Rev. Int. Contam. Ambie.

33 (2) 247-257, 2017

DOI: 10.20937/RICA.2017.33.02.06

BIODEGRADACIÓN AEROBIA DE FRACCIONES DE HIDROCARBUROS PROVENIENTES

DE LA ACTIVIDAD PETROLERA EN UN SUELO DE LA REGIÓN PATAGONIA NORTE,
ARGENTINA

Cecilia E. Silvana ALVARO1*, Lucas Agustín AROCENA2, Miguel Ángel MARTÍNEZ3 y

Norma Ethel S. NUDELMAN4

1 Laboratorio de Recuperación de Suelos Regionales, Facultad de Ingeniería-Instituto de Investigaciones y De-

sarrollo en Ingeniería de Procesos, Biotecnología y Energías Alternativas, Universidad Nacional del Comahue.
Buenos Aires 1400, Neuquén (8300), Argentina
2 Laboratorio de Recuperación de Suelos Regionales, Facultad de Ingeniería, Universidad Nacional del Coma-

hue. Buenos Aires 1400, Neuquén (8300), Argentina

3 Facultad de Tecnología y Ciencia de los Alimentos, Universidad Nacional del Comahue. 25 de mayo y Re-

conquista, Villa Regina, Río Negro (8336), Argentina,

4 Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires. Pabellón II, Piso 3, Ciudad Univer-

sitaria, Buenos Aires (1428), Argentina

* Autor para correspondencia: silvana_alvaro@hotmail.com

(Recibido abril 2016; aceptado agosto 2016)

Palabras clave: biorremediación, petróleo, explotación, biosólidos, suelos norpatagónicos, microorganismos

nativos

RESUMEN

Las técnicas recientes de evaluación de sitios contaminados con hidrocarburos se funda-

mentan en la metodología del análisis de riesgo. El efecto sobre la salud y el ecosistema
que producen agentes químicos presentes en un ambiente contaminado es estimado
como la sumatoria de riesgos individuales, siendo la concentración de hidrocarburos
un dato relevante. La biorremediación es una tecnología sustentable que acelera la
degradación del petróleo en suelos contaminados y posee una relación costo beneficio
favorable frente a otros métodos de remediación. El presente trabajo, realizado a escala
de laboratorio, estudia la velocidad de degradación de distintas fracciones del petróleo
mediante la incorporación de biosólidos (lodos cloacales) a un suelo contaminado de
la Norpatagonia Argentina. Se determinó la concentración de hidrocarburos totales y
el recuento de microorganismos presentes en el suelo al iniciar y finalizar el proceso
de biorremediación. La degradación de las fracciones de hidrocarburos se analizó a
intervalos regulares del proceso. Los resultados obtenidos mostraron una marcada
disminución en la concentración de alcanos e hidrocarburos aromáticos de menor peso
molecular a los 14 días de tratamiento. Los hidrocarburos de fracción pesada, resisten-
tes a la biodegradación, mostraron reducciones significativas durante todo el proceso;
su baja volatilidad y escasa migración por lixiviación indicarían que la degradación
se debió principalmente al metabolismo de los microorganismos nativos presentes en
suelos norpatagónicos. La comparación con el tratamiento convencional indica que la
adición de biosólidos mejoró la remediación y que la biodiversidad de microorganismos
presentes en el suelo es un factor importante para lograr una degradación significativa
de fracciones del petróleo.
248 C.E.S. Alvaro et al.

Key words: bioremediation, petroleum exploitation, biosolids, north Patagonian soils, native microorganisms

ABSTRACT

Recent techniques for assessing hydrocarbon contaminated sites are mainly based on
risk analysis methodology. The effects of chemicals present in contaminated sites on
the human health and the ecosystem are usually estimated as the addition of individual
risks. In this sense, the hydrocarbon concentration is a relevant data. Bioremediation
is a sustainable technology that accelerates the full or partial degradation of petroleum
in contaminated soils and it shows a suitable cost-benefit ratio over other remedia-
tion methods. This work describes a laboratory scale study of the degradation rate
for petroleum fractions by the incorporation of “biosolids” (sewage sludge) in an oil
contaminated Patagonian soil. The determination of the total hydrocarbon concentra-
tion and the count of microorganisms in soil were performed both at the beginning and
the end of the bioremediation process. The hydrocarbon degradation was analyzed at
regular intervals during the study. The observed results showed that alkanes and lower
molecular weight aromatic hydrocarbon concentrations were negligible after 14 days
of treatment. The heavy hydrocarbon fraction, considered recalcitrant to biodegrada-
tion, was also significantly reduced during the biodegradation process. Since heavy
hydrocarbons have low volatility and scarse migration by leaching, the observed de-
crease indicates that heavy hydrocarbon elimination could be mainly due to the native
microorganism activity in the north Patagonian soils. Comparison with conventional
treatment indicates that addition of “biosolids” enhances hydrocarbon remediation
and that the biodiversity of microorganisms in soils is an important factor in achieving
significant petroleum degradation.

