Veterinary Microbiology 135 (2009) 363-367

listas de contenidos ofrecidos en ScienceDirect

Veterinary Microbiology

Página principal de la revista: www.el Sevier. com / localizar a / c vetmi

La variación en Fusobacterium necrophorum cepas presentes en los cascos de pedero infectado

ovejas, cabras y ganado

Huitong Zhou, Grant Bennett, Jon GH Hickford *

División de Ciencias de la Vida y la Agricultura, PO Box 84, la Universidad de Lincoln, Lincoln 7647, Nueva Zelanda

INFORMACIÓN DEL ARTÍCULO RESUMEN

Historia del artículo:

Pododermatitis es una enfermedad de ovejas, cabras y vacas que causa pérdidas en la producción y plantea cuestiones de
Recibido el 24 de junio de 2008
bienestar en todo el mundo. La enfermedad se caracteriza por la destrucción de la fuerza de la queratina de la pezuña que conduce
Recibida en forma 24 de septiembre de 2008 Aceptado revisada de
a la cojera, y ambos Dichelobacter nodosus (D. nodosus) y
septiembre de 2008 29 de
Fusobacterium necrophorum (F. necrophorum) se cree que están implicados en la etiología de esta enfermedad. Aunque se sabe
mucho acerca de la diversidad genética de las D. nodosus, se sabe muy poco acerca de la variación en F. necrophorum, especialmente
palabras clave:
en lo que respecta a su papel en la necrosis en las pezuñas. Se utilizó PCR en conjunción con SSCP y secuenciación para
Fusobacterium necrophorum
leucotoxina ( lktA) gen Variación analizar hisopos recogidos de los cascos de ovejas, cabras y cattlewith pietín sintomático de la presencia de una porción de la lktA

pedero del ganado ovino caprino

gen de F. necrophorum. De 29 muestras analizadas, 27 tenían amplificador capaz lktA secuencias y dentro de estos se encontraron
cuatro variantes diferentes de la lktA gene. Ocho de las nueve muestras de bovinos fueron positivos para una variante que se
correspondía con la cepa de tipo de F. necrophorum
subsp. necrophorum. De las 14 muestras de ovejas, 13 fueron positivos para lktA, pero ninguno de tesis juego con las cepas
de tipo conocido, y 11/13 de la lktA secuencias eran idénticas. Esta secuencia era distinto a los de las cepas de tipo.
Ninguna de las infecciones pedero lleva a múltiples variantes de lktA, lo que sugiere que sólo una cepa de F. necrophorum está
presente en cada caso. Esto está en contraste con D. nodosus en las infecciones pedero, que se han demostrado tener
hasta siete cepas que infectan un solo casco.

2008 Elsevier Todos los derechos reservados.

1. Introducción
Pododermatitis es una debilitante enfermedad contagiosa, pezuña de rumiantes,
especialmente de ovejas, cabras y ganado. La infección parece ser el resultado de la
acción sinérgica de determinadas especies de bacterias, de las cuales Dichelobacter
nodosus (D. nodosus) es la causante agente transmisor y Fusobacterium necrophorum
(F. necrophorum)
( Mattick et al., 1991; Zhou y Hickford, 2000, 2001 ), Pero poco se sabe de la diversidad
genética de F. necrophorum.
F. necrophorum es un patógeno oportunista y se ha implicado en numerosas
enfermedades animales, tales como pododermatitis, absceso hepático y laringitis
necrótico (difteria pantorrilla) ( Nagaraja et al., 2005 ), Y el síndrome de Lemierre en el ser
humano ( Riordan, 2007 ). Existen dos subespecies reconocidas de F. necrophorum, subespecie

parece ser necesaria para la inducción y el desarrollo de la enfermedad ( Beveridge, necrophorum ( biotipo A) y subespecies funduliforme
1941; Roberts y Egerton, 1969 ). (Biotipo B) ( Shinjo et al., 1991 ). Estas subespecies tanto poseen un gen de la leucotoxina
( lktA) y expresar una leucotoxina que se considera que es factor de virulencia themain ( CoyleDennis
Amplia variación en D. nodosus ha sido descrito ( Claxton, 1986 ) Y bien y Lauerman, 1979 ). los lktA gen parece ser única para F. necrophorum, ya que se informa,
caracterizado a nivel genético no está presente en otra Fusobacterium especies ( Oelke et al., 2005 ), Aunque un estudio
reciente sugiere la presencia de un homólogo de lktA

