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UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR
FACULTAD DE QUIMICA Y FARMACIA
ABRIL 2013
UNIVERSIDAD DE EL SALVADOR
RECTOR
SECRETARIA GENERAL
DECANA
SECRETARIO
COORDINADORA GENERAL
DOCENTES DIRECTORES
AGRADECIMIENTOS
A Dios sobre todas las cosas por guiarme, bendecirme e iluminarme siempre
en toda mi carrera y permitirme obtener mi primer triunfo profesional.
A todos mis amigos que siempre han estado conmigo en todos los momentos
buenos y malos, brindándome su apoyo, ayuda y una amistad que durara para
siempre. Como también a β por ser una personita maravillosa en mi vida
gracias por tu paciencia, apoyo y porque siempre has estado
incondicionalmente a mi lado.
Néstor Luna
5
DEDICATORIAS
A mis padres Manuel de Jesús Luna y Marina Lourdes de Luna quien con todo
sus esfuerzos y empeño han llenado mi vida de amor, ejemplo, valentía y por
quien este triunfo fue posible, los amo.
A mis hermanos Henrry, Toñito, Jessica y Roció por el apoyo y llenar mi vida
de alegría, buenos momentos y amor los quiero.
Néstor Luna
6
INDICE
Pág.
Resumen
Capítulo I
1.0 Introducción xx
Capítulo II
2.0 Objetivos
Capítulo III
Capítulo IV
Capitulo V
Capítulo VI
Capítulo VII
ÍNDICE DE ANEXOS
ANEXO N°
8. Tabla de t Student
INDICE DE CUADROS
CUADRO N° N° Pág.
INDICE DE FIGURAS
FIGURA N° N° Pág.
INDICE DE TABLAS
TABLA N° N° Pág.
ABREVIATURAS
Abs: Absorbancia
cm: Centímetros
mL: Mililitros
nm: Nanómetros
RESUMEN
CAPITULO I
INTRODUCCION
xx
20
1. INTRODUCCION
CAPITULO II
OBJETIVOS
23
2. OBJETIVOS
CAPITULO III
MARCO TEORICO
25
3 MARCO TEORICO
Los tipos de azucares en el mercado son: refino, blanco y moreno los cuales se
identifican por su grado de pureza y color siendo el refino el de mayor pureza y
moreno el de menor pureza, en el caso del color el moreno el de mayor color y
el refino el de menor color. Los azúcares blancos son alimentos muy puros con
más del 99% de sacarosa mientras que los azucares crudos o moreno poseen
un contenido menor de sacarosa (> 94%) pues conservan aún parte de la miel a
partir de la cual fueron fabricados. Entre sus usos para consumo humano
directo están como edulcorante en bebidas y alimentos; para uso industrial
como edulcorante en embotelladoras y materia prima en la elaboración de
boquitas, panaderías y confiterías.
La caña de azúcar ha sido sin lugar a dudas uno de los productos de mayor
importancia para el desarrollo comercial en el continente americano y europeo.
El azúcar se consume en todo el mundo, puesto que es una de las principales
fuentes de calorías en las dietas de todos los países y se puede obtener
principalmente a partir de la caña de azúcar y la remolacha azucarera. Para su
obtención se requiere de un largo proceso, desde que la semilla de caña
26
3.3.3 MOLIENDA(7)
Después de haberse disminuido el tallo de la caña es recibida en los molinos
que contienen cuatro masas de rodamiento cada uno, cada molino está
equipado con una turbina de alta presión. En el recorrido de la caña por el
molino se agrega agua, generalmente caliente, o jugo diluido para extraer al
máximo la sacarosa que contiene el material fibroso (bagazo). El proceso de
27
extracción con agua es llamado maceración y con jugo se llama imbibición. Una
vez extraído el jugo se tamiza para eliminar el bagazo y el bagacillo, los cuales
se conducen a una bagacera para que sequen y luego se van a las calderas
como combustible, para la generación de vapor y energía eléctrica para que la
maquinaria siga funcionando.
3.3.4 CLARIFICACIÓN(7)
El jugo obtenido, es filtrado, iniciando la primera etapa de calentamiento que
facilita la sedimentación de sólidos insolubles y separándolos del jugo claro que
queda en la parte superior del clarificador, posteriormente, este se extrae de la
molienda, se pesa en básculas con celdas de carga para saber la cantidad de
jugo sacaroso que entra en la fábrica. El jugo obtenido en la etapa de molienda
es de carácter ácido (pH aproximado 5.2), éste se trata con lechada de cal
(CaOH2), la cual eleva el pH con el objetivo de minimizar las posibles pérdidas
de sacarosa. El pH ideal es de 8 a 8.5, lo cual nos da un jugo brillante, con
volumen de cachaza aumenta la temperatura entre el jugo mixto y clarificado y
se evita la destrucción de la glucosa. Para una buena clarificación se necesita
que la cantidad de cal sea correcta ya que esto puede variar la calidad de los
jugos que se obtienen. La cal también ayuda a precipitar impurezas orgánicas o
inorgánicas que vienen en el jugo y para aumentar o acelerar su poder
coagulante, se eleva la temperatura del jugo encalado mediante un sistema de
tubos calentadores, la temperatura de calentamiento varía entre 90 y 114.4ºC,
por lo general se calienta a la temperatura de ebullición o ligeramente más, la
temperatura ideal está entre 94 y 99ºC.
En la clarificación del jugo por sedimentación, los sólidos no azúcares se
precipitan en forma de lodo llamado cachaza, el jugo claro queda en la parte
superior del tanque; el jugo sobrante se envía al campo para el mejoramiento
de los suelos pobres en materia orgánica.