INTRODUCCIÓN degradación o transferencia entre suelo, aire y agua

La actividad hidrocarburífera en la Provincia del
Neuquén, Argentina, constituye la labor productiva
más importante asociada al cobro de regalías, ge-
neración de empleo y actividades comerciales sub-
secuentes a las etapas de exploración y explotación
que determinan la producción de petróleo y gas por
provincia (IAPG 2012).
Las actividades inherentes a la explotación hidro-
carburífera ocasionan cambios adversos en el am-
biente con riesgos para la salud y la propia industria
La remediación de suelos contaminados con petróleo
crudo, lodos de perforación y solventes derivados de
la explotación es un tema de intensa investigación
actualmente (Singh y Celin 2010, Alvaro et al. 2015).
En este contexto, estudios realizados los últimos años
indican que la presencia de hidrocarburos del petróleo
modifica las propiedades físicas y químicas de los
suelos (Martínez y López 2001) causando procesos
de fototoxicidad (Meudec et al. 2006) y alteración
en las comunidades microbianas (Maila et al. 2006),
entre otros.
Debido a las características de los suelos de la
región patagónica, las precipitaciones escasas y las
bajas temperaturas, sólo algunos de los procesos de
cobran mayor relevancia (Ríos y Nudelman 2005).
La volatilización es un proceso de transferencia de
hidrocarburos que tiene importancia regional debido
a los períodos de fuertes vientos. La movilidad de los
componentes del petróleo depende de la permeabili-
dad del suelo y de la presencia de hidrocarburos livia-
nos, generalmente más solubles y de baja viscosidad.
Las técnicas más recientes de evaluación de sitios
contaminados con hidrocarburos se fundamentan en
la metodología del análisis de riesgo y se basan en la
valoración del efecto que producen agentes químicos
presentes en un sitio contaminado en la salud huma-
na y el ambiente debido a la sumatoria de riesgos
individuales (ASTM 2010). La biorremediación es
una tecnología emergente que utiliza las actividades
metabólicas de microorganismos, hongos, plantas o
las enzimas derivadas de ellos para degradar, trans-
formar o remover contaminantes. La biorremediación
de hidrocarburos del petróleo depende de diversos
factores: presencia de una población microbiana
activa, estructura y concentración del contaminante,
disponibilidad de oxígeno y nutrientes, tipo de suelo,
cantidad de materia orgánica (MO) y minerales pre-
sentes en el mismo, entre otros. En este sentido, las
condiciones ambientales y las características físicas
 BIODEGRADACIÓN DE FRACCIONES DE HIDROCARBUROS EN UN SUELO NORPATAGÓNICO
y químicas del suelo afectan la población microbiana
nativa existente, por lo cual su estudio constituye un
requisito previo para adecuar el crecimiento bacte-
riano a condiciones de laboratorio.
Estudios recientes realizados en pasivos ambien-
tales con altas concentraciones de hidrocarburos
(Alvaro et al. 2014) y en suelos de diferentes carac-
terísticas edafológicas de la Norpatagonia Argentina
contaminados con petróleo (Alvaro et al. 2015) han
demostrado la eficacia de la bioestimulación utili-
zando enmiendas orgánicas e inorgánicas. La biorre-
mediación de suelos contamindos con hidrocarburos
de petróleo mediante la aplicación de enmiendas
orgánicas es una práctica de escasa aplicación en esta
región a nivel experimental.
Durante el tratamiento de aguas residuales se
genera material sólido sedimentable llamado lodos
cloacales o biosólidos (B). Los B están constituidos
por materia orgánica fermentable, minerales inertes,
nutrientes y poseen alto contenido de humedad (Nor-
ma 2002). Debido a su elevado porcentaje de materia
orgánica (MO) y nutrientes, pueden ser utilizados
como enmiendas después de someterlos a un proceso
de estabilización. Su utilización está especialmente
indicada en suelos arenosos y semidesérticos, tales
como los de la meseta patagónica.
Considerando lo expuesto, en el presente trabajo
se estudió, a escala de laboratorio, la tasa de de-
gradación de los hidrocarburos totales del petróleo
(HTP) y de distintas fracciones del mismo mediante
la incorporación de B, frente a la biorremediación
convencional (aireación, laboreo y humectación) en
un suelo regional típico contaminado con un 5 %
(p/p) de petróleo.
MATERIALES Y MÉTODOS
Muestreo del suelo y enmienda utilizada
Para la experiencia se recolectó un suelo de ca-
racterísticas geomorfológicas típicas de la meseta
patagónica afectada por la actividad petrolera, per-
teneciente a la formación geológica Vaca Muerta de
la Cuenca Neuquina. En esta región predominan los
suelos de textura franco arenosa, arenosos y arcillo-
sos, con alto contenido de carbonato de calcio, muy
escasa MO, pH moderadamente alcalino y un alto
déficit hídrico anual (Alvaro et al. 2015). El sitio de
extracción fue escogido considerando que no se en-
cuentran locaciones de explotación hidrocarburífera
en el área circundante, si bien dicho suelo posee las
mismas características morfológicas de los suelos de
exploración y explotación.
249
Las muestras de suelo se tomaron entre los 0 y 30 cm
de profundidad, despreciando la cubierta vegetal y
se secaron a temperatura ambiente, sobre bandejas
metálicas, durante 48 h. Se eliminaron elementos
indeseables, se homogeneizaron con mortero y se
tamizaron mediante malla metálica de 2 mm.
En la región los B se utilizan con fines agrícolas.
Los B utilizados se obtuvieron de las eras de secado
de la planta de tratamiento de efluentes cloacales de
la ciudad de Neuquén, operada por el Ente Provincial
de Agua y Saneamiento de la Provincia de Neuquén
(EPAS).
Análisis físicos, químicos y bacteriológicos
Los análisis físicos y químicos de las muestras de
suelo se realizaron por triplicado utilizando métodos
estándar (Sparks 2003). Las determinaciones y téc-
nicas utilizadas fueron: carbono orgánico y materia
orgánica (método de Walkley-Black), textura (mé-
todo de Bouyoucus), pH (método potenciométrico
en pasta saturada (pHp)), conductividad eléctrica
(puente de Whiston en extracto de saturación del
suelo), capacidad de intercambio catiónico y ca-
tiones totales (método de saturación por acetato de
amonio), fósforo (método Olsen), retención hídrica
(RH) a capacidad de campo (método membrana de
Richard).
En B, las determinaciones y métodos utilizados
