Manual Prácticas Bromatología p53

REVISION 2.
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MANUAL DE PROCEDIMIENTO DE PRÁCTICAS
LABORATORIO DE CIENCIAS DE LA VIDA
PERIODO 53
CARRERA INGENIERÍA EN BIOTECNOLOGÍA DE LOS RECURSOS NATURALES
SEDE QUITO-GIRON
DOCENTE PhD. ELENA COYAGO
MATERIA TOXICOLOGIA
PRÁCTICA N° 1 y 2
1) TEMA: DETERMINACIÓN DE LA CALIDAD COMERCIAL Y
MICROBIOLÓGICA DE VEGETALES, FRUTAS, HORTALIZAS Y CEREALES
2) OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Cuantificar la calidad comercial y microbiológica de vegetales, frutas, hortalizas y
cereales.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Cuantificar los parámetros de calidad comercial tales como: tamaño, peso,
humedad, cenizas, pH, sólidos solubles, acidez titulable y color.
 Cuantificar los parámetros de calidad microbiológica de vegetales, frutas u
hortalizas tales como: Coliformes totales, Escherichia coli y Mohos y
levaduras.
3) MARCO TEÓRICO
La calidad comercial de vegetales, frutas u hortalizas está compuesta por
factores morfológicos, visuales y organolépticos que conforman la calidad
comercial de un producto. La calidad comercial ha ido evolucionando en los
últimos años según las exigencias del mercado y en la actualidad los
parámetros de calidad comercial incluyen la calidad microbiológica y
nutricional, favoreciendo la salud de los consumidores (Ripoll, Urban, Brunel, &
Bertin, 2016).
Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:
Fecha de Elaboración: Fecha de Revisión: Número de Resolución Consejo de

Carrera:
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4) RECURSOS UTILIZADOS
a) CALIDAD COMERCIAL
MATERIALES
CANTIDAD
DESCRIPCIÓN POR POR GRUPO
CURSO
Crisoles 24 3
Pinzas para crisoles 2
Cajas petri 24 3
Pinzas para cajas petri 2
Vasos de precipitación 100 mL 24 3
Matraz de 100 mL 24 3
Bureta y portaburetas 8 1
REACTIVOS
CANTIDAD
DESCRIPCIÓN POR CURSO POR
GRUPO
Solución de fenoftaleína (mL) 50 mL 6 mL
Solución valorada de hidróxido de sodio 01 N 500 mL 50 mL
(mL)

Carrera:
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EQUIPOS
CANTIDAD
DESCRIPCIÓN POR CURSO POR
GRUPO
Micrómetro digital 4
Balanza analítica 2
Balanza digital capac. 2 kg 8
Medidor de humedad digital 1
Mufla 1
Estufa con recirculación de aire 1
Desecador con agente sílica gel 3
phímetro 4
Brixómetro 4
Colorímetro MINOLTA* -
*Bajo el convenio existente con la Universidad UTE, se cuantificará el color de las
muestras en un colorímetro MINOLTA portátil.
5) PROCEDIMIENTO
De acuerdo al producto seleccionado se determina la norma específica para
muestras de laboratorio, así:
NTE INEN 1750 Hortalizas y frutas frescas. Muestreo
NTE INEN 1233 1R Granos y Cereales. Muestreo
NTE INEN-ISO 542 Semillas oleaginosas. Muestreo

Carrera:
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a) Metodología calidad comercial:

 La muestra deberá ser extraída con cuidado de la tierra, para no
producir la rotura de las raíces. Medir el tamaño de las raíces y de la
planta en general. Pesar toda la planta.
 Tamaño: Se cuantificará el diámetro ecuatorial y longitud del material
vegetal seleccionado, empleando un calibrador.
 Peso: Se cuantificará el peso de cada ejemplar seleccionado,

empleando una balanza analítica previamente calibrada.
 Color: Para la determinación de color, se usará un colorímetro
Minolta con espectro visible entre 380 a 770 nm. Los parámetros de
color corresponderán al espacio CIELAB, un iluminante D 65 y un
ángulo de observación de 10º.
 pH: Empleando un mortero se triturará la muestra hasta obtener una
pasta homogénea. Para la cuantificación de pH se mezclará en
partes iguales 10 g de la pasta y 10 g de agua, se mezclará

Carrera:
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completamente y se determinará el pH (NTE INEN-ISO 1842:2013:

Productos vegetales y de frutas-Determinación de pH).
 Sólidos solubles: Empleando un gota del material triturado para la
determinación de pH, se colocará sobre el lente del brixómetro
previamente calibrado con agua y se determinará los ºBrix
respectivos.
 Acidez titulable-Método volumétrico: Mezclar 10 g del material
triturado con 20 g de agua, adicionar 2 o 3 gotas de fenoftaleína y
titular con la solución de NaOH 0,1 N a un pH= 8.2 (momento en que
ocurre el cambio de color del indicador). En el caso de productos de
color rojo u otro que no permite ver el viraje, utilice un pHmetro. La
acidez puede calcularse con la siguiente ecuación:
% acidez= mL NaOH * NNaOH* meq. Ácido* factor dilución*100
g o vol jugo* mL muestra titulada
Utilice el valor del miliequivalente del ácido orgánico predominante en el
producto.
Àcido Peso miliequivalente
Cítrico 0,064
Málico 0,067
Tartárico 0,075
 Humedad-Procedimiento 1:
o Llevar las cajas petri a la estufa a 100 o 125 °C por 1 hora.

