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Trabajo practico de biología #4

Nombre: Normando Rugel


Curso: Pre-BI
Maestra: Lcda. Mayra Alejandro

Domingo, 16 Julio, 2019


Tema: Extracción del ADN

Objetivo

Realizar la extracción de ADN de tejidos animales y vegetales y reflexionar

sobre la simpleza de su composición con sencillas técnicas. Observar

la estructura fibrilar del ADN. Establecer la relación entre el proceso de

extracción y propiedades quimico-fisicas del ADN

Introducción

La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas: En primer lugar,

tiene que romperse la pared celular y la membrana plasmática para poder

acceder al núcleo de la célula. A continuación, debe romperse también la

membrana nuclear para dejar libre el ADN. Los jabones utilizados como

lavavajillas emulsionan los lípidos de las membranas celulares y las rompen. La

sal evita la unión de las proteínas al ADN. Para aislar el ADN hay que hacer

que precipite en alcohol. El ADN es soluble en agua, pero cuando se encuentra

en alcohol se desenrolla y precipita en la interfase entre el alcohol y el agua.

Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros

componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.


Variables

 Independiente: Temperatura, especie de fruta

 Dependiente: Aislamiento del ADN

 Controlada: Cantidad de sal, frutilla y detergente

MATERIALES

- Muestra vegetal (cebolla, ajo, tomate, etc.)

- Agua (destilada o mineral)

- Sal de mesa

- Bicarbonato sódico

- Detergente líquido o champú

- Alcohol isoamílico a 0°C

- Batidora

- Nevera

- Colador o centrífuga

- Vaso

- Tubo de ensayo
- Varilla fina

Proceso

 Picar en trozos pequeños la muestra vegetal (10 frutillas maduras) y

triturarlas en el mortero o en la licuadora con 20ml de agua destilada y

tamizada

 Preparar el tampón con los siguientes reactivos y homogenizarlas

 120ml de agua estilada

 2gramos de cloruro de sodio

 5gramos de bicarbonato sódico

 10ml de detergente liquido o shampoo

 Mezclar en un recipiente limpio de 5ml de triturado celular con 10 ml

del tampón frio y agitar vigorosamente durante 2 minutos, separar

después los restos vegetales grandes por un colador y centrifugar a

velocidad baja por 5 min.

Marco teórico

EL ADN
En los organismos llamados eucariotas, el ADN se encuentra dentro de un

área compartimentalizada dentro de la célula llamada núcleo. Debido a que la

célula es muy pequeña, y porque los organismos tienen muchas moléculas de

ADN por célula, cada molécula de ADN debe estar empaquetada de forma

muy compacta y precisa. Esta forma superempaquetada del ADN se denomina

cromosoma.

Durante la replicación del ADN, el ADN se desenrolla para que pueda ser

copiado. En otros puntos del ciclo celular, secciones puntuales del ADN

también se desenrollan cuando es necesario para que distintos juegos de

instrucciones se usen en la fabricación de proteínas y para otros procesos

biológicos. Pero, durante la división celular, el ADN se encuentra en su forma

compacta de cromosoma para hacer posible la transferencia a nuevas células.

Los investigadores llaman ADN nuclear al ADN encontrado en el núcleo de la

célula. El conjunto completo de ADN nuclear de un organismo se conoce

como su genoma.

Además del ADN ubicado en el núcleo, los seres humanos y otros organismos

complejos también tienen una pequeña cantidad de ADN en otras estructuras

celulares adicionales conocidas como mitocondria. Las mitocondrias son las


factorías de las células, generando la energía que la célula necesita para

funcionar correctamente.

En la reproducción sexual, los organismos heredan la mitad de su ADN

nuclear del padre y la mitad de la madre. No obstante, los organismos heredan

todo su ADN mitocondrial de la madre. Esto ocurre porque sólo los óvulos, y

no los espermatozoides, conservan su mitocondria durante la fecundación.

¿Cómo se forma?

El ADN está formado por unos componentes químicos básicos denominados

nucleótidos. Estos componentes básicos incluyen un grupo fosfato, un grupo

de azúcar y una de cuatro tipos de bases nitrogenadas alternativas. Para formar

una hebra de ADN, los nucleótidos se unen formando cadenas, alternando con

los grupos de fosfato y azúcar.