28
3.3.5 EVAPORACIÓN(7)
En esta fase se extrae el agua, y el jugo se convierte en miel virgen, la cual
pasa a los tanques de meladura, para ser purificada en los clarificadores antes
de ser llevada a los tachos, el jugo procedente del sistema de clarificación se
recibe en los evaporadores con un porcentaje de sólidos solubles entre 10 y
12% y se obtiene una meladura o jarabe con una concentración aproximada de
sólidos solubles del 55 al 60 %.
3.3.6 CRISTALIZACIÓN(7)
Los tanques denominados tachos reciben las mieles y siguen en movimiento
constante a temperatura alta, donde se solidifica y se cristaliza formando el
grano de azúcar, estos aparatos se usan para procesar la meladura y mieles
con el objeto de producir azúcar cristalizada mediante la aplicación de calor. El
material resultante que contiene líquido (miel) y cristales (azúcar) se denomina
masa cocida. Esta mezcla se conduce a un cristalizador, que es un tanque de
agitación horizontal equipado con serpentines de enfriamiento. Aquí se deposita
más sacarosa sobre los cristales ya formados, y se completa la cristalización. El
trabajo de cristalización se lleva a cabo empleando el sistema de tres
cocimientos para lograr la mayor concentración de sacarosa, en este proceso
se define si la producción de azúcar va a ser cruda o blanca.
29
3.3.10 EMPACADO(7)
Una vez el azúcar esté seco y frío, es empacado en sacos de diferentes
presentaciones según las necesidades de los clientes nacionales e
Internacionales.
250-cws*
Esta premezcla deberá ser agregada al azúcar con una proporción adecuada
para el consumo humano (1:1000), de manera que el producto contenga la
cantidad seleccionada de 15 mg de retinol/kg de azúcar.
32
Los ingredientes que se utilizan para la premezcla de vitamina “A” son (9):
- Exactitud
- Precisión
- Especificidad / Selectividad
- Limite de detección
- Limite de cuantificación
- Linealidad
- Intervalo / Rango
34
- Robustez
La validación de métodos analíticos consta de 3 etapas de desarrollo que son:
la realización de un protocolo de validación, el desarrollo experimental de cada
parámetro de desempeño contemplados en el protocolo y la presentación del
informe de validación donde se plasman todos los resultados obtenidos, el
tratamiento estadístico, criterios de aceptación y las respectivas firmas de
analistas y responsables de autorizar la validación.
a) Exactitud(2)(10)(23)
b) Precisión(2)(10)(23)
c) Selectividad /Especificidad(2)(10)(23)
e) Limite de cuantificación(2)(10)(23)
f) Linealidad(2)(10)(23)
h) Robustez(2)(10)(23)
Para la selección de los parámetros de desempeño que aplican para los demás
casos ver anexo Nº6
43
Selectividad/ Sí + + +
Especificidad
Estabilidad + + + +
analítica de la
muestra
Linealidad del No Sí Si +
Sistema
Linealidad del No Sí Sí +
Método
Rango No Sí Sí +
Exactitud No Sí Sí +
Repetibilidad No Sí Sí Sí
Precisión No Sí Sí Sí
Intermedia
Reproducibilidad No ++ ++ ++
Límite de Detección + No No No
Límite de No + Sí +
Cuantificación
Robustez + + + +
CAPITULO IV
DISEÑO METODOLOGICO
46
4 DISEÑO METODOLÓGICO
Para la elaboración del presente trabajo se realizo una revisión bibliográfica en:
Los análisis se realizaron con estándar de palmitato de retinol (ver anexo N°4),
a concentraciones que serán especificadas en el procedimiento de cada uno de
los parámetros de desempeño que se desarrollaron.
12. CALCULO
Restar la absorbancia del blanco de reactivos de la absorbancia de la
muestra.
La concentración de retinol en las muestras de azúcar se calcula según la
ecuación siguiente:
( ⁄ )
En donde:
Absorbancia corregida = Absmuestra – Absblanco
Absorbancia del blanco debería ser menor de 0.050.
Parámetros de la ecuación ver cuadro Nº 4
51
R Recuperación 0.905
D Dilución(5/10) 2
( ⁄ )
En donde:
Absorbancia corregida = Absmuestra – Absblanco
Absorbancia del blanco debería de ser menor de 0.050.
P: el peso de la muestra
Procedimiento:
a) Se preparó una mezcla de palmitato de retinol mas azúcar a una
concentración de 10 ppm de vitamina A, a partir del estándar de palmitato de
retinol el cual contiene 277000 UI de vitamina A realizando los respectivos
cálculos:
Media (2)(10)(12)(20)
∑
̅
∑ ̅
√
55
Varianza (2)(10)(12)(20)
Estadístico t (2)(10)(12)(20)
̅ ̅
Procedimiento:
a) Se preparó una mezcla de azúcar crudo con palmitato de retinol a una
concentración de 15 µg/g de vitamina A (15 ppm) a partir del estándar de
palmitato de retinol el cual contiene 277000 UI de vitamina A realizando los
respectivos cálculos:
56
Retinol (4)
( ⁄ )
∑ ̅
√
4.7.3 Linealidad
Linealidad del método(2)(10)(12)(20)
Procedimiento:
a) Se preparó una solución de palmitato de retinol a una concentración de
5 ppm de vitamina A, a partir del estándar de palmitato de retinol el cual
contiene 277000 UI de vitamina A realizando los respectivos cálculos:
58
Pendiente (2)(10)(12)(20)
∑ ̅ ̅
∑ ̅
̅
̂ ̅
[∑ ̅ ̅ ]
[∑ ̅ ] [∑ ̅ ]
∑ ̂
√
√∑ ̅
60
∑
√
∑ ̅
Procedimiento:
a) Se preparó una solución de palmitato de retinol en etanol absoluto a una
concentración de 100 µg/mL de vitamina A (100 ppm) a partir del estándar
de palmitato de retinol, el cual contiene 277000 UI de vitamina A realizando
los respectivos cálculos:
Datos:
C1 = 100 ppm
V1 = x
C2 = 25 ppm
V2 = 50 mL
Se tomó una alícuota de 12.5 mL de la solución madre de 100 ppm con pipeta
volumétrica y se transfirió un balón de 50 mL, se aforó con etanol absoluto para
obtener una concentración de 25 ppm. Posteriormente se realizaron los cálculos
similares como el anterior para las concentraciones de 5, 10, 15, y 20 ppm.