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o Retirar las cajas de la estufa con ayuda de una pinza y colocarlos en

un desecador por 1 hora y el material está listo para ser usado.
o Trocear en pedazos pequeños la muestra
o Pesar aproximadamente 2 g de muestra
o Con las tapas removidas, secar hasta peso constante en una estufa
de recirculación de aire a 70°C y un flujo de aire de 2 a 4.
o Cubrir las cajas petri con la respectiva tapa, llevar al desecador por 1
hora y pesar.
o Anotar los pesos y calcular la pérdida de peso.
CÁLCULOS
P2  P3
% Humedad  *100 Donde: P1 = Peso de la caja petri vacía
P2  P1
P2 = Peso de la caja petri + muestra

fresca
P3 = Peso de la caja petri + muestra seca
 Humedad-Procedimiento 2: Triturar una pequeña fracción de muestra y

colocar sobre el plato metálico del medidor digital de humedad, previamente
tarado. Esperar unos minutos y registrar el valor de humedad reportado.
 Cenizas:
a) Colocar los crisoles bien identificados, con lápiz, en la mufla y
tarar a 550 ºC por 1 hora.

Carrera:
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b) Sacar los crisoles en un desecador y esperar 10 min hasta que se

enfríen.
c) Pesar entre 3 a 5 g de muestra previamente triturada en el crisol
tarado. Anotar los pesos del crisol vacío y del crisol más muestra.
d) Colocar en la plancha de calentamiento dentro de una sorbona y
calentar la muestra lentamente hasta que se carbonice.
e) Con ayuda de una pinza, colocar el crisol con la muestra
carbonizada en la mufla a 550 ºC hasta que se observe ceniza
gris claro, o hasta peso constante. Enfriar en el desecador y
pesar tan pronto alcance la temperatura ambiente.
CÁLCULOS
% Cenizas= (P3 – P1)*100
P2-P1 Donde: P3 – P1 = g de cenizas (peso constante)
P2 - P1 = g de muestra
b) CALIDAD MICROBIOLÓGICA: (Se empleará el Manual de

Procedimientos de la Docente Gabriela Méndez)
1. Recuento Total (Aerobios mesófilos) en agua contaminada

MATERIALES
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Fundas de muestreo estériles 8 1
Cucharas estériles 8 1
Frasco boeco con 90 mL de agua de peptona 0,1% 8 1

Carrera:
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Gradilla 8 1
Tubos con 9 mL de agua peptonada 0,1% 32 4
Micropipetas 1000ul 5 1
Cajas llenas con puntas plasticas 1000ul 5 1
Placas de recuento rápido para recuento total 16 2
(aerobios totales)
Cajas de fósforos 2
Tijeras estériles 5 1
Aplicador para placas Petrifilm 5 1
REACTIVOS
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Alcohol al 97% Para aspersores y vasos de precipitación Para aspersores y
para asas. vasos de precipitación
para asas.
Agua peptonada 0,1% Para tubos y frascos boeco Para tubos y frascos
boeco
EQUIPOS
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Incubadora a 37C 1
Balanzas 5 1
PROCEDIMIENTO
Preparación diluciones
a) De manera aséptica con instrumentos estériles y junto al mechero, pesar 10 gramos de
la muestra en una funda estéril y resuspender en 90 ml de agua peptonada.
Homogenizar la muestra. De esta manera se ha preparado la primera dilución 1/10 ó
10-1.

Carrera:
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b) La dilución 10-2 resulta de transferir 1 ml de la dilución anterior a 9 ml de agua

peptonada y así sucesivamente hasta la dilución 10-4.
c) Sembrar cada dilución utilizando el método de siembra correspondiente.
Figura 1Preparación de diluciones

Fuente: Leboffe.J y Pierce.E., 2011.
Método de conteo rápido con placas Compact Dry (Nissui) o Petrifilm.

a) Rotular las placas para conteo rápido en el borde inferior (dilución, grupo, fecha).
b) Colocar con ayuda de una micropipeta 1 ml (1000 µl) de cada dilución en el centro de
la placa.
c) Tapar la placa y dejar reposar por 5 minutos.
d) En el caso de las placas de Coliformes, las colonias azules verdosas corresponden a
coliformes.

Carrera:
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MATERIA TOXICOLOGIA
Figura 2 Siembra en placas Petrifilm

Fuente: 3M petrifilm, 2016.
Figura 3 Siembra en placas Compact Dry (Nissui)

Fuente: HyServe, 2016.
Recuento de colonias
a) Efectuar los contajes respectivos a las 24 y 48 horas.
b) Elegir las placas cuyos contajes se encuentren entre 25 y 250 ufc y seguir la guía para
recuento microbiano.
c) Expresar los resultados como UFC/gramo ó ml de muestra aplicando la siguiente
ecuación:
𝑈𝐹𝐶 # 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑝𝑙𝑎𝑐𝑎 𝑥 𝑒𝑙 𝑖𝑛𝑣𝑒𝑟𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑜𝑟𝑖𝑔𝑖𝑛𝑎𝑙
=
𝑔 𝑜 𝑚𝐿 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑖𝑛𝑜𝑐𝑢𝑙𝑎𝑑𝑎 𝑒𝑛 𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 (𝑚𝐿) ∗

Carrera:
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MATERIA TOXICOLOGIA
*0,1 mL cuando se utiliza extensión en placa y 1 mL en placas Compact Dry o

Petrifilm.
Los recuentos debe ser reproducibles es decir no debe existir un error mayor al 5% entre
duplicados.
El resultado se calculará tomando la de los resultados de cada dilución y no debe existir un
error mayor al 10% entre diluciones.
Ejemplo de recuento total
Ejemplo de cálculo: 135*102=13500=1,35*104
Resultado final del recuento: Para expresar el resultado final se debe sacar una media de las ufc/g ó
ml calculada para cada dilución. En este caso tenemos tres datos:
1) 1.35 x 104
2) 1.25 x 104
3) 5 x 103
Al observar estos resultados podemos darnos cuenta que los valores A y B son parecidos (error <
10%) y el valor C tiene un error mayor comparado con los valores A y B. El resultado C, al
provenir de la dilución 10-4, la justificación podría ser que la probabilidad de acumular errores en la
elaboración de esta dilución es mayor. En este caso se puede eliminar el resultado discrepante y se
calcula la media entre las otras diluciones. Ufc/ml = (1.35 x 104 + 1.25 x 104)/2 Ufc/ml = 1.3 x 104.
Recuento total: 1.3 x 104 UFC/mL

