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TESIS
Parasitóloga
AUTOR
ASESOR
Formatted: Right
Jorge León Quispe
Lima - Perú
2019
TESIS
Formatted: Right
Bióloga Microbióloga ParasitólogaPara optar el Título Profesional de
Bióloga Microbióloga
Parasitóloga
AUTOR
ASESOR
ASESOR
Lima - Perú
2019
Formatted: Right
Formatted: Left, Tab stops: 3.97", Left + 5.91", Right
Lima - P
Formatted: Right
Dedico esta tesis a mis padres Amparo y Gabriel, a mi abuelita Tomasa, a mi tía María
y y a César, por su apoyo constante durante mis 5 años de carrera. Los amo mucho.
A mis maestros por ser los que me enseñaron y motivaron a seguir estudiando
microbiología.
A mi asesor por decir SI PUEDES, y creer en mí a pesar que me sentía sin fuerzas.
Este logro es para ustedes, el sacrificio a pesar de las dificultades siempre da buenos
Formatted: Justified
Formatted: Centered
Formatted: Centered
Formatted: Left
Formatted: Centered
AGRADECIMIENTOS
A mi Alma Máter, la Universidad Nacional Mayor de San Marcos por el Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: List Paragraph, Bulleted + Level: 1 + Aligned at:
financiamiento a través del Vicerrectorado de Investigación y Posgrado (VRIP) 0.25" + Indent at: 0.5"
A mi asesor Mag. Jorge León por darme la oportunidad de formar parte del Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: List Paragraph, Left, Adjust space between Latin
Laboratorio de Ecología Microbiana, por sus conocimientos y enseñanzas, por and Asian text, Adjust space between Asian text and numbers
Formatted: Font: (Default) Arial
permitirme conocer parte de su pueblo, Cabana-Ayacucho y por la confianza Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Font: (Default) Arial
depositada para salir adelante.
Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: List Paragraph, Bulleted + Level: 1 + Aligned at:
0.25" + Indent at: 0.5"
A Dios por haberme dado todo, una familia, amistades, personas que amo y Formatted: Font: (Default) Arial
por darme la alegría para ver el lado positivo de las cosas, siempre sacar una
Al Dr. Julio Santiago y a su colaboradora Marlene Velásquez del Laboratorio de Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: List Paragraph, Bulleted + Level: 1 + Aligned at:
Investigación de Química Orgánica de la UNMSM por el gran apoyo brindado. 0.25" + Indent at: 0.5"
Formatted: Font: (Default) Arial
Al Blgo Wilbert Cruz Hilacondo de la Universidad Nacional Federico Villarreal
por su gran apoyo en el manejo de la cepa de Phytophthora infestans. Formatted: Font: Italic
Sarita, Carolina, Verónica, Junior y a todos los demás. Gracias por ser mi
A los miembros del Jurado de Tesis, por sus consejos, sus enseñanzas en mi Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Font: (Default) Arial
época universitaria y en la revisión de la etapa final de este trabajo. Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Justified, Line spacing: Double
Finalmente, agradecer a todo aquel que en alguna forma ha contribuido a la
Formatted: Font: (Default) Arial
realización y culminación de este trabajo
A mis padres Amparo y Gabriel por ser mi fortaleza y mi ejemplo, gracias Formatted: Font: 12 pt
por haberme dado la oportunidad de estudiar y cumplir mis metas. Formatted: List Paragraph, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
A mi abuelita Tomasa por ser como una madre para mí y acogerme Asian text and numbers
cuando me sentía sola , a mis tíos en especial a mi tía María por
influenciar en mí en el mundo de biología.
A Cody por ser mi mejor amigo de cuatro patas y mi confidente.
A César por ser mi compañero, y enseñarme tanto del amor.
A mi asesor Jorge León por permitirme ser parte de su historia, de su
pueblo, de Cabana-Ayacucho, por la confianza depositada, por creer en
mi a pesar de todo.
A mis amigos del laboratorio de Ecología microbiana, especialmente a
Sarita por ser un gran apoyo y una gran amiga, a Carolina por ser como
mi hermana, su apoyo es inmenso, a Junior por ser un excelente guía en
la realización de mi tesis, y a todos los demás chicos por ser como mi
familia, los valoro demasiado.
A los profesores Pedro Castellanos, Abad Flores, Fernando de la Cruz,
por sus consejos, sus enseñanzas en mi época universitaria y en la
etapa final de la revisión de este trabajo.
Formatted: Centered
A mis “amiwis” de base y de fiestas Alys, Xio, Luchito. Gracias por enseñarme
una amistad sincera y por los ánimos, siempre podrán contar conmigo.
APD: Agar de patata y dextrosa CMI: Concentración mínima inhibitoria CPD: Caldo de Formatted: Font: (Default) Arial
DMSO: Dimetilsulfóxido
Dióxido de carbono CXC: Carboximetil celulosa DMSO: Dimetilsulfóxido DNA: Ácido Formatted: Font: (Default) Arial
Kilogramo
National Comitee for Clinical Laboratory Standards PEG 200: Polietilenglicol 200 p.o: Formatted: Font: (Default) Arial
Mm: Milímetro
µm: micrómetro
Ml: Mililitro
CAB: Cabana
mg: Miligramo
Formatted: Centered
ÍINDICEContenido Formatted: Font: 14 pt, Bold, English (United States)
3.5.1.2 MORFOLOGÍA…………………………………………………………………………………………………..……….13
3.5.1.4 VARIABILIDAD GENÉTICA DE Phytophthora infestans……………………………………………….15 Formatted: Font: 10 pt, Italic, No underline, Font color: Auto
Formatted: Font: 10 pt, Not Italic, No underline, Font color:
3.6 ACTINOMICETOS ..................................................................................................................... 235 Auto
3.6.1 EL ORDEN ACTINOMYCETALES ...............................................................................................235 Formatted: Font: 10 pt, Check spelling and grammar
Formatted: Tab stops: 0.61", Left
3.6.2 GÉNERO Streptomyces ................................................................................................... 16
Formatted: Font: 10 pt, No underline
3.6.2.1 GENERALIDADES TAXONÓMICAS…………………………………………………..……………………..…….16 Formatted: Normal, Tab stops: Not at 0.92" + 5.9"
Formatted: Default Paragraph Font, Font: 10 pt, Check
3.6.2.2 MORFOLOGÍA, Y CICLO DE VIDA ………………………..…….…………………………………………..…….17
spelling and grammar
3.7 COMPUESTOS BIOACTIVOS PRODUCIDOS POR Streptomyces SP…………...…………………................19 Formatted: Normal, Tab stops: Not at 0.61" + 5.9"
Formatted: Font: 10 pt, Check spelling and grammar
3.7.1 METABOLITOS SECUNDARIOS .......................................................................................... 19
3.7.2 ENZIMAS EXTRACELULARES ............................................................................................. 19
3.7.3 METABOLITOS CON CAPACIDAD ANTAGÓNICA ............................................................. 270
IV HIPÓTESIS Y OBJETIVOS ..................................................................................................................... 21
Formatted: Right
4.1. Hipótesis.......................................................................................................................................... 21
V FORMULACIÓN DE OBJETIVOS, GENERAL Y ESPECÍFICOS ...............................................................301
5.1 Objetivo general: .................................................................................................................... 301
5.2 Objetivos específicos: ............................................................................................................. 301
VI MATERIALES Y MÉTODOS ................................................................................................................ 312
6.1 MATERIALES ............................................................................................................................ 312
6.1.1 Material biológico ............................................................................................................ 22
6.2 MÉTODOS ....................................................................................................................................... 322
6.2.1 LOCALIDAD DE MUESTREO ............................................................................................ 322
6.2.2 TOMA DE MUESTRAS Y TRANSPORTE AL LABORATORIO DE TRABAJO .......................... 332
6.2.3 AISLAMIENTO ................................................................................................................. 333
6.2.4 SELECCIÓN DE COLONIAS DE ACTINOMICETOS ............................................................. 343
6.2.5 CONSERVACIÓN DE LOS CULTIVOS PUROS DE ACTINOMICETOS ..................................... 24
6.2.6 CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA DE ACTINOMICETOS AISLADOS ............................... 24
6.2.7 DETERMINACIÓN HIDROLÍTICA Y ASIMILACIÓN DE CARBOHIDRATOS ............................ 24
6.2.8 CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA ...................................................................................... 25
6.2.9 CARACTERIZACIÓN DE Phytophthora infestans ............................................................. 376
6.2.10 PRUEBA DE ANTAGONISMO DE ACTINOMICETOS VS. Phytophthora infestans............. 376
6.2.11 OBTENCIÓN DEL EXTRACTO ORGÁNICO ........................................................................ 387
6.2.12 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTI- Phytophthora DE LOS EXTRACTOS ORGÁNICOS
27
VII RESULTADOS ...................................................................................................................................... 28
7.1 COLONIAS DE ACTINOMICETOS ................................................................................................ 28
7.2 CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA DE LOS AISLAMIENTOS .......................................................... 28
7.3 DETERMINACIÓN HIDROLÍTICA Y ASIMILACIÓN DE CARBOHIDRATOS ................................... 462
7.4 CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA DE LOS ACTINOMICETOS .................................................... 547
7.4.1 Rango de crecimiento en función de la temperatura .................................................... 547
7.4.2 Rango de crecimiento en función del pH ...................................................................... 557
7.5 CARACTERIZACIÓN DE Phytophthora infestans ........................................................................ 39 Formatted: Font: 10 pt, Not Italic
Formatted: Right
............................................................................................................................... RESUMEN Formatted: Font: 10 pt, No underline, Font color: Text 1
...................................................................................................................................................... 1 Formatted: Font: 10 pt
2 .................................................................................................................................................................... 1 Formatted: Heading 1, Outline numbered + Level: 1 +
Numbering Style: I, II, III, … + Start at: 1 + Alignment: Right
3 INTRODUCCIÓN ................................................................................................................................... 3 + Aligned at: 0" + Indent at: 0.3"
4 MARCO TEÓRICO ................................................................................................................................. 6
4.1 LA PAPA (Solanum tuberosum) ................................................................................................... 6
4.2 AGRICULTURA DE LA PAPA ......................................................................................................... 7
4.3 CULTIVOS ORGÁNICOS ................................................................................................................ 8
4.3.1 PAPAS NATIVAS .................................................................................................................. 9
4.3.2 VARIEDADES DE PAPAS NATIVAS ....................................................................................... 9
4.4 PROBLEMAS POR LOS QUE ATRAVIESA EL CULTIVO DE PAPA .................................................. 10
4.5 EL TIZÓN TARDÍO DE LA PAPA ................................................................................................... 12
Phytophthora infestans ............................................................................................................. 15
4.5.1 ................................................................................................................................................... 15
4.6 ACTINOMICETOS ....................................................................................................................... 19
El Orden Actinomycetales ......................................................................................................... 19
4.6.1 ................................................................................................................................................... 19
4.6.2 GÉNERO Streptomyces ..................................................................................................... 19
4.7 COMPUESTOS BIOACTIVOS PRODUCIDOS POR Streptomyces SP. ............................................ 22
4.7.1 METABOLITOS SECUNDARIOS .......................................................................................... 22
4.7.2 ENZIMAS EXTRACELULARES ............................................................................................. 22
4.7.3 METABOLITOS CON CAPACIDAD ANTAGÓNICA ............................................................... 23
5 HIPÓTESIS Y OBJETIVOS ..................................................................................................................... 25
4.1. Hipótesis.......................................................................................................................................... 25
6 FORMULACIÓN DE OBJETIVOS, GENERAL Y ESPECÍFICOS ................................................................. 25
6.1 Objetivo general: ...................................................................................................................... 25
6.2 Objetivos específicos: ............................................................................................................... 25
7 MATERIALES Y MÉTODOS .................................................................................................................. 26
7.1 MATERIALES .............................................................................................................................. 26
7.1.1 Material biológico ............................................................................................................ 26
MÉTODOS ...................................................................................................................................... 26
7.2 .......................................................................................................................................................... 26
7.2.1 LOCALIDAD DE MUESTREO .............................................................................................. 26
7.2.2 TOMA DE MUESTRAS Y TRANSPORTE AL LABORATORIO DE TRABAJO ............................ 26
7.2.3 AISLAMIENTO ................................................................................................................... 27
