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OBJETIVOS
Comparar los principales métodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos
de microorganismos.
Conocer los principales métodos de cultivo utilizados para los diferentes tipos de
microorganismos.
MARCO TEORICO
Diferentes métodos de siembra:
Métodos Generales:
1) Siembra por dilución: Se toma el tubo de ensayo con medio líquido, como el caldo
simple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada
con el material bacteriológico, se agita, con movimientos moderados.
Medio de cultivo: Liquido
Instrumento: Asa
Finalidad: poner la bacteria en suspensión
Diluciones sucesivas
Consiste en diluir una muestra hasta conseguir muy pocas células que, tras inocularse en
un medio de cultivo, generen colonias aisladas.
4) Por picadura o punción: Con una aguja se toma el material que se quiere sembrar y
se lo introduce en el tubo, con medio semisólido. Introducir la aguja hasta el fondo,
formando un canal de punción, trayecto por el cual la retiraremos luego. Este método se
utiliza para estudiar la movilidad de las bacterias.
Medio de cultivo. Semisólido
Instrumento: aguja bacteriológica
Finalidad: Estudiar la movilidad de las bacterias
5) Siembra en TSI: (Por picadura y estrías en superficie): el TSI (Triple Sugar Iron)
es un medio que contiene glucosa, sacarosa y lactosa, hierro y un indicador que es el
rojo fenol.
En este medio sembraremos por picadura y estrías en superficie, como ya conocemos,
para estudiar los cambios que ocurrirán en superficie y profundidad. A lo largo del canal
se desarrollan los microorganismos, y según lo hagan en la parte superior o inferior del
tubo, estarán indicando su comportamiento frente a los azucares, los cambios indican lo
siguiente:
Crecimiento microbiano en medio líquido:
Si la bacteria crece en un medio líquido, en la mayoría de los casos las células que se
producen en cada división continúan su vida independientemente formándose una
suspensión de células libres.
En un cultivo discontinuo de bacterias en medio líquido, se pueden diferenciar cuatro
fases en la evolución de los parámetros que miden el crecimiento microbiano:
1.- Fase lag o de adaptación durante que los microorganismos adaptan su metabolismo
a las nuevas condiciones ambientales (abundancia de nutrientes y condiciones de
cultivo) para iniciar la fase de crecimiento exponencial.
2.- Fase exponencial o logarítmica: en ella la velocidad de crecimiento es máxima y
el tiempo de generación es mínimo. Durante esta fase las bacterias consumen a
velocidad máxima los nutrientes del medio. La evolución del número de células durante
esta fase se explica con los modelos matemáticos que describiremos a continuación.
Las fases, parámetros y cinética de crecimiento discutidas para el caso de los cultivos
líquidos se presentan también en cultivos sólidos. La cinética de crecimiento, en este
caso, se puede estudiar siguiendo la evolución del número de células viables por unidad
de superficie o por unidad de masa.
Cuando una célula aislada e inmóvil comienza a crecer sobre un substrato sólido, el
resultado del crecimiento al cabo del tiempo es una colonia. Por consiguiente, se
denomina unidad formadora de colonia (UFC) a una célula bacteriana viva y aislada que
si se encuentra en condiciones de substrato y ambientales adecuadas da lugar a la
producción de una colonia en un breve lapso de tiempo. Si el número inicial de bacterias
por unidad de superficie es muy alto, la confluencia de las colonias da lugar a lo que se
llama un césped cuando se realizan los cultivos en placas de laboratorio.
En el caso de microorganismos móviles (deslizantes) o en el de los hongos filamentosos
que tienen un crecimiento trófico no se producen colonias aisladas sino formaciones
más difusas o miceliares.
MATERIALES
PROCEDIMIENTO
Cuando se utilice exclusivamente el asa de platino o nicrón.
Coger el asa por el cabo, en forma similar, a cuando tomamos el lápiz para
escribir.
Con el asa estéril y fría tome el volumen o fragmento de la muestra que será
sembrado y trasládelo de inmediato para el medio del cultivo seleccionado.
Con la mano opuesta a la que sujeta el asa, tome el tubo por l porción inferior.
Con el dedo meñique de la mano que sostiene el asa, retire del tubo el tapón de
algodón o la tapa de rosca y reténgala(no colocar el tapón o la tapa sobre la mesa
de trabajo)
Flamee de inmediato la boca del tubo de ensayo, pasándola una o dos veces por
la llama del mechero, con el objetivo de eliminar por incineración, los
microorganismos contaminantes que se encuentran en esa zona, por la parte
externa del tubo. Esta acción calórica, provoca además una convección del
movimiento del oxígeno presente en el interior del tubo hacia afuera, debido a la
desigualdad de calor, lo cual favorece que decrezca el riesgo de contaminación.
Deslizando el asa, desde el fondo hacia arriba, por toda la superficie de la cuña,
trazando una línea longitudinal.
Con la mano opuesta a la que sujeta el asa de platino, tome la placa de Petry, de manera
que la tapa quede hacia arriba. Con ayuda del dedo pulgar abra parcialmente la placa.
Cierre la placa y gírela varios cm, en contra de las manecillas del reloj,
procediendo a abrirla nuevamente por igual procedimiento.
CONCLUSIONES
Una vez que ya tenemos los medios de cultivo preparados, hay que inocularlos, y para
ello se necesita:
Medio de cultivo.
Condiciones óptimas de incubación como temperatura, pH, presión, condiciones
atmosféricas (concentración de O2).
Estos medios de cultivo son sólidos (cultivos en reposo), o líquidos (para cultivos en
agitación)
CUESTIONARIO
Siembra volumétrica.
Siembra masiva.
BIBLIOGRAFIA