e) Se hicieron las lecturas directas de cada una de las soluciones en el
espectrofotómetro a una longitud de onda de 325nm, llevando a cero de
absorbancia con alcohol absoluto.
f) Se calculó la cantidad de vitamina A con la ecuación de la curva de
calibración, la pendiente, coeficiente de determinación e intervalo de
confianza de la pendiente.
Pendiente (2)(10)(12)(20)
∑ ̅ ̅
∑ ̅
63
[∑ ̅ ̅ ]
[∑ ̅ ] [∑ ̅ ]
∑ ̂
√
√∑ ̅
∑ ̅
√
Donde:
CAPITULO V
1. OBJETIVO
Asegurar que el método analítico de cuantificación de vitamina A en azúcar
moreno por espectrofotometría ultravioleta / visible sea confiable, a través de
los parámetros de desempeño respectivos para su validación brindando
evidencia objetiva de su cumplimiento.
2. ALCANCE
La validación del método se efectuara a partir del mínimo rango cuantificable
que se establecerá atreves del límite de cuantificación hasta 25 ppm (mg/kg) de
vitamina A.
3. RESPONSABILIDADES
Analista: Br. Néstor Manuel Luna Ventura
Jefe de laboratorio: Licda. María del Socorro Bercian
Supervisor: Licda. Zenia Ivonne Arévalo de Márquez
4. PARAMETROS DE DESEMPEÑO A ESTUDIAR
Debido a que se trata de un método normalizado modificado, los parámetros a
evaluar son:
a) Exactitud
b) Repetibilidad
c) Precisión intermedia
d) Linealidad del método
68
5. MUESTRA
La muestra corresponde a azúcar crudo sin fortificar con vitamina A en el cual
se tomara a través de un método interno de muestreo estático según la
Comisión Internacional para la Unificación de los Métodos de Análisis de
Azúcar (siglas en ingles ICUMSA) de la bodega Nº1 del Ingenio
Chaparrastique.
6. EQUIPOS INVOLUCRADOS EN LA VALIDACION
Balanza Analítica METTLER TOLEDO AB204-5
Balanza semianalítica METTLER TOLEDO PL3002
Espectrofotómetro ultravioleta/visible SHIMADZU UV MINI 1240
Shaker THERMO SCIENTIFIC 4310
Agitador Vortex MIXER VM2000
Baño María STOMAS SCIENTIFIC TS6WN
Ver anexo N°5 los certificados de calibración de los equipos utilizados en la
validación.
7. DESCRIPCION DEL METODO ANALITICO A VALIDAR
a) FUNDAMENTO
La muestra de azúcar se disuelve en agua caliente para disolver la matriz del
compuesto de vitamina A. Luego se realiza una dilución 1:1 con hidróxido de
sodio 0.1N para posteriormente realizar la extracción de palmitato de retinol en
hexano. La concentración de retinol es determinada por absorbancia a 325nm.
b) PUNTOS CRÍTICOS Y PRECAUCIONES
Se recomienda el uso de tela negra para cubrir los tubos o balones que
contienen retinol o utilizar cristalería color ámbar.
69
Fenolftaleína al 1%
Hidróxido de sodio 0.1N
n- Hexano
f) CONDICIONES AMBIENTALES
Todos los análisis de la validación se tienen que efectuar en las condiciones
ambientales controladas como la temperatura y humedad del laboratorio que
deben de ser adecuadas al método de análisis debido a que la vitamina A es
susceptible a diversos factores que la pueden degradar.
g) MEDIDAS DE SEGURIDAD PARA LA PREPARACIÓN Y USO DE LOS
REACTIVOS A UTILIZAR
Utilizar el vestuario y equipo adecuado como gabacha, guantes de látex,
mascarillas y lentes durante la preparación del los reactivos como para su
uso.
Aplicar todo lo que establece las buenas prácticas de laboratorio como las
siguientes: no comer ni tomar bebidas dentro del laboratorio, no fumar, no
utilizar celulares, utilizar zapatos cerrados, no utilizar reloj ni joyería entre
otros.
h) PREPARACIÓN DE REACTIVOS
Fenolftaleína 1% p/v
En un beaker de 50 mL pese exactamente 2.5 g de fenolftaleína y disuelva con
aproximadamente 40 mL de etanol absoluto, transfiera la solución a un balón
volumétrico de 250.0 mL, lave las paredes del beaker con pequeñas porciones
de etanol adicionarlas al balón y llevar a marca de aforo con etanol absoluto.