* Autor correspondiente. Tel .: +64 3 325 2811; Fax: +64 3 3253851. en el F. equinum genoma, basado en análisis de hibridación Southern ( Tadepalli et al.,
Dirección de correo electrónico: hickford@lincoln.ac.nz (Jon GH Hickford). 2008 ).

0378-1135 / $ - see front matter 2008 Elsevier Todos los derechos reservados.
doi: 10.1016 / j.vetmic.2008.09.084
364 H. Zhou et al. / Veterinary Microbiology 135 (2009) 363-367
Poco se sabe sobre el papel de F. necrophorum en las infecciones pedero, y no hay
estudios han descrito las subespecies o cepas de F. necrophorum presente en las
lesiones pedero. Como resultado del crecimiento de tasa lenta de muchos anaerobios y fl
ora frecuentemente mezclado en las infecciones pedero, análisis de PCR proporciona
una alternativa rápida y fiable para la detección y amplificador de cationes de F.
necrophorum. En este trabajo, se utilizó PCR en muestras de pezuñas de pedero
infectado ovejas, cabras y ganado toamplify la F. necrophorumlktA gen, e informar de la
identificación de cuatro novela lktA secuencias.
2. Materiales y métodos
2.1. Cepas bacterianas y muestras infectadas pedera
Las cepas bacterianas de las siguientes especies / subespecies se utilizaron para
probar la especificidad de lktA PCR ampli fi cación: F. pseudonecrophorum [ American
Type Culture Collection (ATCC) no. 51644], F. varium ( ATTC no. 8501), F. necrophorum subespecie
seguido de 35 ciclos de 94 8 C durante 30 s, 60 8 C durante 30 s y 72 8 C durante 40 s,
funduliforme ( ATTC no. 51357), F. necrophorum subsp. necrophorum [ colección nacional
de cultivo de tipo (NTCC) no.10575], F. nucleatum
subsp. nucleatum ( ATCC no. 25586) y F. equinum ( NTCC no. 13176). D. nodosus ( cepa
198) también se incluyó como la bacteria se asocia con infecciones pedero.
hisopos de algodón estériles se utilizan para recoger el exudado de la axial unión
piel de cuerno de los cascos infectadas de 14 ovejas, cabras 6 y 9 de ganado, de las
granjas a través de Nueva Zelanda. Los extremos de estos swabswere fracturados
apagado en tubos de 1,5 ml que contienen 0,7 ml de solución salina tamponada con
fosfato (PBS) y 20mMNa 2 EDTA (pH 8,0). Los tubos se almacenaron a 20 8 C hasta que el
procedimiento de extracción de ADN podría llevarse a cabo.
2.2. Extracción de ADN
ADN de todos los cultivos bacterianos excepto F. equinum fue extraído de células
por ebullición durante 10 min en 0,8% (v / v) de Triton X-100 solución y después de
centrifugación a
13000 sol, un 1- metro l alícuota del sobrenadante se utilizó como molde para la PCR
ampli fi cación.
ADN a partir de material de la lesión recogido en hisopos se extrajo utilizando un
método desarrollado por Zhou y Hickford (2000) . Brevemente, después de la
descongelación en hielo, hisopos se agitaron beforeremoval todisperse la intothebuffer
lesionmaterial. Después de la centrifugación de la suspensión resultante a
13000 sol for1 min, thepelletswerewashedandsuspended en 200-500 metro l de tampón
TE (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH
8.0). Cada muestra se mezcla a continuación con 1/10 volumen de dodecilsulfato de
sodio al 10% (SDS) y un volumen igual de fenol / cloroformo (1: 1) añadida. Los tubos se
agitaron vigorosamente durante 20 s para lisar las células bacterianas y después se
colocaron en 20 8 min Cfor10. Thelysateswerecentrifugedat13,000 sol
durante 4 min y la fase acuosa que contiene el ADN se recogió. El ADN se recuperó por
precipitación con etanol y se resuspendió in50-150 metro l de tampón TE, en función de
una estimación de la cantidad original del material de la lesión.
2.3. cebadores de PCR y de cationes fi cador
dos publicado lktA secuencias [números de acceso de GenBank AF312861 ( Narayanan
et al., 2001 ) y
AY972049 ( Zhang et al., 2006 )] Se utilizaron para diseñar cebadores de PCR para
amplificar un 401-bp lktA fragmento que abarca fromnucleotides 6336-6736
(coordenadas dadas en relación con el inicio de la lktA secuencia de codificación), y que
no muestran una estrecha homología a cualquier otras secuencias conocidas (GenBank
nucleótido, visitada octubre de 2007). Estos cebadores fueron 5 0- aatcggagtagtaggttctg-3 0
y 5 0- ctttggtaactgccactgc-3 0,