7.2.4 SELECCIÓN DE COLONIAS DE ACTINOMICETOS ............................................................... 27
7.2.5 CONSERVACIÓN DE LOS CULTIVOS PUROS DE ACTINOMICETOS ..................................... 28
Formatted: Right
7.2.6 CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA DE ACTINOMICETOS AISLADOS ............................... 28
7.2.7 CARACTERIZACIÓN HIDROLÍTICA Y ASIMILACIÓN DE CARBOHIDRATOS .......................... 28
7.2.8 CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA ...................................................................................... 29
7.2.9 CARACTERIZACIÓN DE Phytophthora infestans ............................................................... 30
7.2.10 PRUEBA DE ANTAGONISMO DE ACTINOMICETOS VS. Phytophthora infestans............... 30
7.2.11 OBTENCIÓN DEL EXTRACTO ORGÁNICO .......................................................................... 31
7.2.12 DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTI- Phytophthora DE LOS EXTRACTOS ORGÁNICOS
31
8 RESULTADOS ...................................................................................................................................... 32
8.1 COLONIAS DE ACTINOMICETOS ................................................................................................ 32
8.2 CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA DE LOS AISLAMIENTOS .......................................................... 32
8.2.1 Caracterización morfológica............................................................................................. 32
8.3 CARACTERIZACIÓN HIDROLÍTICA Y ASIMILACIÓN DE CARBOHIDRATOS .................................. 36
8.4 CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA DE LOS ACTINOMICETOS ...................................................... 40
8.4.1 Rango de crecimiento en función de la temperatura ...................................................... 40
8.4.2 Rango de crecimiento en función del Ph.......................................................................... 40
8.5 CARACTERIZACIÓN DE Phytophthora infestans ........................................................................ 42
8.6 PRUEBA DE ANTAGONISMO EN PLACA ..................................................................................... 43
8.7 ACTIVIDAD ANTI-Phytophthora DE LOS EXTRACTOS ORGÁNICOS ........................................... 45
...................................................................................................................................................... DISCUSIÓN
.................................................................................................................................................................... 47
9 .................................................................................................................................................................. 47
8. DISCUSIÓN ......................................................................................................................................... 47
10 CONCLUSIONES ............................................................................................................................. 53
11 RECOMENDACIONES ..................................................................................................................... 54
12 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ..................................................................................................... 55
13 ................................................................................................................................................................ 55
Formatted: Right
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Bold
Formatted: List Paragraph, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
1. RESUMEN space between Asian text and numbers
I. Formatted: Right: 0.98", Top: 0.98", Bottom: 1.38",
Header distance from edge: 0.49", Footer distance from
edge: 0.49"
Formatted: Font: 12 pt, Not Italic
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Bold, No underline,
Font color: Auto
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Bold
Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Normal, No bullets or numbering, Adjust space
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
Formatted: Right
1
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Heading 1, Numbered + Level: 1 + Numbering
Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at:
0.25" + Indent at: 0.5", Adjust space between Latin and
Asian text, Adjust space between Asian text and numbers
Formatted: Right
2
RESUMEN Formatted: Font: Not Bold, No underline, Font color: Text 1
Formatted: Heading 1, Adjust space between Latin and Asian
text, Adjust space between Asian text and numbers
El cultivo deLa papa (Solanum tuberosum L.) es el cuarto cultivo más consumido y
utilizado en el mundo. El Perú , en el que cuenta con más de 600 000 agricultores de 19
3
Lucanas -– Región de Ayacucho, frente al Ooomiceto Phytophthora infestans, por ser el
Se aislaron 32 cepas de actinomicetos utilizando agar Avena, agar Almidón Caseína, Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
agar Czapeck y agar Asparragina. Las pruebas se realizaron en agar Avena y agar
Centeno, den las que el 71,9% de las cepas de actinomicetos mostraron antagonismo a
alrededor dede 28°C - los 30°C. Se concluye que los actinomicetos de la rizósfera de
para ser utilizados como control biológico de enfermedades que afectan a la papa.
Palabras claves: RizobacteriasActinobacterias, Phytophthora infestans, papa nativa, Formatted: Font: Bold, No underline, Font color: Auto
Formatted: Normal, Justified, Line spacing: Double, Don't
biocontrol de plagas, antagonismo. adjust space between Latin and Asian text, Don't adjust space
between Asian text and numbers, Pattern: Clear
Formatted: Right
4
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Bold
involved , who see their production performance diminishing due to the high costs of Formatted ...
Formatted ...
chemical fertilizers, phytosanitary problems, soil deterioration and other problems in their Formatted ...
Formatted ...
cultivationfarming. In the present workjob, we triedsought to determine the antagonistic
Formatted ...
Formatted ...
capacity of actinomycetes isolated from the native potato rhizosphere, collected in the
Formatted ...
district of Cabana, province of Lucanas - Ayacucho Region , in front of theagainst the Formatted ...
Formatted ...
Oomycete Phytophthora infestans which , causes of the disease known as the “Late Formatted ...
Formatted ...
bBlight of the potato”. By means ofUsing conventional cultures in the laboratory, 32
Formatted ...
strains of actinomycetes were isolated usingisolated utilizing OatAvena agar, Casein Formatted ...
Formatted ...
Starch agar, Czapeck agar and Asparagine agar. The t tests were performed on OAvenat Formatted ...
Formatted ...
agar and RyeCenteno agar, in which 71.9% of the actinomycete strains showed
Formatted ...
antagonism to Phytophthora infestans on Avena agar, while only 31.3% of actinomycetes Formatted ...
Formatted ...
inhibited on RyeCenteno agar. Formatted ...
Formatted ...
Starch hydrolysis and cellulose hydrolysis tests were performed, and , 100% ofbeing
Formatted ...
actinomycetes showed with amylolitic capacity and only 50,% cellulolytic activity. Also, we Formatted ...
Formatted ...
carried out physiological characterization tests through their growth at different pH and Formatted ...
Formatted ...
temperature ranges, which showed that they grow better at basic pH of 7,5- 8,5 and
Formatted: No underline, English (United States)
temperatures of 28°C - 30°Cclose to 30 °C. We conclude potato rhizospheric Formatted ...
Formatted ...
actinomycetes are excellent producers of bioactive compounds capable of significantly Formatted ...
Formatted ...
inhibiting the development of Phytophthora infestans, which is why they are considered as
Formatted ...
Formatted ...
Formatted: Right
5
potential candidates to be used in biological control programs for pests that affect
potatoes.
Physiological characterization tests were also carried out by means of their growth at Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline, English
(United States)
different pH and temperature ranges, which showed that they grow better at basic pH and
candidates to be used in biological control programs for pests that affect potatoes. Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, English (United
States)
. Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline, English
(United States)
Key words: Actinobacteria, Phytophthora infestans, native potato, biocontrol of Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, English (United
States)
La papa es el cuarto cultivo más consumido a nivel mundial, después del trigo, maíz y
arroz. Aunque nutricionalmente la papa supera a estos cultivos. Las regiones más
productivascon mayor producción de papade este tubérculo se ubican en estos La Formatted: Right
6
Libertad, Huánuco, Puno, Junín y Ayacucho, los lugares donde todavía se practican
productividad y poca rentabilidad del producto (Rico, 2009). Las sustancias químicas
De losLos fitopatógenos que afectan a los cultivos de papa pueden ser nematodos,
hongos, oomicetos y virus. Aquellos causados por los hongos y oomicetos son las más
solani, entre otros (Pérez et al., 2015). Hoy Actualmente en día se utilizan Formatted: Font: Not Italic, No underline, Font color: Auto,
Spanish (Peru)
microorganismos antagonistas para controlar hongos y oomicetos fitopatógenos en los
consecuencias negativas en el ambiente que a posteriori puedaen provocar la resistencia Formatted: Font: 11 pt, Italic, No underline, Font color:
Auto, Spanish (Peru)
de plagas (Marín et al., 2013). El “tizón tardío de la papa”, ocasionado por Phytophthora
Formatted: Right
7
potencialmente productores de metabolitos, es decir presentan actividad antagónica
Cabe destacar que cultivo orgánico de papa nativa en el Perú tiene un gran potencial por Formatted: No underline, Font color: Auto
Formatted: Space After: 10 pt, Adjust space between Latin
ser un país muy diverso, debido a su riqueza geográfica, posee más de tres mil and Asian text, Adjust space between Asian text and numbers
Formatted: No underline, Font color: Auto
variedades de papa de las cinco mil que existen en el mundo. Nuestro país es
millones de toneladas. Las papas nativas representan una oportunidad única en cuanto a Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline, Font
color: Auto
los alimentos de origen 100% libres de pesticidas y transgénicos. Es por ello la Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline, Font
color: Auto
importancia de estos cultivos como motivo de estudio a nivel biológico (SENASA, 2015). Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline, Font
color: Auto
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline, Font
En nuestro país, hay muy pocos trabajos de investigación que se han realizado sobre la color: Auto
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline, Font
estos temasactividad antagonista de la microbiota rizosférica frente a fitopatógenos de la color: Auto
papa, tenemos los el trabajos realizados por Rico (2009) sobre quien aisló cepas de
fitopatógenos, y entre ellos al Oomiceto Phytophthora infestans; los de Caro (2016) quien
(2014) que enfrenta cepas de actinomicetos frente a Phytophthora infestans. Con elEl Formatted: Font: 11 pt, Italic, No underline, Font color: Auto
Formatted: Right
8
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
space between Asian text and numbers
9
la tradición y cultura ancestral de los habitantes peruanos (Rico, 2009). Es una planta
de tallos, uno aéreo, circular o angular en sección transversal, sobre el cual se disponen
las hojas compuestas y dos tipos de tallos subterráneos: los rizomas y los tubérculos.
son comestibles y saludables, contiene 80% de agua y la materia seca constituida por
presencia de luz solar y registra altitudes de 2 000 a 4 000 m.s.n.m, en general las
La producción de papa a nivel mundial se está desarrollando rápidamente. Seis países Formatted: Justified
producen cerca del 60% de la producción mundial de papa, siendo China quien el que
variedades, siendo estas alrededor de 3 000. Aquí se cultiva en 19 de las 25 regiones del
10
3.2 3.2 AGRICULTURA DE LA PAPA Formatted: No underline, Font color: Auto
Formatted: Heading 2, Indent: Left: 0", First line: 0", Line
Según restos arqueológicos encontrados en distintos puntos del país. Los cultivos spacing: single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering
Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at:
2.76" + Indent at: 3.01", Adjust space between Latin and
andinos tienen más de 10 mil años. Los primeros vestigios provienen del año 8,000 a.C. y Asian text, Adjust space between Asian text and numbers
Formatted: Font: Not Bold
fueron encontrados en la cueva Tres Ventanas, en el valle de Chilca, Lima. Su presencia
es fue segura segura hacia 4,400 y 3,100 a.C. en Ayacucho. (Ministerio de agricultura,
2011).
El origen y la domesticación de Solanum tuberosum tuvo lugar en la sierra del Perú. Sin
embargo, el cultivo intensivo de este tubérculo fue en la región ubicada cerca al Lago
La papa es el principal cultivo utilizado en Perú y representa el 25% del PBI agropecuario.
Es producida por 600 mil unidades agrarias y es el principal alimento de las comunidades
andinas, puesto que contiene en 100 gramos; 78 gr. de humedad; 18,5 gr. de almidón,
El Perú es el país con mayor diversidad de papas en el mundo, posee 8 especies nativas
domesticadas y 2,301 de las más de 4,000 variedades que existen en América Latina.
Además, nuestro país Pposee 91 de las 200 especies que crecen de manera silvestre en
Arequipa, Lima, Apurímac, Ancash, Ayacucho, Pasco e Ica lugares donde todavía se
llevan a cabo prácticas ancestrales como el ayni, donde las comunidades campesinas
aúnan esfuerzos en pos de una buena cosecha. (Ministerio de agricultura, 2011). La papa
Formatted: Right
11
La producción de papa a nivel mundial , llegó a 381,7 millones de toneladas, con una alta
3.3 3.3 CULTIVOSs ORGÁNICOSs Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: 0", First line: 0",
Line spacing: single, Outline numbered + Level: 2 +
Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left +
La agricultura orgánica es un sistema de gestión que fomenta y mejora la situación del Aligned at: 2.76" + Indent at: 3.01", Adjust space between
Latin and Asian text, Adjust space between Asian text and
agroecosistema, basados en el cuidado de la biodiversidad, los ciclos biológicos, y la numbers
actividad biológica del suelo. Por consiguiente se apuesta por métodos culturales,
artificiales (Comisión del Codex Alimentarius, 1999). Es uno de los enfoques más
En el Perú, los productos con Certificación Orgánica más importantes son café; , algodón;
hortalizas y frutas frescas, como mango, banano, uvas y papaya; , frutales nativos y
exóticos,; tubérculos y granos andinos como quinua, kiwicha, yacón, maca y papa;
semillas de sésamo; aceite de oliva y aceitunas,; palmito, limón sutil, tomate y pasta de
(MINCETUR, 2016).