Almacenamiento y expiración: Guardar en frasco oscuro en un lugar fresco, la
solución es estable indefinidamente.
solución a un balón volumétrico de 500.0 mL, lavar las paredes del beaker con
pequeñas porciones de agua destilada libre de CO 2 adicionarlas al balón y
aforar.
i) PREPARACIÓN DE ESTÁNDARES
EXACTITUD
Para 10 ppm (67%): pesar 0.0120 g del estándar de vitamina A y agregarlo a
99.988 g de azúcar moreno mezclándola varias veces.
Para 15 ppm (100%): pesar 0.018 g del estándar de vitamina A y agregarlo a
99.982 g de azúcar moreno mezclándola varias veces.
Para 20 ppm (133%): pesar 0.024 g del estándar de vitamina A y agregarlos a
99.976 g de azúcar moreno mezclándola varias veces.
C1V1 = C2V2
Datos:
C1 = 100 ppm
V1 = x
C2 = 25 ppm
V2 = 50 mL
Se tomo una alícuota de 12.5 mL de la solución madre de 100 ppm con pipeta
volumétrica y se transfirió un balón de 50 mL, se aforo con etanol absoluto para
obtener una concentración de 25 ppm.
Para 5 ppm (33.33%): Pipetear 2.5 mL de la solución madre, transferirlo a un
balón volumétrico de 50.0 mL y aforar con alcohol absoluto.
Para 10 ppm (67%): Pipetear 5.0 mL de la solución madre, transferirlo a un
balón volumétrico de 50.0 mL y aforar con alcohol absoluto.
Para 15 ppm (100%): Pipetear 7.5 mL de la solución madre, transferirlo a un
balón volumétrico de 50.0 mL y aforar con alcohol absoluto.
Para 20 ppm (133%): Pipetear 10.0 mL de la solución madre, transferirlo a un
balón volumétrico de 50.0 mL y aforar con alcohol absoluto.
Para 25 ppm (166.66%): Pipetear 12.5 mL de la solución madre, transferirlo a
un balón volumétrico de 50.0 mL y aforar con alcohol absoluto.
j) PREPARACIÓN DE LA MUESTRA
1. Homogenizar la muestra de azúcar crudo fortificado mezclándola varias
veces.
75
CALCULO
Sustraiga la absorbancia del blanco de reactivos de la absorbancia de las
muestra.
La concentración de retinol en las muestras de azúcar se calcula según la
ecuación siguiente:
( ⁄ )
En donde:
Absorbancia corregida = Absmuestra – Absblanco
Absorbancia del blanco debería de ser menor de 0.050.
Parámetros de la ecuación ver cuadro Nº4
77
R Recuperación 0.905
D Dilución(5/10) 2
( ⁄ )
78
Calcular el coeficiente de
variación.
Calcular el coeficiente de
variación de las dos series de
datos (analista titular y
suplente)
80
Donde:
9. REFERENCIAS
Aguirre Ortega L, Garcia Garcia J, Garcia Junca T, Martin Pomar M, Mateos
Perez B, Illera Fontanet M, et at., Validación de métodos analíticos;
Barcelona. España. Marzo 2001.Pag. 45-96
Arroyave G. y Dary O. Manual para la fortificación de azúcar con vitamina A;
Determinación espectrofotométrica de retinol en azúcar fortificada. Parte 3.
2ª edición, USAID/OMNI-INCAP/OPS, 1997. Pág. 13-17
CONACYT (Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología), guía técnica;
validación de métodos analíticos fisicoquímicos. 2010
83
Porcentaje de recobro:
84
̂ (cantidad
y(cantidad ̅ recuperada
N° de adicionada de (promedio de vitamina %
replica vitamina A) (Abs1) (Abs2) abs) A) Recobro
1 10 0.213 0.219 0.216 10.132 101.3
2 10 0.215 0.219 0.217 10.181 102.8
3 10 0.218 0.216 0.217 10.181 102.8
1 15 0.306 0.311 0.309 14.648 97.7
2 15 0.309 0.310 0.310 14.697 98.0
3 15 0.309 0.314 0.312 14.795 98.6
1 20 0.412 0.409 0.411 19.629 98.1
2 20 0.419 0.422 0.421 20.117 100.6
3 20 0.415 0.406 0.411 19.629 98.1
Abs blanco 0.005 Promedio 99.7
Media aritmética
̅
85
Porcentaje de recobro:
El valor obtenido como el porcentaje de recobro para cada uno de las replicas
analizadas cumplen con respecto al criterio de aceptación ya que están dentro
del rango de trabajo de recobro del 80%-110% para la identificación de analito
en proporción de 10-5 según las tablas del porcentaje de recuperación del
CONACYT (ver anexo N° 7)
Media:
∑
̅
Varianza:
86
Estadístico t:
̅ ̅
√
87
Tabla N°3: Resultados de la veracidad del método de cuantificación de vitamina A en azúcar moreno
por espectrofotometría ultravioleta/visible
y(cantidad Y2
adicionada ̅ Y1 Est
de vitamina (Promedio (Vit A1) (Vit A2) (Promedio Vit A
Muestra A)ppm (Abs1) (Abs2) abs) ppm ppm Vit A) (Y-̅ ppm
1 15 0.318 0.315 0.316 15.37 15.25 15.31 0.07185 15
2 15 0.311 0.305 0.308 15.03 14.75 14.89 0.02250 15
3 15 0.309 0.311 0.310 14.93 15.05 14.99 0.00267 15
4 15 0.305 0.311 0.308 14.75 15.03 14.89 0.02250 15
5 15 0.315 0.320 0.317 15.25 15.47 15.36 0.10064 15
6 15 0.306 0.314 0.310 14.80 15.20 15.00 0.00155 15
7 15 0.316 0.316 0.315 15.27 15.27 15.27 0.05344 15
8 15 0.303 0.305 0.304 14.66 14.73 14.69 0.12023 15
9 15 0.304 0.309 0.306 14.71 14.93 14.82 0.05008 15
10 15 0.316 0.312 0.314 15.27 15.10 15.19 0.02105 15
Abs blanco 0.005 Suma 150.40 0.46650 150
Promedio 15.04 15
Desvest 0.2276
%CV 1.51
88
La tabla N°3 muestra los resultados de las diez replicas del material de
referencia, realizadas el mismo día por el mismo analista e instrumento. Se
muestra la cantidad de vitamina A encontrada experimentalmente a partir de
una teórica, el promedio de vitamina A, la desviación estándar y el porcentaje
de coeficiente de variación.