fueron: nitrógeno total (método Kjeldahl), fósforo to-
tal (método estándar 4500-P-F), hidrocarburos totales
(método TPHCWG 1998b), aceites y grasas (método
EPA 413.1), arsénico, cadmio, zinc, cobre, cromo to-
tal y mercurio (método EPA 3051A), níquel y plomo
(método EPA 3050 B/7000 B), bifenilos policlorados
(método EPA 3051A), Escherichia coli (recuento del
número de bacterias viables por dilución y siembra en
placa), microorganismos heterótrofos aerobios totales
y degradadores de hidrocarburo (método Número
Más Probable (NMP)) (Woomer 1994).
Para el recuento de los microorganismos hete-
rótrofos aerobios totales (HAT) se utilizó un medio
de cultivo completo, que provee una fuente de
carbono de rápida asimilación junto con factores
de crecimiento. En cambio, para la determinación
de los microorganismos degradadores de hidrocar-
buros (DH), se utilizó un medio de cultivo mínimo,
consistente en una solución salina, con el agregado
de micronutrientes y queroseno como única fuente
de carbono y energía. La cuantificación de benceno,
tolueno y xilenos (BTEX), se realizó mediante el
método EPA 5021 A “Compuestos orgánicos volátiles
en suelos y otras matrices sólidas, según el análisis
de equilibrio de espacio en cabeza” acoplada a
250 C.E.S. Alvaro et al.
cromatografía gaseosa. La determinación de las dis-
tintas familias de hidrocarburos presentes en el suelo
contaminado se realizó mediante el método ASTM
D-5739/00, “Práctica estándar para la identificación
de derrames de petróleo por cromatografía gaseosa
y espectrometría de masas de baja resolución por
impacto electrónico”, que se utiliza para realizar una
comparación cualitativa (generalmente llamada de
huella digital) de los componentes del petróleo en las
distintas etapas del proceso de degradación. La cuan-
tificación de los materiales extraíbles con n-hexano
(HEM) y los hidrocarburos de fracción pesada (HFP)
se realizó siguiendo la Norma NMX-AA-134-SCFI
(2006). La concentración de hidrocarburos totales del
petróleo en suelo (HTP) se determinó por el método
TPHCWG (1998b.)
Diseño experimental de biorremediación
El ensayo de laboratorio se realizó en microcos-
mos durante un periodo de 120 días e involucró dos
tratamientos de biorremediación con tres repeticiones
cada uno y un diseño completamente aleatorizado.
Los microcosmos se armaron en recipientes de vidrio,
con seis kg de suelo cada uno. Una semana antes de
iniciar cada tratamiento se contaminó el suelo con
petróleo crudo al 5 % (p/p). La homogeneización
del suelo con el hidrocarburo se hizo en recipientes
plásticos, mediante agitación y mezcla lenta de todo
el material a fin de minimizar la volatilización de hi-
drocarburos, dos veces por semana. Los tratamientos
ensayados fueron:
Tratamiento SC: el suelo contaminado con 5 % de
petróleo (p/p) sólo recibió laboreo, aireación y aporte
de agua. Tratamiento SB: el suelo contaminado con
5 % de petróleo (p/p) + B. La dosis de B agregada
fue de 40 g/kg de suelo (base seca).
Durante el periodo en el que se desarrolló el
trabajo se mantuvieron las siguientes condiciones
ambientales para los tratamientos: el aporte de
agua en cada microcosmos se realizó dos veces por
semana, incorporando el volumen necesario para
alcanzar el 80 % de la capacidad de campo del suelo.
La temperatura ambiente en el laboratorio osciló en
el rango 20 ± 4 °C.
Análisis estadístico
Se utilizó el paquete estadístico InfoStat, versión
2011e (Di Renzo et al. 2011) para realizar un análisis
de regresión no lineal para las tres repeticiones de
cada tratamiento y un análisis de la varianza para
comprobar si había diferencias entre las velocida-
des medias de degradación de hidrocarburos entre
tratamientos.
RESULTADOS
Análisis físicos y químicos del suelo testigo
De acuerdo con los análisis físicos y químicos
obtenidos el suelo se clasificó como moderada-
mente alcalino (pH 8.45 ± 0.2), con bajo contenido
de carbono orgánico (CO = 0.10 ± 0.1 %), MO,
(0.15 ± 0.08 %), nitrógeno (0.01 ± 0.005 %) y me-
dianamente provisto en fósforo (13.8 ± 0.2 ppm),
baja capacidad de intercambio de catiónico (CIC =
11.6 ± 0.2 mEq/100 g), retención hídrica a 0.3 atm
RH = 3.30 ± 0.2 %, retención hídrica a 15 atm RH
= 1.80 ± 0.4 %. Considerando los resultados de
conductividad eléctrica (CE) = 0.60 ± 0.2 dS/m y el
porcentaje de sodio intercambiable (PSI) = 5.80 ±
0.1 % se catalogó como suelo normal, dentro de los
rangos frecuentes para la región (Ríos y Nudelman
2005). Este tipo de suelos posee características be-
neficiosas y a la vez perjudiciales para los procesos
de biorremediación. Por un lado, la clase textural
franco arenosa favorece la circulación de agua y
aire. En contraste, posee una baja retención de agua,
que sumado a la hidrofobicidad de los hidrocarburos
adsorbidos a las partículas del suelo demandan un
aumento en la frecuencia de humectación (Adams
et al. 2011). Otra desventaja es el bajo contenido de
MO y nutrientes contenidos en este tipo de suelos,
que determinan una actividad microbiana muy dis-
minuida (Adams Schroeder et al. 2002).
Análisis químico y microbiológico del biosólido
En el cuadro I se presentan los resultados obteni-
dos de la caracterización de los biosólidos. En la últi-
ma columna se incorporaron los límites establecidos
en la Resolución 97/2001 del Ministerio de Desarro-
llo Social y Medio Ambiente, República Argentina,
que aprueba el Reglamento para el Manejo Susten-
table de Barros Generados en Plantas de Tratamiento
de Efluentes Líquidos en el ámbito federal. Estos
resultados establecieron que los biosólidos utilizados
en el estudio son aptos para uso agrícola, ganadero,
forestal o para recuperación de suelos degradados,
sin restricciones de tipo sanitario, debido a que el
análisis de la composición química del biosólido para
compuestos orgánicos o inorgánicos tipificados como
tóxicos, así como el recuento de microorganismos
se encuentran dentro de los límites A.1 permitidos,
especificados en la Resolución 97/2001.
Resultados similares se informaron en ensayos
realizados en varios países del mundo, por lo que su
aporte controlado al suelo no traería aparejado un
riesgo significativo al ambiente ni a los seres vivos
(Maila y Cloete 2005).
 BIODEGRADACIÓN DE FRACCIONES DE HIDROCARBUROS EN UN SUELO NORPATAGÓNICO 251