y que fueron sintetizados por Integrated DNA Technologies (Coralville, IA, EE.UU.).
Ampli fi cación se realizó en un 20- metro l de reacción que contiene 1 metro l de
ADN extraído, 0,25 metro M de cada cebador, 150 metro M dNTP (Eppendorf,
Hamburgo, Alemania),
Mg 3,5 mM 2+, 500 ng / metro albúmina de suero bovino l (BSA) (Sigma, St. Louis, MI,
EE.UU.), 0,5 U Taq ADN polimerasa (Qiagen, Hilden, Alemania) y 1
tampón de reacción
suministrado. Ampli fi cación se llevó a cabo en un termociclador Mastercycler EP
(Eppendorf), y el térmico pro fi le consistió en la desnaturalización a 94 8 C durante 2 min,
con una etapa de extensión final a 72 fi 8 C durante 5 min. amplicones de PCR se
visualizaron por electroforesis en agarosa al 1% (Quantum la Ciencia, Queensland,
Australia) geles, utilizando 1 TBE tampón (Tris 89 mM, ácido bórico 89 mM, Na 2 mM 2 EDTA),
que contiene 200 ng / ml de bromuro de etidio.
La presencia de D. nodosus fue detectado por PCR como se ha descrito
previamente ( Zhou y Hickford, 2000 ).
2.4. Single-strand análisis de polimorfismo conformacional
Un 0,7- metro l alícuota de cada ampliconwas mezclado con 7 metro l de colorante
de carga (98% de formamida, EDTA 10 mM, 0,025% de azul de bromofenol, 0,025% de
xileno-cianol), y después de desnaturalización a 95 8 C durante 5 min, las muestras se
enfriaron rápidamente en hielo húmedo y después se cargó en 16 cm 18 cm, 12% de
acrilamida: bisacrilamida (37.5: 1) (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA) geles. La
electroforesis se realizó utilizando células xi Protean II (Bio-Rad), a 300 V durante 18
horas a 5 8 C en 0,5 tampón TBE, y geles se silverstained.
2.5. Clonación de amplicones de PCR y el cribado de clones
ADN muestras representativas de diferentes patrones de SSCP fueron
seleccionados para ampli fi cationusing Pwo SuperYieldDNA polimerasa (Roche Applied
Science, Mannheim, Alemania) y usando las condiciones descritas anteriormente. Los
amplicones se ligaron en el vector pCR4 Blunt-TOPO (Invitrogen, Carlsbad, CA, EE.UU.),
y un 2- metro l alícuota de la mezcla de ligación se utilizó para transformar competente
Escherichia coli Las células (One Shot INV una F 0, Invitrogen), siguiendo las instrucciones
del fabricante. Entre 10 y 15 insertar colonias positivas para fueron recogidos cada
transformación y se incubó durante la noche en caldo de fi c Terri (Invitrogen) a 37 8 C, en
una incubadora de agitación rotatoria (225 rpm).
Los clones fueron seleccionados utilizando un enfoque de PCR-SSCP clonal como
se ha descrito previamente ( Zhou y Hickford de 2008 ), Y sólo aquellos clones para los
que los patrones de SSCP coincidían con los del DNA genómico correspondiente fueron
seleccionados para secuenciación de ADN.
 H. Zhou et al. / Veterinary Microbiology 135 (2009) 363-367
2.6. secuenciación de ADN y análisis de la secuencia
El ADN del plásmido se extrajo de cultivos de una noche de los clones originales
usando un kit QIAprep Spin Miniprep (Qiagen) y se secuenció en ambas direcciones
usando el M13-cebadores directo e en la Instalación Waikato secuenciación de ADN,
Universidad de Waikato, Hamilton, Nueva Zelanda inversa. secuencias idénticas
obtenidas a partir de al menos tres clones independientes que producían los patrones de
SSCP PCR idéntica se sometieron a análisis de secuencia adicional.
Alineamientos de secuencias, traducciones y las comparaciones se realizaron
utilizando DNAMAN (versión 5.2.10, Lynnon BioSoft, Vaudreuil, Canadá). El
tosearchtheNCBIGenBank algorithmwas BLAST utilizado ( http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ )
bases de datos para las secuencias homólogas.
Un árbol filogenético de unión de vecinos se construyó sobre la base de las
distancias genéticas, estimada por el Kimura (1980) método de dos parámetros, usando
MEGA (versión 3.1;
Kumar et al., 2004 ; http://www.megasoftware.net/ ). La fiabilidad de los árboles se estimó
por valores confianza estafadores de arranque ( Felsenstein, 1985 ), Y se utilizaron 1000
repeticiones de arranque.
3. resultados
De las especies bacterianas y subespecies probados, solamente F.
necrophorum subsp. necrophorum y F. necrophorum