La tabla N°4 muestra los resultados del estudio probabilístico t Student de dos
colas para dos muestras suponiendo varianzas desiguales. Se muestra la
media obtenida de la tabla N°3, la varianza, el estadístico t y el valor critico de t
para dos colas que es un valor teórico (ver anexo N°8) para un numero de
muestra de nueve (10-1) y utilizando un nivel de significancia (α) del 5%(0.05)
establecido para proyectos de investigación experimental.
Media aritmética
̅
89
Retinol
( ⁄ )
( ⁄ )
( ⁄ )
Desviación estándar
∑ ̅
√
%Coeficiente de variación
90
∑ ̅
Estadístico t
̅ ̅
√ ( )
√ ( )
Zona de
aceptación
-0.5555 0.5555
Ho: valor de la media encontrada del estándar igual al valor del estándar de
referencia
Alfa (α) = 0.05 es decir, se trabajara con un nivel de confianza del 95%
92
Rechazamos Ho si |t|>talfa,n-1
e) Paso 5: decisión
Retinol:
( ⁄ )
Desviación estándar:
∑ ̅
√
%Coeficiente de variación
∑
̅
La tabla N°5 muestra los resultados de las diez replicas de la muestra a una
misma concentración de 15 ppm analizadas, en el mismo día por el mismo
analista e instrumento. Se muestra la cantidad de vitamina A encontrada
experimentalmente, la desviación estándar y el porcentaje de coeficiente de
variación. A continuación se ejemplifica como se realizaron los cálculos para el
análisis N°1:
Retinol
( ⁄ )
( ⁄ )
( ⁄ )
Media aritmética
∑
̅
̅
95
∑ ̅
Desviación estándar
∑ ̅
√
Retinol:
( ⁄ )
Desviación estándar:
∑ ̅
√
%Coeficiente de variación
∑
̅
97
Y
N° de Concentración x1 x2 y2 y2 (promedio
(Y-̅)
2
replicas teórica (ppm) (Abs 1) (Abs 2) (Vit A 2) (Vit A 2) de Vit A)
1 15 0.320 0.314 15.44 15.15 15.30 0.6467
2 15 0.338 0.340 16.33 16.43 16.38 0.0772
3 15 0.326 0.325 15.74 15.69 15.71 0.1491
4 15 0.325 0.322 15.69 15.54 15.62 0.2347
5 15 0.328 0.335 15.84 16.18 16.01 0.0083
6 15 0.320 0.318 15.44 15.35 15.39 0.4981
7 15 0.320 0.321 15.44 15.49 15.47 0.3994
8 15 0.330 0.336 15.94 16.23 16.08 0.0003
9 15 0.342 0.346 16.53 16.72 16.62 0.2744
10 15 0.342 0.335 16.53 16.18 16.35 0.0642
11 15 0.332 0.336 16.03 16.23 16.13 0.0010
12 15 0.344 0.351 16.62 16.97 16.80 0.4843
13 15 0.322 0.326 15.54 15.74 15.64 0.2115
14 15 0.358 0.358 17.31 17.31 17.31 1.4698
15 15 0.335 0.343 16.18 16.57 16.38 0.0772
16 15 0.35 0.353 16.92 17.07 16.99 0.7969
17 15 0.318 0.318 15.35 15.35 15.35 0.5700
18 15 0.327 0.321 15.79 15.49 15.64 0.2115
19 15 0.351 0.352 16.97 17.02 16.99 0.7969
20 25 0.326 0.33 15.74 15.94 15.84 0.0692
Abs blanco 0.006 Sumatoria 322.00 7.0406
̅Promedio 16.10
Desv Est 0.61
%CV 3.8
Retinol
( ⁄ )
( ⁄ )
( ⁄ )
Media aritmética
∑
̅
∑ ̅
99
Desviación estándar
∑ ̅
√
Pendiente:
∑ ̅ ̅
∑ ̅
Ordenada al origen:
̅
̂ ̅
Coeficiente de determinación:
[∑ ̅ ̅ ]
[∑ ̅ ] [∑ ̅ ]
∑ ̂
√
√∑ ̅
101
∑
√
∑ ̅
̂
102
Tabla N°7: Resultados de la linealidad del método para la cuantificación de vitamina A en azúcar moreno por
espectrofotometría ultravioleta / visible
103
Pendiente:
∑ ̅ ̅
∑ ̅
Ordenada al origen:
̅
̂ ̅
Coeficiente de determinación:
[∑ ̅ ̅ ]
[∑ ̅ ] [∑ ̅ ]
104
∑ ̂
√
√∑ ̅
∑
√
∑ ̅
√
105
Se hizo analizando cinco concentración (5, 10, 15, 20 y 25 µg/mL) del estándar
de palmitato de retinol analizándolas por triplicado, de esta manera se pudo
elaborar la curva de calibración concentración vrs absorbancia. Se calculo la
cantidad d vitamina A por medio de la ecuación de la curva de calibración, el
valor de la pendiente, coeficiente de determinación e intervalo de confianza de
la pendiente utilizando las siguientes formulas:
106
Pendiente:
∑ ̅ ̅
∑ ̅
Coeficiente de determinación:
[∑ ̅ ̅ ]
[∑ ̅ ] [∑ ̅ ]
∑ ̂
√
√∑ ̅
107
Tabla N°8: Resultados de la linealidad del sistema para el método de cuantificación de vitamina A en azúcar
moreno por espectrofotometría ultravioleta / visible
108
Pendiente:
∑ ̅ ̅
∑ ̅
Coeficiente de determinación:
[∑ ̅ ̅ ]
[∑ ̅ ] [∑ ̅ ]
∑ ̂
√
109
√∑ ̅
Desviación estándar:
∑ ̅
√
Limite de cuantificación
Donde:
promedio ̅ 0.004
Desvest 0.0007071
Media Aritmética:
∑
̅
̅
112
∑
̅
∑ ̅
Desviación Estándar:
∑ ̅
√
Limite de cuantificación
ppm
Resultados de Exactitud
Resultados de Precisión
2
r = 0.999 El coeficiente de Conforme
determinación deberá ser
mayor a 0.98
2
r = 0.999 El coeficiente de Conforme
determinación deberá ser
mayor 0.98
b= 0.0902
El IC(b), el valor de la
Conforme
IC(b)= 0.0875 , 0.0929 pendiente debe incluirse en
el intervalo.
