“Año de la consolidación de mar de Grau”

UNIVERSIDAD PERUANA CAYETANO HEREDIA

FACULTAD DE MEDICINA ALBERTO HURTADO

Macroscopía
ASIGNATURA: Técnicas de Anatomía Patológica y Citología Exfoliativa

ALUMNOS: CIPRIANO AVILES, BARI

ESTRADA PEREZ, SHARON

RAMOS TASAYCO, LESLY

REYES DIAZ, SANDY

ROJAS DE LA CRUZ, MOISES

DOCENTE: LIC. HUGO DE LA CRUZ

CICLO: Cuarto

LIMA 2016
Marco teorico
Es una técnica que permite localizar moléculas en los tejidos mediante el empleo de
anticuerpos. La técnica, por la gran especificidad y alta afinidad que tienen los anticuerpos
para reconocer moléculas y unirse a ellas, permite detectar cantidades ínfimas de
moléculas presentes en el tejido. La inmensa mayoría de técnicas de inmunohistoquimica
pueden aplicarse a tejido fijado e incluido en parafina con buenos resultados, siempre
que la fijación tisular, su procesado e inclusión se realicen adecuadamente ya que la
utilización de métodos o reactivos inapropiados en el tratamiento tisular previo puede
producir perdidas de antigenicidad que limitaran o impedirán la obtención de resultados
fiables.

Marcadores de anticuerpos
CD20
Proteína que se encuentra en las células B (un tipo de glóbulo blanco). Se puede encontrar
en cantidades mayores que las normales en pacientes de ciertos tipos de linfomas de
células B y de leucemias. La medición de la cantidad de CD20 en las células sanguíneas
puede ayudar a diagnosticar el cáncer o planificar el tratamiento de cáncer. CD20 es un
tipo de marcador tumoral. También se llama antígeno CD20.
Tipo de cáncer: Linfoma no Hodgkin

ENFERMEDAD DE HODGKIN y LINFOMA NO HODGKIN

 Kit67
Kit-67 es una proteína de las células cuyo nivel aumenta a medida que estas se preparan
para dividirse y formar células nuevas. Mediante un procedimiento de coloración es
posible medir el porcentaje de células tumorales que contienen Ki-67 (resultado positivo).
Cuantas más células positivas hay, mayor es la velocidad con que se dividen para formar
nuevas células. En el caso del cáncer de mama, un resultado menor a un 10% se considera
bajo; entre un 10 y un 20%, ambiguo; y mayor a un 20%, alto.
Tipo de cáncer: Adenocarcinoma.

Células tumorales mamarias (flechas) invadiendo el seno subcapsular del ganglio linfático. (b)
Algunas células expresan el marcador en gran cantidad (flecha línea continua) mientras que otras
presentan una menor intensidad (flecha línea punteada).

CD3.
Linfocitos T. Forma complejo con el receptor de célula T (TCR).

La molécula CD3 está constituida por cinco cadenas polipeptídicas designadas gamma, delta,
epsilon, zeta y eta. Tanto el Ac Po como el Ac Mo CD3 están dirigidos contra la unidad epsilon de la
molécula CD3, un dominio intracitoplásmico que además de ser un marcador pan-T, está presente
en células NK activadas y tumorales (Spits et al, 1995). Aproximadamente el 95% de las células T
expresan CD3, y prácticamente no se conocen otro tipo de células distintas que lo expresen, con la
única excepción de las células de Purkinje. La mayoría de los tumores de células T son positivos en
parafina para CD3, aunque en raras ocasiones es posible que el proceso neoplásico lo negativice,
como puede ocurrir en el linfoma anaplásico de células grandes CD30+. Además CD3 puede
encontrarse en algunos casos de histiocitosis maligna y enfermedad de Hodgkin.

Tipo de cáncer: Linfoma T

Tinción inmunohistoquímica para el marcador CD3. (Hematoxilina-eosina, x40.)

CD30
Biomarcador validado. Esta proteína es miembro de la superfamilia de los receptores del factor de
necrosis tumoral. CD30 se expresa en los linfocitos B y T activados. Las proteínas TRAF2 y TRAF5
interactúan con este receptor y median la activación de NF-kappaB. CD30 es un regulador positivo
de la apoptosis y también ha demostrado que limita la proliferación de las células T CD-8
autorreactivas, protegiendo al organismo de la autoimnunidad.

Reactividad: Céls. B y T activadas, céls. Plasmáticas. Céls. R-S, LACG.

PRECAUCIONES: En las linfadenitis reactivas es posible ver algunas céls. Positivas. Algunos linfomas
B y T pueden mostrar diferentes grados de positividad. La tinción citoplásmica puede ser
inespecífica. Céls. L&H negativas.

Tipo de cáncer: Linfoma de Hodgkin

Linfoma de Hodgkin: tinción inmunohistoquímica para el antígeno CD30.

Preparación de Buffer TBS y solución recuperadora
Solución concentrada al 20X empleada para un lavado óptimo de los reactivos presentes
en la lámina en cada paso del procedimiento inmunohistoquímico. Ayuda a mantener las
características morfológicas de los anticuerpos y sus respectivos epítopos para facilitar el
vínculo que ocurre en la reacción de IHQ.

Materiales:
Preparar 200ml de buffer TBS 1x

1.Verter 190ml de agua destilada en el frasco donde se va a preparar el buffer.

2. Luego medir en una probeta 10 ml del buffer.

3.Añadir el buffer al frasco que contiene el agua destilada.

4.Verter el preparado de buffer en tres coplin.

Preparar 250ml de solución recuperadora

1. Medir un volumen de 250ml de agua destilada y verter en frasco donde se va a preparar la

solución recuperadora.
2. Con ayuda de una pipeta medir 5ml de solución recuperadora.

3. verter en el frasco que contiene el agua destilada.

Pasos

1. Llevar la lámina a estufa por

30 minutos

2. en un coplin añadir la solución

recuperadora y las láminas

3. Llevar a baño maría a 97°C

por 25 minutos

4. Sacar las láminas del baño

maría
 5. dejar que baje la temperatura
hasta 65°C

6. Se lava con buffer 1 por 3

min, buffer 2 por 3 min y el
buffer 3 por 3min

7. Secar las láminas

8. Agregar la peroxidasa por 5

c minutos
 9. Lavar con agua destilada al
c chorro

1. Lavar con agua destilada

al chorro

10. Poner en buffer 2 por 3

c minutos y el 3 por 3 minutos

1. Lavar con agua destilada

al chorro

11. Retirar las láminas y secarlas

c

1. Lavar con agua destilada

al chorro
 12. Agregar el primer marcador
o anticuerpo y esperar

13. Verter entre 50 o 100 ul en

cada una
c

14. Solución de lavado con

buffer 2 y 3 por 3 minutos cada
c uno.

15. Agregar el segundo

c marcador (peroxidasa) y esperar
20 minutos.
 16.Lavar con buffer 2 y el 3 por 3
c minutos cada uno.

17. Proceder a secar.

c

18. Revelar el tejido con un agente

cromógeno: Diaminobencidina
(marca DAKO)

19. Colorear la lámina con

c
hematoxilina y esperar 15 min
 . 20. Lavar con agua destilada y con la
ayuda de una canastilla procedemos
con la deshidratación (con alcohol
de menor a mayor grado) y el
aclaramiento (con xilol)

21. Montaje con bálsamo de

c Cánada
Observación al microscopio de resultados.