CUADRO I. ANÁLISIS QUÍMICO Y MICROBIOLÓGICO DEL BIOSÓLIDO

Parámetros Unidad Valor Límite A.1

Arsénico mg/kg <10.0 75
Cadmio mg/kg < 1.0 20-40
Zinc mg/kg 144 ± 0.3 2500 a 4000
Cobre mg/kg 37.4 ± 0.2 1000 a 1750
Cromo total mg/kg 10.2 ± 0.1 1000 a 1500
Mercurio mg/kg < 0.8 16 a 25
Níquel mg/kg < 5.0 300 a 400
Plomo mg/kg 27.7 ± 0.2 750 a 1200
Bifenilos policlorados mg/kg < 0.5 0.8
Escherichia coli UFC/g < 100 < 1000
Fósforo total mg/kg 36.0 ± 0.2 N/E
Nitrógeno total mg/kg 4125 ± 1.2 N/E
Hidrocarburos mg/kg 941.1 ± 0.6 N/E
Grasas y aceites mg/kg 9934.3 ± 2.5 N/E
Microorganismos heterótrofos Nº microorg./g suelo 5 × 105 N/E
aeróbicos totales
Microorganismos Nº microorg./g suelo 10 N/E
degradadores de hidrocarburo

Nota: N/E: no establecido. UFC: Unidades formadoras de colonia. Límites A.1: establecidos en
la Resolución (2001) que aprueba el “Manejo sustentable de barros generados en plantas de tra-
tamiento de efluentes líquidos” en la República Argentina

Caracterización del petróleo animales, ceras, jabones y materia relacionada

De acuerdo con el peso molecular de los hi-
drocarburos presentes en el petróleo utilizado
en la experiencia, los hidrocarburos de hasta 14
átomos de carbono correspondieron al 94.1 % y
los de quince átomos de carbono y superiores al
5.9 %. La determinación de la gravedad especí-
fica del petróleo fue de 38 grados API, densidad
0.84 g/mL y se clasificó como petróleo ligero.
El porcentaje de las distintas familias de hidro-
carburos del petróleo estudiado se muestra en el
cuadro II y los componentes presentes según el
número de átomos de carbono en el cuadro III,
donde puede observarse que el mayor porcentaje de
hidrocarburos está comprendido entre los que poseen
de cinco a nueve átomos de carbono, correspondien-
do con la clasificación anteriormente citada.
(Norma NMX-AA-134-SCFI-2006), por lo que el
parámetro apropiado para realizar el seguimiento del
proceso degradativo de hidrocarburos son los HFP.
Al finalizar la experiencia los HEM mostraron
una marcada reducción con el aporte de biosólidos
respecto al tratamiento donde sólo se realizó airea-
ción, laboreo y humectación (SC).
La misma tendencia se observa en la degradación
de los HFP al finalizar la experiencia, siendo la reduc-
ción de hidrocarburos estadísticamente significativa.
En el tratamiento con aporte de materia orgánica, la
degradación de HEM y HFP se produjo principal-
mente durante los primeros ochenta días de iniciada
la biorremediación.

Evolución del proceso de biorremediación CUADRO II. FRACCIONES DEL PETRÓLEO DETERMI-
Los resultados del tratamiento con humectación, NADAS POR EL MÉTODO ASTM D-5739/00
aireación y laboreo indicados como tratamiento SC, ± DESVIACIÓN ESTÁNDAR
así como las reducciones observadas en las fracciones
Componente %/peso
HEM y HFP se observan en los cuadros IV y V.
Los porcentajes de reducción de HEM y HFP Total parafínicos 32.0 ± 0.2
para cada tratamiento se determinaron a intervalos Total nafténicos y de mayor PM 28.2 ± 0.2
regulares de tiempo, hasta los 120 días. Es impor- Total mono-aromáticos 5.40 ± 0.2
tante recalcar que los HEM están constituidos por Total isoparafínicos 34.4 ± 0.2
Total 100
hidrocarburos no volátiles, aceites vegetales, grasas
252 C.E.S. Alvaro et al.

CUADRO III. CARACTERIZACIÓN DE LOS COMPONEN- Determinación de sustancias extraíbles con

