8/6/2019 Laboratorio de Microbiologia: Observación de Bacterias

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Laboratorio de Microbiologia
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Introducción Página principal

Observación de Bacterias
Son técnicas que permiten observar microorganismos en función de Tinción de Gram
la capacidad de los mismos para retener o no determinadas Sembrado en placa de Microorganismos del Medio Amb...
sustancias colorantes, lo que depende de la carga de la célula y del Aislamiento de 2 Microorganismos y Obtención de un...
colorante.
Aislamiento de Bacterias mediante el Método Siembr...
Los colorantes pueden ser de distintos tipos:
Elaboración de un Antibiograma
Catiónicos. Son sustancias que tienen carga positiva. Determinación del tiempo y Punto Térmico Mortal en...
Penetran en el interior de las células y las tiñen. Ejemplos:
azul de metileno, cristal violeta, safranina. Seguidores
Aniónicos. Con carga negativa. No penetran en el interior
Seguidores (20)
celular, de modo que no tiñen las células, sino el entorno. En
este caso se habla de tinción negativa. Ejemplos: eosina,
nigrosina.
Liposolubles. Se mezclan con los lípidos celulares y los
tiñen. Ejemplo: negro sudán.
Las tinciones pueden ser:
Simples. Utilizan un solo colorante. Se basan en el hecho de
que las células tienen una composición química diferente a
la de su entorno, de modo que ambos se comportan de forma
diferente frente a un colorante. El colorante tiñe las células
(azul de metileno, safranina) o no (nigrosina).
Diferenciales. Se basan en el hecho de que distintos tipos de
células tienen distinta composición química, y por lo tanto
reaccionan de forma diferente frente a una tinción, lo que
permite clasificar los microorganismos en diferentes grupos,
según su capacidad de tinción. En este apartado están dos
tinciones de importancia taxonómica y médica: la tinción de
Gram y la de ácido-alcohol resistencia (de Ziehl-Neelsen).
Estas tinciones utilizan más de un colorante.
Selectivas. Se basan en el hecho de que distintas estructuras
celulares tienen distinta composición química, de modo que
se tiñen selectivamente con ciertos colorantes. Ej; tinción de
esporas, de flagelos, de paredes celulares, de corpúsculos
metacromáticos. Pueden utilizarse uno o más colorantes.
a) Azul de metileno (Tinción positiva). Permite teñir el interior
celular. Tiñe microorganismos procarióticos (vivos o muertos). Los
eucarióticos sólo se tiñen si están muertos. Algunas estructuras,
como los corpúsculos metacromáticos, se tiñen más intensamente
con este colorante que el resto de la célula.
b) Nigrosina (Tinción negativa). Se trata de un colorante aniónico,
que no penetra en el

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interior celular. Proporciona una visión de la forma y el tamaño

celulares al observarse los
microorganismos brillantes sobre un fondo oscuro.
Objetivos
1. Realizar una tinción simple de bacterias procedentes de
distintas muestras naturales.
2. Realizar dos tipos de fijaciones bacterianas y saber en qué
casos se recomienda una u otra.
3. Observar la morfología bacteriana y aprender a distinguir los
distintos tipos de agrupaciones que existen.
4. Practicarcon el microscopio al máximo aumento y con el
correcto empleo del aceite de inmersión.

MATERIAL
Mechero Bunsen o de alcohol
Asa de siembra o aguja ebmangada
Pinzas
Portaobjetos
Muestras bacterians de origen natural: yogurt, vinagre, sarro
dental, suelo,etc.
Colorantes para tinción:
a) Solución de cristal violeta al 1%
b) Solución de safranina al 0.5%
c) Azul de metileno al 1%
Microscopio y aceite de inmersión

BACTERIAS DEL YOGURT

El yogur es un producto lácteo producido por la fermentación natural

de la leche. A escala industrial se realiza la fermentación añadiendo a
la leche dosis del 3-4% de una asociación de dos cepas bacterianas:
el Streptococcus termophilus, poco productor de ácido, pero muy
aromático, y el Lactobacillus bulgaricus, muy acidificante. En esta
preparación se podrán, por tanto, observar dos morfologías
bacterianas distintas (cocos y bacilos) y un tipo de agrupación
(estreptococos, cocos en cadenas arrosariadas). Además, el tamaño
del lactobacilo (unos 30µm de longitud) facilita la observación
aunque no se tenga mucha práctica con el enfoque del microscopio.

Procedimiento
1. Extension: Realizar el frotis
disolviendo una mínima porción de
yogur en una pequeña gota de
agua.
2. Fijación Fijar con metanol o Xilol
para eliminar parte de la grasa.

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3. Teñir Apoyar el portaobjetos sobre el soporte de tinciones y

añadir unas gotas de azul de metileno o con un colorante
cualquiera de los arriba indicados durante 4-5 minutos.

4. Lavar con agua destilada

5. Secar. pasar el portaobjetos varias veces por encima de la
llama del mechero de alcohol, sin permitir que llegue a hervir,
hasta que se seque.
6. añadir una gota de glicerina y colocar el cubreobjetos
7. Observar primero con el objetivo 40×; luego se añade aceite
de inmersión y se observa con el objetivo 100×

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Resultados

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Contestar las siguientes preguntas:

1) El yogur es un alimento más fácilmente digerible que la
leche, ¿por qué?
R/. Es debido a que los cultivos de bacterias que contiene el
yogur rompen las cadenas de lactosa y la hacen mas facil de
digerir. el proceso de hacer yogur tambien modifica
las proteínas de la leche haciendolas mas digerible.

