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GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

PERÍODO ACADÉMICO Abril 2019 – Agosto 2019


ASIGNATURA Análisis Clínico I Semestre: Sexto Paralelo: A

NOMBRE DEL DOCENTE LIC. ELENA BRITO

FECHA 11/04/2019

NÚMERO DE PRÁCTICA 1 HORA: 19HOO – 22H00 DURACIÓN: 3


HORAS

GRUPO 1 GRUPO 2 GRUPO 3

1. Aguilar Janina 7. Avilés Ruth 14. Curillo Nancy


2. Cushpa Danny 8. Barahona Fernando 15. Goyes Marco

NOMBRE DE LOS 3. Flores Sebastián 9. Bolaños Dayanara 16. Llerena Pamela


ESTUDIANTES. 4. Obando Joselyn 10. Guashpa Dennis 17. Padilla Jazmín
5. Quinchuela Erika 11. Paredes Fernanda 18. Rojas Nicol
6. Tzerembo Paola 12. Pullotasi Carolina 19. Rumancela Lizeth
13. Ramírez Fernando 20. Saquinga Erika
LUGAR DE LA PRÁCTICA Laboratorio e300 (facultad de ciencias de la salud)
TÍTULO DE LA UNIDAD Unidad I. Tecnicas cuantitativas de analisis
TEMA DE LA PRÁCTICA Turbidimetria
OBJETIVO GENERAL Realizar la lectura de una técnica turbidimetrica
 Obtener la lectura de las absorbancias de la muestra de la
Objetivos específicos técnica de potasio.

FUNDAMENTO TEÓRICO:

La turbidimétria

La turbidez se define por la Organización Internacional de Normalización (ISO), como la


reducción de la transparencia de un líquido causada por la presencia de partículas no disueltas
de material distinto al propio líquido. 5 Al ser un indicador de apariencia óptica, ocasionado por
la dispersión y absorción de la energía lumínica a través del líquido, la turbidez solo puede ser
medida usando técnicas ópticas.6 Se fundamenta en la relación de la intensidad de la luz
incidente y de la luz dispersada por el medio, mediante la ley de Lambert-Beer.
En la que la turbidez es proporcional a la concentración de partículas. Un haz de radiación
monocromática paralelo con intensidad I0 llega al medio absorbente perpendicular a la
superficie; luego pasa a través de la longitud X del medio, que contiene partículas absorbentes
que bloquearán la transmisión de la luz (átomos, iones o moléculas), la intensidad del haz
disminuye a I como resultado de la absorción y la dispersión. Si el material se compone de
partículas con diferentes coeficientes de absorción y de dispersión, el coeficiente total de
absorción y de dispersión, (αA y αB), es igual a la suma de los coeficientes de absorción y de
dispersión de todas las partículas.10

dónde:

 I intensidad de la luz resultante.

 I0 intensidad de la luz en el punto 0.

 0 punto de partida del paso de luz a través del medio absorbente.

 X longitud del medio o distancia del viaje de la luz a través del medio.

 C concentración del medio.

 αA coeficiente de absorción.

 αB coeficiente de dispersión.

La proporcionalidad entre la intensidad de la luz incidente y la luz dispersada por el medio


depende del tamaño y de la forma de las células que se encuentren en el medio que se esté
analizando, que también puede ser afectada por las condiciones ambientales. La medición de
turbidez se usa para estimar los indicadores de crecimiento de bacterias como una alternativa a
los recuentos de las placas tradicionales. La unidad de medición estándar para la turbidez es la
Unidad Nefelométrica de Turbidez (UNT).

Principio de medición de turbidez


Cuando el haz de luz atraviesa el fluido de la muestra (Fig. 1), los sólidos suspendidos
dispersan la luz en todas direcciones. La reducción de la intensidad del haz de luz se debe a la
difusión del haz por dichos sólidos suspendidos en el medio. Sin embargo, la absorción de la
radiación incidente por sustancias coloreadas disueltas, también reduce la intensidad de la luz y
debe tenerse en cuenta para contrarrestar este efecto, de forma manual o automática. En el
análisis de bajas cantidades de sólidos suspendidos, se suele usar la medida de la luz dispersa,
debido a que los fotodetectores detectan pequeños cambios de la intensidad de la luz en
contraste con un fondo oscuro. Sin embargo, este método tiene como desventaja que con
grandes cantidades de sólidos disueltos en la muestra, se produce una dispersión múltiple que
limita la cantidad de luz que recibe el detector. 13 A elevadas concentraciones de sólidos
suspendidos, se deben emplear métodos de medición alternativos, tales como los de absorción.