TES DEL PETRÓLEO SEGÚN EL NÚMERO n-hexano (HEM) e hidrocarburos de fracción
DE ÁTOMOS DE CARBONO ± DESVIA-
CIÓN ESTÁNDAR.
pesada (HFP)
En los cuadros IV y V se presentan los valores
Componente %/peso obtenidos para ambos parámetros, en ellos se indica
el promedio de los análisis realizados por triplicado
C3 0.23 ± 0.02
para cada tratamiento, expresados en porcentaje.
iC4 1.10 ± 0.02
nC4 2.97 ± 0.02 En el cuadro V se observa que los resultados
iC5 7.10 ± 0.02 iniciales de HFP son considerablemente menores
nC-5 6.70 ± 0.02 a los esperados al contaminar el suelo con un 5 %
C6 12.2 ± 0.02 de petróleo (p/p). Ello se debió probablemente a la
C7 23.6 ± 0.02 composición del petróleo utilizado en la experiencia,
C8 26.7 ± 0.02 datos con los cuales no se contaba al iniciar el trabajo.
C9 14.0 ± 0.02
En el tratamiento SB se observó un porcentaje de re-
C10 1.09 ± 0.02
C11 0.70 ± 0.02 ducción de HFP del 89.2 % al finalizar el tratamiento,
C12 0.27 ± 0.02 lo que indica una acentuada disminución de HFP
C13 0.003 ± 0.001 en el tratamiento con biosólidos. Considerando la
C14 0.22 ± 0.02 viabilidad de los biosólidos en el proceso de degra-
C15 0.20 ± 0.02 dación, se realizó la determinación de las fracciones
C16 0.25 ± 0.02 de hidrocarburos utilizando técnicas analíticas de
C17 0.34 ± 0.02
mayor sensibilidad.
C18 0.24 ± 0.02
C19 0.30 ± 0.02
C20 y superiores 1.87 ± 0.02 Cuantificación de benceno, tolueno y xilenos
(BTEX) por cromatografía gaseosa
En el cuadro VI se puede apreciar que a los
CUADRO IV. PORCENTAJE DE MATERIAL EXTRAÍBLE 14 días de iniciado el tratamiento se verificó una
CON n-HEXANO DURANTE LA EXPERIEN- importante disminución en las concentraciones de
CIA EN EL TRATAMIENTO TESTIGO (SC)
Y CON APORTE DE BIOSÓLIDOS (SB) ± BTEX, alcanzando el benceno y el tolueno los valores
DESVIACIÓN ESTÁNDAR. NORMA (2006)

Tiempo de muestreo (días) SC (% peso) SB (% peso)

CUADRO VI. CUANTIFICACIÓN DE BTEX EN LAS
0 1.67 ± 0.2 1.87 ± 0.3 MUESTRAS DE SUELO HASTA LOS 14
15 1.52 ± 0.2 1.47 ± 0.2 DÍAS DE TRATAMIENTO ± DESVIACIÓN
30 1.40 ± 0.3 1.29 ± 0.3 ESTÁNDAR. MÉTODO EPA 5021 A
45 1.30 ± 0.4 1.13 ± 0.3
80 1.19 ± 0.4 0.87 ± 0.5 Benceno (mcg/g peso seco)
120 1.07 ± 0.3 0.65 ± 0.4
Tiempo (días) Tratamiento Tratamiento
% de reducción 35.9 ± 0.3 65.2 ± 0.33
testigo con biosólidos
0 7.08 ± 0.3 6.63 ± 0.3
14 < 0.05 < 0.05
CUADRO V. PORCENTAJE DE HIDROCARBUROS DE
FRACCIÓN PESADA DURANTE LA EXPE- Tolueno (mcg/g peso seco)
RIENCIA EN EL TRATAMIENTO TESTIGO
(SC) Y CON APORTE DE BIOSÓLIDOS (SB) Tiempo (días) Tratamiento Tratamiento
± DESVIACIÓN ESTÁNDAR. NORMA (2006) testigo con biosólidos

Tiempo de muestreo (días) SC (% peso) SB (% peso) 0 84.4 ± 0.3 79.8 ± 0.3

14 0.08 < 0.05
0 1.16 ± 0.3 1.61 ± 0.4
15 1.00 ± 0.3 0.96 ± 0.3 Xilenos totales (mcg/g peso seco)
30 0.85 ± 0.2 0.77 ± 0.2 Tiempo (días) Tratamiento Tratamiento
45 0.72 ± 0.2 0.60 ± 0.2 testigo con biosólidos
80 0.59 ± 0.2 0.36 ± 0.3
120 0.48 ± 0.2 0.19 ± 0.2 0 82.7 ± 0.4 73.9 ± 0.4
% de reducción 58.6 ± 0.23 89.2 ± 0.26 14 8.4 ± 0.3 3.8 ± 0.3
 BIODEGRADACIÓN DE FRACCIONES DE HIDROCARBUROS EN UN SUELO NORPATAGÓNICO 253

permitidos para uso agrícola en ambos tratamientos.
En el caso de los xilenos, los valores obtenidos en
el tratamiento SB indicaron que los suelos son aptos
para uso residencial, mientras que los obtenidos en
el tratamiento SC los clasificaron como aptos para
uso industrial, de acuerdo a lo establecido en la Ley
24051 de Residuos Peligrosos (República Argentina).
Estos resultados concuerdan con los informados por
diversos autores, quienes coinciden en que gran parte
de los hidrocarburos monoaromáticos se volatilizan
durante los procesos de aireación del suelo (Eweis
et al. 1999, Margesin et al. 2003).

TIC: M2-27-10.D
220000

200000

180000

160000

140000
Abundance

Modo scan-M2
120000
46.8348.36
45.39
100000 44.00
42.68
41.43
80000 40.24
39.02
37.75
60000 6.10 9.27 36.43
35.07
5.23
33.65
40000 9.07 12.23 32.17
8.07 30.63

60000

6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48
Time

Fig. 1. Suelo contaminado previo al agregado de biosólidos. Cromatograma de iones totales (TIC, por sus siglas en
inglés), en modo de escaneo. Tiempo 0 días

TIC: M4-27-10.D
220000

200000

180000

160000

140000
Abundance

120000

48.34
100000 46.83
45.38
Modo scan-M4
80000 44.00
42.69
41.43
60000 40.24
39.02
5.30 37.75
40000 36.44
35.08

