Abstrak

Pendahuluan
Estimasi interval postmortem (PMI), juga dikenal sebagai waktu saat kematian, sangat
penting dalam penyelidikan forensik. Dalam kasus forensik harian, Estimasi interval
postmortem (PMI) dapat membantu ahli patologi forensik memverifikasi pernyataan
saksi, mempersempit ruang lingkup pencarian, atau bahkan memandu arah
investigasi. Berbagai metode telah digali oleh para sarjana forensik untuk mencapai tujuan
ini.
Metode tradisional termasuk pemeriksaan algor mortis, rigor mortis, livor mortis, dan
kondisi pertumbuhan serangga setelah kematian. Banyak metode baru fokus pada
postmortem perubahan indeks kimia dan biomolekul, seperti degradasi DNA, RNA,
protein, dan variasi postmortem mikroorganisme. Namun, sebagian besar metode baru
memerlukan proses yang kompleks untuk menganalisis forensik sampel, dan instrumen
yang dibutuhkan mahal dan memakan waktu. Oleh karena itu, penggunaan pretreatment
sederhana untuk memperkirakan PMI akan cukup bermanfaat dalam pekerjaan forensic
sehari-hari.

Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy merupakan metode analisis sensitive

sangat tinggi untuk identifikasi sampel komposisi molekul
biologis dengan deteksi getaran ikatan kimia. Oleh karena itu
keuntungannya tidak merusak, cepat, portabel, dan baik untuk digunakan.
FTIR telah banyak digunakan dalam investigasi forensik untuk menganalisis sidik jari,
tinta, serat, rambut dan residu tembakan ditemukan di TKP. Selain itu, FTIR dapat
diterapkan menganalisis sampel biologis, termasuk komponen makromolekul organik
seperti protein, karbohidrat, lipid, dan
asam nukleat. Ketika organ dan jaringan menurun secara bertahap setelah
kematian, komponen jaringan berubah
dari waktu ke waktu, dan fenomena ini dapat digunakan dalam spektral data seperti
penurunan intensitas puncak dan area. Kombinasi dengan kemometrik lebih banyak
informasi yang diperoleh dan lebih tepat untuk memperkirakan estimasi interval
postmortem.
Penulis sebelumnya telah menunjukkan kegunaan FTIR untuk studi perubahan biokimia
dalam organ dan cairan biologis, dan beberapa karakteristik intensitas puncak dan area
terbukti berkorelasi dengan estimasi interval postmortem. Petimbangan bahwa sebagian
besar jaringan rentan terhadap degradasi dan gangguan mikroba, ada banyak keterbatasan
untuk estimasi interval postmortem secara akurat untuk tetap dalam kondisi pembusukan
tinggi. Yan et al. menemukan bahwa komposisi
adipocere berbeda pada berbagai titik waktu, yang dapat diterapkan untuk estimasi
interval postmotem dalam kasus tertentu. Degradasi lipid relatif lambat dan dapat
diterapkan untuk estimasi interval postmortem yang lebih lama. Selain itu, jaringan
adiposa dekat dengan permukaan tubuh dan dapat diperoleh melalui sayatan kecil, bahkan
tanpa melakukan otopsi forensik, dan mungkin merupakan sampel yang tepat untuk
memperkirakan estimasi interval post mortem dari sisa-sisa yang terurai. Jadi, dalam
pekerjaan ini, kami menggunakan FTIR yang digabungkan dengan kemometrik untuk
mendeteksi proses dekomposisi jaringan adiposa.