subsp. funduliforme amplicones de PCR generados del tamaño esperado
(aproximadamente 400 bp). La clonación y secuenciación de estos amplicones indicaron
que eran idénticos a los publicados lktA secuencias de F. necrophorum subsp. necrophorum
( Narayanan et al., 2001 ) y F. necrophorum subsp. funduliforme ( Zhang et al., 2006 ),
Respectivamente. No hay amplicones de PCR se observaron con las otras especies
bacterianas probadas.
Las muestras de pezuñas fueron todos confirmada tener la presencia de D. nodosus
usando una técnica de PCR como se ha descrito previamente ( Zhou y Hickford, 2000 ).
PCR ampli fi cación usando el lktA cebadores revelaron que 13 de las 14 muestras de
pezuña de oveja, 5 de los 6 raspados de cabras y todas las nueve muestras de ganado,
generaron amplicones de PCR del tamaño esperado (aproximadamente 400 bp). Estos
amplicones se pudo detectar polimorfismo exhibido en el análisis de SSCP y en total
cuatro patrones únicos ( Figura 1 ).
La clonación y secuenciación de PCR amplicones representante de estos patrones
de SSCP revelaron cuatro secuencias de nucleótidos diferentes ( Figura 2 ). Una
secuencia (correspondiente al patrón SSCP A) era idéntica a la publicada F. necrophorum
subsp. necrophorum lktA secuencia (GenBank número de acceso AF312861), mientras
que los tres restantes eran novela, pero la más alta homología de secuencia en la
búsqueda BLAST fue a esta lktA secuencia y la F. necrophorum subsp. funduliforme lktA secuencia
(GenBank número de acceso AY972049). Estos recién identi fi ed lktA
secuencias B-D se depositaron en el GenBank con los números de acceso
FJ230830-FJ230832, respectivamente. No
lktA secuencias idénticas a la subsp publicados. funduliforme ( Número de acceso
GenBank AY972049) se encontraron en este estudio.
365
Figura 1. PCR-single-strand polimorfismo conformacional de la lktA gene. Los productos de PCR fueron
amplificado a partir de lesiones pedero y los cuatro patrones de bandas únicos (A-D) detectados se
muestran.
Había dos, tres y dos secuencias diferentes de la lktA gen detectado en ovejas,
cabras y ganado vacuno, respectivamente ( tabla 1 ). Sin embargo, sólo uno lktA se
detectó secuencia para animales individuales. Secuencia A (idéntica a lktA de la subsp. necrophorum)
se encontró predominantemente en el ganado vacuno, mientras que en ovejas y cabras,
secuencia C se detectó más comúnmente ( tabla 1 ). El análisis filogenético de estos
recién identi fi ed lktA
secuencias B-D y la lktA secuencias de F. necrophorum
subsp. necrophorum y subsp. funduliforme, revelaron que las secuencias C y D agrupan
juntos, pero se separaron del grupo de F. necrophorum subsp. necrophorum y
funduliforme. Secuencia B era más similar a F. necrophorum subsp. necrophorum y funduliforme
que a las secuencias C y D ( Fig. 3 ).
4. Discusión
Este documento describe la detección de la F. necrophorum
lktA gen en muestras tomadas de las pezuñas pedero infectado ovejas, cabras y ganado
vacuno y la identificación de cuatro diferentes lktA secuencias. Esto sugiere que F.
necrophorum
es con frecuencia, aunque no siempre presente, sin embargo genéticamente diversa en las
pezuñas de los animales cojos.
La presencia de una única banda de amplicones de PCR con el tamaño esperado
tanto para F. necrophorum subsp. necrophorum
y subsp. funduliforme utilizando la lktA cebadores y ausencia de amplicones para otras
especies bacterianas relacionadas, sugiere que la PCR amplifica catión de la lktA gen
era altamente específica en las condiciones descritas.
La detección casi absoluta de F. necrophorum en las lesiones pedera, sugiere un
papel de esta bacteria en la infección por necrosis en las pezuñas, el apoyo a las
contiendas de Beveridge (1941)
y Roberts y Egerton (1969) . No F. necrophorum subsp.
funduliforme se detectó a partir de estos animales, lo cual es coherente con ella o bien
ser menos patógeno ( Smith y Thornton, 1993 ), O que tiende a encontrarse en la
enfermedad humana solamente ( Riordan, 2007 ).
Aunque había cuatro variantes diferentes de F.
necrophorum presente en las lesiones pedero, había bastante
366 H. Zhou et al. / Veterinary Microbiology 135 (2009) 363-367