Técnicas turbidimétricas de medición

La turbidez se mide utilizando las técnicas de turbidimetría o nefelometría. La relación directa


entre los datos de turbidez y la concentración de sólidos suspendidos depende de muchos
factores, entre los cuales se incluye el tamaño de las partículas, la forma, la distribución y el
estado de la superficie, índice de refracción de las partículas de dispersión y de la longitud de
onda de la luz utilizada

El turbidímetro

Es uno de los instrumentos más utilizados y la técnica empleada consiste en el uso de un


cultivo de microorganismos en un medio líquido, que actúa como una suspensión coloidal, la
cual bloquea y refleja la luz que pasa a través de él. La luz es absorbida de manera
directamente proporcional a la concentración de células que hay en el cultivo o fluidos
biológicos.

Es la clave para obtener buenas características de rendimiento en las mediciones de turbidez,


así como una buena estabilidad, linealidad, sensibilidad, baja luz difusa y rechazo del color.
[ CITATION Day13 \l 12298 ]

Usos
-Se utiliza para el análisis de fibrinógeno, triglicéridos, complejos Ag-Ac y otras sustancias.
-Aplicable cuando la dispersión es suficientemente grande (concentración alta de partículas).

DETERMINACIÓN DEL POTASIO

El método presentado para la determinación de potasio se basa en la técnica turbidimétrica publicada


por Hillman y Beyer en 1967, siendo modificada a través del uso de TCA como reactivo precipitante.
Los resultados coincidían favorablemente con aquellos obtenidos por fotometría de flama y fueron
adecuados para la detección rápida de hiper e hipokalemia en ausencia de un fotómetro de flama o
electrodo ion-selectivo.

Los iones potasio en un medio alcalino libre de proteínas reaccionan con el tetrafenilborato de sodio
para producir una suspensión turbia finamente dispersa de tetrafenilborato de potasio. La turbidez
producida es proporcional a las concentraciones de potasio.

Preparación del reactivo de trabajo:

Mezcle 1 volumen de barato de Potasio con 1 volumen de Hidróxido de sodio. Déjelo reposar por un
tiempo mínimo de 15-30 minutos antes de utilizarse.

Preparación del sorbrenadante de libre de proteínas

1. Añada 0.05 mL de suero, plasma u orina diluida a tubos previamente etiquetados.

2. Añada 0.5 mL de Reactivo TCA precipitante gota a gota a cada tubo mezclado vigorosamente
(de preferencia utilizar vortex)

3. Déjelo por 5minutos, despúes centrifuge a alta velocidad por 5 – 10 minutos.

Procedimiento de la prueba

1. Añada el estándar o el sobrenadante claro en la mitad de la superficie del reactivo de trabajo,


asegurese que cada celdilla sea mezclada con cuidado antes de proseguir con la siguiente
muestra, de acuerdo al siguiente esquema:

Blanco Estándar Muestra

Reactivo de trabajo 1.0 mL 1.0 mL 1.0 mL


Estándar -------- 0.1 mL ---------

Sobrenadante -------- --------- 0.1 mL

Agua Destilada 0.1 mL --------- --------

Nota: Puede utilizar todos los volúmenes al doble si el instrumento que utiliza requiere volúmenes
mayores a 1.0 mL.

1. Incube todas las celdillas a temperatura ambiente por 5 minutos.

2. Lea S y U contra RB a 580 en un intervalo de 60 minutos.

Resultados

Los valores se pueden derivar por la siguiente ecuación: Potasio en suero, plasma u orina (mmoI/L)=
Au x 4 As

NOTA: Los valores de orina se deben multiplicar por 10 para corregir por el factor de dilución. Orina
Potásica (mmol/L x Volumen de 24 h (mL) 1000 donde Au y As son los valores de absorbancia de la
muestra y estándar, respectivamente, y 4 es la concentración del estándar.

Valores Normales

 Suero 3.6-5.5 mmol/L

 Plasma 3.5-4.8 mmol/L

 Orina 26-123 mmol/24h (varía con la dieta).