Carrera:
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2. Métodos de recuento de Coliformes y E.coli

MATERIALES
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Tubos de ensayo con 9ml de agua peptonada al 24 3
0,1%.
Placas Petrifilm de coliformes y E.coli 16 2
Tubos con 10 mL del caldo Lauril Sulfato Lactosa 72 9
(MUG) de concentración simple y tubos Durham.
Gradilla 8 1
Cajas llenas con puntas plásticas 1000ul 5 1
Aspersores con alcohol 3
Caja de AN con cepa de E.coli 1
Tubos con 10 mL del caldo Lauril Sulfato Lactosa 2
(MUG) concentración simple y tubos Durham.
Aspersores con alcohol 3
REACTIVOS
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Agua peptonada al 0,1% Para los tubos de Para los tubos de
ensayo. ensayo.
Solución salina 0,9% Para llenar los 5 goteros.
Cristal Violeta Gram
Yodo Gram o Lugol
Solución de alcohol cetona
Gram (30ml acetona 70ml
alcohol)
Safranina gram

Carrera:
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MATERIA TOXICOLOGIA
EQUIPOS
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Incubadora a 35±2C 1
Lámpara UV 1
Contador de colonias (para lectura de resultados) 1
PROCEDIMIENTO
Preparación de la muestra
Para tomar la muestra se necesitará un frasco estéril (Frasco de recolección de orina). La
muestra deberá ser tomada máximo 24 horas antes del análisis y mantenida en refrigeración
hasta la hora de la práctica.
 Preparar un set de diluciones de 10-1 a 10-3.
 Sembrar por duplicado cada dilución en una placa petrifilm.
 Incubar a 35±2ºC por 24 horas y verificar los resultados a las 48 horas.

Método del número más probable:

1. Transferir 1 ml de la muestra directa y de las diluciones (10-1 y 10-2) a 3 tubos que
contienen 10 ml de medio Lauryl Sulfato Lactosa (MUG) para la detección de E. coli y
Coliformes.
2. Incubar a 37ºC por 24 horas.

Carrera:
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MATERIA TOXICOLOGIA
3. La presencia de Coliformes se manifiesta con la formación de gas en el interior de los

tubos de Durham y turbidez del medio.
4. Indicar los tubos positivos de cada dilución
5. Para la detección de E. coli, todos los tubos positivos para la presencia de Coliformes se
deben iluminar bajo luz UV para observar la fluorescencia producida por la acción de la
enzima β glucoronidasa.
6. Sembrar por agotamiento en medio EMB agar (Eosin Methylene Blue).
7. Calcular el NMP/ml para Coliformes y E. coli de acuerdo a la siguiente tabla:

Carrera:
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MATERIA TOXICOLOGIA
3. Recuento de mohos y levaduras.
MATERIALES
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Fundas de muestreo estériles 8 1
Cucharas estériles 8 1
Frasco boeco con 90mL de agua de peptona 0,1% 8 1
Gradilla 8 1
Tubos con 9ml de agua peptonada 0,1% 32 4
Cajas llenas con puntas plasticas 1000ul 5 1
Placas de recuento rápido para mohos y levaduras 16 2
Tijeras estériles 5 1
Aplicador para placas Petrifilm 8 1
Parafilm 1
REACTIVOS
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Alcohol al 97% Para aspersores y vasos de Para aspersores y vasos de
precipitación para asas. precipitación para asas.
Agua peptonada 0,1% Para tubos y frascos boeco Para tubos y frascos boeco
EQUIPOS
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Incubadora a 25C 1
Balanzas 5 1
PROCEDIMIENTO
Preparación diluciones

Carrera:
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SEDE QUITO-GIRON
MATERIA TOXICOLOGIA
a) De manera aséptica con instrumentos estériles y junto al mechero, pesar 10 gramos de

la muestra en una funda estéril y resuspender en 90 ml de agua peptonada.
Homogenizar la muestra. De esta manera se ha preparado la primera dilución 1/10 ó
10-1.
b) La dilución 10-2 resulta de transferir 1 ml de la dilución anterior a 9 ml de agua
peptonada y así sucesivamente hasta la dilución 10-4.
c) Sembrar cada dilución utilizando el método de siembra correspondiente.
Figura 5Preparación de diluciones

Fuente: Leboffe.J y Pierce.E., 2011.
Método de conteo rápido con placas Compact Dry (Nissui) o Petrifilm.

a) Rotular las placas para conteo rápido en el borde inferior (dilución, grupo, fecha).
b) Colocar con ayuda de una micropipeta 1 ml (1000 µl) de cada dilución en el centro de
la placa.
c) Tapar la placa y dejar reposar por 5 minutos.
Incubación
Colocar las cajas Petri y las placas de contaje rápido en la incubadora a 25°C, y revisar
resultados a los 3-5d.

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
MATERIA TOXICOLOGIA
En la revisión de resultados se debe realizar la tinción gram de dos hongos predominantes

en la caja Petri.

Figura 7 Siembra en placas Compact Dry (Nissui)

Fuente: HyServe, 2016.
Recuento de colonias
d) Efectuar los contajes respectivos a las 24 y 48 horas.
e) Elegir las placas cuyos contajes se encuentren entre 25 y 250 ufc y seguir la guía para
recuento microbiano.