Los cuatro tipos de bases nitrogenadas encontradas en los nucleótidos son:

adenina (A), timina (T), guanina (G) y citosina (C). El orden, o secuencia, de

estas bases determina qué instrucciones biológicas están contenidas en una

hebra de ADN. Por ejemplo, la secuencia ATCGTT pudiera dar instrucciones

para ojos azules, mientras que ATCGCT pudiera indicar ojos de color café.
En el caso de los seres humanos, la colección completa de ADN, o el genoma

humano, consta de 3 mil millones de bases organizados en 23 pares de

cromosomas, y conteniendo alrededor de 20,000 genes.

Función

El ADN contiene las instrucciones que un organismo necesita para

desarrollarse, sobrevivir y reproducirse. Para realizar estas funciones, las

secuencias de ADN deben ser transcritas a mensajes que puedan traducirse

para la fabricación proteínas, que son las moléculas complejas que hacen la

mayor parte del trabajo en nuestro cuerpo.

Una secuencia discreta de ADN que contiene las instrucciones para elaborar

una proteína se conoce como gen. El tamaño de un gen puede variar

enormemente, desde aproximadamente 1,000 bases hasta 1 millón de bases en

los seres humanos. Los genes sólo forman aproximadamente el 1 por ciento de

la secuencia de ADN. Otras secuencias reguladoras de ADN dictan cuándo,

cómo y en qué cantidad se elabora cada proteína. La mayoría de las secuencias

del genoma humano no tienen una función conocida.

Replicación
Una vez que se comprobó que el ADN era el material hereditario y se descifró

su estructura, lo que quedaba era determinar como el ADN copiaba su

información y como la misma se expresaba en el fenotipo. Matthew Meselson

y Franklin W. Stahl diseñaron el experimento para determinar el método de

la replicación del ADN. Tres modelos de replicación era plausibles.

1. Replicación conservativa durante la cual se produciría un ADN

completamente nuevo durante la replicación.

2. En la replicación semiconservativa se originan dos moléculas de ADN, cada

una de ellas compuesta de una hebra del ADN original y de una hebra

complementaria nueva. En otras palabras, el ADN se forma de una hebra vieja

y otra nueva. Es decir que las hebras existentes sirven de molde complementario

a las nuevas.
3. La replicación dispersiva implicaría la ruptura de las hebras de origen

durante la replicación que, de alguna manera se reordenarían en una molécula

con una mezcla de fragmentos nuevos y viejos en cada hebra de ADN.

El experimento de Meselson-Stahl consiste en cultivar la bacteria Escherichia

coli en un medio que contenga nitrógeno pesado (15Nitrógeno que es mas

pesado que el isótopo mas común: el 14Nitrógeno ). La primera generación de

bacterias se hizo crecer en un medio que únicamente contenía 15Nitrógeno como

fuente de N. La bacteria se transfirió luego a un medio con 14N. Watson y Crick

habían pronosticado que la replicación del ADN era semiconservativa, de ser

así el ADN extraído de las bacterias luego de cultivarlas por una generación

en 14N tendría un peso intermedio entre el ADN extraído del medio con 15N y

el del extraído de medio con 14N y así fue.

Los detalles del experimento que incluye un proceso de ultra centrifugación en

cloruro de Cesio (CeCl2) puede encontrarse en el Curtis.

La replicación del ADN, que ocurre una sola vez en cada generación celular,

necesita de muchos "ladrillos", enzimas, y una gran cantidad de energía en

forma de ATP (recuerde que luego de la fase S del ciclo celular las células
pasan a una fase G a fin de, entre otras cosas, recuperar energía para la siguiente

fase de la división celular). La replicación del ADN en el ser humano a una

velocidad de 50 nucleótidos por segundo, en procariotas a 500/segundo. Los

nucleótidos tienen que ser armados y estar disponibles en el núcleo

conjuntamente con la energía para unirlos.

La iniciación de la replicación siempre acontece en un cierto grupo de

nucleótidos, el origen de la replicación, requiere entre otras de las

enzimas helicasas para romper los puentes hidrógeno y

las topoisomerasas para aliviar la tensión y de las proteínas de unión a

cadena simple para mantener separadas las cadenas abiertas.


Una vez que se abre la molécula, se forma un área conocida como "burbuja de

replicación" en ella se encuentran las "horquillas de replicación”. Por acción del

ADN polimerasa los nuevos nucleótidos entran en la horquilla y se enlazan con

el nucleótido correspondiente de la cadena de origen (A con T, C con G). Los

procariotas abren una sola burbuja de replicación, mientras que los eucariotas

múltiples. El ADN se replica en toda su longitud por confluencia de las

"burbujas".

