Академический Документы
Профессиональный Документы
Культура Документы
CENTRIFUGACIÓN Y CUANTIFICACIÓN
DE PROTEÍNAS POR ESPECTROSCOPIA
DE ABSORCIÓN MÉTODO DE BRADFORD
Integrantes
Yannis Baldu P.
Priscilla Loyola A.
Diego Meza I.
Jocelyn Vejar A.
Fecha Práctico
05/06/2019
Sección
4
Profesor
Jorge Cortés
Introducción
Las células, tanto animales como vegetales, están compuestas por organelos (estructuras
internas que cumplen importantes funciones). Estos organelos pueden ser visualizados a
través de un microscopio para estudiarlos, sin embargo, para lograr tal objetivo es necesario
aislarlos con tal de que estén en fracciones puras, lo que facilita su visualización. Para lograr
este objetivo se pueden emplear técnicas físico-químicas para aislar estos organelos con el
fin de analizarlos. Una de ellas es la centrifugación diferencial que permite separar
componentes celulares por diferencias de coeficiente de sedimentación.
Estas estructuras tienen sus propias características que las diferencian de una con la otra,
pero tienen una en común: absorber radiación electromagnética. Esta característica permite
que a través de la espectrofotometría UV-visible (técnica analítica que permite determinar la
concentración de un compuesto en solución), podamos cuantificar proteínas
(específicamente determinar concentración). Como la concentración que se estudiará y
cuantificara es muy baja, se requiere de un método que sea útil para bajas concentraciones
y el método Bradford cumple con tal especificación (rango medible de 10 a 800 µg de
proteínas).
Tabla 1
Tabla 2
blanco 0 0
1 0,1 0,043
2 0,2 0,107
3 0,3 0,154
4 0,4 0,211
5 0,5 0,050 (*)
6 0,6 0,304
7 0,7 0,338
8 0,8 0,470
Concentración de cada tubo y absorbancias a 𝜆 = 595 𝑛𝑚
(*) Absorbancia no conforme (no será considerada en construcción de recta estándar)
Gráfico
Recta Estándar
Concentración BSA v/s Absorbancia
0.5
y = 0.5449x - 0.0078
R² = 0.9811
0.4
0.3
Absorbancia
0.2
0.1
0
0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9
-0.1
Concentración BSA (mg/ml)
Recta obtenida
Y = 0,5449X - 0,0078
Relación Lineal
Tabla 3
Absorbancia de las muestras a 595 nm y las concentraciones obtenidas por relación lineal
Tabla 4
La metodología y lo aprendido nos da una clara señal que existen procedimientos reales y
factibles para lograr, a través de la investigación y aplicación, determinar las concentraciones
de lo que deseemos, aportando de manera significativa conocimiento y técnicas bioquímicas
para nuestro desempeño como futuros Ingenieros Químicos.