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
MATERIA TOXICOLOGIA
f) Expresar los resultados como UFC/gramo ó ml de muestra aplicando la siguiente

ecuación:
𝑈𝑝𝑚𝑙 # 𝑑𝑒 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎𝑠 𝑒𝑛 𝑙𝑎 𝑝𝑙𝑎𝑐𝑎 𝑥 𝑒𝑙 𝑖𝑛𝑣𝑒𝑟𝑠𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑑𝑖𝑙𝑢𝑐𝑖ó𝑛 𝑜𝑟𝑖𝑔𝑖𝑛𝑎𝑙
=
𝑔 𝑜 𝑚𝐿 𝑉𝑜𝑙𝑢𝑚𝑒𝑛 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 𝑖𝑛𝑜𝑐𝑢𝑙𝑎𝑑𝑎 𝑒𝑛 𝑒𝑙 𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 (𝑚𝐿) ∗
*0,1 mL cuando se utiliza extensión en placa y 1 mL en placas Compact Dry o
Petrifilm.
Los recuentos debe ser reproducibles es decir no debe existir un error mayor al 5% entre
duplicados.
El resultado se calculará tomando la de los resultados de cada dilución y no debe existir un
error mayor al 10% entre diluciones.
BIBLIOGRAFÍA
 3M (2016). Guía de interpretación. Placas Petrifilm para el recuento de mohos y
levaduras.
 HyServe (2016). Compact Dry. Alemania.
 Izurieta, N. (2001). Manual de laboratorio.
 Leboffe.J y Pierce.E. (2011). A photographic Atlas for the Microbiology
Laboratory. 4th edition. MORTON. USA.
 Prescott, Lansing M. Harley, John P. Klein, Donald A. (2009). Microbiología. Mc
Graw Hill Interamericana. Madrid. España.
 Madigan M., Martinko, J. Parker J. (2007). Brock Biología de los Microorganismos.
ISBN: 84-486-0261-7. Pentice-Hall. Madrid. España.

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
MATERIA BROMATOLOGÍA
6) REGISTRO DE RESULTADOS
Esta plantilla deberá ser entregada por cada grupo al finalizar la práctica, con
la firma de los integrantes que asistieron a la ejecución de la misma. Además la
plantilla en Excel con los datos y los cálculos realizados deberá cargar al AVAC
conjuntamente con el respectivo informe.
Muestra # 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Ø ecuatorial
(mm)
Ø longitudinal
(mm)
Peso (g)
L*
a*
b*
C*ab
hab
pH
Sólidos
solubles
(ºBrix)
Acides

Carrera:
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SEDE QUITO-GIRON
Titulable
NaOH (mL)
Peso caja Petri
vacía (g)
Peso
CP+muestra
fresca (g)
Peso
CP+muestra
seca (g)
% Humedad
Peso crisol (g)
Peso
crisol+muestra
fresca (g)
Peso
crisol+muestra
seca (g)
ESTRUCTURA DEL INFORME:

Tema
1. Introducción (Revisión bibliográfica referente a la práctica de laboratorio

Carrera:
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SEDE QUITO-GIRON
2. Metodología (pasos realizados para la ejecución de la práctica)

3. Resultados (presentación en tabla de los resultados obtenidos)
4. Discusión de resultados (discutir el porqué de los resultados obtenidos,
acompañado de resultados encontrados en otros estudios)
5. Conclusión
6. Bibliografía (20 será el número mínimo de referencias bibliográficas, las
cuales deberán ser en inglés (20% permitido en español). El artículo en
mención deberá ser descargado en pdf, en el cual constará subrayada la
parte importante que seleccionó para referenciar en su artículo y los cuales
deberán estar colocados en una carpeta llamada bibliografía).
7. DOCUMENTOS A ENTREGAR EN EL AVAC:
En una carpeta zip, colocar la siguiente información:
Documento Código
Informe word Nombre del vegetal-Grupo-P1
Plantilla cálculos excel Nombre del vegetal-Grupo-P1
Carpeta bibliografía Nombre del vegetal-Grupo-P1
EL INFORME SERÁ ENTREGADO EN EL AVAC DOS SEMANAS

DEPUÉS DE FINALIZAR LA PRÁCTICA.
REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
 Hess, J., Official Method 950.46 (39.1.02), in Official Methods of

Analysis of AOAC INTERNATIONAL, W. Horwitz, Editor. 2000,
AOAC INTERNATIONAL: Gaithersburg, MD, USA.
 Rodríguez, B., Análisis de alimentos. 1980, Caracas: Universidad
Central de Venezuela. p. 18.
 AOAC Official Method 999.10 (2000), Chapter 9, p.16-22.
 3M (2016). Guía de interpretación. Placas Petrifilm para el recuento
de aerobios.
 HyServe (2016). Compact Dry. Alemania.
 Izurieta, N. (2001). Manual de laboratorio.
 Leboffe.J y Pierce.E. (2011). A photographic Atlas for the
Microbiology Laboratory. 4th edition. MORTON. USA.
 Prescott, Lansing M. Harley, John P. Klein, Donald A. (2009).
Microbiología. Mc Graw Hill Interamericana. Madrid. España.
 Madigan M., Martinko, J. Parker J. (2007). Brock Biología de los
Microorganismos. ISBN: 84-486-0261-7. Pentice-Hall. Madrid.
España.
 3M (2016). Guía de interpretación. Placas Petrifilm para Coliformes.
 3M (2016). Guía de interpretación. Placas Petrifilm para el recuento
de mohos y levaduras.
 HyServe (2016). Compact Dry. Alemania.
 Izurieta, N. (2001). Manual de laboratorio.
 Prescott, Lansing M. Harley, John P. Klein, Donald A. (2009).
Microbiología. Mc Graw Hill Interamericana. Madrid. España.
 Madigan M., Martinko, J. Parker J. (2007). Brock Biología de los
Microorganismos. ISBN: 84-486-0261-7. Pentice-Hall. Madrid.
España.