CAPITULO VI
CONCLUSIONES
119
6. CONCLUSIONES
CAPITULO VII
RECOMENDACIONES
122
7. RECOMENDACIONES
3. Utilizar este proceso de validación como una guía que pueda orientar a los
estudiantes de la carrera de Licenciatura en Química y Farmacia en temas
de validación de métodos analíticos para que puedan aumentar sus
conocimientos en las cátedras de control de calidad.
8. BIBLIOGRAFIA
1. Aguilar G.M, Nájera Mejía A.R, determinación de vitamina A agregada y
trazas de plomo en azúcar obtenida en los ingenios nacionales y
consumidas en el país, Universidad de El Salvador, Facultad de Química y
Farmacia, marzo 1998.
13. Grupo CASSA. Hoja técnica de azúcar blanco sulfitado. Código D-OVT-002.
Edición 001. Agosto 2011. Pág. 1-3
14. Grupo CASSA. Hoja técnica de azúcar crudo. Código D-OVT-005. Edición
001. Agosto 2011. Pág. 1-3
125
20. Miller J. C., Miller J.N, Estadística y Quiometría para química Analítica 4 a
edición, Pearson Educación S.A, Madrid, España 2002. Pág. 110-122
25. www.asamblea.gob.sv/eparlamento/indice-legislativo/buscador-de-
documentos-legislativos/ley-de-fortificacion-del-azucar-con-vitamina-a
26. www.ecured.cu/index.php/Archivo:Proceso_del_azucar.jpg
27. www.perafan.com/azucar/ea02azuc.html
127
GLOSARIO (15)
Imbibición: es el proceso por el cual se añade agua o jugo al bagazo, para que
se mezcle con el jugo existente en este y lo diluya.
ANEXOS
129
ANEXO N°2
̂ (cantidad
y(cantidad ̅ recuperada
N° de adicionada de (promedio de vitamina %
replica vitamina A) (Abs1) (Abs2) abs) A) Recobro
1 10 0.213 0.219 0.216 10.132 101.3
2 10 0.215 0.219 0.217 10.181 102.8
3 10 0.218 0.216 0.217 10.181 102.8
1 15 0.306 0.311 0.309 14.648 97.7
2 15 0.309 0.310 0.310 14.697 98.0
3 15 0.309 0.314 0.312 14.795 98.6
1 20 0.412 0.409 0.411 19.629 98.1
2 20 0.419 0.422 0.421 20.117 100.6
3 20 0.415 0.406 0.411 19.629 98.1
Abs blanco 0.005 Promedio 99.7
Media aritmética
̂
132
Porcentaje de recobro:
̅
133
Tabla N°3: Resultados de la veracidad del método de cuantificación de vitamina A en azúcar moreno
por espectrofotometría ultravioleta/visible
y(cantidad Y2
adicionada ̅ Y1 Est
de vitamina (Promedio (Vit A1) (Vit A2) (Promedio Vit A
Muestra A)ppm (Abs1) (Abs2) abs) ppm ppm Vit A) (Y-̅ ppm
1 15 0.318 0.315 0.316 15.37 15.25 15.31 0.07185 15
2 15 0.311 0.305 0.308 15.03 14.75 14.89 0.02250 15
3 15 0.309 0.311 0.310 14.93 15.05 14.99 0.00267 15
4 15 0.305 0.311 0.308 14.75 15.03 14.89 0.02250 15
5 15 0.315 0.320 0.317 15.25 15.47 15.36 0.10064 15
6 15 0.306 0.314 0.310 14.80 15.20 15.00 0.00155 15
7 15 0.316 0.316 0.315 15.27 15.27 15.27 0.05344 15
8 15 0.303 0.305 0.304 14.66 14.73 14.69 0.12023 15
9 15 0.304 0.309 0.306 14.71 14.93 14.82 0.05008 15
10 15 0.316 0.312 0.314 15.27 15.10 15.19 0.02105 15
Abs blanco 0.005 Suma 150.40 0.46650 150
Promedio 15.04 15
Desvest 0.2276
%CV 1.51
134
Media aritmética
Retinol
( ⁄ )
( ⁄ )
( ⁄ )
̅
135
Desviación estándar
∑ ̅
√
%Coeficiente de variación
∑ ̅
Zona de
aceptación
-0.5555 0.5555
Ho: valor de la media encontrada del estándar igual al valor del estándar de
referencia
Alfa (α) = 0.05 es decir, se trabajara con un nivel de confianza del 95%
Rechazamos Ho si |t|>talfa,n-1
j) Paso 5: decisión