Dado que las cadenas del ADN son antiparalelas, y que la replicación procede

solo en la dirección 5' to 3' en ambas cadenas, numerosos experimentos

mostraron que, una cadena formará una copia continua, mientras que en la otra

se formarán una serie de fragmentos cortos conocidos como fragmentos de

kazaka. La cadena que se sintetiza de manera continua se conoce como

cadena adelantada y, la que se sintetiza en fragmentos, cadena atrasada.

Para que trabaje el ADN polimerasa es necesario la presencia, en el inicio de

cada nuevo fragmento, de pequeñas unidades de ARN conocidas

como cebadores, a posteriori, cuando la polimerasa toca el extremo 5' de un

cebador, se activan otras enzimas, que remueven los fragmentos de ARN,

colocan nucleótidos de ADN en su lugar y, un ADN ligasa los une a la cadena

en crecimiento.
Observaciones

El producto filamentoso obtenido de la extracción no es ADN puro ya que,

entremezclado con él, hay fragmentos de ARN. Una extracción "profesional"

se realiza añadiendo enzimas que fragmentan las moléculas de ARN e

impiden que se unan al ADN.

Para realizar una extracción pura ocurrirá que el detergente contiene lauril

sulfato de sodio, el cual limpia los trastes removiendo grasas y proteínas. Éste

actúa de la misma manera en el protocolo de extracción de ADN, separando

las grasas (lípidos) y las proteínas que constituyen las membranas que rodean

la célula y el núcleo. Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es

liberado de la célula
El calor suaviza los fosfolípidos (grasas) en las membranas que rodean la

célula y el núcleo. También desactiva (desnaturaliza) a las enzimas

desoxirribonucleicas (ADN asas) las cuales, si están presentes, pueden cortar

el ADN en pedazos tan pequeños que lo haría imposible de ver. Si las enzimas

se desnaturalizan y el ADN se desenrolla, éste pierde su forma y se vuelve

inactivo. Las enzimas se desnaturalizan a 60° Celsius y el ADN se

desnaturaliza a 80° Celsius.

Los zumos de piña y papaya contienen un enzima, la papaína, la solución

ablandadora de carne también actúa como una enzima, que contribuye a

eliminar las proteínas que puedan contaminar el ADN. La solución

ablandadora de carne actúa como una enzima.

El ADN se precipita en el alcohol fuera de la solución, donde puede ser visto.

Además de permitirnos ver el ADN, el alcohol separa el ADN de otros

componentes celulares, los cuales son dejados en la solución acuosa.

El proceso de extracción de ADN desde una célula es el primer paso para

muchos procedimientos (protocolos) de los laboratorios de biotecnología.

Los científicos deben ser capaces de separar suavemente el ADN de sustancias

no deseadas que se encuentran en las células, evitando que el ADN se

desnature (que se rompa).


El material que se necesita para ello es fácil de encontrar y el procedimiento es

sencillo. Cada uno de los ingredientes tiene su propia función. La solución de

sal y jabón sirve para romper la membrana plasmática y nuclear e incluso la

pared celular. El líquido de lentillas elimina las proteínas que degradan el

ADN. El alcohol etílico sirve para precipitar el ADN.

Conclusión

Al realizar el procedimiento adecuadamente, resulta que las fibrillas de ADN

comenzaron a salir, de un color blanco precipitado por sobre el alcohol

(mezcla Heterogénea). Con un alambre doblas y obtenemos y sacamos del

tubo de ensayo el ADN. Si quieres conservar el ADN puede dejarse secar

sobre un papel de filtro.

En caso de que el ADN de la Muestra Vegetal no se pueda apreciar muy

claramente. Tenemos que agitar el tubo un poco para poderlo apreciarlo

mejor.

Si se tiene problemas con el filtro, que no está bien hecho y que no filtra bien,

por lo tanto hay que hacer otro. También puede haber complicaciones con la
forma de poner el alcohol de manera que cayera por las paredes del tubo de

ensayo.

Con esto podemos saber cómo es el procedimiento del extracto del ADN, así

como si estructura de una forma fácil y sencilla.

REFERENCIAS

http://learn.genetics.utah.edu/es/units/activities/extraction/
http://html.rincondelvago.com/extraccion-del-adn-de-una-cebolla.html
http://centros5.pntic.mec.es/ies.victoria.kent/Rincon-C/Practica/PR-5.htm
http://www.joseacortes.com/practicas/extraccionADN.htm
http://www.jpimentel.com/ciencias_experimentales/pagwebciencias/pagweb/la_ciencia_a_t
u_alcance_II/quimica/Experiencias_quimica_extraccion_de_adn.htm
http://www.bioapuntes.cl/laboratorio/extrac-adn.htm
http://www.slideshare.net/marcia_karina/extraccion-adn

ANEXOS