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1-Introduction :
La biochimie clinique est le domaine de la Biologie médicale qui est en général concerné par
l'analyse des molécules contenues dans les fluides corporels (sang, liquide céphalo-
rachidien, urines, etc.) et l'interprétation des résultats de ces analyses par un biologiste
médical dans le but de caractériser l'origine physiopathologique d'une maladie.
En médecine vétérinaire, le recours aux épreuves de laboratoire est aussi important pour le
clinicien que les commémoratifs et l’examen clinique de l’animal. Dans certains cas, de telles
épreuves sont même plus importantes, car les résultats peuvent fournir une preuve absolue
de l’altération physiologique résultante d’un état pathologique. L’appréciation correcte de
l’état physiologique d’un animal dépend de la combinaison des résultats des examens de
laboratoire, des examens cliniques et des commémoratifs.
En résumé, l’intérêt évident des dosages biochimiques est de permettre au clinicien de
diagnostiquer des affections que les autres méthodes de diagnostique révèlent difficilement.
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Analyse biochimique
Le prélèvement fourni doit être adapté à l’examen demandé. La plupart des analyses
biochimiques sont réalisées sur le sang et l’urine. Mais dans des conditions
particulières, le praticien pourra prélever d’autres liquides tels que, le lait, le liquide
céphalorachidien, liquide d’épanchement ainsi que des fragments tissulaires.
La plupart des analyses peuvent être réalisées indifféremment sur sérum ou plasma
mais dans certain cas, il est très important de prendre en considération la nature du
milieu. Par exemple, le sérum est nécessaire pour l’électrophorèse des protéines.
4- Le prelevement sanguin :
Le sang est un liquide rouge ,visqueux,circulant dans les artéres et les veines sous l’action de
la pompe cardiaque. Le volume sanguin est constitué par des cellules (erythrocytes,
leucocytes, plaquettes) et par le pasma. Ce dernier est le composant liquide du sang,dans
lequel les cellules sanguines sont en suspension. Il constitue 55 % du volume total du sang.
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Analyse biochimique
4. B-Nature de l’échantillon :
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Analyse biochimique
Le sérum : si le dosage porte sur le sérum, le prélèvement se fait sur tube sec. Le
fibrinogène est alors consommé. Le sérum renfermera donc tous les éléments
contenus dans le plasma à l’exception du fibrinogène. Bien que le dosage de la
plupart des paramètres biochimiques puisse être effectue sur sérum, le dosage
différé du glucose sanguin doit impérativement être réalisé sur du sang conservé sur
un anticoagulant inhibiteur de la glycolyse (fluorure de sodium). Le sérum est
recommandé pour le dosage des protéines et la réalisation du protéinogramme, ainsi
que le dosage des acides biliaires. Le sérum est obtenu après recueil du sang sur un
tube sec et rétraction du caillot sanguin dans le tube conservé à température
ambiante (20°C) en position verticale. Une centrifugation immédiate entraine parfois
la formation d’un énorme coagulum rendant le recueil du sérum difficile.
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Analyse biochimique
partir de cellules de constituants intracellulaire (par exemple le potassium chez les espèces
comme le chat ou le chien ayant une forte concentration intra érythrocytaire de cet ion) ;-
l’instabilité à la lumière de la bilirubine ; - la volatilité (gaz du sang)
Le sang total ne peut pas être conservé plus de 4 heures même à 4°C. En hématologie, le
sang total prélevé sur EDTA conservé à 4°C en position verticale, permet d’obtenir après 24
heures des valeurs correctes des numérations cellulaires, l’hématocrite étant quant à lui
légèrement augmenté. La conservation des paramètres sanguins à 4°C sur Le plasma ou le
sérum diffère en fonction du substrat. (Voir tableau ci-dessous).