Figura 2. Alineaciones de la lktA secuencias (excluidas las regiones de unión de cebador) identi fi ed de lesiones pedero junto con el publicado lktA secuencias. los lktA Una secuencia era idéntica a la secuencia
publicada de F. necrophorum subsp. necrophorum ( se muestra el número de acceso AF312861) y por lo tanto sólo una secuencia [indicada como A (Fnn)]. los lktA secuencia de F. necrophorum subsp. funduliforme ( número
de acceso AY972049) se muestra como Fnf. Los números de acceso GenBank para las secuencias B-D son FJ230830-FJ230832, respectivamente. Los aminoácidos se representan en código de una letra y se muestran
en negrita a la parte superior de los codones correspondientes. Los nucleótidos y aminoácidos idéntica a la secuencia A (Fnn) se presentan por guiones y se han introducido puntos para mejorar la alineación.

sorprendentemente sin evidencia de infección mixta-deformación para F. necrophorum en
ovejas, cabras y ganado. Esto está en contraste con el agente causante esencial de
pododermatitis: D. nodosus, para los que las infecciones mixtas-deformación son comunes
( Zhou y Hickford, 2000 ) Y puede haber hasta siete cepas presentes en un único pezuña ( Zhou
et al., 2001 ). La detección de una única variante de cualquier muestra parecería sugerir
que F. necrophorum variantes son o muy especializada; están bajo fuerte competencia
inter-específica; solamente colonizar muestras pedero en números muy pequeños (y por
lo tanto carecen diversidad cepa); o una combinación de estos factores. Esto sólo puede
ser revelado tras una investigación detallada.
Diferentes especies huéspedes también parecían estar infectados por diferentes
variantes de F. necrophorum. Esto parecería indicar que, o bien un efecto de
host-específico se produce, con una variante favorecer a un huésped, o que las
poblaciones de acogida sólo están expuestos a especí cepas fi cos en el medio
ambiente, como consecuencia de alguna granja o el efecto gestión específica.
Aunque el recién identi fi ed lktA secuencias eran homólogas a la informado
anteriormente F. necrophorum
secuencias ( Narayanan et al., 2001; Zhang et al., 2006 ), Estaban a cierta distancia
genética de éstos F. necrophorum
secuencias ( Fig. 3 ). Es posible que las variantes detectadas en este estudio pueden
representar diferentes especies de Fusobacterium, en lugar de diferentes cepas de F.
necrophorum. Un fenómeno similar se ha reportado previamente para '' F.

