomposición
de H 2O2?
2. ¿Qué crees que va a pasar con la velocidad de reacción si la concentración de la enzima se
elevará a cinco gotas? Predecir cuál sería la tasa de 5 gotas.
Parte II Efecto de la Temperatura
3.At qué temperatura es la tasa de actividad de la enzima el más alto? Más bajo? Explique.
4.How no modificar la temperatura afecta a la tasa de actividad de la enzima? ¿Esto sigue un
patrón lo previsto?
5.Why podría la actividad disminución enzima a temperaturas muy altas?
Parte III Efecto del pH
6.At lo pH es la tasa de actividad de la enzima el más alto? Más bajo?
7.How no cambiando el pH afecta a la tasa de actividad de la enzima? ¿Esto sigue un patrón lo
previsto?

EXTENSIONES
organismos 1.Different a menudo viven en ambientes muy diferentes. Diseñar una serie de
experimentos para investigar cómo los diferentes tipos de organismos pueden afectar la tasa
de actividad de la enzima. Considere un ensayo de una planta, un animal, y un protista.

2.Presumably, a mayores concentraciones de H 2O2, existe una mayor probabilidad de que

una molécula de enzima podría chocar con el H2O2. Si es así, la concentración de H2O2
podría alterar la tasa de producción de oxígeno. Diseño de una serie de experimentos para

Biología con Vernier La acción enzimática: Prueba de Actividad Catalasa
 investigar cómo diferentes concentraciones del peróxido de hidrógeno sustrato podrían
afectar la tasa de actividad de la enzima.
3.Design un experimento para determinar el efecto de la ebullición de la catalasa en la velocidad
de reacción.
4.Explain factores cómo ambientales afectan la velocidad de las reacciones catalizadas por
enzimas.

Calculadora 6B