2) En casos de intolerancia a la lactosa, ¿qué alimento será

más fácilmente tolerado, la leche o el yogur? ¿Por qué?
R/. El yogur, porque es un derivado de la leche y se elabora
mediante la fermentación bacteriana de leche que transforma a
los azucares en ácidos, así la lactosa se convierte
en ácido láctico. El menor contenido de lactosa del yogur con
respecto a la leche, hace que sea mejor tolerado por quienes
no consumen leche habitualmente y ademas, permite
comenzar a tolerar la lactosa.

3) ¿Qué papel desempeña cada una de estas bacterias en la

formación del yogur a partir de la leche?
R/. Tanto Lactobacillus bulgaris como Streptococcus
thermophilus realizan la fermentación del ácido lactico.
Transforman los azucares presentes en la leche (lactosa
formada por glucosa y galactosa) en ácido lactico. se trata de
un proceso anaerobico que confiere acidez al yogur.

4) ¿Qué otros procesos conoces en que se empleen bacterias

para la elaboración de algún producto alimenticio?

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Proceso Organismo Papel en proceso molécula Product

original o final
Fabricación de Saccharomyces Fermentación alcohólica Glucosa i/o Etanol
la cerveza cerevisidae(levadura) y carbonatación fructosa +CO2
F. del pan S. cerevisidae Fermentación y Azucar Co2
carbonatación
F. del vinagre Bacterias del ácido Oxidación aerobios Alcohol Acido
acético estrictos (etanol) acético

BACTERIAS DEL VINAGRE

El vinagre es una solución acuosa rica en ácido acético resultante de
la fermentación espontánea del vino o de bebidas alcohólicas de baja
graduación. La acetificación del vino es producida por bacterias
aeróbicas del ácido acético, principalmente Acetobacter aceti,
aunque también Gluconobacter. Se trata de bacilos rectos con
flagelos polares.
1. Tomar con una aguja enmangada una pequeña porción de
madre de vinagre natural o de la telilla que se forma sobre la
superficie de los vinos agriado.
2. Extender la muestra en el portaobjetos con una gota de agua y
hacer el frotis.
3. Dejar secar y fijar con calor.
4. Teñir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.
BACTERIAS DEL SARRO DENTAL
El sarro dental es un depósito consistente y adherente localizado
sobre el esmalte de los dientes. Está constituido principalmente por
restos proteicos, sales minerales y bacterias junto con sus productos
metabólicos. La flora bacteriana de la cavidad bucal es muy variable
dependiendo de las condiciones que se den en el momento de hacer
la preparación, pero suelen abundar bacterias saprófitas, pudiéndose
observar gran variedad de morfologías: espiroquetas, cocobacilos,
diplococos y bacilos.
1. Con una aguja enmangada tomar una pequeña porción de sarro
dental y disolverla en una gota de agua sobre el portaobjetos.
2. Dejar secar y fijar con calor.
3. Teñir 2-3 minutos, lavar el exceso de colorante y secar.

BACTERIAS DEL SUELO

La variedad de bacterias que pueden aparecer en una muestra de
suelo es prácticamente infinita, muchas de ellas no cultivables en los
laboratorios y algunas, incluso, desconocidas para los microbiólogos.
Para recoger la muestra y hacer el frotis basta con dejar parcialmente
enterrado en vertical un portaobjetos en la tierra de una maceta o de
un jardín. Después de varios días, las bacterias se habrán adherido al
vidrio y sólo habrá que fijarlas por calor y teñirlas con un colorante

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cualquiera. Previamente hay que limpiar los bordes del portaobjetos,

así como la parte que no se va a teñir.

Preguntas:
1) ¿ Cuales son las distintas formas y asociaciones que pueden
presentar las bacterias? Explicarlas y haz un dibujo esquemático de
cada una de ellas.

2) Enumera 5 diferencias entre las bacterias y otros tipos de células.

Característ Procariotas Eucariotas

icas
Tamaño de 0,5 micras a 2 de 2 a 200 micras
micras
membrana sin membrana. No Con membrana. Hacen mitosis
nuclear hacen mitosis
Orgánulos Ribosomas y Ribosomas, mitocondrias, vacuolas, etc sin
mesosomas mesosomas
ADN Una molécula. Sin De una a varias moléculas. Forman
cromosomas cromosomas
Movimiento Flagelos de estructura Cilios y flagelos de estructura compleja
simple
Pared Delgada y de Sólo la presentan los vegetales (celulosa), los
celular peptidoglicano hongos (quitina)

Conclusión

Durante este experimento pudimos observar las diferentes formas

que tienen las bacterias.

La mayoría de los enterococos, estreptococos y demás grupos o

genero microbianos son algunos patógenos y no patógenos, de estos
se pueden preparar fermentaciones, que mediante un largo
proceso,llegan a ser elaboradas en productos comestibles,
garantizando la mayor seguridad al consumir ese producto
fermentado.

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