60000

6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48
Time

Fig. 2. Suelo contaminado previo al agregado de biosólidos. Cromatograma de iones totales (TIC, por sus siglas en
inglés), en modo de escaneo. Tiempo 120 días
254
220000
200000
180000
160000
140000
Abundance
Modo scan-M3
120000
100000
80000
60000
5.21
40000
9.06
60000
6 8 10 12 14
Fig. 3. Suelo contaminado con agregado de biosólidos. Cromatograma de iones totales (TIC, por sus siglas en
inglés), en modo de escaneo. Tiempo 120 días
La fracción de hidrocarburos alifáticos y aromá-
ticos de bajo PM fue degradada más rápidamente
que las fracciones de hidrocarburos aromáticos
policíclicos (HFP). Esto es debido a que la fracción
alifática está formada principalmente por n-alcanos,
hidrocarburos que son fácilmente metabolizados por
los microorganismos (Ríos y Nudelman 2008). La
utilización como fuente de carbono de compuestos
orgánicos se dificulta cuando los contaminantes pre-
sentan ramificaciones y dos o más anillos aromáticos
en su estructura.
Caracterización de las fracciones de hidrocar-
buros presentes en los suelos contaminados por
cromatografía gaseosa y espectrometría de masas.
En la figura 1 se observa el cromatograma del
suelo contaminado con petróleo previo al agregado
de biosólidos. En las figuras 2 y 3 se observan los
cromatogramas correspondientes a los 120 días para
los tratamientos SC y SB, respectivamente. Superpo-
niendo los cromatogramas correspondientes al inicio
y al final del tratamiento se observa disminución de
los hidrocarburos de bajo PM en ambos tratamientos
y una marcada eliminación de picos correspondientes
a hidrocarburos de elevado PM en el tratamiento SB.
Al inicio del proceso hay una variedad de compuestos
presentes en el suelo contaminado que corresponden
a hidrocarburos de bajo PM como el benceno y el
xileno (tiempo de retención 5.21 s) y alto PM como
C.E.S. Alvaro et al.
TIC: M3-27-10.D
19.03
42.76
33.58
35.07 37.50
30.19
16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48
Time
el tetratetracontano de 44 átomos de carbono (tiempo
de retención de 40.24 s). A los 120 días se observa
una clara disminución de los compuestos de bajo PM
en ambos tratamientos. Esta tendencia se incrementa
en SB, observándose en el cromatograma (Fig. 3)
la eliminación de numerosos picos, variación en las
señales de mayor tiempo de retención respecto al
tratamiento testigo y la aparición de nuevos picos,
probablemente debidos a compuestos presentes en
los biosólidos y a sustancias ausentes al inicio del
tratamiento, inherentes al metabolismo bacteriano. Si
bien los antracenos y fenantrenos son resistentes a la
degradación, se observa una sensible disminución en
el número de picos de alto PM, lo cual indicaría que
este tipo de compuestos han sido mayoritariamente
degradados. Otro resultado a destacar comparando
los cromatogramas del suelo contaminado sin agre-
gado de enmienda (Fig. 1) y al finalizar los trata-
mientos (Figs. 2 y 3) es la disminución de picos de
bajo PM correspondientes principalmente a alcanos
en el tratamiento SC, tendencia que se acentúa en el
tratamiento con agregado de B.
Análisis microbiológico
El incremento de la población microbiana nativa
del suelo puede acelerar la degradación de conta-
minantes orgánicos, para ello es necesario agregar
nutrientes de manera equilibrada, fundamentalmente
fuentes de carbono. Esta afirmación se basa en el
 BIODEGRADACIÓN DE FRACCIONES DE HIDROCARBUROS EN UN SUELO NORPATAGÓNICO
CUADRO VII. NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP) DE
MICROORGANISMOS DEGRADADORES
DE HIDROCARBUROS (DH) Y HETERÓ-
TROFOS AEROBIOS TOTALES (HAT) EN
EL SUELO TESTIGO (SC) Y CON AGRE-
GADO DE BIOSÓLIDOS (SB) A DISTINTOS
TIEMPOS DEL PROCESO DE BIORREME-
DIACIÓN
Microorganismos (NMP/g suelo)
Muestra de suelo
HAT DH
SC (tiempo 0) 1.2 × 103 1.5 × 101
SC (60 días) 3.0 × 106 7.0 × 105
SC (120 días) 5.0 × 104 5.0 × 104
SB (60 días) 1.0 × 107 1.2 × 106
SB (120 días) 4.0 × 106 3.0 × 106
hecho de que el agregado de grandes cantidades de
carbono (hidrocarburos) interrumpe el equilibrio
natural de los nutrientes en el sistema causando una
rápida disminución de otros (tal como N y P), y por
lo tanto reduce el crecimiento bacteriano (Martínez
Prado et al. 2011).
El recuento de microorganismos heterótrofos
aerobios totales (HAT) y degradadores de hidrocar-
buros (DH) se obtuvo una concordancia del 95 %
entre los resultados de las tres repeticiones realizadas
para cada recuento. Los valores presentados son el
promedio de los valores obtenidos.
El cuadro VII muestra la fluctuación de las po-
blaciones de microorganismos HAT y DH a lo largo
de la experiencia. Al comienzo de ambos tratamien-
tos se observó baja cantidad de microorganismos
HAT y DH. Estos valores son inferiores en dos o
tres órdenes de magnitud a los recomendados para
biorremediar suelos contaminados con hidrocarbu-
ros, aunque son normales para este tipo de suelos,
coincidentes con trabajos anteriores realizados en
suelos provenientes de la región patagónica (Al-
varo et al. 2015). Este resultado es debido a que el
suelo en estudio posee baja concentración de MO y
nutrientes, escasa humedad durante gran parte del
año y está sometido a una intensa radiación solar,
todos factores desfavorables para el desarrollo
microbiano.
A los 60 días en ambos tratamientos, se observó
incremento de las poblaciones HAT y DH respecto
al tiempo cero (Cuadro VII).
A los 120 días de tratamiento, el recuento de
ambas poblaciones de microorganismos se mantuvo
