INFORME DE MICROBIOLOGIA

EVALUACIÓN DE LA SENSIBILIDAD DE LOS MICROORGANISMOS A

ANTISÉPTICOS Y ANTIBIÓTICOS
Sandry Hernández, Hellen Martínez, Katia Romero & Yuledis Tovar
Universidad De Sucre, Departamento De Biología, Programa De Biología

INTRODUCCION
Las bacterias como todos los seres vivos exhiben mecanismos biológicos, que las facultan
para adecuarse a diversas presiones ambientales. Aunque la resistencia a los antibióticos es
una expresión natural de la evolución y genética bacteriana, ciertos factores también
contribuyen al aumento de la expresión y diseminación de esta característica inherente.
El incremento en el uso de antibióticos y la respectiva presión selectiva que ejercen, es el
factor más importante que contribuye a la aparición de diversas clases de resistencia
bacteriana es por ello que las bacterias pueden crear resistencia a los antibióticos, antisépticos
y desinfectantes evadiendo su acción contra ellas [1]. Ahora bien, esta resistencia puede ser
una propiedad natural de un organismo (intrínseca) o conseguida por mutación o adquisición
de plásmidos (autorreplicación, ADN extracromosómico) o transposones (cromosomal o
integrado en plásmidos, cassettes de ADN transmisibles). Las bacterias gramnegativas por lo
general son más resistentes a los antisépticos y desinfectantes que las grampositivas [2].
La resistencia que ejercen las bacterias a los antibióticos, antisépticos y desinfectantes, es un
problema de salud pública que se creía superado.
Desde el descubrimiento de los primeros antibióticos, los microorganismos han sido capaces
de evadir su acción. Un ejemplo que ofrece muestras evolutivas de resistencia, es la bacteria
Staphylococcus aureus, que en 1946 presentaba la mayoría de sus cepas sensibles a la
penicilina; en la actualidad casi todas las cepas hospitalarias, son resistentes a
bencilpenicilina y algunas lo son a meticilina, gentamicina o a ambas y sólo se pueden tratar
con vancomicina Además, en los últimos 25 años la comunidad ha adquirido
microorganismos resistentes a múltiples fármacos, por ejemplo Mycobacterium tuberculosis,
Salmonella spp, Shiguella spp, Vibrio cholerae, Streptococcus pneumoniae, que, al aumentar,
causan infecciones en ambientes nosocomiales; y dejan en claro que la resistencia a los
fármacos constituye un problema de salud pública extremadamente grave [3].
En base a lo anterior un método muy utilizado por su sencillez para el estudio de la
sensibilidad de las bacterias es el de difusión en agar. Se basa en la inhibición del crecimiento
de la bacteria alrededor de un disco cargado con un antimicrobiano que difunde en un medio
sólido. Esta técnica consiste en la siembra de la bacteria en la superficie de una placa con un
medio de cultivo, sobre el que se depositan unos discos de papel cargados con una cantidad
precisa de antibiótico, que difunde casi instantáneamente a través del agar, formándose un
gradiente de concentración del mismo alrededor del disco. Posteriormente, se lleva a incubar
a 37 °C durante 24 horas. El microorganismo crece en la superficie de la placa, pero
alrededor de los discos se forman unos halos de inhibición más o menos grandes,
dependiendo de la mayor o menor sensibilidad de la bacteria a cada antibiótico. Se mide el
diámetro del halo (expresado en milímetros) y se evalúa la correlacionan de los diámetros
con la sensibilidad [4].
El objetivo de la práctica fue el comprar el efecto germicida de algunos antisépticos de uso
diario y determinar la sensibilidad de bacterias a diferentes antibióticos aplicados mediante
la técnica de sensidiscos.

METODOLOGIA
1. Para la primera parte de la realización de esta práctica, la cual consistió en la
siembra de 4 antibióticos diferentes, se realizó una siembra masiva de un cultivo
en caldo (Fig. 1) en toda la superficie de la caja de Petri, ésta se dividió en la zona
exterior en 4 partes o secciones que sirvieron de separación y guía para la siembra
de los diferentes sensidiscos de antibióticos. Los antibióticos se distribuyeron de
la siguiente manera.
1.Gentamicina
2.Ciprofloxacina
3.Kanamicina
4.Ampicilina

(Figura 1).