Retinol
( ⁄ )
( ⁄ )
( ⁄ )
139
Media aritmética
∑
̅
∑ ̅
Desviación estándar
∑ ̅
√
Y
N° de Concentración x1 x2 y2 y2 (promedio
(Y-̅)
2
replicas teórica (ppm) (Abs 1) (Abs 2) (Vit A 2) (Vit A 2) de Vit A)
1 15 0.320 0.314 15.44 15.15 15.30 0.6467
2 15 0.338 0.340 16.33 16.43 16.38 0.0772
3 15 0.326 0.325 15.74 15.69 15.71 0.1491
4 15 0.325 0.322 15.69 15.54 15.62 0.2347
5 15 0.328 0.335 15.84 16.18 16.01 0.0083
6 15 0.320 0.318 15.44 15.35 15.39 0.4981
7 15 0.320 0.321 15.44 15.49 15.47 0.3994
8 15 0.330 0.336 15.94 16.23 16.08 0.0003
9 15 0.342 0.346 16.53 16.72 16.62 0.2744
10 15 0.342 0.335 16.53 16.18 16.35 0.0642
11 15 0.332 0.336 16.03 16.23 16.13 0.0010
12 15 0.344 0.351 16.62 16.97 16.80 0.4843
13 15 0.322 0.326 15.54 15.74 15.64 0.2115
14 15 0.358 0.358 17.31 17.31 17.31 1.4698
15 15 0.335 0.343 16.18 16.57 16.38 0.0772
16 15 0.35 0.353 16.92 17.07 16.99 0.7969
17 15 0.318 0.318 15.35 15.35 15.35 0.5700
18 15 0.327 0.321 15.79 15.49 15.64 0.2115
19 15 0.351 0.352 16.97 17.02 16.99 0.7969
20 25 0.326 0.33 15.74 15.94 15.84 0.0692
Abs blanco 0.006 Sumatoria 322.00 7.0406
̅Promedio 16.10
Desv Est 0.61
%CV 3.8
141
Retinol
( ⁄ )
( ⁄ )
( ⁄ )
Media aritmética
∑
̅
∑ ̅
142
Desviación estándar
∑ ̅
√
Tabla N°7: Resultados de la linealidad del método para la cuantificación de vitamina A en azúcar moreno por
espectrofotometría ultravioleta / visible
144
Pendiente:
∑ ̅ ̅
∑ ̅
Ordenada al origen:
̅
̂ ̅
Coeficiente de determinación:
[∑ ̅ ̅ ]
[∑ ̅ ] [∑ ̅ ]
∑ ̂
√
145
√∑ ̅
∑
√
∑ ̅
̂
146
Tabla N°8: Resultados de la linealidad del sistema para el método de cuantificación de vitamina A en azúcar
moreno por espectrofotometría ultravioleta / visible
147
Pendiente:
∑ ̅ ̅
∑ ̅
Coeficiente de determinación:
[∑ ̅ ̅ ]
[∑ ̅ ] [∑ ̅ ]
∑ ̂
√
√∑ ̅
148
promedio ̅ 0.004
Desvest 0.0007071
149
Media Aritmética:
∑
̅
∑
̅
∑ ̅
Desviación Estándar:
∑ ̅
√
Límite de cuantificación
ppm
150
25
20
Concentración
15
10
0
0.000 0.100 0.200 0.300 0.400 0.500 0.600
-5
Absorbancia
2.000
Absorbancia
1.500
1.000
0.500
0.000
0 5 10 15 20 25 30
Concentración
ANEXO N°4
ANEXO N°5
ANEXO Nº6
Métodos Normalizados
Selectividad/ Especificidad Sí + + +
Estabilidad analítica de la + + + +
muestra
Rango No + + +
Exactitud No Sí Sí +
Repetibilidad No Sí Sí Sí
Precisión Intermedia No Sí Sí Sí
Reproducibilidad No ++ ++ ++
Límite de Detección + No No No
Límite de Cuantificación No + + +
Robustez + + + +
Selectividad/ Sí Sí Sí +
Especificidad
Estabilidad Sí Sí Sí +
analítica de la
muestra
Linealidad del No Sí Sí +
Sistema
Linealidad del No Sí Sí +
Método
Rango No Sí Sí +
Exactitud No Sí Sí +
Repetibilidad No Sí Sí Sí
Precisión No Sí Sí Sí
Intermedia
Reproducibilidad No ++ ++ ++
Límite de Sí No + No
Detección
Límite de No + Sí +
Cuantificación
Robustez + Si Sí +
ANEXO N°7
ANEXO N°8
ANEXO Nº 9
DECRETO Nº 843.-
CONSIDERANDO:
POR TANTO,
DECRETA la siguiente:
TITULO I
CAPITULO UNICO
OBJETO DE LA LEY
Art. 1.- El objeto de la presente ley es establecer normas que regulen la
obligación de los centros de producción o ingenios azucareros para la
fortificación del azúcar con vitamina "A", Palmitato de Retinilo, como medio para
controlar y prevenir la deficiencia nutricional de la población.