en el mismo orden de magnitud para el tratamiento
SB. El tratamiento SC mostró un decaimiento de
la población HAT y el tratamiento SB mantuvo
255
constantes los valores para DH respecto a los obte-
nidos a los 60 días. Estos resultados podrían deberse
a la formación de sustancias tóxicas producto del
metabolismo bacteriano que modifican la tasa de
crecimiento de los microorganismos.
Los resultados obtenidos pueden explicarse
considerando que el tratamiento SB proporciona
una rápida disponibilidad de nutrientes y carbono
fácilmente degradable, lo cual se manifiesta en un
acelerado crecimiento de ambas poblaciones de mi-
croorganismos. El recuento de los mismos muestra
que el desarrollo microbiano es superior en el trata-
miento SB, indicando que el N y el P presentes en B
son elementos críticos para el desarrollo microbiano
en este tipo de suelos, resultado recientemente infor-
mado para suelos agrícolas mexicanos contaminados
con hidrocarburos (Castro-Mancilla et al. 2013).
DISCUSIÓN
La degradación obtenida de HEM, HFP y prin-
cipalmente los cromatogramas realizados en el tra-
tamiento control (SC) y con agregado de enmienda
orgánica (SB), muestran marcadas diferencias al ini-
cio y al final del proceso de biorremediación, lo cual
permite deducir que se han eliminado componentes
pertenecientes a distintas fracciones del petróleo. Los
hidrocarburos de alto peso molecular, de estructura
química estable y resistentes a la biodegradación,
mostraron reducciones significativas, siendo el
tratamiento SB el más efectivo. La baja volatilidad
y escasa solubilidad de los HFP en agua, así como
la poca posibilidad de migración por lixiviación
fuera del sistema, indicarían que la eliminación de
los mismos se debió principalmente al metabolismo
microbiano. Los hidrocarburos alifáticos y aromáti-
cos de bajo PM fueron eliminados rápidamente en
suelos areno-francos sometidos a tratamientos de
biorremediación debido a procesos de volatilización
y degradación biológica.
El recuento de microorganismos heterótrofos
aerobios totales y degradadores de hidrocarburos al
inicio de ambos tratamientos fue bajo, probablemente
debido a las propiedades físicas y químicas del suelo
antes mencionadas. Sin embargo, la aplicación de
biosólidos al suelo contaminado produjo un rápido
aumento de la población microbiana lo que favoreció
el proceso de biorremediación.
Dada la aparición de nuevos compuestos durante
el tratamiento con biosólidos (Fig. 3), consideramos
necesario evaluar la ecotoxicidad de los mismos, lo
que permitiría reforzar criterios de seguimiento y
256 C.E.S. Alvaro et al.
determinación del punto de final del proceso. En este
sentido, se continuará el estudio utilizando diferentes
tipos de gramíneas y/o arbustos de la zona norpata-
gónica como especies fitoindicadoras del proceso de
remediación aplicado.
CONCLUSIONES
En el presente trabajo se determinó la viabilidad
de biorremediar suelos patagónicos contaminados
con hidrocarburos mediante el agregado de biosóli-
dos provenientes de plantas de tratamiento de aguas
residuales. La baja concentración de materia orgánica
y nutrientes inorgánicos disponibles en el suelo para
el crecimiento bacteriano mejoró con el aporte del
agregado de la enmienda aplicada.
Es interesante notar que debido a las caracte-
rísticas de los suelos patagónicos, asociado con
el clima desértico de la región, el tratamiento con
biosólidos resultó eficaz frente a los procesos con-
vencionales de biorremediación, tales como aporte
de F y laboreo, aireación y humectación (SC). Los
resultados obtenidos fomentan la aplicación de este
tratamiento en ensayos de campo para evaluar la
sensibilidad del modelo a las variaciones de los
principales factores que intervienen. Las reduccio-
nes observadas en el contenido de HFP confirman
estas suposiciones. Asimismo, al tomar en cuenta
la urgencia de dar un destino ambientalmente sus-
tentable a los biosólidos generados en la región, los
resultados del presente trabajo pueden contribuir
a la selección de enmiendas orgánicas empleadas
para sanear suelos contaminados y aumentar la
efectividad del proceso en función de las propie-
dades del remediante aportado.
REFERENCIAS
Adams Schroeder R.H., Domínguez Rodríguez V.I. y
Vinalay Carrillo L. (2002). Evaluation of microbial
respiration and ecotoxicity in contaminated soils rep-
resentative of the petroleum producing region of
southeastern Mexico. Terra 20 (3), 253-265.
Adams R.H., Kanga-Leyva K., Guzmán-Osorio F.J. y
Escalante-Espinosa E. (2011). Comparison of mois-
ture management methods for the bioremediation of
hydrocarbon contaminated soil. Afr. J. Biotechnol. 10
(3), 394-404.
Alvaro C.E.S., Olave A.J., Schmid P.M. y Nudelman
N.S. (2014). Microbial remediation performance of
environmental liabilities from oil spills in Patagonian
soils: A laboratory-scale. Int. J. Res. Chem. Environ.
4 (3), 119-126.
Alvaro C.E.S., Torre A.M. y Nudelman N.S. (2015).
Hydrocarbons degradation in crude-oil polluted Pa-
tagonian soils with different organic matter quality:
Effect of added organic amendment. Int. J. Res. Chem.
Environ. 5 (2), 18-25.
ASTM (2000). Standard practice for oil spill identifica-
tion by gas chromatography and positive ion electron
impact mass spectrometry (D-5739/00). American
Society for Testing and Materials. West Conshohocken,
EUA, 13 pp.
ASTM 2010b (2010). Standard guide for risk-based
corrective action applied at petroleum release sites
E1739-95. American Society for Testing and Materials.