2. Para la segunda parte de la práctica, se realizó un procedimiento parecido al

anterior, se dividió la caja de Petri en 4 partes y se sembró en el centro de cada
uno de ellos, con la diferencia de que en esta caja se sembraron dos desinfectantes
y dos antisépticos, ubicados y sembrados de la siguiente forma‫׃‬
 1.Hipoclorito de sodio
2.Extran
3. Alcohol aséptico
4. Agua del grifo

(Figura 2).

3. Posteriormente a esto se incubaron las muestras durante 24 horas y se midió el

diámetro de inhibición del crecimiento bacteriano.
4. A las 24 horas de realizo la medición de los halos de crecimiento en cada una de
las cajas.

RESULTADO Y ANALISIS
Al momento de evaluar las placas de Petri se observó que, la inhibición por parte de los discos
con antibióticos fue muy parecida en efectividad en los antibióticos 2 de (1.3 cm halo) y 3(1.2
cm halo) siendo menor en el 1(0.3 cm de halo) y 4 (0.5 cm de halo) pero mayor en 4 como
se observa en la figura 3.

(Figura 3).
Los antibióticos que presentaron mayor inhibición de crecimiento de la bacteria fue la
ciprofloxacina los efectos antibacterianos de la ciprofloxacina se deben a la inhibición de la
topoisomerasa IV y la DNA-girasa bacterianas. Estas topoisomerasas alteran el DNA
introduciendo pliegues super helicoidales en el DNA de doble cadena, facilitando el
desenrollado de las cadenas. La DNA-girasa tiene dos subunidades codificadas por el gen
gyrA, y actúan rompiendo las cadenas del cromosoma bacteriano y luego pegándolas una vez
que se ha formado la superhélice. Las quinolonas inhiben estas subunidades impidiendo la
replicación y la transcripción del DNA bacteriano, aunque no se conoce con exactitud porqué
la inhibición de la DNA-girasa conduce a la muerte de la bacteria, por esto se puede decir
que esta bacteria no es resistente a este antibiótico [5].
En contraste el antibiótico gentamicina que tuvo menor halo de inhibición es un antibiótico
aminoglucósido de amplio espectro. Actúa sobre bacterias gramnegativas aerobias,
incluyendo enterobac-teriáceas, Pseudomonas y Haemophilus. Actúa también sobre
estafiloco-cos (Sta-phy-lococcus aureus y Staphylococcus epidermidis) incluyendo cepas
productoras de penicilinasa, tiene actividad muy limitada sobre estrep-tococos. Carece de
actividad sobre bacte-rias ana-erobias, debido a como actúa se puede decir que por esta razón
no tuvo un gran halo de inhibición podría ser una bacteria gran positiva [6].
El antibiótico 3 kanamicina como todos los antibióticos aminoglucósidos, la kanamicina se
une a la subunidad S30 del ribosoma bacteriano, impidiendo la transcripción del DNA
bacteriano y, por tanto, la síntesis de proteínas en los microorganismos susceptibles.
El sulfato de kanamicina es activo in vitro contra muchas cepas de Staphylococcus aureus
(incluyendo cepas no productoras de penicilinasa y productoras de penicilinasa),
Staphylococcus epidermidis, N. gonorrhoeae, H. influenzae, Escherichia coli, Enterobacter
aerogenes, Shigella y Salmonella especies, especies de k. pneumoniae, Serratia marcescens,
especies de Providencia, Acinetobacter y especies Citrobacter freundii y Citrobacter y
muchas variedades de cepas de Proteus indol-positivo y negativo de indol-negativos que son
frecuentemente resistentes a otros antibióticos[7]. Igual que la gentamicina tiene bajo efecto
sobre bacterias gran positivas pero un poco mayor que la gentamicina.
La ampicilina como todos los antibióticos betalactámicos, la ampicilina es capaz de penetrar
bacterias gram positivas, algunas gram negativas y aerobias. Interfiere con la síntesis de la
pared celular durante la replicación celular. Esto se debe a su efecto inhibidor de la síntesis
de la pared celular de la bacteria en sus últimas dos etapas (3 y 4), uniéndose a las PBP
(proteínas fijadoras de penicilinas), lo que lleva a la destrucción de la pared y la consiguiente
lisis celular.6 La ampicilina inhibe la formación de puentes en la capa de peptidoglicano (la
que proporciona rigidez a la pared celular) [8].