tabla 1
La detección de la lktA secuencias en muestras pedero de ovejas, cabras y ganado vacuno.

Oveja Cabra Ganado

No. de muestras analizadas

14 6 9

No. de muestras que contienen lktA

Fig. 3. árbol del vecino a participar lktA secuencias. Árbol se construyó usando el lktA secuencias de
13 5 9
nucleótidos identi fi de lesiones pedero (A-D) y desde ambos F. necrophorum subsp. necrophorum ( indicado
como Fnn) y
lktA secuencia A
F. necrophorum subsp. funduliforme ( indicado como Fnf). secuencias idénticas se combinaron en una
0 1 8
secuencia antes de generar el árbol. Los números en las horquillas indican los valores de con fi anza de
segundo 2 0 0
rutina de carga y sólo se muestran aquellos igual o mayor que 50%. Subdivisión de longitudes son
do 11 3 1
proporcionales a la distancia genética.
re 0 1 0
 H. Zhou et al. / Veterinary Microbiology 135 (2009) 363-367
necrophorum '' Cepas aisladas a partir de caballos, con la reclasi fi cación de F. equinum como
una nueva especie basadas en el análisis filogenético del gen 16S rRNA, hibridación
ADN-ADN y caracterización fenotípica ( Dorsch et al., 2001 ). Estos análisis ayudarán a la
clasi fi cación de estas variantes, pero alsowill requerir el aislamiento de variantes
individuales, un culto fi cultades y proceso que consume tiempo.
Expresiones de gratitud
Nos gustaría agradecer al Dr. Jacqueline Norris (Universidad de Sydney, NSW,
Australia) para el suministro de la F. equinum tensión, y la doctora Ruth Kennan y el
profesor Julian Rood (Universidad de Monash, NSW, Australia) para la extracción de
ADN de esta bacteria. Este trabajo fue apoyado financieramente por el marcador de
laboratorio Gene, Lincoln University, Nueva Zelanda.
referencias
Beveridge, WIB, 1941. Foot-rot en ovejas: una enfermedad transmisible debido a
la infección con nodosus fusiformis ( norte. sp.). Consejo para la Ciencia Industrial Research,
Melbourne y c. Boletín No. 140.
Claxton, PD, 1986. Serogrupo de Bacteroides nososus aísla. En:
Stewart, DJ, Peterson, JE, MeKern, NM, Emery, DL (Eds.), Pezu~nas en rumiantes. CSIRO, pp.
131-134.
Coyle-Dennis, JE, Lauerman, LH, 1979. Las correlaciones entre leucocidina
la producción y la virulencia de dos aislados de Fusobacterium necrophorum. A.m. J. Vet. Res. 40,
274-276. Dorsch, M., Lovet, DN, Bailey, GD, 2001. equinum Fusobacterium sp. nov.,
de la cavidad oral de los caballos. En t. J. Syst. Evol. Microbiol. 51, 1959-
1963.
Felsenstein, J., 1985. estafadores límites confianza en las filogenias: una aproximación utilizando
el sistema de arranque. Evolución 39, 783-791.
Kimura, MA, 1980. Un método simple para estimar las tasas de evolución de
sustituciones de bases a través de estudios comparativos de secuencias de nucleótidos. J. Mol.
Evol. 16, 111-120.
Kumar, S., Tamura, K., Nei, M., 2004. MEGA3: integrado de software para
molecular análisis genética evolutiva y la alineación de secuencia. Breve. Bioinform. 5, 150-163.