El SENASA (Servicio Nacional de Sanidad Agraria), es la Autoridad Nacional encargada Formatted: Normal, Justified, None, Space Before: 0 pt, Line
spacing: Double, No bullets or numbering, Don't keep with
next, Don't keep lines together, Pattern: Clear (White)
de la fiscalizar y promover la producción orgánica nacional. El Decreto Supremo Nº 044-
2006-AG, establece requisitos para los Productos Orgánicos que toman como referencia
Formatted: Right
12
el Codex Alimentarius y normas de países consumidores producción orgánica (SENASA,
3.3.1 3.3.1 PAPAS NATIVAS Formatted: Font: Not Bold, No underline, Font color: Text 1
Formatted: Heading 3, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Font Alignment: Auto, Pattern: Clear
Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers
Formatted: Heading 3, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Font Alignment: Auto, Pattern: Clear
Formatted: Space After: 0 pt
Actualmente el 16% de la producción anual de papa nativa es de 16%, y se exporta
Asociación de Exportadores (Adex), en los últimos cincos años, este ancestral insumo
3.3.2 3.3.1.2 VARIEDADES DE PAPAS NATIVAS Formatted: Heading 3, Left, Space After: 0 pt, Font
Alignment: Auto, Pattern: Clear
De las 3000Nuestro país posee aproximadamente 3000 variedades existentes en nuestro Formatted: Font: Not Italic, Border: : (No border)
a) Sumac Soncco: de pulpa tiene una aureola y su piel puede ser roja – guinda, pulpa Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic
b) Qeqorani: pulpa amarilla y morada. Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic
c) Leona: pulpa azulada, piel de color oscuro con trazas de color crema.
d) Wenccos: tubérculo alargado, de cáscara acero azulado y pulpa de color morado con Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic
g) Conda Huagallina: cáscara de color rojo con manchas amarillas y pulpa amarillo fuerte. Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic
Formatted: Right
13
h) Huayro: cáscara roja y centro amarillo encendido. Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic
i) Cacho de buey: cáscara rojo suave, de pulpa morada con machas cremas.
k) Azul Sunqu: de piel negruzco con pulpa morada y blanca. Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic
l) Caspas: de piel negruzco con jaspes rojos y pulpa amarilla con amillo morado.
n) Yawar Wayku: de cáscara roja con piel violeta. Formatted: Font: 11 pt, Not Bold, Italic
3.4 3.4 PROBLEMAS QUE AFECTAN EL DESARROLLLO DEL CULTIVO DE PAPA Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: 0", First line: 0",
Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2, 3, … +
Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 2.76" + Indent at:
3.01", Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
Los principales problemas observados en el campo son la falta de riego, mala utilización space between Asian text and numbers
de la semilla, falta de rotación con otros cultivos, el poco control a las plagas que afecten
a la papa; así como también heladas, sequías y otros efectos ambientales que dañarían
presencia e intensidad de estos problemas varían de una zona ecológica a otra, por lo
que los mecanismos de control también son diferentes (Ministerio de Agricultura y Riego,
2013)
Cabe destacar, que el uso de plaguicidas químicos en la papa está aumentando en los
países tercermundistas, estas a menudo son muy tóxicas y se aplican con insuficiente o
Formatted: Right
14
ningún equipo de protección; el resultado es la intoxicación por plaguicidas en las
que ocasiona la destrucción o quemazón del follaje y la pudrición seca de los tubérculos
tomate (S. lycopersicum) y pepino dulce (S. muricatum). Se ha reportado infección natural
El cultivo in vitro de Phytophthora infestans es influenciado por diversos factores tales Formatted: Font: Not Bold, Not Italic
Formatted: Space After: 10 pt, Adjust space between Latin
como la composición del medio, nutrientes, temperatura y pH. En placa Petri, presenta and Asian text, Adjust space between Asian text and numbers
micelio aéreo blanco radiado. Microscópicamente, las hifas son cenocíticas. Los
El patógeno e Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold, Font color: Text 1
invadirá el tejido vascular Este tipo de infección es la más devastadora, porque afecta
campo de cultivo
Formatted: Right
15
(Torres, 2002).
Los síntomas ocasionados por Phytophthora infestans se ven en de toda la planta. En las
hojas, la enfermedad se presenta con manchas irregulares oscuras que a medida que
Formatted: Centered
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Bold
Formatted: Centered, Line spacing: Double
Formatted: Font: (Default) Arial
Figura 1. Tallo con presencia de lesiones oscuras a nivel superior de la planta (Infoagro, 2018)
Formatted: Font: (Default) Arial, Font color: Black
Formatted: Justified
Formatted: Font: Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Font color: Text 1
Formatted: List Paragraph, Justified, Numbered + Level: 1 +
A B Numbering Style: A, B, C, … + Start at: 1 + Alignment: Left +
Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.5"
Figura 2. (Cornell University, 2005) Formatted: Font: (Default) Arial, Font color: Text 1
Formatted: Font: (Default) Arial, Font color: Text 1
A. El tejido interno del tubérculo es de color marrón. Formatted: List Paragraph, Justified
Formatted: List Paragraph, Justified, Numbered + Level: 1 +
B. En el corte transversal se observa necrosis de forma irregular que avanza de la periferia Numbering Style: A, B, C, … + Start at: 1 + Alignment: Left +
Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.5"
del tubérculo hacia el centro medular
Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Right
16
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted Table ...
En el Perú el tizón tardío es el problema más importante del cultivo de papa que
Formatted ...
enfrentan los agricultores en la zona de Cajamarca, Contumazá y San Miguel (Ortiz et., Formatted ...
Formatted ...
al 1999). El nivel de incidencia en la Tabla 1: Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Tabla 1. Estimaciones sobre la superficie cultivada con papa (ha) en las que incide Formatted ...
Formatted ...
Phytophthora infestans en los departamentos productores de papa del Perú (Egúsquiza, Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
2001):
Formatted ...
Formatted ...
Departamento Superficie (ha) Nivel de incidencia de rancha y área (ha) afectada
Formatted ...
Muy baja Baja Alta Muy alta
Cajamarca 29733 0 6735 12810 10188 Formatted ...
Amazonas 2650 0 343 1060 1247 Formatted ...
La Libertad 28015 225 1972 11161 14657 Formatted ...
Áncash 29630 2669 23602 3359 0
Formatted ...
Huánuco 30562 325 12465 12838 4934
Formatted ...
Lima 10489 4201 4492 1346 0
Junín 37738 1188 16557 13532 6461 Formatted ...
Ica 1822 1490 332 0 0 Formatted ...
Huancavelica 33233 5226 14502 11412 2093 Formatted ...
Ayacucho 8909 2165 2945 2158 1641
Formatted ...
Apurímac 9646** 1169 7848 639 0
Formatted ...
Arequipa 5325 650 3745 930 0
Puno 33200**** 33200 4800 0 0 Formatted ...
Moquegua 900 280 620 0 0 Formatted ...
Tacna 1076 141 935 0 0 Formatted ...
Totales ha 267729 52930 102333 71245 41227
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
17
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
% 100 19,8 38,2 26,7 15,3 Formatted: Font: 8 pt, Not Bold
(*) INCIDENCIA DE RANCHA: Muy baja (ocasional), Baja (Requiere de 2 a 4 aplicaciones), Alta (Requiere de 6 a 8 Formatted: Font: 8 pt
aplicaciones), Muy alta (Requiere de 10 a más a aplicaciones).(**) Considera solamente las provincias de Andahuaylas y Formatted: Font: 8 pt, Not Bold
Formatted: Font: 8 pt
Chincheros (****) Superficie departamental redondeada
Formatted: Font: 8 pt, Not Bold
Formatted: Font: 8 pt
Formatted: Font: 8 pt, Not Bold
Formatted: Font: 8 pt
Formatted: Font: 8 pt, Not Bold
Formatted: Font: 8 pt
Formatted: Font: 8 pt, Not Bold
Formatted: Font: 8 pt
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: 9 pt, Not Bold
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: 9 pt
Formatted: Font: (Default) +Body (Calibri), 8 pt, Not Bold
Formatted: Left, Space After: 10 pt, Don't add space
between paragraphs of the same style, Line spacing: Multiple
1.15 li, Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
space between Asian text and numbers
Formatted: Font: 14 pt
cuando el tizón tardío, arrasó los cultivos en toda Europa continental, desde Bélgica hasta
Rusia. Pero lo peorLa situación más grave se registró enfue en Irlanda ya que el
consumo de papa era alto. Entre 1845 y 1848 el tizón tardío destruyó tres cosechas de
mejoradores de Europa y América del Norte, con nuevo germoplasma, produjeron nuevas
Formatted: Right
18
3.5.1. 3.5.1 Phytophthora infestans Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers
3.5.1.1 3.5.1 TAXONOMÍA
que quitina y no sintetizan los esteroles. Estas características nos permiten suponer que
superiores como Aascomycetos y Bbasidiomycetos. (Llácer et al., 1996; Judelson, 1997) Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Right
19
Debido a su morfología filamentosa, inicialmente se le incluyó en el Reino Fungi (Raven
et al., 1999), pero estudios posteriores presentaron otras características que diferencian a Formatted: Font: Not Bold, Italic
3.5.1.2 3.5.2 MORFOLOGÍA Formatted: Heading 4, Left, Adjust space between Latin and
Asian text, Adjust space between Asian text and numbers
El micelio es cenocítico, puesto que no presenta septas que separen el miceliola hifa; los
“masculinos” cuando poseen más anteridios que oogonios, y más “femeninos” cuando
poseen más oogonios que anteridios. También pueden poseer ambos aislamientos
El genoma de P. infestans fue secuenciado en 2009 en el Laboratorio Sainsbury de Formatted: Font: Not Bold, Italic
Norwich (Reino Unido). Su estudio reveló que es su genoma es muy largo, más del doble
Formatted: Right
20
que las especies de oomicetos más cercanas. Este gran tamaño se debe a la enorme
cantidad de secuencias repetidas que posee (Hass et al., 2009). Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Italic
El patógeno, al igual que la mayoría de las especies de oomicetos, puede reproducirse
El ciclo asexual involucra sólo un solo tipo de apareamiento. En este caso no se produce
Las zoosporas se forman dentro del esporangio y son estructuras hialinas con morfología
viento, lo que les permite alcanzar los tejidos de las plantas huéspedes y germinar
en la hoja por las estomas o también pueden formar apresorios, en cuyo caso la hifa de
Tras 10 días de infección, los esporangios emergen a través de los estomas de la planta
huésped.
Formatted: Right
21
3.5.1.3.2 3.5.3.2 CICLO SEXUAL Formatted: Heading 5, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers
Phytophthora infestans es una especie heterotálica, por lo tanto, necesita dos tipos de Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
apareamiento (A1 y A2). A pesar de ello, la diferencia entre ambos grupos no radica está between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
en unen el dimorfismo sexual, sino en la autoincompatibilidad de éstos y la necesidad de
una estimulación hormonal del tipo de apareamiento (Pérez y Forbes, 2008). La meiosis
La cariogamia se da entre estos dos núcleos haploides, formando una oospora diploide
de estrés (Smart et al., 2000). Cuando las condiciones son favorables, las oosporas Formatted: Font: Not Bold, Italic
3.5.1.4 3.5.4 FACTORES DE VIRULENCIAVARIABILIDAD GENÉTICA DE Formatted: Heading 4, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Phytophthora infestans Asian text and numbers
Formatted: Font: Not Bold
La genética poblacional describe y cuantifica la variación genética en determinadas Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
poblaciones del patógeno. Esta variación se usa para hacer inferencias acerca de los text and numbers
procesos de evolución que las afectan. Las posibles fuentes de variación de P. infestans
selección.