BAHAN DAN METODE

Persiapan sampel manusia
Informed consent diperoleh dari kerabat semua orang yang meninggal dalam penelitian
ini, dan harus ditekankan bahwa semua prosedur dalam penelitian ini mematuhi
persyaratan hukum setempat dan pedoman kelembagaan dan telah disetujui dan diawasi
oleh Komite Etik Xi'an Jiaotong Universitas. Sebanyak delapan jaringan adiposa subkutan
perut dikumpulkan dari delapan manusia: dua yang sudah terurai dan enam relatif segar,
seperti yang ditunjukkan pada Tabel 1. Untuk setiap kasus, setelah sayatan longitudinal
dari seluruh dinding perut selama otopsi, sekitar 4 cm × 4 cm kulit dengan lapisan lemak
subkutan penuh terputus dari atas daerah pusar. Kemudian spesimen disimpan dalam gelas
ukur 100 mL dan ditempatkan di ruang yang dikontrol secara lingkungan dengan suhu
konstan 25 ° C ± 1 ° C dan kelembaban relatif 50% ± 5%. Kemudian, sekitar 0,5 cm × 0,5
cm × 0,5 cm jaringan adiposa dari setiap sampel setiap 2 hari selama 2 minggu berikutnya.
Untuk mendapatkan gambar spektral yang stabil, sebelumnya dilakukan pengukuran

sampel: semua tabung jaringan adiposa dengan ultrasonik selama 15 detik dan
disentrifugasi pada suhu 4 ° C dan 3000 rpm selama 3 menit, dan supernatan diperoleh
dan kemudian dibekukan pada - 80 ° C hingga analisis FTIR.

Persiapan sampel hewan

Tikus jantan (n = 121, berat 24-26 g), dibeli dari Pusat Hewan Universitas Xi'an Jiaotong,
dibius dengan 0,1 ml / 10 g 4% chloral hydrate melalui perut, dan kemudian dengan
dislokasi serviks. Semua percobaan hewan dalam penelitian ini secara khusus disetujui
dan diawasi oleh Komite Perawatan dan Penggunaan Hewan Laboratorium
Universitas Xi’an Jiaotong. Kadaver disimpan pada suhu sekitar 25 ° C ± 1 ° C dan
kelembaban relatif 50% ± 5% dalam ruang. Sampel jaringan adiposa dari 121 tikus
diambil pada 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, dan 14 hari (11 sampel untuk setiap titik waktu,
delapan untuk satu set kalibrasi, dan tiga untuk suatu set prediksi). Semua sampel jaringan
adiposa dikumpulkan dari daerah inguinal. Karena tikus tidak memiliki cukup lemak
dalam jaringan adiposa, semua sampel secara ultrasonik selama 15 detik, dan 100 μL
petroleum eter ditambahkan untuk memurnikan
lipid dalam jaringan adiposa. Selain itu, harus dicatat bahwa kerapuhan eter minyak bumi
tidak boleh mempengaruhi spektral
pengumpulan data. Kemudian sampel disentrifugasi pada 4 ° C dan 3000 rpm selama 3
menit dan supernatan terutama terkandung dalam jaringan adiposa untuk analisis FTIR.

Pengukuran fourier transform infrared (FTIR)

FTIR dikumpulkan oleh Thermo Nicolet-IS50 FTIR (Thermo Electron Scientific

Instruments Corp, WI, USA) digabungkan dengan berlian attenuated total reflectance
(ATR) aksesori, dan balok splitter KBr digunakan untuk akuisisi spektral. Paket perangkat
lunak analisis spektrum inframerah OMNIC versi 8.2 (Thermo Nicolet Analytical
Instruments, WI, USA) digunakan untuk menganalisis spektrum dan merekam data. Tiga
supernatan 1 μL dari masing-masing sampel ditambahkan pada kristal berlian ATR.
Untuk memastikan reproduktifitas spektral dan menilai ketelitian analisis, setiap tetes
supernatan terdeteksi dan dicatat tiga kali. Parameter pengumpulan spektral diatur ke
frekuensi mulai dari 4000 hingga 400 cm-1 dengan resolusi 4 cm-1 dan 32 scan.