367
Mattick, JS, Anderson, BJ, Cox, PT, Dalrymple, BP, Bills, MM, Hobbs,
M., Egerton, JR, 1991. Secuencias de genes y la comparación de la fi subunidades mbrial
representante de Bacteroides nodosus serotipos A a I: cepas de clase I y clase II. Mol. Microbiol. 5,
561-573. Nagaraja, TG, Narayanan, SK, Stewart, GC, Chengappa, MM, 2005.
Fusobacterium necrophorum infecciones en animales; patogénesis y mecanismos patogénicos.
Anaerobio 11, 239-246. Narayanan, SK, Nagaraja, TG, Chengappa, MM, Stewart, GC, 2001.
Clonación, secuenciación y expresión del gen de la leucotoxina de
Fusobacterium necrophorum. Infectar. Immun. 69, 5447 hasta 5455. Oelke, AM, Nagaraja, TG,
Wilkerson, MJ, Stewart, GC, 2005. La
operón de la leucotoxina de Fusobacterium necrophorum no está presente en otras especies de Fusobacterium.
Anaerobio 11, 123-129. Riordan, T., 2007. La infección humana con Fusobacterium necrophorum
( Necrobacillosis), con un enfoque en el síndrome de Lemierre. Clin. Microbiol. Rev. 20, 622-659.
Roberts, DS, Egerton, JR, 1969. La etiología y la patogénesis de ovino
podredumbre basal. II. La asociación patogénica de nodosus fusiformis y F. necrophorus. J. Comp.
Pathol. 79, 217-227.
Shinjo, T., Fujisawa, T., Mitsuoka, T., 1991. Propuesta de dos subespecies de
Fusobacterium necrophorum ( GRIPE ESB) Moore y Holdeman: Fusobacterium necrophorum subsp.
necrophorum subsp. nov., nom. Rdo. (Ex gripe ESB 1886), y Fusobacterium necrophorum subsp. funduliforme
subsp. nov., nom. Rdo. (Ex Halle' 1898). En t. J. Syst. Bacteriol. 41, 395-397.
Smith, GR, Thornton, EA, 1993. Patogenicidad de Fusobacterium
necrophorum cepas de hombre y los animales. Epidemiol. Infectar.
110, 499-506.
Tadepalli, S., Stewart, GC, Nagaraja, TG, Jang, SS, Narayanan, SK, 2008.
equinum Fusobacterium posee un gen de la leucotoxina y exposiciones leucotoxina actividad.
Veterinario. Microbiol. 127, 89-96. Zhang, F., Nagaraja, TG, George, D., Stewart, GC, 2006. Los dos
principales
subespecies de Fusobacterium necrophorum tener leucotoxina distintas regiones promotoras del
operón. Veterinario. Microbiol. 112, 73-78. Zhou, H., Hickford, JGH, 2000. Una amplia diversidad en
Nueva Zelanda
Dichelobacter nodosus cepas de ovejas y cabras infectadas. Veterinario. Microbiol. 71, 113-123.
Zhou, H., Hickford, JGH, 2001. Dichelobacter nodosus serotypeM fi mbrial
gen de la subunidad: implicaciones para serológica clasificacion. Veterinario. Microbiol. 79,
367-374.
Zhou, H., Hickford, JGH, Armstrong, KF, 2001. El rápido y tipificación precisa
de Dichelobacter nodosus usando PCR ampli fi cación y revertir la hibridación dot-blot. Veterinario.
Microbiol. 80, 149-162. Zhou, H., Hickford, JGH, 2008. polimerasa Clonal reacción-sola cadena
strand análisis de polimorfismo conformacional: un enfoque eficaz para la identificación de
secuencias clonadas. Anal. Biochem. 378, 111-112.