22
reportada dentro de poblaciones de P. infestans a nivel mundial, constituyéndose en un
3.6 3.6. ACTINOMICETOS Formatted: Heading 2, Left, Line spacing: single, Outline
numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start
at: 5 + Alignment: Left + Aligned at: 0" + Indent at: 0.46",
3.6.1 3.6.1 EL ORDEN ACTINOMYCETALES Adjust space between Latin and Asian text, Adjust space
between Asian text and numbers
Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers
Este taxón es uno de los 15 órdenes clasificados en la Clase Actinobacteria. Los Formatted: Font: Not Bold, Not Italic
Formatted: Font: Not Bold
actinomicetos forman un grupo de microorganismos morfológicamente muy heterogéneo,
Formatted: Line spacing: 1.5 lines
por bacterias generalmente aerobias, Gram-positivas, con alto contenido en G+C.. Dos
desarrollarse sobre sustratos muy diversos, como la quitina y celulosa y su aptitud para
pueden ser filamentosas dando una apariencia micelial, sin que se forme un micelio
láctico, con variación en la cantidad de estos ácidos producidos (Gonzales et al., 2010).
23
Los estreptomicetos son los microorganismos más estudiados dentro del orden de los
estimado que las especies de Streptomyces producen más del 50 % de los compuestos
bioactivos microbianos que se han descubierto en los últimos 50 años (Berdy, 2012).
Inicialmente las colonias tienen una superficie lisa y sin esporas, pero luego desarrollan
(Henderson et al., 1987), celulasas, nucleasas, amilasas (Long et al., 1987), quitinasas,
Formatted: Right
24
crecimiento óptimo de Streptomyces se encuentra entre 6.5 y 8 (Crawford et al., 1993),
al., 2014).
En el caso del desarrollo de colonias aisladas así como del desarrollo de Streptomyces
Formatted: Right
25
metamorfosis de las hifas aéreas reproductivas, que recuerda al comportamiento de los
descomposición del suelo, específicamente de materia orgánica y también en su uso Formatted: Heading 4, Indent: Left: 1.2", Line spacing:
single, Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
space between Asian text and numbers
potencial en biorremediación (Polti et al., 2009). Frecuentemente se encuentran en suelos
Cuando se aíslan actinomicetos del suelo mediante medios de cultivo sólidos, el género
predominante suele ser Streptomyces, con el 70 al 90% de las colonias, seguido por
Nocardia con 10 a 30%, y el tercero puede ser Micromonospora que constituye del 1 al
3.7 3.7. COMPUESTOS BIOACTIVOS PRODUCIDOS POR Streptomyces sp. Formatted: Heading 2, Left, Line spacing: single, Outline
numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start
at: 5 + Alignment: Left + Aligned at: 0" + Indent at: 0.46",
3.7.1. 3.7.1. METABOLITOS SECUNDARIOS Adjust space between Latin and Asian text, Adjust space
between Asian text and numbers
Los metabolitos secundarios son compuestos complejos no esenciales para el Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers
crecimiento en el cultivo de producción, pero cumplen un papel importante en funciones
Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
de supervivencia en la naturaleza, son producidos exclusivamente por algunas especies
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
de un género (Sutton, 1996). Miles de estos compuestos se han aislado y caracterizado,
han caracterizado molecularmente 2500, y alrededor de 50.000 son producidos por Formatted: Right
26
microorganismos, de los 12000 antibióticos conocidos el 55% son producidos por
número de proteínas que son liberadas al medio exterior (Ghanem et al., 2000).
Los actinomicetos producen diversas enzimas extracelulares como las lipasas, amilasas,
quitinasas, celulasas (Chaudhary et al., 2013). Estas son importantes en la industria del
3.7.3. 3.7.3. METABOLITOS CON CAPACIDAD ANTAGÓNICA Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
Asian text and numbers
Formatted: Font: Not Italic
Los biactivos más conocidos con capacidad antagónica son los antibióticos. Durante los
Dos tercios de los antibióticos son de origen natural, incluyendo muchos de los que son
de origen marino mejores antagonistas (Vimal et al., 2009). Entre los 140 géneros de
Formatted: Right
27
actinomicetos descritos, algunos poseen más de 10 000 compuestos bioactivos en uso
La necesidad de nuevos agentes antimicrobianos, son uno de los desafíos que se Formatted: Space After: 0 pt, Don't adjust space between
Latin and Asian text, Don't adjust space between Asian text
and numbers
proponen la industria farmaceútico, ya que cada vez más existen casos de infecciones
al., 2012).
así aplicarlo a campo se debe tomar en cuenta que pueda expandirse sin afectar al
ecosistema y que sea muy selectivo para afectar únicamente a los patógenos, y no a los
usuarios ni a los alrededores de la zona. Diversos ensayos han sido probados con éxito
con muy buenos resultados (Quiñones et al., 2016). Por ejemplo de un actinomiceto con
Phytophthora infestans, probado tanto in vitro como in vivo (Carrer Filho, 2009) Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Right
28
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75"
4.1. Hipótesis
4.1. Hipótesis
Formatted: Justified
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Los actinomicetos nativos presentes en la rizósfera de la papa (Solanum tuberosum) son
Formatted: List Paragraph, Justified, Bulleted + Level: 1 +
Aligned at: 0.25" + Indent at: 0.5"
productores de compuestos bioactivos con capacidad antagónica frente a Phytophthora
Formatted: Font: (Default) Arial
infestans. Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Variables Independientes: Actinomicetos, Phytophthora infestans , medios de Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
cultivo, tipo de suelo, pH, T°, potencial redox..
Formatted: Font: (Default) Arial
Variables dependientes: Producción de cCompuestos bioactivos, actividad Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial
antagónica de actinomicetos frente a Phytophthora infestans Formatted: Font: (Default) Arial, Bold
Formatted: List Paragraph, Bulleted + Level: 1 + Aligned at:
0.25" + Indent at: 0.5", Don't adjust space between Latin
and Asian text, Don't adjust space between Asian text and
numbers
Formatted: List Paragraph, Left, Line spacing: single
Formatted: Right
29
Formatted: List Paragraph, Bulleted + Level: 1 + Aligned at:
0.25" + Indent at: 0.5", Don't adjust space between Latin
and Asian text, Don't adjust space between Asian text and
numbers
V. 5. FORMULACIÓN DE OBJETIVOS, GENERAL Y ESPECÍFICOS Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75"
5.1 5.1. Objetivo general:
Formatted: Font: Not Bold
Aislar, caracterizar y Aislar y caracterizarcContar con una colección Formatted: Indent: Left: 0", First line: 0", Space After: 0
pt, Line spacing: Multiple 1.15 li, Outline numbered + Level: 2
+ Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left
(germoplasma) de actinomicetos rizosféricos de cultivos orgánicos de papa nativa + Aligned at: 0" + Indent at: 0.25"
5.2 5.2. Objetivos específicos: Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: 0", First line: 0",
Line spacing: single, Outline numbered + Level: 2 +
Numbering Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left +
Aislar cepas de actinomicetos nativos presentesnativos de la rizósfera de 6 Aligned at: 0" + Indent at: 0.25"
papa. nativa.
Realizar la caracterización fenotípica mediante procedimientos macroscópicos y Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold, Font color: Black
Formatted: Indent: Left: -0.25", Space After: 0 pt
microscópicos de actinomicetos seleccionados con potencial aplicación como Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold, Font color: Black
biocontrolador del “tizón tardío de la papa”. Formatted: Font: (Default) Arial, Font color: Black
Formatted: Right
30
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75"
Formatted: Font color: Text 1
Universidad Nacional Mayor de San Marcos (UNMSM) proveniente del cultivo de papa de
Formatted: Right
31
6.1.2. Medios de cultivo y material químico Formatted: Heading 2, Left, Indent: Left: -0.25", Line
Medios de cultivo: spacing: single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering
Style: 1, 2, 3, … + Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at:
Agar Centeno 0" + Indent at: 0.25"
Agar Czapeck
Agar Asparragina
Agar Avena
Agar Almidón Caseína
Agar ISP 9
Medio extracto de levadura glucosa
Agar almidón
Agar carboximetilcelulosa
Antibióticos:
Nistatina
Ácido Nalidíxico.
Batería de coloración Gram.
Sustancias químicas:
Fenol
Cloruro de sodio
Alcohol 70o
Agua destilada
Glicerol
Azul de lactofenol
6.1.3. Material de vidrio:
Placas Petri
Tubos de ensayo
Pipetas, matraces
Espátula de Drigalsky
Láminas
Laminillas
Viales
6.1.5. Equipos:
Cabina de seguridad biológica
Incubadora
Autoclave
Estufa
Horno microondas Formatted: Font: Not Bold
Baño de maría y Balanza de precisión Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single
Formatted: Font: Not Italic
Balanza de precisiónMmicroscopio óptico Formatted: Left, Space After: 0 pt, Line spacing: Multiple
6.2. MÉTODOS 1.15 li
6.2 Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
6.2.1. 6.2.1. LOCALIDAD DE MUESTREO
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
La localidadEl distrito de Cabana se encuentrbatar ubicada ……. al noreste de la
Formatted: Font: 11 pt, Not Bold
provincia de Lucanas, en el Sureste de la región Ayacucho, zona de Sierra comprendida Formatted: Font: 11 pt, Not Bold
Formatted: Font: 11 pt, Not Bold
entre las coordenadas 14°17'10'' Latitud Sur y 73°57'51'' Longitud Oeste, a una altitud de Formatted: Font: Not Bold, Superscript
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
3,288 msnm con un área total de 402,63 Km2 (León y León, 2017).
Formatted: Right
32
6.2.2. TOMA DE MUESTRAS Y TRANSPORTE AL LABORATORIO DE TRABAJO Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single
El muestreo se realizó en los campos de cultivo de papa en el liugar denominado de la Formatted: Left, Space After: 0 pt, Line spacing: Multiple
1.15 li
localidad HWuashaswualaca (3,7408 msnm) , siendo la parte más alta de la región
Perú. Se muestreó las rizósferas (raíces y el suelo que rodea a cada planta) de 2 plantas
al azar de cada uno de los campos de cultivo siendo estos pertenecientes a las
variedades de papa nativa Canchán, Futis, Huayro, Cuchipa-akan, y Jompis y Chaska, Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Not Bold, Italic
realizando una mezcla de las mismas. De aquella mezcla, se colectó aproximadamente Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Not Bold, Italic
200 g de muestra, las cuales se colocaron en bolsas Ziploc rotuladas y posteriormente se
Formatted: Font: Not Bold, Italic
trasladaron al Laboratorio de Ecología Microbiana de la Facultad de Ciencias Biológicas Formatted: Font: Not Bold, Italic
de papa, los cuales se colocaron dentro de un frasco estéril con 90 mL de solución salina
con 1,5% de fenol, luego se agitó vigorosamente alrededor de 25 veces incubándolo por
30 minutos a 30 °C. Esta primera dilución fue considerada como 10 -1, de la cual se tomó Formatted: Font: Not Bold, Superscript
diluciones seriadas hasta llegar a 10-4 (Hayakawa et al., 2004). Formatted: Font: Not Bold, Superscript
Formatted: Font: Not Bold, Italic
Luego, 100 μL de las diluciones 10-2, 10-3 y 10-4 se sembraron por duplicado en Agar Formatted: Font: Not Bold, Superscript
Formatted: Font: Not Bold, Superscript
Avena, Agar Asparragina, Agar Czapeck y Agar Almidón Caseína, todsos a pH de 7 y Formatted: Font: Not Bold, Superscript
Formatted: Right
33
microbiota Gram negativa. Finalmente las placas fueron incubadas a 28° C por 15 a 20
6.2.3 SELECCIÓN DE COLONIAS CEPAS DE ACTINOMICETOS ANTAGÓNICOS Formatted: Font: Not Italic
: Formatted: Font: Not Italic
Las placas que presentaron crecimiento visible y distintos tipos de colonias de
una de las placas se seleccionaron colonias de morfologías diferentes pero con típicas
por estriado en Agar Avena suplementado con Nistatina y Ácido Nalidíxico, ya que hubo
6.2.4 CONSERVACIÓN DE LOS CULTIVOS PUROS DE ACTINOMICETOS Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Left, Space After: 0 pt, Line spacing: Multiple
1.15 li
Una vez aisladas y purificadas las cepas de actinomicetos purificadas, se conservaron a
Formatted: Right
34
4 ml de Agar Avena con glicerol al 20 %. Estos fueron almacenados en un congelador a 4
o
C (Sánchez et al., 2011).