Carrera:
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SEDE QUITO-GIRON
PRÁCTICA N° 3
1) TEMA: DETERMINACIÓN DE VITAMINA C Y COMPUESTOS FENÓLICOS

DE MUESTRAS DE FRUTAS, VEGETALES, HORTALIZAS O CEREALES
2) OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Cuantificar la vitamina C y compuestos fenólicos
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Cuantificar vitamina C en muestras de frutas, vegetales, hortalizas o cereales
3) MARCO TEÓRICO
La actividad de la vitamina C es debida al ácido L-ascórbico y la oxidación de
productos de ácido L-hidro ascórbico. El ácido hidro ascórbico es inestable y es
convertido rápidamente en ácido dicetoglucónico que no posee la actividad de
vitamina C. El ácido hidroascórbico es fácilmente reducido a ácido ascórbico
por el uso de agentes como el ácido sulfúrico y la homocisteína. El ácido D-
ascórbico (ácido isoascórbico, ácido eritórbico) tiene una actividad alrededor de
20 veces menor que la del ácido L-ascórbico. Esto no ocurre en productos
naturales pero algunas veces es adicionado a alimentos como un antioxidante.
La vitamina C cuando se encuentra aislada de la matriz que la protege es
sensible al calor, álcali, oxígeno y a la luz. Por otra parte, los compuestos
fenólicos son compuestos bioactivos que presentan características funcionales
y que han generado gran interés, que al igual que los carotenoides son

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
productos del metabolismo secundario de la planta, tanto en condiciones

normales como de estrés, tales como temperaturas extremas, radiación UV,
polución o por la actividad de parásitos. Los compuestos fenólicos según la
solubilidad se clasifican en extraíbles (FE) y no extraíbles (FNE). Los FE se
caracterizan por presentar solubilidad en disolventes acuoso-orgánicos; así, en
este grupo se encuentran los ácidos fenólicos, flavonoides, estilbenos,
proantocianidinas extraíbles y taninos hidrolizados; por otra parte, los
compuestos fenólicos no extraíbles son los compuestos que se quedan
retenidos junto a la matriz tras la extracción y en este grupo se encuentran las
proantocianidinas no extraíbles o taninos condensados y compuestos fenólicos
hidrolizables.
4) RECURSOS UTILIZADOS
MATERIALES
CANTIDAD
CURSO
Columna LiChrospher 100 RP18, 5 um, 250mm- 1 1
4mm
Matraz de 50 mL 49 6
Matraz de 10 mL 8
Matraz de 5 mL 8
Matraz de 25 mL 8

Carrera:
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SEDE QUITO-GIRON
CANTIDAD
CURSO
Matraz de 500 mL 3
Matraz de 1000 mL 1
Probeta de 50 mL 8 1
Kitasato 100 mL 1
Filtro fase (membrana millipore) 3
Jeringas de plástico 3 mL 32 4
Micropipeta 1000 uL 3
Filtro de 0,45 um para HPLC (14 mm de diámetro) 32 4
Filtros de 0,45 um para HPLC (25 mm de 32 4
diámetro)
Falcon de 10 mL 32 4
Gradilla para tubos falcon 2
Falcon de 50 mL 32 4
REACTIVOS
CANTIDAD
DESCRIPCIÓN
POR CURSO POR GRUPO
Metanol grado HPLC (mL) 200 0

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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
CANTIDAD
DESCRIPCIÓN
POR CURSO POR GRUPO
Estándar de ácido ascórbico (mg) 30 0
Homocisteína (mg) 500 0
Acido meta fosfórico (g) 60 0
KH2PO4 (g) 30 0
N-cetyl; N,N,N- 4 0
trimetrhylammonium bromide (g)
Metanol grado analítico (mL) 900 0
Agua desionizada (mL) 400 0
Acido clorhídrico (mL) 5 0
Acido fórmico (mL) 1
Acetonitrilo grado HPLC (mL) 1000 0
EQUIPOS
CANTIDAD
DESCRIPCIÓN
POR CURSO POR GRUPO
Balanza analítica 2
Ultrasonido 1
Centrífuga 1
Vortex 1
Cronómetro 3

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
CANTIDAD
DESCRIPCIÓN
POR CURSO POR GRUPO
Cromatógrafo (HPLC) 1
Detector ultravioleta 1
5) PROCEDIMIENTO
a) Cuantificación de vitamina C
Preparación de la fase móvil
Filtrar por una membrana de 0.45 µm la solución de KH 2PO4 y N-cetyl, N,N,N-
trimethylammonium bromide por separado. Una vez filtradas las soluciones
mezclar sin agitar para no generar espuma. Dejar reposar la fase móvil hasta
que no haya burbujas. No desgasificar.
Preparación de los estándares

Pesar 5 mg de ácido ascórbico en un matraz de 50 mL y añadir 5 mL de
homocisteína al 0.2%. Aforar con ácido meta- fosfórico 3%.
Hacer diluciones de 1/3, 1/5, 1/10 filtrar por una membrana de 0.45 µm e
inyectar en el HPLC inmediatamente.
Preparación de la muestra
a) Pesar la cantidad de muestra en un matraz de 50 mL (no pesar más
de 5 g)
b) Añadir 30 mL de ácido meta- fosfórico al 3% y 5 mL de homocisteía
al 0.2%.
c) Agitar en el baño de ultrasonido por 15 minutos.

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
d) Aforar a 50 mL con agua y centrifugar a 6000rpm y 4ºC.

e) Filtrar la solución por una membrana de 0.45 µm e inyectar en el
HPLC.
CÁLCULOS Y EVALUACIÓN DE RESULTADOS:

Para hallar la concentración de una muestra, se debe:

Curva de calibración: Realizar la curva de calibración graficando en el eje
X la concentración y en el eje Y el área del estándar la cual se ajusta a una
ecuación lineal :
A = a (C) + b
Donde:
A= área del estándar
C= concentración del estándar
a= pendiente de la recta
b= corte con el eje Y
b) Cuantificación de compuestos fenólicos
Aproximadamente entre 2 a 5 g de muestra triturada en mortero se someterá a

extracción con 15 mL de una solución de metanol:agua (75:25) acidificada con 0.1
% de HCl.
La mezcla se agitará en un vortex y luego en un baño de ultrasonido durante 15
min con el fin de mejorar la extracción.
Los sólidos serán separados por centrifugación a 4000 x g durante 7 min a 4 ºC.
El extracto metanólico será separado y recolectado.