Los antisépticos deberían a ver presentando mayor halo de inhibición debía ser el extran ya
que es capaz de alterar la pared celular y los componentes de la membrana citoplasmática
modificando su permeabilidad. Además, puede ocurrir inhibición enzimática por la oxidación
de proteínas con grupos susceptibles de oxidación sulfhidrilos [9]. Pero hubo un error en el
laboratorio al momento de inocular la bacteria no se disperso bien por el agar lo que trajo
como consecuencia que no hubiera crecimiento en dos de los segmentos de la caja de Petri.
Solo se pudo observar un pequeño crecimiento en el agua de grifo donde creció
satisfactoriamente la bacteria.
 CONCLUSIONES
Los agentes antimicrobianos son compuestos químicos tóxicos para los microorganismos.
Algunos inhiben el crecimiento de los microorganismos mientras que otros los eliminan o
matan. El mecanismo de acción de los antisépticos y desinfectantes depende de tres
mecanismos básicos: la Capacidad de coagular y precipitar proteínas, alterar las
características de permeabilidad celular y su toxicidad o envenenamiento de los sistemas
enzimáticos de las bacterias, que a su vez dependen del grupo químico. El mecanismo de
acción de los antibióticos es muy variado, pero suelen atacar uno o varios procesos celulares
específicos que suelen ser de importancia vital para el microorganismo como son síntesis de
proteínas, replicación y/o transcripción de ADN, síntesis de pared celular, obtención de
energía, entre otros.
CUESTIONARIO
1. Defina cada uno de los siguientes términos y de ejemplo de cada uno de ellos:
antibiótico, biocida, bioestático, desinfectante, antiséptico y agente quimioterapéutico.
Antibiótico: Es una sustancia química producida por un ser vivo o derivado sintético, que
mata o impide el crecimiento de ciertas clases de microorganismos sensibles, generalmente
son fármacos usados en el tratamiento de infecciones por bacterias, de ahí que se les conozca
como antibacterianos. Un ejemplo de antibiótico es la gentamicina esta Se emplea como
antibiótico para erradicar infecciones contra bacterias sensibles.
Biocida: Los biocidas pueden ser sustancias químicas sintéticas o de origen natural o
microorganismos que están destinados a destruir, contrarrestar, neutralizar, impedir la acción
o ejercer un control de otro tipo sobre cualquier organismo considerado nocivo para el
hombre.
Bioestático: es un producto que detiene el crecimiento y desarrollo de organismos vivo.
Ejemplo etanol.
Desinfectante: Es aquella sustancia que mata o inactiva agentes patógenos tales como
bacterias, virus y protozoos impidiendo el crecimiento de microorganismos patógenos en
fase vegetativa que se encuentren en objetos inertes. Los desinfectantes reducen los
organismos nocivos a un nivel que no dañan la salud ni la calidad de los bienes perecederos.
Ejemplo: cloro, las cloraminas y el ozono.