6.2.6. 6.2.5 CARACTERIZACIÓN MORFOLÓGICA DE ACTINOMICETOS AISLADOS Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single
Para caracterizar los cultivos de actinomicetos aislados se re-sembraron en agar Avena. Formatted: Left, Space After: 0 pt, Line spacing: Multiple
1.15 li
Los cultivos puros se describieron teniendo en cuenta características macroscópicas de
6.2.7. 6.2.6 CARACTERIZACIÓNDETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single
BIOQUÍMICAHIDROLÍTICA Y ASIMILACIÓN DE CARBOHIDRATOS Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Font: Not Italic
Se determinó la capacidad productiva de enzimas hidrolíticas para la utilización de Formatted: Left, Space After: 0 pt, Line spacing: Multiple
1.15 li
polisacáridos tales como almidón y celulosa. Se usaron medios de cultivo tales como
Agar Almidón y Agar Mandels y Reese, a los cuales se les colocó una concentración de
sobre la superficie del medio, se sembraron por puntura y por duplicado a los
actinomicetos.
actividad amilolítica, se cubrió la superficie del medio con Lugol para observar la
Formatted: Right
35
En el caso de la actividad celulolítica, a la superficie del medio se añadió solución de Rojo
de Congo para observar los halos producto de actividad de las celulasas (Caicedo, 2012).
La actividad enzimática se halla con la siguiente fórmula (Hankin et al., 1975). Formatted: Font: Not Bold
Dónde:
sacarosa (Rico, 2009) en base al agar ISP 9 como medio mínimo suplementado con los
azúcares ya mencionados.
6.2.8. 6.2.7 CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA DE ACTINOMICETOS Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single
Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Heading 3, Left, Indent: Left: 0.85", Line
Todos los actinomicetos aislados fueron caracterizados en función de pruebas fisiológicas spacing: single
sembraron sembró por puntura y por duplicado un cultivo de 5 días de actinomicetos por
Se evaluó midiendo el diámetro de las colonias cada 48 horas durante 15 días, con la
Rango de crecimiento en función del pH: En placas de Agar Avena regulado a Formatted: Left, Space After: 10 pt, Line spacing: Multiple
1.15 li, Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
diferentes gradientes de pH se sembraron por duplicado un cultivo de 5 días de space between Asian text and numbers
actinomicetos en Medio Extracto de Levadura Glucosa. Los medios fueron regulados a
Formatted: Right
36
pH 5,5; 7 y 8, utilizando el pH 7 como control. El crecimiento se evaluó cada 48 horas por
8 días midiendo el diámetro de las colonias con el fin de determinar su capacidad de
adaptación a suelos de diferente pH bajo que presentan algunas zonas de la serranía del
Perú como la localidad estudiada, Cabana-Ayacucho.
6.2.9. 6.2.8 REACTIVACIÓN CARACTERIZACIÓN DE Phytophthora infestans Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Heading 3, Left, Line spacing: single, Adjust
space between Latin and Asian text, Adjust space between
El Oomiceto fitopatógeno de mayor importancia agrícola en los cultivos de papa para los Asian text and numbers
Formatted: Font: Not Italic
ensayos de antagonismo es Phytophthora infestans. Este oomiceto fue resembrado en
Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
Agar centeno para su reactivación, mantenimiento y observación en microcultivo con azul text and numbers
La cepa PHU 117, proveniente de cultivo de papa de Huánuco, se incubó en Agar Avena
caracterización microscópica.
6.2.9 PRUEBA DE ANTAGONISMO EN PLACADE ACTINOMICETOS VS. Formatted: Font: Not Italic
Phytophthora infestans
Formatted: Font: (Default) +Body (Calibri), Not Bold
Para el ensayo de antagonismo en placa, se usó la técnica del co-cultivo, las cepas de Formatted: Left, Line spacing: Multiple 1.15 li, Adjust space
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
text and numbers
actinomicetos se sembraron por puntura en 3 extremos equidistantes de una placa Petri
con Agar Avena y Agar Centeno, posteriormente en el centro de la placa se sembró por
una placa con Agar Avena y Centeno sin actinomicetos, las cuales sirvieron como control,
también fueron incubadas a 28°C por 10 días. Las pruebas se realizaron por triplicado..
Formatted: Right
37
Finalmente, al cabo de este tiempo, se tomaroán las medidas de las áreas alrededor de
expresóará en porcentaje siguiendo la técnica propuesta por Ahmed et al. (2007) como
se describe a continuación.
% de Actividad = (R-r)/R x 100 Formatted: Font: (Default) Calibri, 10 pt, Not Bold
Dónde:
diclorometano, y butanol, los cuales se agregaron al sobrenadante en una proporción de Formatted: Font: Not Bold
1:1 (v/v), agitando la mezcla vigorosamente por 1 hora para completar la extracción. Formatted: Font: Not Bold
Después que los extractos orgánicos fueron separados de la fase acuosa, estos fueron Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Not Bold, Superscript
llevados para evaporación con ayuda de un rotavapor a 40 oC; luego el residuo obtenido Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Right
38
fue pesado y re-suspendido en dimetilsulfóxido (DMSO) al 10% para su conservación y Formatted: Font: Not Bold
posterior análisis
6.2.12. DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTI- Phytophthora DE LOS Formatted: Font: Not Italic
Formatted: Font: Not Italic
EXTRACTOS ORGÁNICOS Formatted: Heading 3, Justified, Line spacing: Double
Avena, donde fueron previamente sembrado el oomiceto Phytophthora infestans. Las Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Not Bold
placas fueron incubadas a temperatura ambiental por 5 días. La actividad anti Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Font: Not Bold, Italic
Phytophthora infestans se determinó por la medida del halo de inhibición según Pandey
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Right
39
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
space between Asian text and numbers
40
Se logró aislar un total de 32 cepas de actinomicetos a partir Habiéndose cumplido el
pigmento. (Estas fueron sembradas por estriado en Agar avena con la finalidad de
actinomicetos.
AISLAMIENTO Y REPICAJE
1
2
Figura 31. Cultivos puros de ocho cepas de actinomicetos aislados en Agar Avena Formatted: Font: Bold
Formatted: Font: Bold
Formatted: Right
41
En cuanto a las características macroscópicas, como se puede observar en la Tabla 21,
una disposición de esporas a manera de espiral, típica del género Streptomyces (Figura
54).
CARACTERIZACIÓN MACROSCÓPICA DE
ACTINOMICETOS TERRESTRES
2
2
T
T
A
A 42
3 B
B
2
O
O
FIGURA 3. Caracterización macroscópica de la cepa CAB10_J2
Formatted: Font: 12 pt
Formatted: Centered, Space After: 0 pt, Line spacing:
Double, Don't adjust space between Latin and Asian text,
Don't adjust space between Asian text and numbers, Tab
stops: 3.42", Left
4
3
4 4
A B
Formatted: Right
43
Tabla 21. caracterizaciónCaracterización macroscópica MORFOLÓGICA de Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Not Bold
Formatted: Font: 12 pt, Not Bold
colonias de actinomicetos aisladas de la rizósfera de papa nativa, cultivadas en Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Not Bold
Formatted: Centered
Formatted: Font: 12 pt, Not Bold
CARACTERIZACIÓN MACROSCÓPICA EN AGAR AVENA Formatted: Left, Position: Vertical: 1.87", Relative to: Page
N° DE CÓDIGO VARIEDAD
Formatted: Centered, Space After: 0 pt, Line spacing:
CEPA DE CEPA DE PAPA
single, Position: Vertical: 1.87", Relative to: Page
Formatted: Font: (Default) Arial, 9 pt
Formatted: Font: (Default) Arial, 9 pt, Bold
Formatted: Font: 9 pt
Formatted: Font: 9 pt
Formatted: Font: 9 pt
Formatted: Font: 9 pt, Bold
Formatted: Font: 9 pt, Bold
Formatted: Font: 9 pt, Bold
Formatted: Right
44
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
FORMA PIGMENTO COLOR BORDE ELEVACIÓN Formatted ...
4
6
2
FIGURA 66. Crecimiento de los actinomicetos en el medio ISP 9 con glucosa, sacarosa Formatted: Font: (Default) Arial, Bold
y manitol respectivamente. Formatted: Justified
Formatted: Font: Bold
Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Font: (Default) Arial
Los resultados de asimilación de carbohidratos por los actinomicetos fueron muy Formatted: Font: 11 pt, Not Bold
variables (Tabla 32). Por la cantidad de carbohidratos asimilados (Figura 77), los
actinomicetosel actinomiceto CAB7_5 fue el único que que no utilizaron ninguno de los Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, Not Bold
Formatted: Font: 11 pt, Not Bold
carbohidratos ensayados fueron 1no utilizó ninguno de los carbohidratos (3%), mientras
Formatted: Right
46
que los que usaron todos fueron 31 (97%). Por el tipo de azúcar asimilado, aquellos
actinomicetos que usaron la glucosa fueron 31 cepas (97%), los que utilizaron la
sacarosa fueron 31 (97%), y los que utilizaron el manitol fueron 31 (97%). Formatted: Font: 11 pt
3%
Ningun azucar
1 azúcar
2 azúcares
97%
Formatted: Right
47
Formatted: Right
48
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Tabla 3. Prueba de asimilación de carbohidratos
Tabla 2. Prueba de asimilación de carbohidratos Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
N° DE CÓDIGO VARIEDAD DE GLUCOSA SACAROSA MANITOL
N° DE CEPA CÓDIGO DE GLUCOSA SACAROSA MANITOL Formatted
CEPA DE CEPA
CEPA PAPA ...
1 1 CAB3_1 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB3_CA1 + +
2 2 CAB3_2 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB3_CA2 + +
3 3 CAB3_3 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB3_CA3 + +
4 4 CAB4_1 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB4_CA1 + +
5 5 CAB4_2 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB4_CA2 + +
6 6 CAB4_3 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB4_CA3 + +
7 7 CAB4_4 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB4_CA4 + +
8 8 CAB4_5 Canchán+ + + + Formatted ...
CAB4_CA5 + +
Formatted ...
9 9 CAB4_6
CAB4_CA6 Canchán+ + + + + +
Formatted ...
1010 CAB5_1
CAB5_F1 Futis + + + + + +
Formatted ...
1111 CAB5_2
CAB5_F2 Futis + + + + + +
Formatted ...
1212 CAB5_3
CAB5_F3 Futis + + + + + +
Formatted ...
1313 CAB5_4
CAB5_F4 Futis + + + + + +
Formatted ...
1414 CAB5_5
CAB5_F5 Futis + + + + + +
Formatted ...
1515 CAB6_1
CAB6_F1 Futis + + + + + +
Formatted ...
1616 CAB7_1
CAB7_H1 Huayro + + + + + +
Formatted ...
1717 CAB7_2
CAB7_H2 Huayro + + + + + +
Formatted ...
1818 CAB7_3
CAB7_H3 Huayro + + + + + +
Formatted ...
1919 CAB7_4
CAB7_H4 Huayro + + + + + +
Formatted ...
2020 CAB7_5
CAB7_H5 Huayro - - - - - -
Formatted ...
2121 CAB8_1
CAB8_H1 Huayro + + + + + +
Formatted ...
2222 CAB8_2
CAB8_H2 Huayro + + + + + +
Formatted ...
2323 CAB9_CU1
CAB9_1 +
Cuchipa-akan + + + + +
Formatted ...
2424 CAB9_CU2
CAB9_2 +
Cuchipa-akan + + + + +
Formatted ...
2525 CAB9_CU3
CAB9_3 +
Cuchipa-akan + + + + +
26 CAB9_CU4 + + + Formatted ...
26 CAB9_4 Cuchipa-akan + + +
27 CAB10_J1 + + + Formatted
27 CAB10_1 Jompis + + + ...
28 CAB10_J2 + + + Formatted
2829 CAB10_2 Jompis + + + + ...
CAB10_J3 + +
2930 CAB10_3 Jompis + + + + Formatted ...
CAB10_J4 + +
3031 CAB10_4 Jompis + + + + Formatted ...
CAB10_J5 + +
3132 CAB10_5 Jompis + + + + Formatted ...
CAB10_J6 + +
32 CAB10_6 Jompis + + + Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Resultados: Positivo (+), Negativo (-).
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
49
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
La última parte de la caracterización bioquímica está relacionada a la capacidad para
(Tabla 4 y 53). Dentro de los resultados, encontramos que la totalidad de las cepas
(100%) son capaces de sintetizar amilasas, siendo la cepa CAB9_CU4 la que tiene
mayor actividad amilolítica (Figura 8 5); mientras que el 50% son capaces de sintetizar
celulasas, siendo la cepa CAB10_J2 la que tiene mayor actividad celulolítica (Figura 9);.
