BIOLOGÍA MOLECULAR

REPLICACIÓN EN EUCARIOTES

José Salvador Montaña Lara

Unidad de Investigaciones Agropecuarias

UNIDIA

Febrero 7 de 2018
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

Replicación en eucariotas
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

Elementos requeridos
dTTP
dATP
Nucleótidos
dCTP
dGTP

Molde de DNA

Primer

Origen de
replicación Polimerasa
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

Replicón

La replicación se lleva a cabo de manera simultánea

en diferentes sitios a lo largo de la molécula

REPLICON: DNA replicado a partir de un origen

de replicación
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

Origen de replicación eucariota

• Orígenes de replicación:
11pb ricos en A-T

• Reconocidos por el
complejo proteico (ORC:
Origin Recognition
Complex)
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

Proteínas necesarias para la

replicación en eucariotas

• Desenrollamiento de la doble hélice:

o Mcm2 y Mcm7 (helicasas) : Rompimiento de los
puentes de hidrógeno
o Topoisomerasas I y II: liberan los super-
enrollamientos positivos
o RPA: Proteínas de unión a DNA de cadena
sencilla
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

DNA polimerasas eucariotas

A diferencia de las células procariotas, en
eucariotas se han descrito aproximadamente
15 clases de DNA polimerasas:

Polimerasa α (alfa): Subunidad con

actividad primasa, pone los primers
en la cadena líder y en la rezagada

Polimerasa δ (delta) : elongación en

ambas cadenas
DNA

Polimerasa ε (epsilon): elongación

reparación DNA

Polimerasa γ (gamma): replicación del

DNA mitocondrial
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

DNA polimerasas eucariotas

En eucariotas se han descrito aproximadamente 15 clases de DNA polimerasas

Polimerasa α (alfa): actividad primasa,

Polimerasa δ (delta): síntesis cadena retrasada y
reparación del DNA
Polimerasa ε (epsilon): síntesis cadena líder y
reparación del DNA

Polimerasa γ (gamma): replicación del DNA mitocondrial

Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

DNA polimerasas eucariotas

Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

Otras proteínas necesarias para la

replicación en eucariotas

RFC: Subunidad que carga la pinza deslizante (PCNA)

en el DNA.
- PCNA subunidad que sujeta el núcleo de la polimerasa al DNA

Ribonucleasa FEN-1y RNAsa HI: Remueve primers de RNA

DNA ligasa: Sella los fragmentos de okasaki. Restablece enlace fosfodiester

Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

Otras proteínas necesarias para la

replicación en eucariotas
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

El replisoma eucariota

Replisoma: Combinación de todas las enzimas que funcionan

en la horquilla de replicación
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

Mantiene las hebras

separadas
Cerrar las
pinzas Síntesis primaria
deslizantes

Endonucleasa:
eliminación de primers

Pinza deslizante
para las polimerasas
δyε
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

Terminación de la replicación

• Finalización de Elongación por la DNA

polimerasa
• Primers de RNA: eliminados por las nucleasas
(FEN1 y Rnasa H1)
• Sintesis de DNA en espacios de los Primers
• Ligación de fragmentos de DNA sintetizados
(DNA ligasa)
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

Velocidad de síntesis (polimerización)

Bacterias
1 cromosoma 800 Nucleótidos por segundo
1 replicón

Mamíferos
Varios cromosomas 50 Nucleótidos por segundo
Varios replicones/cromosoma

Las regiones mas compactadas del cromosoma (menos acetiladas)

o heterocromatina son las últimas en replicarse.

Las regiones con histonas acetiladas (relacionadas con la transcripción

activa de genes) replicación temprana
Replicación en eucariotas Polimerasas procariotas vs eucariotas

Resumiendo…
Procariotes Eucariotes
Polimerasa I II III β γ δ Ε

Ubicación Núcleo Núcleo Mitocondria Núcleo Núcleo

subcelular
Actividad No No No Sí No No No No
Primasa
Polimerasa Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí Sí
5´a 3´
Exonucleasa Sí Sí Sí No No Sí Sí Sí
3´a 5´
(corrección)
Exonucleasa Sí No No No No No No No
5´a 3´
(eliminar
primers)
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

Replicación en los telómeros

Telómeros: Secuencias del

final de los cromosomas
altamente repetidas ricas en G-
T (2000 repeticiones células
humanas)
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

Replicación en los telómeros

Problema de la duplicación de
los extremos

Cromosomas lineales
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

Replicación en los telómeros

• Cada ronda de
duplicación produciría
un acortamiento de
una de las cadenas
de DNA

• Pérdida de genes de
los extremos de los
cromosomas
http://www.aimdigital.com.ar/
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

telomerasa
• Transcriptasa inversa
- Componente proteico
- Componente
ribonucleotidico

• Sintetiza DNA a partir de

RNA

• No necesita de “Primer” Elizabeth

Blackburn
Carol Greider Jack W. Szostak

Premio Nobel de Medicina 2009

telomerasa
1. La telomerasa utiliza el
componente de RNA para
aparearse con el extremo 3’ de la
región de ssDNA del telómero
2. La telomerasa utiliza su
actividad de transcriptasa inversa
para sintetizar DNA hacia el
extremo de la plantilla de RNA
3. La telomerasa desplaza el RNA
del producto de DNA y se vuelve a
unir al extremo del telómero para
repetir el proceso
4. Síntesis de DNA a partir del
primer de RNA por acción de la
polimerasa alfa (α)
http://www.youtube.com/watch?v=nzlt8oit32o
Replicación en eucariotas Replicación en eucariotas

Telómeros y telomerasa como relojes moleculares

“Las células podrán multiplicarse un

cierto número de veces, hasta que el
tamaño del telómero sea tal, que las
células entren en un estado de crisis
que indiquen que la vida útil de esa
célula ha llegado a su fin y se entrará
en un proceso de senescencia,
provocando su muerte”
 Para recordar…

REPLICÓN ORIGEN DE HORQUILLA DE

REPLICACIÓN REPLICACIÓN

REPLICACIÓN HEBRA
BIDIRECCIONAL HEBRA LIDER
REZAGADA

DIRECCIÓN DE
DNA POLIMERASAS
SÍNTESIS 5’– 3’
Replicación
http://www.youtube.com/watch?v=-EGKrYdQEHQ