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
Los sólidos serán nuevamente extraídos con 5 mL de solución metanólica. La

mezcla se agitó en un vortex, luego en un baño de ultrasonido durante 7 min y se
centrifugó para separar los sólidos. Este proceso fue repetido una vez más.
El extracto metanólico fue filtrado con filtros de nylon de 13 mm × 0.45 um y
almacenados a -20 ºC hasta su cuantificación por cromatografía líquida.
CÁLCULOS Y EVALUACIÓN DE RESULTADOS:
Para hallar la concentración de una muestra, se debe:
Curva de calibración: Realizar la curva de calibración graficando en el eje

X la concentración y en el eje Y el área del estándar la cual se ajusta a una
ecuación lineal :
A = a (C) + b
Donde:
A= área del estándar
C= concentración del estándar
a= pendiente de la recta
b= corte con el eje Y

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
6) REGISTRO DE RESULTADOS
Muestra # 1 2 3 4 5 6 7 8 9
Vitamina C
Peso muestra (g)
Volumen de aforo
(mL)
Dilución
Compuestos fenólicos
Peso muestra (g)
Volumen de aforo
(mL)
Dilución
ANEXOS
REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
 AOAC (2000). Official methods of analysis (17th edn), Association of Official
Analytical Chemists, Washington, DC. 925.10-32.1.03

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
PRÁCTICA N° 4
TEMA: ANÁLISIS DE MINERALES EN FRUTAS, VEGETALES Y HORTALIZAS

SECAS POR ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN ATÓMICA, PREVIA
DIGESTIÓN POR MICROONDAS
OBJETIVO GENERAL:
Cuantificar minerales en varios productos vegetales utilizando la técnica de Absorción
atómica
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
Cuantificar minerales
MARCO TEÓRICO
Espectrometría de absorción atómica por llama.
La espectroscopia de absorción atómica de llama es la forma más utilizada de la

espectroscopia atómica, por medio de esta, muchos iones metálicos pueden determinarse
fácilmente en niveles de mg/Kg (ppm).
En la práctica, la técnica se basa en una fuente de átomos elementales o iones que están
electrónicamente excitados por la luz monocromática, la absorción que se produce se mide
por el instrumento.

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
El suministro de una fuente de átomos en forma elemental (o iónico elemental), está

determinado por un nebulizador, junto con una llama de aire/acetileno, la primera etapa es
la formación de un aerosol de micro-gotas de la solución del analito por medio del
nebulizador, en este proceso, una bomba peristáltica pasa por un suministro continuo de la
solución del analito en la trayectoria de un chorro de aire comprimido para producir una
fina niebla de gotas diminutas y el aerosol se dirige en una larga y delgada llama de aire /
acetileno para dar lugar a la atomización del analito.
Los gases de combustión se mezclan antes de la combustión, la llama está dirigida por una
rendija de chorro gas de aproximadamente 10 cm de longitud y 2-3 mm de ancho, el
acetileno se quema para proporcionar una temperatura de alrededor de 2000 °C a 2200 ºC,
si se requieren temperaturas más altas, las mezclas de gases de combustible acetileno
/óxido nitroso puede ser utilizadas. El acetileno y el aire de la espectroscopia atómica de
llama se mezclan antes de pasar a través del flujo de gas y es en este punto donde la mezcla
de estos se enciende y para los gases de escape se coloca una campana de extracción
directamente encima de la chimenea de salida del espectrofotómetro como muestra la
Figura 1 (Oxford University, 2004).

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
Figura 1. Esquema de la llama del espectrómetro de absorción atómica
Las gotas finas del disolvente en la sustancia analizada (que es casi siempre agua) se
evapora muy rápidamente a estas temperaturas. La sal del metal, a su vez se evapora y este
se reduce en las altas temperaturas dentro de la llama para completar el proceso de
atomización, la llama tiene una forma que permite que la radiación incidente pase a través
de un suministro continuo de la muestra atomizada. Un detector (que es normalmente un
tubo fotomultiplicador) puede controlar la intensidad de la radiación y por lo tanto la
absorción.

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
RECURSOS UTILIZADOS
MATERIALES
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Digestores de teflón 3 2
Matraz de 25 mL 9 3
Matraz de 50 mL 9 3
Pipetas volumétricas 5 mL 6 2
Espátula 3 1
Mortero 3 1
Piceta de plástico 3 3
REACTIVOS
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Lámpara de Hierro 1 0
Lámpara de Calcio 1 0
Lámpara Potasio 1 0

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
Lámpara de Zinc 1 0
Agua destilada (L) 10 3
Agua desionizada  14 M.cm. (L) 10 3
Ácido nítrico 65% (mL) 330 110
Ácido sulfúrico 98% (mL) 15 5
Solución de estándar de metal (mL) 3 1
Estándar de Fe 3 1
Estándar de Ca 3 1
Estándar de K 3 1
Estándar de Zn 3 1
Acetona (mL) 50 1
Filtros de 0,45 um 15 1
EQUIPOS
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Espectrofotómetro de absorción atómica 1 0
Tamiz malla 60 1 0
Microondas 1 0
PROCEDIMIENTO

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
1. LAVADO DE MATERIAL
A) Material de vidrio
Lavar primero con agua y detergente. Enjuagar con agua de la llave, seguido por
agua desionizada y luego con la solución de ácido nítrico al 65%. Finalmente
enjuagar 4 o 5 veces con agua desionizada y dejar secar el material.
B) Material de teflón
Lavar con agua y detergente. Enjuagar primero con acetona y luego con agua
desionizada. Mantener los digestores cubiertos con ácido nítrico 0.1M al menos
30 minutos. Enjuagar con agua desionizada y dejar secar.
2. PRE-TRATAMIENTO DE LA MUESTRA
Si el producto son granos secos, se realiza la molienda hasta obtener partículas que
pasen por malla 60 mesh. Si el producto es fruta, vegetales, hojas se realiza un
secado en estufa hasta peso constante o se liofiliza y luego se muele en mortero.
3. Digestión microondas
Pesar aproximadamente 250 mg de muestra seca directamente en el digestor.
Añadir 1,5 mL de ácido nítrico concentrado y 1,5 mL de ácido sulfúrico
concentrado. Cerrar el digestor, introducir en el horno microondas y digerir la
muestra por un minuto.
De igual forma, se prepara en un digestor un blanco que contiene la misma cantidad
de reactivos pero sin muestra. Terminada la digestión, dejar enfriar el digestor en