5
8
Figura 8. Actividad amilolítica de los actinomicetos en Agar Almidón revelada con lugol Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Centered
6
9 Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Right
Figura 99. Actividad celulolítica de los actinomicetos en Agar Mandels y Reese revelada con
rojo de congo al 1%
50
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Tabla 4: Producción de enzimas extracelulares de actinomicetos aislados de la
Formatted Table ...
52
Radio de la Radio del Porcentaje de la Formatted: Font: Not Bold
colonia halo de actividad Formatted: Font: Not Bold
(mm) inhibición enzimática (%) Formatted: Font: Not Bold
(mm)
1 CAB3_CA1 4.74 No 0 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
celulolítico single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
2 CAB3_CA2 3.4 No 0 Indent at: 0.2"
celulolítico Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
3 CAB3_CA3 4.73 11.30 58.14 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
4 CAB4_CA1 4.6 10.8 57.40 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
5 CAB4_CA2 3.8 13.15 71.10 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
6 CAB4_CA3 2.53 8.90 71.57 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
7 CAB4_CA4 3.5 No 0
celulolítico Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
8 CAB4_CA5 3.28 No 0 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
celulolítico Indent at: 0.2"
9 CAB4_CA6 1.46 No 0 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
celulolítico 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
10 CAB5_F1 1.85 4.12 55.10 Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
11 CAB5_F2 4.57 No 0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
celulolítico Indent at: 0.2"
12 CAB5_F3 3.68 No 0 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
celulolítico single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
13 CAB5_F4 7.16 No 0 Indent at: 0.2"
celulolítico
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
14 CAB5_F5 5.83 No 0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
celulolítico 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
15 CAB6_F1 3.03 7.78 61.05
Formatted ...
Formatted ...
16 CAB7_H1 1.86 No 0
celulolítico Formatted ...
17 CAB7_H2 1.25 3 58.33 Formatted ...
Formatted ...
18 CAB7_H3 2.78 4 30.50 Formatted ...
Formatted ...
19 CAB7_H4 1.83 3.75 51.20 Formatted ...
Formatted ...
20 CAB7_H5 2 3.2 37.50
Formatted ...
Formatted ...
21 CAB8_H1 5.43 15.25 64.39
Formatted ...
53
23 CAB9_CU1 6 8 25 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
24 CAB9_CU2 1.75 No 0 Indent at: 0.2"
celulolítico Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
25 CAB9_CU3 1 No 0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
celulolítico Indent at: 0.2"
26 CAB9_CU4 2.65 No 0 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
celulolítico single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
27 CAB10_J1 1.21 No 0 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
celulolítico
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
28 CAB10_J2 3.75 No 0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
celulolítico 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
29 CAB10_J3 5.63 15.50 63.68
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
30 CAB10_J4 4.25 17.50 75.71 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
31 CAB10_J5 2.15 8 73.12 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
32 CAB10_J6 5.23 11.5 54.52 Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
7.4. single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
TABLA 4.PRUEBA DE LA CARBOXIMETILCELULOSA CMC + ROJO DE CONGO Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Adjust space between Latin and
Asian text, Adjust space between Asian text and numbers
7.4 CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA DE LOS ACTINOMICETOS Formatted: Heading 2, Left
Formatted: Heading 2
7.4.1. 7.4.1. Rango de crecimiento en función de la temperatura Formatted: Heading 2, Left
Formatted: Heading 2, Line spacing: single, Adjust space
between Latin and Asian text, Adjust space between Asian
Transcurrido el tiempo de incubación, se midió el diámetroobservó el crecimiento de las text and numbers
Formatted: Font: Not Italic
colonias en el Agar Avena, con la finalidad de hacer una comparación entre el tamaño Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Space After: 10 pt, Line spacing: Multiple 1.15
alcanzado en condiciones normales y en las modificadas, mediante una relación de li, Adjust space between Latin and Asian text, Adjust space
between Asian text and numbers
porcentaje con respecto al control (Tabla 565). Así, se llegó a determinar que a 4 °C, 28
redujeron en más de 50% su crecimiento con respecto al control (Figura 8); a temperatura Formatted: Right
54
de 28°C, los 32 aislados (100%) lograron crecer, y mientras que a 45°C , 3 cepas (9.4%)
No crecieron
Crecieron con
eficiencia reducida
mayor al 50%
Formatted: Right
55
Formatted: Font: 12 pt
Formatted: Centered
Formatted: Centered
Crecieron con
eficiencia reducida
mayor al 50%
Crecieron con
eficiencia reducida
menor al 50%
Figura 11.
Tabla 565. Porcentaje de eficiencia de crecimiento de actinomicetos a diferentes Formatted: Line spacing: Double
Formatted: Font: Not Bold
temperaturas con respecto al control (28 °C) a los 15 días.Caracterización
56
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Porcentaje de eficiencia de T°
CÓDIGO VARIEDAD DE crecimiento en Formatted Table ...
NRO DE CEPA PAPA función de la temperatura con Formatted ...
DE Código de cepa respecto al
Formatted ...
CEPA control (%)pH
Formatted ...
4° C5.5 45°C7.0 8.5 4°C 28°C 45°C Formatted ...
Formatted ...
1 CAB3_1 CanchánCAB3_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
CA1 Formatted ...
2 CAB3_2 CanchánCAB3_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
CA2 Formatted ...
3 CAB3_3 CanchánCAB3_ ++0.0 ++100. ++ - ++ ++
Formatted ...
CA3 0
Formatted ...
4 CAB4_1 CanchánCAB4_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
CA1 Formatted ...
5 CAB4_2 CanchánCAB4_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
CA2 Formatted ...
6 CAB4_3 CanchánCAB4_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
CA3 Formatted ...
7 CAB4_4 CanchánCAB4_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
Formatted ...
CA4
Formatted ...
8 CAB4_5 CanchánCAB4_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
CA5 Formatted ...
9 CAB4_6 CanchánCAB4_ ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
CA6 Formatted ...
10 CAB5_1 FutisCAB5_F1 ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
11 CAB5_2 FutisCAB5_F2 ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
12 CAB5_3 FutisCAB5_F3 ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
Formatted ...
13 CAB5_4 FutisCAB5_F4 ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
Formatted ...
14 CAB5_5 FutisCAB5_F5 ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
15 CAB6_1 FutisCAB6_F1 ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
16 CAB7_1 HuayroCAB7_H ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
1 Formatted ...
17 CAB7_2 HuayroCAB7_H ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
2 Formatted ...
18 CAB7_3 HuayroCAB7_H ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
Formatted ...
3
Formatted ...
19 CAB7_4 HuayroCAB7_H ++37.04 ++0.0 ++ + ++ -
4 Formatted ...
20 CAB7_5 HuayroCAB7_H ++0 ++39.0 ++ - ++ + Formatted ...
5 6 Formatted ...
21 CAB8_1 HuayroCAB8_H ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
1 Formatted ...
22 CAB8_2 HuayroCAB8_H ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
Formatted ...
2
Formatted ...
23 CAB9_1 Cuchipa- ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
akanCAB9_CU1 Formatted ...
24 CAB9_2 Cuchipa- ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
akanCAB9_CU2 Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
57
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
25 CAB9_3 Cuchipa- ++0.0 ++0.0 ++ - ++ -
Formatted ...
akanCAB9_CU3
26 CAB9_4 Cuchipa- ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
akanCAB9_CU4 Formatted ...
27 CAB10_1 JompisCAB10_J ++41.18 ++0.0 ++ + ++ - Formatted ...
1 Formatted ...
28 CAB10_2 JompisCAB10_J ++75.85 ++0.0 ++ ++ ++ - Formatted ...
2
Formatted ...
29 CAB10_3 JompisCAB10_J ++0.0 ++77.2 ++ - ++ ++
Formatted ...
3 7
30 CAB10_4 JompisCAB10_J ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
4 Formatted ...
31 CAB10_5 JompisCAB10_J ++0.0 ++0.0 ++ - ++ - Formatted ...
5 Formatted ...
32 CAB10_6 JompisCAB10_J ++21.43 ++0.0 ++ + ++ - Formatted ...
6
Formatted ...
Formatted ...
(++) Crecimiento regular
Formatted ...
(+) Poco crecimiento
Formatted ...
Formatted ...
(-) No hubo crecimiento,( Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
,( Formatted ...
Formatted ...
Rango de crecimiento en función del pH
Se sembró en agar Avena a pH 5.5, pH 7 y pH 8.5. Transcurrido el tiempo de Formatted ...
crecimiento, se realizaron las mediciones y se halló la relación de porcentaje con Formatted ...
respecto al control, que presentaba pH 7 (Tabla 6). En este ensayo, se llegó a Formatted ...
determinar que a pH 5.5, 32 cepas (100%) crecieron, de ellas, el 100% redujeron Formatted ...
en menos de 50% su eficiencia de crecimiento con respecto al control (Figura
Formatted ...
10); mientras que a pH 8,5, el 100% logró crecer, y todas ellas tuvieron una
eficiencia de crecimiento mayor al 50% respecto al control (Figura 11). Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
100 % Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Figura 12. Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
58
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Porcentaje de cepas de actinomicetos en base a su crecimiento a pH 5.5
Formatted: Font: Not Bold
Crecimiento en función al pH
100%
No crecieron
3 CAB3_CA3 100.0 100.0 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
4 CAB4_CA1 100.0 100.0 Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
5 CAB4_CA2 96.2 96.7 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
6 CAB4_CA3 73.7 98.6 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
7 CAB4_CA4 98.2 99.1 Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
8 CAB4_CA5 100.0 100.0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
9 CAB4_CA6 100.0 100.0
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
10 CAB5_F1 100.0 100.0 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Right
59
11 CAB5_F2 100.0 100.0 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
12 CAB5_F3 100.0 100.0 Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
13 CAB5_F4 90.0 100.0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
14 CAB5_F5 71.1 99.2 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
15 CAB6_F1 53.5 91.4 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
16 CAB7_H1 100.0 100.0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
17 CAB7_H2 63.4 100.0
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
18 CAB7_H3 100.0 100.0 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
19 CAB7_H4 58.6 99.4 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
20 CAB7_H5 100.0 96.4 Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
21 CAB8_H1 76.4 100.0 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
22 CAB8_H2 67.5 100.0 Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
23 CAB9_CU1 72.2 100.0 Indent at: 0.2"
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
24 CAB9_CU2 59.4 94.5 single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
25 CAB9_CU3 88.3 98.2
Formatted: Heading 2, Left, Space After: 0 pt, Line spacing:
single, Outline numbered + Level: 2 + Numbering Style: 1, 2,
26 CAB9_CU4 65.6 91.1 3, … + Start at: 2 + Alignment: Left + Aligned at: 0.2" +
Indent at: 0.2"
Formatted: Right
60
7.5 CARACTERÍSTICASIZACIÓN DE Phytophthora infestans
P. infestans en placa se presenta con un micelio aéreo blanco, algodonoso y radiado, Formatted: Font: Not Bold, Italic
fácil de retirar con el asa de siembra, crece en toda la placa aproximadamente en 7 días
CARACTERÍSTICAS MACROSCÓPICAS Y
Figura 10 Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Bold
A5. Phytophthora infestans en agar CentenoAvena. Formatted: Font: 11 pt
Formatted: Font: 11 pt
FIGURA 1B6. Phytophthora infestans en agar Avena.Centeno
Formatted: Font: 11 pt
Formatted: Font: 11 pt
Formatted: Centered
Formatted: Centered
Formatted: Right
91
5
61
Formatted: Left, Space After: 10 pt, Line spacing: Multiple
1.15 li, Adjust space between Latin and Asian text, Adjust
space between Asian text and numbers
Formatted: Centered
Avena.