Durée de conservation des paramètres sanguins
Paramètres Sang total Sérum ou Sérum ou Sérum ou
plasma plasma plasma
T˚ ambiante 4˚C Congelé
Protéines 7 jours 30 jours Stable
Urée Tube sec : quelques minutes 1 jour 3 jours Stable
Héparine :< 8 heures
EDTA : < 8 heures
Créatinine Tube sec : quelques minutes 1 jour 1 jour Stable
Héparine :< 8 heures
EDTA : < 8 heures
Glucose Tube sec : quelques minutes 45 minutes 2 jours Stable
Héparine : < 10 minutes
EDTA : < 10 minutes
Fluorure : stable
Bilirubine Tube sec : quelques minutes 2 jours Quelques jours 90 jours
Héparine : < 2 heures (obscurité)
cholestérol Tube sec : quelques minutes 7 jours 7 jours Stable
Héparine : < 8 heures
EDTA : < 8 heures
GGT Tube sec : quelques minutes 7 jours 7 jours
Héparine : < 8 heures
PAL Tube sec : quelques minutes 2 jours 7 jours Stable
Héparine : < quelques
minutes
ALAT et ASAT Tube sec : quelques minutes 8 heures 3 jours Stable
Héparine :< 1 heure
CPK Tube sec : quelques minutes 2 jours 7 jours Stable
Héparine : < 8 heures
LDH 7 jours instable Instable
Calcium Héparine : 3 jours 7 jours stable Stable
Phosphore 4 jours 7 jours Stable
Magnésium Tube sec 7 jours 7 jours Stable
Potassium Héparine 14 jours 30 jours Stable
Oxalate : < 1 heure
Tub sec
Sodium Héparine 14 jours 30 jours Stable
Oxalate : < 1 heures
Tube sec
Chlorure Héparine 7 jours 7 jours Stable
Oxalate :< 1 heure
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Analyse biochimique
4.d-Les sources d’erreurs : des erreurs peuvent survenir à différentes phases du processus
analytiques :
A la phase préanalytique : en dehors du laboratoire
A la phase analytique, dans le laboratoire avec par exemple une erreur humaine ou
analytique.
A la phase post analytique, avec une mauvaise transcription des résultats.
Les résultats : après des efforts considérables, des résultats apparaissent (des chiffres sur
papier), la plupart des résultats sont quantitatives. Les concentrations sont exprimées en
mm/L, en g/L, en UI/L. il est d’une importance cruciale de comprendre ce que les valeurs
des paramètres sanguins une fois obtenus signifient. Un résultat doit être validé par
comparaison avec la valeur attendue chez des individus homologues et en bonne sante.
Influence de l’hémolyse : l’hémolyse est l’une des principales causes d’erreur analytique
autant en hématologie qu’en biochimie. L’hémolyse peut être la conséquence pathologique
de différentes affections, mais elle est le plus souvent due aux difficultés rencontrées lors de
la réalisation du prélèvement sanguin. Certains animaux peuvent présentés une certaines
fragilité érythrocytaire comme chez les carnivores ou les moutons, toute fois on reconnait
que les causes principales de l’hémolyse sont artefactuelles.
L’hémolyse devient visible après centrifugation chez le chien lorsque la concentration en
hémoglobine dans le sérum ou le plasma atteint et dépasse 0,1g/dl.
L’hémolyse produit trois types d’effets induisant des erreurs de dosage :
- La libération de constituants intra érythrocytaires peut augmenter de
manière significative le dosage plasmatique ou sérique de ces derniers
- Inversement, l’hémolyse a un effet de dilution pour le dosage de
constituants essentiellement sériques (calcium, sodium)
- L’hémolyse interfère sur le plan analytique en augmentant la densité
optique une lecture entre 540 et 590nm ou en modifiant le pH de
certaines réactions enzymatiques.
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Analyse biochimique
5.b-L’analyse urinaire : il est préférable de prélever les urines du matin, ce qui permet
de s’affranchir d’une dilution occasionnée par une consommation d’eau importante.
Le prélèvement urinaire doit être réalise avant tout traitement qui pourrait altérer la
fiabilité des analyses. Les urines doivent être analysées immédiatement après le
recueil ou conservées au maximum pendant 6 heures à 4°C. Une alcalinisation et une
cristallisation in vitro sont fréquemment observées sur des urines dont le délai de
conservation a été trop long.