Antiséptico: Los antisépticos son sustancias antimicrobianas que se aplican a un tejido vivo
o sobre la piel para reducir la posibilidad de infección, sepsis o putrefacción. Algunos
antisépticos son auténticos germicidas, capaces de destruir microbios (bactericidas), mientras
que otros son bacteriostáticos y solamente previenen o inhiben su crecimiento. Ejemplo:
Compuestos de amonio cuaternario.
Agente quimioterapéutico: Sustancia química (de origen natural o sintético) que puede
interferir directamente con la proliferación de microorganismos a concentraciones que son
toleradas por el huésped. Ejemplo: Antraciclinas y Epipodofilotoxinas [10] [11].
2. De acuerdo a su mecanismo de acción ¿cómo se clasifican los antibióticos?
Según su mecanismo de acción los antibióticos se clasifican como: inhibidores de la
formación de la pared bacteriana, inhibidores de la síntesis proteica, inhibidores de la
duplicación del ADN, inhibidores de la membrana citoplasmática, inhibidores de vías
metabólicas [12].
3. Investigue 3 microorganismos productores de antibióticos y mencione el antibiótico
producido.
* Cephalosporium acremonium: Cefalosporina
* Streptomyces erythreus: Eritromicina
* Streptomyces mediterranei: Rifampicina [13].
4. ¿Qué es la concentración mínima inhibitoria (CMI)?
La CMI es la concentración mínima de un antibiótico expresada en g/mL que inhibirá el
crecimiento de un microorganismo in vitro. Los agentes antimicrobianos diluidos
conjuntamente con una cantidad estandarizada del organismo puro aislado, se incuban de 18
- 24 horas y se dejan en observación hasta que se desarrolle el crecimiento de las bacterias.
La cantidad mínima de antimicrobiano necesaria para inhibir el crecimiento nos da la CMI
[14].
5. ¿Qué es un antibiograma y cuál es su aplicación?
Las técnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de microbiología para
estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables de las
infecciones
El antibiograma tiene cuatro utilidades principales:
* La utilidad básica del antibiograma es la instauración de un tratamiento antibiótico correcto
al paciente. Es necesario conocer si el microorganismo responsable de la infección posee
mecanismos que le confieran inmunidad frente a algún antibiótico para no incluirlo como
terapia.
* En cuanto al tratamiento el antibiograma no sólo es necesario en la instauración, también
resulta útil en el seguimiento e incluso en la confirmación de tratamientos empíricos. En
ocasiones la enfermedad infecciosa resulta grave y se comienza el tratamiento antes de
conocer los datos de sensibilidad de la cepa. El antibiograma tiene que confirmar, o en su
caso corregir el tratamiento.
* Otra aplicación de las técnicas de estudio de resistencia es la epidemiología. Es necesario
detectar el aumento de los niveles de resistencia en los aislamientos clínicos para tomar
medidas correctoras.
* Por otro lado también puede tener utilidad diagnóstica porque el perfil de resistencia puede
en algún caso orientar en la identificación bacteriana [15].
BIBLIOGRAFIA
1. Ang JY, Ezike E, Asmar BI. Antibacterial resistance. Indian J Pediat 2004; 71: 229-
239.
2. Cabrera C., Gómez R & Zúñiga A. (2007). La resistencia de bacterias a antibióticos,
antisépticos y desinfectantes una manifestación de los mecanismos de supervivencia
y adaptación. Colombia Médica.
3. Koneman, E. W. and S. Allen (2008). Koneman. Diagnostico Microbiologico/
Microbiological diagnosis: Texto Y Atlas En Color/ Text and Color Atlas, Médica
Panamericana
4. http://microbiologia3bequipo5.blogspot.com/2014/10/halos-de-inhibicion.html
5. Smith PD, Gastrointestinal infections in AIDS. Ann Intern Med. 1992; 116:63-77.
6. Catálogo de Medicamentos Genéricos Intercambiables para farmacias y público en
general al 3 de agosto de 2007.
7. María del Carmen Padilla Desgarennes, Laura Estela Castrillón Rivera, Alejandro
Palma Ramos, Lesly Grisel Pech Ortiz. Kanamicina: una alternativa terapéutica para
pacientes con actinomicetomas. Dermatología Rev Mex 2011;55(3):112-118
8. Guía de terapéutica antimicrobiana 2008. Mensa J, Gatell J Mª, Azanza J R, et al.
Elsevier Doyma. 2008. ISBN 978-84-458-1813-8.
9. Sánchez Saldaña, L. y Sáenz Anduaga, E. 2005. ANTISÉPTICOS Y
DESINFECTANTES. Dermatología Peruana. 15(2): 82-103
10. Florez, J. (2013). Farmacolgía humana (3º ed. edición). Masson.
11. Rodríguez, Sebastián Sánchez-Fortún; Gomariz, María Victoria Barahona (1 de
enero de 2002). Riesgo toxicológico medioambiental de compuestos activos
utilizados para la desinfección de torres de refrigeración. Editorial Complutense.
ISBN 9788474916874. Consultado el 10 de febrero de 2017.
12. V. Seija, R. Vignoli. (2006). Principales grupos de antibióticos.
13. Kong, Kok-Fai; Schneper, Lisa; Mathee, Kalai (enero de 2010). «Beta-lactam
Antibiotics: From Antibiosis to Resistance and Bacteriology» [Antibióticos beta
lactámicos: desde la antibiosis a la resistencia y bacteriología]. APMIS (en inglés)
118 (1): 1-36. PMID 20041868. doi:10.1111/j.1600-0463.2009.02563.x. Consultado
el 20 de agosto de 2017.
14. Andrews, J. M. (2001). Determination of minimum inhibitory concentrations. Journal
of Antimicrobial Chemotherapy.
15. [Canton, R. (2011). Lectura interpretada del antibiograma: una necesidad clínica.
Enfermedades infecciosas y Microbiología clínica.