inhibición siguiendo la técnica propuesta por Ahmed et al. (2007), la cual consiste en
62
De las 32 cepas de actinomicetos aislados, el 71,9% (23) de estas cepas inhibieron el
Los porcentajes de inhibición obtenidos varían entre 13,33 y 80,05 %, siendo la cepa
CAB10_J2 aquella que presentó el porcentaje de inhibición más alto en Agar Avena y
PORCENTAJE DE INHIBICIÓN
NRO DE CÓDIGO VARIEDAD FRENTE A P, infestans (%)
Formatted: Right
63
CEPA DE CEPA DE PAPA
AGAR AVENA AGAR CENTENO
1 CAB3_1 Canchán 50 0
2 CAB3_2 Canchán 13,33 0
3 CAB3_3 Canchán 0 0
4 CAB4_1 Canchán 33,33 0
5 CAB4_2 Canchán 26,66 37,50
6 CAB4_3 Canchán 16,66 16,67
7 CAB4_4 Canchán 33,33 32,79
8 CAB4_5 Canchán 57,14 38,00
9 CAB4_6 Canchán 11,11 0
10 CAB5_1 Futis 16,66 0
11 CAB5_2 Futis 44,44 21,05
12 CAB5_3 Futis 16 0
13 CAB5_4 Futis 44,44 0
14 CAB5_5 Futis 37,5 0
15 CAB6_1 Futis 0 0
16 CAB7_1 Huayro 37,3 37.3
17 CAB7_2 Huayro 0 0
18 CAB7_3 Huayro 0 0
19 CAB7_4 Huayro 0 0
20 CAB7_5 Huayro 16,66 0
21 CAB8_1 Huayro 37,73 0
22 CAB8_2 Huayro 33,33 0
23 CAB9_1 Cuchipa-akan 30,43 0
24 CAB9_2 Cuchipa-akan 58,33 0
25 CAB9_3 Cuchipa-akan 0 0
26 CAB9_4 Cuchipa-akan 77,47 30,16
27 CAB10_1 Jompis 39,81 42,31
28 CAB10_2 Jompis 80,05 43,90
29 CAB10_3 Jompis 0 0
30 CAB10_4 Jompis 40 0
31 CAB10_5 Jompis 60 0
32 CAB10_6 Jompis 60 31,07
Tabla 6. 7.pruebaPrueba de antagonismo de los actinomicetos frente a Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
Pphytophthora infestans en agar Aavena y en agar Centeno Formatted: Font: 12 pt, Not Bold
Formatted: Font: 12 pt, Not Bold
Formatted: Right
64
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
1B
15 Formatted ...
5
A Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Figura 12. Antagonismo frente a Phytophthora infestans en Agar Avena
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
TABLA 8.PRUEBA DE ANTAGONISMO DE LOS ACTINOMICETOS FRENTE A Phytophthora Formatted ...
infestans EN AGAR CENTENO Formatted ...
Formatted ...
NRO CÓDIGO ANTAGONISMO (10 DÍAS) EN AGAR CENTENO Formatted ...
RADIO DE LA COLONIA RADIO DEL HALO DE PORCENTAJE DE INHIBICIÓN Formatted ...
DE
(MM) INHIBICIÓN (MM) FRENTE A (%) Formatted ...
CEPA
Formatted ...
Formatted ...
1 CAB3_CA1 1.8 0 0
Formatted ...
2 CAB3_CA2 1.45 0 0
Formatted ...
3 CAB3_CA3 3.0 0 0
4 CAB4_CA1 3.2 0 0 Formatted ...
5 CAB4_CA2 5.0 8.0 37..50 Formatted ...
6 CAB4_CA3 5.0 6.0 16.67 Formatted ...
7 CAB4_CA4 4.1 6.1 32.79
Formatted ...
8 CAB4_CA5 3.1 5.0 38.00
Formatted ...
9 CAB4_CA6 1.4 0 0
10 CAB5_F1 5.0 0 0 Formatted ...
11 CAB5_F2 1.5 1.9 44.44 Formatted ...
12 CAB5_F3 1.19 0 0 Formatted ...
13 CAB5_F4 3.2 0 0
Formatted ...
14 CAB5_F5 2.1 0 0
Formatted ...
15 CAB6_F1 1.32 0 0
Formatted ...
16 CAB7_H1 3.3 5.1 37.3
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
65
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
17 CAB7_H2 2 0 0
FIGURA
18 1A7.CAB7_H3
Las cepas CAB4_CA2,
2.75 CAB4_CA4 0 y CAB4_CA5 son antagonistas
0 frente a Formatted ...
Phytophthora
19 infestans en Agar Avena.
CAB7_H4 3 0 0 Formatted ...
20 CAB7_H5 2.4 0 0 Formatted ...
FIGURA
21 1B8.CAB8_H1
La cepa CAB10_J2 2.1 con 80.05% de 0inhibición es la más antagonista
0 frente a
Formatted ...
Phytophthora
22 infestans de los 32 2.3
CAB8_H2 actinomicetos aislados
0 en Agar Avena. 0
Formatted ...
23 CAB9_CU1 1.45 0 0
Formatted ...
24 CAB9_CU2 1.44 0 0
25 CAB9_CU3 1.0 0 0 Formatted ...
26 CAB9_CU4 4.4 6.3 30.16 Formatted ...
27 CAB10_J1 4.5 7.8 42.31 Formatted ...
28 CAB10_J2 4.6 8.2 43.90 Formatted ...
29 CAB10_J3 4.1 0 0
Formatted ...
30 CAB10_J4 2.0 0 0
Formatted ...
31 CAB10_J5 5.0 0 0
32 CAB10_J6 7.1 10.3 31.07 Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
ANTAGONISMO FRENTE A Phytophthora infestans EN AGAR AVENA Y EN AGAR
Formatted ...
CENTENO
Formatted ...
Figura 11. Antagonismo frente a phytophthora infestans en agar avena y en agar Formatted ...
centeno. Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted FIGURA 18. La cepa CAB10_J2 con 80.05
...
Formatted
inhibición es la más antagonista fren
...
Phytophthora infestans de los
Formatted ...
actinomicetos aislados en Agar Avena.
Formatted ...
Formatted ...
17 18 Formatted ...
0 0 Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
66
Formatted ...
Formatted ...
Formatted ...
Figura 138. La cepa12 CAB10_J2 con 43.90% de inhibición es la más antagonista frente a Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, Bold
Phytophthora infestans90de los 32 actinomicetos aislados en Agar Centeno. Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt
7.7. 7.7. OBTENCIÓN DEL EXTRACTO ORGÁNICOACTIVIDAD ANTI-Phytophthora Formatted: Font: Italic
DE LOS EXTRACTOS ORGÁNICOS Formatted: Heading 2
Formatted: Font: 11 pt
La cepaEl actinomiceto CAB10_2 fue escogida , cepa que fue elegida para probar la
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
actividad de los extractos obtenidos con los solventes: acetato de etilo, diclorometano y Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
butanol; no mostraron actividad in la preparación de extractos orgánicos y su posterior Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
ensayo de determinación de actividadvitro antifúngica, debido a su capacidad antagonista
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
frente al cultivo de Phytophthora infestans (Figura 14). A pesar de que se determinó el
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold, Italic
peso seco a cada extracto (Tabla 7),, estos al ser resuspendidos en DMSO al 10% no Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
ffueron utilizadosactivos en las pruebas. Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Not Bold, Italic
y sus elevados porcentajes de inhibición frente a dos de las cuatro cepas. Los solventes Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
utilizados para la extracción de los metabolitos presentes en el medio de cultivo fueron Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Los extractos obtenidos fueron concentrados hasta la obtención de los pesos secos Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
(Tabla 10). Posteriormente, los extractos se resuspendieron en dimetilsulfóxido (DMSO) Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
al 10% para la realización del ensayo en placa de avena, la cual contenía pocillos de 5 Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Right
67
incubación, se realizó la lectura de las placas, siguiendo la técnica propuesta por Pandey
TABLA 9. ASPECTOS QUÍMICOS DE LOS SOLVENTES ORGÁNICOS UTILIZADOS Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Font: Bold
Formatted: Centered
SOLVENTE ETIL ACETATO DICLOROMETANO BUTANOL
Formatted: Centered, Space After: 0 pt
Tabla 710. Extracto orgánico obtenido del cultivo de la cepa CAB10_2 Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
Formatted: Font: 12 pt
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt
SOLVENTE ETIL ACETATO DICLOROMETANO BUTANOL LÍQUIDO
Formatted: Font: (Default) Arial, 12 pt, Not Bold
Peso seco (mg) 10.4 8.9 10.6 Formatted: Font: 12 pt, Not Bold
Formatted Table
Los extractos obtenidos con etil acetato, diclorometano y butanol no presentaron halos Formatted: Font: (Default) Arial
Formatted: Justified
de actividad antifúngica contra Phytophtora infestans. Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Right
68
Formatted: Font: (Default) Arial, Bold
Formatted: Font: (Default) Arial
BUTANOL ETIL ACETATO Formatted: Centered
CAB10_2 CAB10_2
Formatted: Font: 8 pt
Formatted: Centered
Formatted: Font: 8 pt
DICLOROMETANO
DMSO 10% Formatted: Font: 7 pt
CAB10_2
Formatted: Centered
Formatted: Centered
A. Los extractos de la cepa CAB10_2 en diclorometano, butanol y etilacetato en Agar Formatted: Line spacing: Multiple 1.15 li
Avena. Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Control negativo: DMSO AL 10% Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Formatted: Right
69
8. DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Formatted: Font: Not Bold
Formatted: Line spacing: Multiple 1.15 li
antibióticos y enzimas extracelulares (Arasu et al., 2008), en nuestro medio aún hay
pocos estudios de investigación sobre los grandes aportes que nos pueden proporcionar
fitopatógenos.
rizósfera de S. tuberosum. Autores como Tsavkelova et al. (2006) señalan que los
exudados de las raíces de las plantas atraen por quimiotaxis a una diversidad de géneros
bacterianos, tales como Agrobacterium, Azotobacter y Azospirillum, con los cuales las
tales como las fitohormonas. Sin embargo, según lo mencionado por Franco (2009), a
segundo tipo de relación con las plantas, la cual se produce por la síntesis de moléculas
indirecto.
menos el 90% de los actinomicetos aislados a partir del suelo pertenecen al género
70
Se concuerda con losLos resultados obtenidos en la caracterización morfológica de los
género Streptomyces, las cuales presentan pigmentación verde, roja, naranja, gris y
se fragmentan que coinciden con las características propuestas por (Reddy et al., 2011).
esta investigación.
este trabajoun buen número de actinomicetos (97%) pueden utilizar glucosa, manitol y
sacarosa. En el trabajo de Rico (2009) se muestra que solo el 15% puede utilizar los
explicar a que las muestras provienen de distintos lugares, Rico (2009) colectó tierras
trabajo las muestras fueron colectadas en Ayacucho. Por tanto distintos climas y
condiciones ambientales. Cada factor físico y químico del suelo influye en el crecimiento
actividad amilolítica son del 100 %, lo que comprueba el porcentaje alto de síntesis de
amilasas León (2007). A su vez Caro (2016) con un porcentaje menor (89,9%) Gutiérrez
(2017), tiene resultados parecidos con un 62% de actinomicetos amilolíticos siendo estas
cepas de origen terrestre. En cuanto a cepas marinas (León et al., 2016) reporta un
Formatted: Right
71
Una diferencia sustancialgran diferencia se observa en cuanto a la producción de
reportado por Gutiérrez (2017) menciona que el 53% de las cepas eran celulolíticas
respectivamente, En contraste con Caro (2016) que solo obtuvo un 26,5% de cepas
celulolíticas
(CABANA, AYACUCHO) fue 7,5°C, quizás habría dificultad en el bioinóoculo ya que los
psicrófilas (12,.5%)
Rico (2009), reporta que a 10°C, el 65% de sus aislados crecieron, pero a menor tamaño.
A 15°C y 20°C, el 100% de las cepas crecieron y aumentaron el tamaño de las colonias.
Cisneros (2016) reporta que a 5°C ninguno de sus aislados creció, y que en el rango de
En cuanto a la evaluación del crecimiento a diferentes pH. A pH 5,5, las cepas crecieron
en un 100% en menos de 8 días con respecto al control. Muy parecidos similares con
estos resultados, Rico (2009) quien encuentra que todos los actinomicetos pudieron
crecer a pH 5,5. A diferencia de Cisneros (2016) que determina que ninguna de sus
cepas crecía a pH 5.5. Ambos estudios tienen mucho que ver con las características
rizósfera de papa, y de suelos fértiles y fríos de Rico (2009) obtiene muestras de suelo
72
Además de ellos, los actinomicetos frente a un pH de 8,5, crecieron eficientemente
puesto que el 100% se desarrolló en menos de 8 días. Se puede decir que los
agricultura y Riego (2014), ya que los suelos con pHs entre 5,2 a 7,5 son óptimos para el
cultivo de papa.