TITUTO II
CAPITULO UNICO
ORGANISMOS DE APLICACION
Art. 3.- Los organismos estatales encargados de velar por el debido
cumplimiento de las normas contenidas en esta ley y su reglamento, son el
Ministerio de Salud Pública y Asistencia Social y el Ministerio de Economía.
a) Ejercer los controles necesarios para que no se importe azúcar sin fortificar;
TITULO III
CAPITULO UNICO
PROCEDIMIENTOS PARA LA FORTIFICACION
Art. 9.- Los sacos que contengan la premezcla deberán tener etiqueta impresa
en la que esté identificado su contenido en la forma siguiente: "Premezcla de
azúcar, Palmitato de Retinilo. Para uso exclusivo en la fortificación de azúcar.
Peligro. No apta para consumo directo". Además, deberá señalar la fecha de
preparación, el número de lote y la nominación de la institución a cuyo cargo
está su elaboración.
Los sacos que deben usarse para empacar la premezcla, serán de polietileno
negro, colocado dentro de otro saco de fibras de polipropileno, sellándolos
herméticamente, procurando no dejar ningún espacio vacío en su interior a fin
de impedir que se lleguen a abrir por deficiencia del material empleado en su
fabricación.
Los ingenios velarán porque los sacos conteniendo premezcla sean
almacenados en un lugar limpio y fresco. En el caso de que se abriera uno de
los sacos, su contenido debe ser usado de inmediato y por ninguna razón
deben guardarse sacos abiertos dentro de un ingenio.
Art. 10.- En los mercados al aire libre y para la venta al detalle, el azúcar debe
estar empacado en bolsas plásticas transparentes, pero opacas a la luz
173
Art. 12.- Para imponer cualquier clase de sanción deberá tomarse en cuenta la
naturaleza de la infracción, su mayor o menor gravedad, la repercusión que la
infracción haya tenido o pueda tener en la población y la capacidad económica
del infractor.
Art. 13.- Toda acción y omisión que contravenga lo dispuesto en esta Ley, se
considerará como infracción contra la salud y se sancionará
administrativamente de conformidad con los procedimientos establecidos en el
Título III, Capítulo II, Sección Dos y Capítulo V del Código de Salud en lo que
fueren aplicables.
TITULO V
CAPITULO UNICO
DISPOSICIONES FINALES Y TRANSITORIAS
Art. 15.- El proceso de fortificación del azúcar con Palmitato de Retinilo, objeto
de esta ley deberá entrar en funcionamiento a partir de la zafra correspondiente
al año 1994/1995.
Art. 17.- Está exceptuado del proceso de fortificación a que se refiere esta ley,
la existencia del producto elaborado, que para el mercado interno se tuviere
como resultado de zafra anteriores a la quede termine esta ley. Para tal efecto,
los interesados deberán hacer del conocimiento del Ministerio de Salud Pública
y Asistencia Social, el monto de las existencias del azúcar antes de la zafra
respectiva, para que la autoridad correspondiente ejerza sobre el producto no
enriquecido el control que estimare necesario.
CASA PRESIDENCIAL: San Salvador, a los veintiún días del mes de abril de
mil novecientos noventa y cuatro.
PUBLIQUESE,
ANEXO N°10
AZUCARES. ESPECIFICACIONES.
I.C.S. 67.180
INFORME
Los Comités Técnicos de Normalización del Consejo Nacional de Ciencia y
Tecnología, CONACYT, son los organismos encargados de realizar el estudio o
la adopción de Normas. Están integrados por representantes de la Empresa
Privada, Gobierno, Organismos de Protección al Consumidor y Académico
Universitario.
1. OBJETO
Esta Norma Salvadoreña Obligatoria establece las características físicas,
químicas y especificaciones nutricionales que debe cumplir el azúcar.
2. AMBITO DE APLICACION
Esta norma se aplica a toda el azúcar que se consume en el país, cualquiera
que sea su tipo, sea ésta de producción nacional, importación comercial o
donación la cual debe estar fortificada con Vitamina "A", para consumo directo o
indirecto.
3. DEFINICIONES
3.1 Azúcar: producto sólido cristalino, constituido principalmente por sacarosa.
3.2 Azúcar fortificada con Vitamina "A": es aquella que contiene, durante su
comercialización un nivel mínimo de 5 mg/kg de Palmitato de Retinol.
179
7. ENVASE Y ETIQUETA
Además de los requisitos de la NSO 67.10.01:98 NORMA GENERAL PARA EL
ETIQUETADO DE LOS ALIMENTOS PREENVASADOS se deben aplicar las
siguientes disposiciones específicas:
7.1 Nombre y tipo del producto: Se debe indicar la siguiente leyenda: Azúcar
(el especificado en el inciso 4 de la presente norma), Fortificada con Vitamina
"A".
Conductividad 004-1981
9. REFERENCIAS NORMATIVAS
Para la elaboración de la presente norma se han considerado los siguientes
documentos:
- Ley de Fortificación de Azúcar con Vitamina A.
- Decreto N° 843 del Ministerio de Salud Pública y Asistencia Social, 14 de
abril de 1994.
- Reglamento de la Ley de Fortificación con Vitamina A.
- Decreto N° 3 del Ministerio de Salud Pública y Asistencia Social, 2 de abril
de 1995.
- Norma Técnica del Azúcar Centrifugada Fortificada con Vitamina A.
- SCA-02 Resolución Ministerial N° 507 del 18 de mayo de 1995.
- Azúcar Blanco. CODEX STAN 4. 1981 (Volumen 11 del CODEX
ALIMENTARIUS).
FIN DE NORMA