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
agua fría por lo menos 20 minutos y abrir cuidadosamente, trasvasar el líquido a un

matraz de 25 mL y aforar con agua desionizada.
4. Medición por espectrofotometría de absorción atómica
Seguir el instructivo de uso del equipo y esperar aproximadamente 10 minutos hasta
que se estabilice, verificando que las longitudes de onda y energía máxima sean las
correspondientes para el elemento seleccionado.
Previo a la lectura en el espectrofotómetro se preparan las respectivas curvas de
calibración a partir de la solución patrón inicial las cuales deberán cubrir el rango
lineal del equipo.
La preparación del set de estándares debe realizarse en el día del análisis; la
aceptación de la curva de calibración se la realiza con el criterio de que el
coeficiente de correlación de dicha curva tenga un valor de 0,99.
La técnica de flama es empleada para determinar la concentración de metales. Se
setea la lámpara. Se enciende el quemador y se deja que se estabilice por 10 min.
Seguidamente se encera usando el blanco de reactivos que corresponde a agua
desionizada y se mide la absrobancia de cada una de las soluciones estándar, de
manera similar, se mide la absorbancia de la muestra cuya concentración es
desconocida, la muestra de control de calidad y el blanco de reactivos. Con el
objetivo de verificar el buen funcionamiento del espectrofotómetro se intercala la
lectura de una solución estándar. En caso de que la muestra tenga alta concentración
del metal a analizar se procede a diluir.

Carrera:
Página 1 de
REVISION 2.0
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
REGISTRO DE RESULTADOS ESPERADOS
Con los resultados obtenidos se procede a calcular la concentración del elemento (C) en
la muestra de acuerdo a la siguiente ecuación:
C 
Cf  Cb x Fd x 25
M
Donde: C = Concentración del elemento en la muestra (Base Seca) (mg.kg-1)
Cf = Concentración del elemento medida en el equipo (mg.L-1)
Cb = Concentración del blanco (mg.L-1)
Fd = Factor de dilución
M = masa de la muestra seca
Si la muestra fue secada y el resultado debe ser reportado en base húmeda, se utiliza
la siguiente corrección:

Carrera:
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39
PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
C x 100  %Humedad 
C BH 
100
Donde: CBH = Concentración del elemento en la muestra (Base Húmeda)

(mg.kg-1)
% Humedad = contenido de humedad de la muestra (g agua en 100 g
de muestra)
ANEXOS.
NA
BIBLIOGRAFÍA

Carrera:
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40
PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
PRACTICA N° 3a
TEMA: ANÁLISIS DE METALES PESADOS EN FRUTAS, VEGETALES Y

HORTALIZAS SECAS POR ESPECTROFOTOMETRÍA DE ABSORCIÓN
ATÓMICA, PREVIA DIGESTIÓN POR MICROONDAS
OBJETIVO GENERAL:
Cuantificar minerales en varios productos vegetales utilizando la técnica de Absorción
atómica
OBJETIVOS ESPECIFICOS:
Cuantificar minerales
MARCO TEÓRICO
Espectrometría de absorción atómica por llama.
La espectroscopia de absorción atómica de llama es la forma más utilizada de la

espectroscopia atómica, por medio de esta, muchos iones metálicos pueden determinarse
fácilmente en niveles de mg/Kg (ppm).
En la práctica, la técnica se basa en una fuente de átomos elementales o iones que están
electrónicamente excitados por la luz monocromática, la absorción que se produce se mide
por el instrumento.

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
El suministro de una fuente de átomos en forma elemental (o iónico elemental), está

determinado por un nebulizador, junto con una llama de aire/acetileno, la primera etapa es
la formación de un aerosol de micro-gotas de la solución del analito por medio del
nebulizador, en este proceso, una bomba peristáltica pasa por un suministro continuo de la
solución del analito en la trayectoria de un chorro de aire comprimido para producir una
fina niebla de gotas diminutas y el aerosol se dirige en una larga y delgada llama de aire /
acetileno para dar lugar a la atomización del analito.
Los gases de combustión se mezclan antes de la combustión, la llama está dirigida por una
rendija de chorro gas de aproximadamente 10 cm de longitud y 2-3 mm de ancho, el
acetileno se quema para proporcionar una temperatura de alrededor de 2000 °C a 2200 ºC,
si se requieren temperaturas más altas, las mezclas de gases de combustible acetileno
/óxido nitroso puede ser utilizadas. El acetileno y el aire de la espectroscopia atómica de
llama se mezclan antes de pasar a través del flujo de gas y es en este punto donde la mezcla
de estos se enciende y para los gases de escape se coloca una campana de extracción
directamente encima de la chimenea de salida del espectrofotómetro como muestra la
Figura 1 (Oxford University, 2004).

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
Figura 1. Esquema de la llama del espectrómetro de absorción atómica
Las gotas finas del disolvente en la sustancia analizada (que es casi siempre agua) se
evapora muy rápidamente a estas temperaturas. La sal del metal, a su vez se evapora y este
se reduce en las altas temperaturas dentro de la llama para completar el proceso de
atomización, la llama tiene una forma que permite que la radiación incidente pase a través
de un suministro continuo de la muestra atomizada. Un detector (que es normalmente un
tubo fotomultiplicador) puede controlar la intensidad de la radiación y por lo tanto la
absorción.