Las pruebas más importantes del estudio fueron los el ensayos de antagonismo en placa
80.05% cabe resaltar que no se han encontrado estudios basados en antagonismo sobre
este agar y solo un 31.3 % demostró actividad en Agar Centeno con el máximo halo de
devastadora de los cultivos de papa denominada el tizón tardío, viene siendo uno de los
un análisis comparativo, Fonseca et al. (2011) encuentran que del total de actinomicetos
infestans. Cabe
porcentajes de inhibición están dentro del rango de 33.3% - 77.8%. En cuanto al trabajo
realizado por Pérez et al. (2015), los reportes dados mencionan un 42,4% del total de
el máximo halo de inhibición mientras que para Pérez et al. (2015) el máximo valor
alcanza los 22%. Por su parte Caro (2016), obtuvo un porcentaje del 46,9% de los Formatted: Right
73
actinomicetos aislados tienen actividad positiva contra Phytophthora infestans en Agar
cantidad de actinomicetos antagonista pero menor los halos de inhibición con respecto al
trabajo realizado.
Medina (2014) obtuvo resultados utilizando la técnica dúal (Verner y Martín, 2009) en el
medio Agar Extracto de levadura a 20 ° C por 22 días, donde las cepas con mayores halo
de inhibición fueron 77,65% y 75,33%, mientras que en nuestro trabajo los halos de
presenta los denominados grupos de anastomosis, donde algunos grupos son más
patógenos que otros y que podrían generar resistencia a los antibióticos (Cherepennikova
et al., 2002).
En el 2009, un actinomiceto Streptomyces setonii 'UFV-RD1' aislado de tomate inhibió la Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
Phytophthora infestans , Corynespora cassiicola , Stemphylium solani ) básicamente para Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: (Default) Arial, Not Bold
el biocontrol in vitro, para que luego el inóculo sea aplicado en un campo invernadero, En
este trabajo el medio de cultivo utilizado fue Agar Papa Dextrosa (Carrer Filho,2009) en el
Evaluando en conjunto los resultados anteriores, pero en especial los altos valores de
que mayores halos tuvo en avena y centenoEl método de cultivo dual que se utilizó para Formatted: Justified, Space After: 0 pt, Don't adjust space
between Latin and Asian text, Don't adjust space between
Asian text and numbers
investigar el antagonista de S. rubrolavendulae S4 indicó que se utilizó como
Formatted: Font: Not Bold, Italic
microorganismo antagonista para la supresión del crecimiento de micelios de P. infestans Formatted: Font: Not Bold, Italic
en el agar V8. Después de incubarse durante 3 días a temperatura ambiente, los radios
Formatted: Font: Not Bold, Italic
de crecimiento de P. infestans en la placa de control y el crecimiento de P. infestans Formatted: Font: Not Bold, Italic
Formatted: Font: Not Bold, Italic
hacia S. rubrolavendulae S4 se midieron aproximadamente 4,5cm y 0,75cm, Formatted: Right
74
respectivamente. Por lo tanto, el 83,33% de la inhibición del crecimiento ha demostrado
claramente que S. rubrolavendulae S4 mostró una buena inhibición del crecimiento de los Formatted ...
acción contra los eucariotas no está bien definido. Algunos protozoos ciliados eucariotas
( Palmer y Wilhelm 1978 ; Edlind 1989 ). Parece posible que los oomycetes reportan un Formatted ...
grupo bastante especial en la filogenia que tiene sensibilidad procariota a la acción de los
especies o géneros de oomycetes. ( Ann y Ko 1988). En el 2014 Streptomyces plicatus Formatted ...
proteínas tales como como Phytophthora y Pythium (Lima et al., 1998). Ciertos
75
Alabama. (2010). En general, casi todos sustancias antimicrobianas producidas son Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline
metabolitos secundarios extracelulares (Hacene et al., 2000) Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, Italic, No underline
.Evaluando en conjunto los resultados anteriores, pero en especial los altos valores de Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, No underline
Formatted: Font: (Default) Arial, 11 pt, Font color: Text 1,
porcentajes de inhibición frente a los Phytophthora infestans, la cepa CAB9_2 obtuvo Spanish (Peru)
En cuanto a ensayos de evaluación de solventes por otros autores, Pérez et al. (2015) Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
obtiene extractos con dos solventes, los cuales son etil acetato y diclorometano. En etil Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
acetato obtiene mejores resultados. Formatted: Font: (Default) Arial, Italic, No underline, Font
color: Auto
Leiva et al. (2004) seleccionaron 13 cepas de un total 31 actinomicetos para obtener Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
extractos con 5 solventes de polaridad creciente; utilizó éter de petróleo, cloroformo, Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
etilmetilcetona, acetato de etilo y butanol; siendo los extractos más activos los obtenidos Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
con etilmetilcetona y acetato de etilo. Cabe resaltar que la polaridad es una característica Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
actinomicetos salinos con acetato de etilo, metanol, cloroformo y etanol frente a bacterias
Gram positivas como Staphylococcus aureus y Bacillus subtilis; y frente a bacterias Gram
negativas como Escherichia coli y Salmonella typhi, también frente a levadura como
Formatted: Right
76
Ps. aeruginosa, V. cholerae, S. typhi, Sh. disentirae, S. aureus, P. mirabilis y B.
subtilis; sin embargo, los extractos de acetato de etilo generaron mejores resultados.
El extracto orgánico a partir de acetonitrilo y hexano de hongos nativos frente a bacterias Formatted: Justified, Space After: 0 pt, Don't adjust space
between Latin and Asian text, Don't adjust space between
Asian text and numbers
Gram positivas, negativas y levaduras en cromatogtrafía, resultaron ser buenos solventes
para esta técnica (De la Rosa, 2007). Todos estos resultados señalan que el etil acetato Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
es el mejor solvente en la recuperación de los metabolitos activos producidos por Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
actinomicetos, ya que el etilacetato arrastra a las sustancias que son más polares, y Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
estas a su vez tienen mayor capacidad antagonista frente a microrganismos patógenos Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
(Okeleye et al., 2010). Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
, equivalente a un 77,3%. La explicación a esta diferencia de resultados podría estar en el Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
Auto
Formatted: Font: (Default) Arial, Italic, No underline, Font
hecho que esta especie presenta los denominados grupos de anastomosis, de los cuales color: Auto
Formatted: Font: (Default) Arial, No underline, Font color:
se puede mencionar que algunos grupo son más patógenos que otros, e incluso se Auto
menciona que ciertos grupos son mucho más resistentes a los antibióticos
(Cherepennikova et al., 2002). De haberse dado este posible escenario, puede que en
ambos trabajos se haya utilizado gruposde anastomosis que conllevaron a esta variación
En el presente trabajo ninguno de los solventes fue capaz de arrastrar los metabolitos
con posibilidad de generar halos de inhibición, esto quizás es debido a la escasa o nula
Formatted: Right
77
que mayores halos tuvo en avena y centeno. Formatted: No underline, Font color: Text 1
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
https://repositorio.espe.edu.ec/bitstream/21000/8346/1/T-ESPE- at: 0.75"
047817.pdf Formatted: No underline, Font color: Text 1
/29612
00116.pdf
05362009000300014
2018-09.pdf
Natalia%20Pastrana%20Camacho%20%20%28tesis%29.pdf?seque
nce=1&isAllowed=y
78
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Tab stops: Not at 5.44"
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75"
Formatted: Right
79
Formatted: Heading 1, Centered, Line spacing: single,
Outline numbered + Level: 1 + Numbering Style: I, II, III, …
+ Start at: 1 + Alignment: Left + Aligned at: 0.25" + Indent
at: 0.75", Tab stops: Not at 5.44"
tuberosum sp. andigena de las zonas altoandinas del Perú con potencial antagonismo
Formatted: Right
80
para enfrentar en campo a este fitopatógeno, debido a que crece a 4° C y utiliza diversas
asimilación de azúcares.
la prueba fue realizada en Agar Mandels y Reese revelada con rojo de congo, notándose
prueba fue realizada en Agar almidón revelada con lugol 1:1, notándose un halo claro en
la zona de inhibición.
suelos con pH neutro, alcalino y condiciones de psicrofilia (4°C) hasta los 28°C, pero no a
54. De acuerdo a los resultados de los ensayos de antagonismo en placa, la mayor parte
5. Los solventes utilizados para la producción de los extractos no son compatibles con el
65. Tanto para aislamiento de actinomicetos como para las pruebas de antagonismo
frente Phytophthora infestans el medio Agar Avena fue más eficiente. Los actinomicetos
Formatted: Right
81
crecen desarrollaron considerablemente en menor tiempo en comparación con otros
compuestos, además de extraer metabolitos con otros solventes para obtener halos de
orgánicos obtenidos de actinomicetos con buena actividad anti-Phytophthoraantifúngica Formatted: Font: Italic, No underline, Font color: Auto
Formatted: Right
82
5. Utilizar marcadores moleculares para la determinación de especies de actinomicetos.
Formatted: Right
83
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Auto
Formatted: Right
98
Formatted: Left
XII.ANEXOS
Formatted: Right
99
ANEXO 1. TOMA DE MUESTRA
LOCALIDAD DISTRITO
CABANA SUR, LUCANAS,
AYACUCHO-PERÚ
Formatted: Right
100
Formatted: Left
TIERRA
10 g 9 ml 9 ml 9 ml
90 ml de
Sol. Salina +
fenol 0.85 %
Agitar 25
veces,
incubar por
30 min a
30°c .
0,1 ml 0,1 ml
Formatted: Right
101
ANEXO 3: SELECCIÓN DE ACTINOMICETOS
COMPORTAMIENTO CULTURAL:
GRAM: GRAM +
Formatted: Right
102
ANEXO 4. CARACTERIZACIÓN FENOTÍPICA DE ENZIMAS HIDROLÍTICAS EN AGAR
Formatted: Right
103
ANEXO 5. CARACTERIZACIÓN BIOQUÍMICA DE LOS ACTINOMICETOS EN EL USO
SIEMBRA POR
PUNTURA
Formatted: Right
104
ANEXO 6. CARACTERIZACIÓN FISIOLÓGICA DE LOS ACTINOMICETOS
SIEMBRA POR
PUNTURA
Modificando el pHs:
5.5, 7 y 8.5 (AA a 28
oC). Modificando la T o
: 4, 45 y 28 oC (AAC a
pH 7).
Formatted: Right
105
Formatted: Left
A Pphytophthora infestans
Formatted: Right
106
Formatted: Left
ANEXO 8. OBTENCIÓN DEL EXTRACTO ORGÁNICO ANTIMICROBIANO Y Formatted: Font: Bold, No underline, Font color: Auto
DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTI-PHYTOPHTHORA Formatted: Font: Italic, No underline, Font color: Auto
Formatted: Left
Formatted: Right
107
Formatted: No underline, Font color: Auto
Realizar pocillos y
añadir extractos,
ANEXO 98. MEDIOS DE CULTIVO incubar. Formatted: Font: (Default) Arial
Almidón 10,0
Caseína 0,30
NaCl 2,00
K2HPO4 2,00
MgSO4.7H2O 0,05
Formatted: Right
108
CaCO3 0,02
FeSO4.7H2O 0,01
Agar 15,0
pH 7,0
Avena 20,0
Agar 18,0
pH 7,2 pH 7,0
Sacarosa 20,0
Agar 15,0
pH 5,5
Formatted: Right
109
*Para el aislamiento, cultivo y mantenimiento de Phytophthora infestans.
NaCl 6,0
Almidón 2,0
Agar 18,0
Carboximetilcelulosa 10,0
K2HPO4 2,0
KH2PO4 2,0
Agar 18,0
Agua 1000,0 ml
pH 7,0
6. Medio Extracto de Levadura Glucosa – mg/L (Modificado por Sultan et al., 2002)
D-glucosa 5,0
CaCO3 1,0**
Almidón 10,0**
Formatted: Right
110
Agua 1000,0 ml
(NH4)2SO4 2,64
KH2PO4 2,38
K2HPO4 5,65
MgSO4 1,0
Agar 18,0
8. Agar Glicerol-Asparragina - mg/L (Pridham y Lyons, 1961) Formatted: No underline, Font color: Auto
Agar 20,0
111
pH 7,4
Sacarosa 30,00 g
Formatted: Right
112