Hasil dan diskusi

Analisis spektrum visual sampel manusia
Analisis spektral visual sampel manusia gambar 1 menunjukkan sampel awal SNV ATR-
FTIR pada 0 dan 6 hari dalam kisaran 4000-400 cm-1. Tanda pada band ditunjukkan pada
Tabel 2. Spektra memiliki C – H yang kuat antara 3050 dan 2850 cm-1. Band terpisah
pada 2922 dan 2852 cm-1 sesuai dengan peregangan C – H asimetris (CH2) dan
peregangan C – H simetris, masing-masing dengan puncak yang lemah pada 3008 cm-1
disebabkan oleh peregangan C – H asimetris (= C – H). Dibandingkan dengan spektrum
pada 0 hari, spektrum pada 6 hari menunjukkan 1711 cm-1, yang dikenal sebagai daerah
signifikan untuk asam lemak bebas. Kami menganggap bahwa ini mungkin puncak
karakteristik yang terkait dengan estimasi interval postmortem. Pada 1465 cm-1 ditetapkan
untuk memutuskan CH2 dari rantai asil lipid dan rentang frekuensi 1159-1174 cm-1 hasil
dari peregangan getaran karbohidrat. Wilayah spektral antara 1120 dan 1050 cm-1
memiliki dua puncak lemah dari RNA yang disebabkan oleh peregangan C – O pada 1117
cm-1 dan PO2 - peregangan simetris pada 1089 cm-1.
Waktu puncak pada 1711 cm-1 pertama kali muncul (T1711) dalam 8 sampel selama 2
minggu tercantum dalam Tabel 1. Kami menemukan bahwa T1711 sampel 1 dan sampel
7 masing-masing adalah 6 dan 8 hari, yang jauh lebih sedikit daripada sampel lain dan
karakteristik umum keduanya adalah bahwa mereka berada dalam keadaan pembusukan
tinggi dengan estimasi interval postmortem lebih lama. Estimasi interval postmortem
dalam kedua kasus tidak dapat sepenuhnya ditentukan karena kurangnya informasi di
tempat. Tidak termasuk dua kasus yang sangat terurai, T1711 dari sampel 2 dan sampel 6
keduanya 10 hari. Estimasi interval postmortem dari dua sampel ini lebih panjang dari
pada sampel lainnya. Temuan ini lebih jauh mengkonfirmasi relevansi puncak pada 1711
cm-1.
Penelitian telah membuktikan bahwa jaringan adiposa tubuh sebagian besar terdiri dari
lipid, dimana 90% - 99% adalah trigliserida yang dihidrolisis oleh jaringan intrinsic lipase
setelah kematian untuk menghasilkan campuran asam lemak jenuh dan tidak jenuh. [21]
Pada penelitian Swann et al asam lemak dapat dideteksi dengan metode kromatografi
spektrometri massa dalam cairan yang dikeluarkan selama dekomposisi dan komponen
asam lemak berkorelasi dengan estimasi interval postmortem. Kami menemukan bahwa
asam lemak bebas juga dapat dideteksi oleh ATR-FTIR dalam jaringan adiposa. Asam
lemak bebas yang dihasilkan dari penguraian lipid berkorelasi
dengan estimasi interval postmortem. Menurut penelitian pendahuluan pada sampel
manusia in vitro. Namun, kondisi in vitro sangat berbeda dengan in vivo. Karena
kurangnya penelitian terus menerus tentang penguraian lipid, kami mempelajari tikus
untuk memverifikasi temuan pada sampel manusia dan untuk membangun model yang
sesuai untuk memperkirakan estimasi interval postmortem.
Analisis spectrum visual sampel tikus
Kami hanya menggunakan spektrum pada 3050–2800 cm-1 dan 1800–400 cm-1, yang
berisi getaran frekuensi dasar penyerap energi dari sebagian besar biomolekul untuk
analisis lebih lanjut untuk mengurangi gangguan dari kebisingan. Gambar 2 menunjukkan
spektra rata-rata setelah pawal perawatan dengan SNV dari setiap kelompok estimasi
interval postmortem dan perbandingan. Pada gambar 2 yang terlihat berubah adalah pada
1743 dan 1711 cm-1 , dan intensitas 1743 cm-1 menurun dari waktu ke waktu, sementara
1711 cm-1 meningkat pada awalnya dan kemudian menurun. Nilai tertinggi yang terkait
dengan = C – H pada 3008 cm-1 menunjukkan peningkatan intensitas, sedangkan nilai
tertinggi yang terkait dengan getaran CH2 pada 2922 dan 2852 cm-1 mengalami
peningkatan kemudian menurun. Kami percaya bahwa perubahan dalam spektrum ini
dihasilkan dari hidrolisis trigliserid yang mengurangi kandungan lipid dan meningkatkan
kandungan asam lemak bebas dan dengan peningkatan estimasi interval postmortem,
asam lemak bebas tersebar dari jaringan adiposa dan menjadi bagian
dari produk degradasi.
Selanjutnya, kita dapat menentukan bahwa waktu ketika nilai pada 1711 cm-1 pertama kali
muncul adalah pada hari ke-4 pada 25 ° C ± 1 ° C dan kelembaban relatif 50% ± 5%.
Variasi spektrum pada karakteristik konsisten dengan sampel manusia in vitro.
Perbedaannya adalah bahwa nilai tertinggi karakteristik pada sampel tikus in vivo muncul
lebih awal daripada pada sampel manusia in vitro. . Kami mempertimbangkan jaringan
adiposa in vivo terdegradasi dengan cara yang sama seperti in vitro, tetapi terjadi lebih
cepat, karena kandungan lebih banyak pada enzim dan air. Nilai tertinggi pada 1159-1174
cm-1, yang mewakili karbohidrat dan berhubungan dengan RNA pada 1117 dan 1089 cm-
1
berkurang.
Wiya
Wiya
Wiya