Manual. West Conshohocken, EUA, 53 pp.
Castro-Mancilla Y.V., Castro-Meza B.I., de la Garza-
Requena F.R., Rivera Ortiz P., Heyer-Rodríguez
L. y Ortiz-Carrizales Y.P. (2013). Variación de las
poblaciones microbianas del suelo por la adición de
hidrocarburos. Terra 31 (3), 221-230.
Di Renzo J.A., Casanoves F., Balzarini M.G., González L.
y Tablada M. (2011). InfoStat versión 2011e liberada.
Grupo InfoStat. Facultad de Ciencias Agrarias. Univer-
sidad Nacional de Córdoba, Argentina [en línea]. http://
www.infostat.com.ar/index.php?mod=page&id=28
15/09/2015
Eweis J.B., Ergas S.J., Chang D.P.Y. y Schroeder E.D.
(1999). Principios de Biorrecuperación: Tratamientos
para la descontaminación y regeneración de suelos
y aguas subterráneas mediante procesos biológicos
y fisicoquímicos. Mc Graw Hill/ Interamericana de
España. Madrid, España, 327 pp.
IAPG (2012). Producción de petróleo por provincia.
Instituto Argentino del Petróleo y del Gas [en línea].
http://www.iapg.org.ar/sectores/estadisticas/productos/
listados/mayo12.htm 13/09/2015
Ley Nacional (1992). Ley Nacional 24051. Régimen de
residuos peligrosos. Boletín Oficial de la República
Argentina. 17 de enero de 1992.
Lladó S., Solanas A.M., Lapuente J., Borras M. y Viñas M.
(2012). A diversified approach to evaluate biostimu-
lation and bioaugmentation strategies for heavy-oil
contaminated soil, Sci. of the Total Environ. 435-436,
262-269.
DOI: 10.1016/j.scitotenv.2012.07.032
Maila M.P. y Cloete T.E. (2005). Bioremediation of petro-
leum hydrocarbons through landfarming: Are simplic-
ity and cost-effectiveness the only advantages? Env.
Science and Biotechnology 3 (4), 349-360.
 BIODEGRADACIÓN DE FRACCIONES DE HIDROCARBUROS EN UN SUELO NORPATAGÓNICO
Maila M.P., Randima P., Dronen K. y Cloete T. E. (2006).
Soil microbial communities: Influence of geographic
location and hydrocarbon pollutants. Soil Biol. Bio-
chem. 38 (2), 303-310.
DOI: 10.1016/j.soilbio.2005.05.006
Margesin R., Walder G. y Schinner S.F. (2003). Bioreme-
diation Assessment of a BTEX-contaminated soil. Acta
Biotechnol. 23 (1), 29-36.
Martínez M.V.E. y López F.S. (2001). Efecto de hidrocar-
buros en las propiedades físicas y químicas de suelo
arcilloso. Terra 19 (1), 9-17.
Martínez-Prado A., Pérez-López M.E., Pinto-Espinoza
J., Gurrola-Nevárez B.A. y Osorio-Rodríguez A.L.
(2011). Biorremediación de suelo contaminado con
hidrocarburos empleando lodos residuales como fuente
alterna de nutrientes. Rev. Int. Contam. Ambie. 27 (3),
241-252.
Meudec A., Dussauze J., Deslandes E. y Poupart N. (2006).
Evidence for bioaccumulation of PAHs within internal
shoot tissues by a halophytic plant artificially exposed
to petroleum polluted-sediments. Chemosphere 65 (3),
474-481. DOI: 10.1016/j.chemosphere.2006.01.058
Norma (2002). Norma NMX-004-SEMARNAT. Protec-
ción ambiental. Lodos y biosólidos. Especificaciones
y límites máximos permisibles de contaminantes para
su aprovechamiento y disposición final. Diario Oficial
de la Federación, Ciudad de México, México, 56 pp.
15 de agosto de 2003.
Norma (2006). Norma NMX-AA-134-SCFI. Suelos-
Hidrocarburos de fracción pesada por extracción y
gravimetría. Método de prueba. Norma de la Secretaría
de Economía de México. Programa Nacional de Medio
Ambiente y Recursos Naturales 2001-2006. Ciudad de
México, México, 27 pp. 12 de octubre de 2006.
Resolución (2001). Resolución 97/01 del Ministerio de
Desarrollo Social y Medio Ambiente de la Nación
Argentina. Manejo sustentable de barros generados en
plantas de tratamiento de efluentes líquidos. Boletín
Oficial de la Nación Argentina. 28 de noviembre de
2001.
257
Ríos S.M. y Nudelman N.S. (2005). Multilayer sorption
model for the interactions between crude oil and
clay in Patagonian soils. J. Disper. Sci. Technol. 26
(1), 19-25.
DOI: 10.1081/DIS-200040228
Ríos S.M. y Nudelman N.S. (2008). Natural attenuation of
oil spills in Patagonian Soils. Characterization by 1H
NMR spectroscopy. Environ. Technol. 29 (1), 23-33.
DOI: 10.1080/09593330802008446
Sparks D.L. (2003). Environmental soil chemistry. 2a ed.
Academic Press. Boston, EUA, 352 pp.
Singh R. y Celin S.M. (2010). Biodegradation of BTEX
compounds by bacterial strain under aerobic condi-
tions. J. of Ecobiotechnol. 2 (4), 27-32.
Trindade P.V.O., Sobral L.G., Rizzo A.C.L., Leite S.G.F.
y Soriano A.U. (2005). Bioremediation of a weathered
and a recently oil-contaminated soils from Brazil: a
comparison study. Chemosphere 58 (4), 515-522.
TPHCWG (1998). Analysis of petroleum hydrocarbons in
environmental media. Total Petroleum Hydrocarbon
Criteria Working Group Series. Volume 1, Amherst
Scientific Publisher. Massachussets, EUA, 98 pp.
USEPA (1986). Total petroleum hydrocarbons in analytical
methods and laboratories petrochemicals-oils. United
States Environmental Protection Agency. Manual.
Washington D. C., EUA, 111 pp.
USEPA (2014). Método 5021 Rev. 2 SW-846 Update V
Test methods Manual. Volatile organic compounds in
soils and other solid matrices using equilibrium head-
space analysis. United States Environmental Protection
Agency, 31 pp.
Walkley A. y Black L.A. (1934). An examination of Degt-
jareff method for determining soil organic matter and
a proposed modification of the chromic acid titration
method. Soil Sci. 37 (1), 29-38 pp.
Woomer P.L. (1994). Most probable number counts. En:
Methods of soils analysis Part 2. Microbiological and
biochemical properties. (S. H. Mickelson y  J. M.
Bigham, Eds.) Soil Science Society of America Book
Series. Madison, EUA, pp. 59-79.