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
RECURSOS UTILIZADOS
MATERIALES
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Matraz de 25 mL 9 3
Matraz de 50 mL 9 3
Espátula 3 1
Mortero 3 1
Piceta de plástico 3 3
REACTIVOS
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Lámpara de Fe 1 0
Agua destilada (L) 10 3
Agua desionizada  14 M.cm. (L) 10 3

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
Filtros de 0, 45 um de poro 20 3
Ácido nítrico 65% (mL) 330 110
Lámpara de Cr 1 0
Lámpara de Pb 1 0
Lámpara de Ni 1 0
Lámpara de Hg 1 0
Lámpara de Cu 1 0
Ácido sulfúrico 98% (mL) 15 5
Solución de estándar de Fe (mL) 3 1
Acetona (mL) 50 1
Solución de estándar de Cr (mL) 3 1
Solución de estándar de Pb (mL) 3 1
Solución de estándar de Ni (mL) 3 1
Solución de estándar de Hg (mL) 3 1
Solución de estándar de Cu (mL) 3 1
EQUIPOS
CANTIDAD
DESCRIPCION
POR CURSO POR GRUPO
Espectrofotómetro de absorción atómica 1 0

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
Tamiz malla 60 1 0
Microondas 1 0
PROCEDIMIENTO
5. LAVADO DE MATERIAL
C) Material de vidrio
Lavar primero con agua y detergente. Enjuagar con agua de la llave, seguido por
agua desionizada y luego con la solución de ácido nítrico al 65%. Finalmente
enjuagar 4 o 5 veces con agua desionizada y dejar secar el material.
D) Material de teflón
Lavar con agua y detergente. Enjuagar primero con acetona y luego con agua
desionizada. Mantener los digestores cubiertos con ácido nítrico 0.1M al menos
30 minutos. Enjuagar con agua desionizada y dejar secar.
6. Digestión microondas
Pesar aproximadamente 250 mg de muestra seca directamente en el digestor.
Añadir 1,5 mL de ácido nítrico concentrado y 1,5 mL de ácido sulfúrico
concentrado. Cerrar el digestor, introducir en el horno microondas y digerir la
muestra por un minuto.
De igual forma, se prepara en un digestor un blanco que contiene la misma cantidad
de reactivos pero sin muestra. Terminada la digestión, dejar enfriar el digestor en

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
agua fría por lo menos 20 minutos y abrir cuidadosamente, trasvasar el líquido a un

matraz de 25 mL y aforar con agua desionizada.
7. Medición por espectrofotometría de absorción atómica
Seguir el instructivo de uso del equipo y esperar aproximadamente 10 minutos hasta
que se estabilice, verificando que las longitudes de onda y energía máxima sean las
correspondientes para el elemento seleccionado.
Previo a la lectura en el espectrofotómetro se preparan las respectivas curvas de
calibración a partir de la solución patrón inicial las cuales deberán cubrir el rango
lineal del equipo.
La preparación del set de estándares debe realizarse en el día del análisis; la
aceptación de la curva de calibración se la realiza con el criterio de que el
coeficiente de correlación de dicha curva tenga un valor de 0,99.
La técnica de flama es empleada para determinar la concentración de metales. Se
setea la lámpara. Se enciende el quemador y se deja que se estabilice por 10 min.
Seguidamente se encera usando el blanco de reactivos que corresponde a agua
desionizada y se mide la absrobancia de cada una de las soluciones estándar, de
manera similar, se mide la absorbancia de la muestra cuya concentración es
desconocida, la muestra de control de calidad y el blanco de reactivos. Con el
objetivo de verificar el buen funcionamiento del espectrofotómetro se intercala la
lectura de una solución estándar. En caso de que la muestra tenga alta concentración
del metal a analizar se procede a diluir.

Carrera:
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PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON
REGISTRO DE RESULTADOS ESPERADOS
Con los resultados obtenidos se procede a calcular la concentración del elemento (C) en
la muestra de acuerdo a la siguiente ecuación:
C 
Cf  Cb x Fd x 25
M
Donde: C = Concentración del elemento en la muestra (Base Seca) (mg.kg-1)
Cf = Concentración del elemento medida en el equipo (mg.L-1)
Cb = Concentración del blanco (mg.L-1)
Fd = Factor de dilución
M = masa de la muestra seca
ANEXOS.
NA
BIBLIOGRAFÍA

Carrera:
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48
PERIODO 53
SEDE QUITO-GIRON

Carrera:

Manual Prácticas Bromatología p53

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a) Metodología calidad comercial:

 Peso: Se cuantificará el peso de cada ejemplar seleccionado,

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completamente y se determinará el pH (NTE INEN-ISO 1842:2013:

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o Retirar las cajas de la estufa con ayuda de una pinza y colocarlos en

P2 = Peso de la caja petri + muestra

P3 = Peso de la caja petri + muestra seca

 Humedad-Procedimiento 2: Triturar una pequeña fracción de muestra y

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b) Sacar los crisoles en un desecador y esperar 10 min hasta que se

P2-P1 Donde: P3 – P1 = g de cenizas (peso constante)

b) CALIDAD MICROBIOLÓGICA: (Se empleará el Manual de

1. Recuento Total (Aerobios mesófilos) en agua contaminada

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b) La dilución 10-2 resulta de transferir 1 ml de la dilución anterior a 9 ml de agua

Figura 1Preparación de diluciones

Método de conteo rápido con placas Compact Dry (Nissui) o Petrifilm.

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Figura 2 Siembra en placas Petrifilm

Figura 3 Siembra en placas Compact Dry (Nissui)

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*0,1 mL cuando se utiliza extensión en placa y 1 mL en placas Compact Dry o

Ejemplo de cálculo: 135*102=13500=1,35*104

Recuento total: 1.3 x 104 UFC/mL

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2. Métodos de recuento de Coliformes y E.coli

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Figura 4 Siembra en placas Petrifilm

Método del número más probable:

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3. La presencia de Coliformes se manifiesta con la formación de gas en el interior de los

Elaborado por: Revisado por: Aprobado por:

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Ejemplo de cálculo: 135102=13500=1,35104