Seiring dengan keuntungan jaringan adiposa, penelitian spektroskopi saat ini

menunjukkan bahwa jaringan adiposa dapat menjadi media yang tepat untuk estimasi
interval postmortem dalam tubuh yang sangat terurai. Namun, estimasi interval
postmortem dipengaruhi oleh banyak faktor, seperti suhu, kelembaban, dan penyebab
kematian. studi saat ini berfokus pada satu kondisi tunggal dan penerapan ruang lingkup
yang terbatas. Kondisi yang lebih kompleks dan dapat berubah dalam kasus forensik nyata
dapat mempengaruhi proses perubahan postmortem dari jaringan adiposa dan
menyebabkan kesalahan prediksi yang lebih besar. Oleh karena itu, dalam pekerjaan di
masa depan kita perlu mempelajari perubahan postmortem dari jaringan adiposa dalam
kondisi kompleks, menetapkan model yang sesuai, mengurangi kesalahan dan beradaptasi
dengan kebutuhan kerja.
KESIMPULAN

Spektroskopi ATR-FTIR diaplikasikan untuk memperoleh informasi biokimia dalam

jaringan adiposa sampel manusia in vitro untuk pertama kalinya dan kemudian dilakukan
tes in vivo pada tikus. Hasilnya menunjukkan bahwa analisis FTIR dan kemometrik
berdasarkan perubahan biokimia dalam jaringan adiposa sangat ideal untuk
memperkirakan estimasi interval postmortem pada sisa yang sangat terurai. Spektroskopi
mencerminkan bahwa perubahan yang bergantung pada estimasi interval postmortem
dalam jaringan adiposa berasal dari proses hidrolisis lipid yang diatur waktu menjadi asam
lemak bebas dan molekul biologis lainnya seperti karbohidrat dan asam nukleat yang juga
memiliki efek kecil. Selain itu partial least square untuk memprediksi estimasi interval
postmortem yang menghasilkan hasil yang memuaskan. Singkatnya, penelitian ini
menunjukkan kelayakan menggunakan ATR-FTIR pada jaringan adiposa untuk
memperkirakan estimasi interval postmortem dan memberikan pendekatan baru yang
menjanjikan dalam adegan spesifik sisa- sisa yang sudah sangat terdekomposisi.