MATERIALES Y MÉTODOS

Equipos Materiales Reactivos

PROCEDIMIENTO / TÉCNICA:
RESULTADO (Gráficos, cálculos, etc.)

OBSERVACIONES

CONCLUSIONES

RECOMENDACIONES

CUESTIONARIO

1. ¿Que pasa con la densidad óptica en las técnicas de turbidimetria?

BIBLIOGRAFÍA

1. Los métodos Turbidimétricos y sus aplicaciones en las ciencias de la vida. Dayana Acebo González,
Armando T. Hernández García. 1, 2013, CENIC, Vol. 44.

2.Análisis químico instrumental. 2014. Disponible


en:http://quimicabasica2014.blogspot.com/2014/10/nefelometria-y-turbidimetria.html

MgS. Ximena Robalino Lic. Elena Brito Ing. Eliana De la Torre

DIRECTOR/A DE CARRERA DOCENTE RESPONSABLE DEL LABORATORIO


}

La turbidimétria

Las técnicas ópticas de medición se utilizan desde hace años para obtener cierta
información de un objeto, teniendo en cuenta la existencia de fenómenos ópticos y las
propiedades que presenta la luz. Los fenómenos ópticos implican la interacción de la luz
con un medio. Al atravesar una muestra el haz luminoso, ocurre la absorción, la
fluorescencia o la dispersión que junto a las propiedades ondulatorias (amplitud, fase,
polarización, longitud de onda) ofrecen un mundo rico en información.1
Nefelometría y turbidimetría son métodos analíticos basados en la dispersión de
partículas suspendidas en líquidos.

Definición de turbidez

La turbidez se define por la Organización Internacional de Normalización (ISO), como


la reducción de la transparencia de un líquido causada por la presencia de partículas no
disueltas de material distinto al propio líquido.5 Al ser un indicador de apariencia óptica,
ocasionado por la dispersión y absorción de la energía lumínica a través del líquido, la
turbidez solo puede ser medida usando técnicas ópticas.6 Se fundamenta en la relación
de la intensidad de la luz incidente y de la luz dispersada por el medio, mediante la ley
de Lambert-Beer.
En la que la turbidez es proporcional a la concentración de partículas. 7-9 Un haz de
radiación monocromática paralelo con intensidad I0 llega al medio absorbente
perpendicular a la superficie; luego pasa a través de la longitud X del medio, que
contiene partículas absorbentes que bloquearán la transmisión de la luz (átomos, iones
o moléculas), la intensidad del haz disminuye a I como resultado de la absorción y la
dispersión. Si el material se compone de partículas con diferentes coeficientes de
absorción y de dispersión, el coeficiente total de absorción y de dispersión, (αA y αB),
es igual a la suma de los coeficientes de absorción y de dispersión de todas las
partículas.10

dónde:

 I intensidad de la luz resultante.

 I0 intensidad de la luz en el punto 0.

 0 punto de partida del paso de luz a través del medio absorbente.

 X longitud del medio o distancia del viaje de la luz a través del medio.

 C concentración del medio.

 αA coeficiente de absorción.

 αB coeficiente de dispersión.

La proporcionalidad entre la intensidad de la luz incidente y la luz dispersada por el


medio depende del tamaño y de la forma de las células que se encuentren en el medio
que se esté analizando, que también puede ser afectada por las condiciones
ambientales. La medición de turbidez se usa para estimar los indicadores de crecimiento
de bacterias como una alternativa a los recuentos de las placas tradicionales.
La unidad de medición estándar para la turbidez es la Unidad Nefelométrica de
Turbidez (UNT).

Principio de medición de turbidez

Cuando el haz de luz atraviesa el fluido de la muestra (Fig. 1), los sólidos suspendidos
dispersan la luz en todas direcciones. La reducción de la intensidad del haz de luz se
debe a la difusión del haz por dichos sólidos suspendidos en el medio. Sin embargo, la
absorción de la radiación incidente por sustancias coloreadas disueltas, también reduce
la intensidad de la luz y debe tenerse en cuenta para contrarrestar este efecto, de forma
manual o automática.13 En el análisis de bajas cantidades de sólidos suspendidos, se
suele usar la medida de la luz dispersa, debido a que los fotodetectores detectan
pequeños cambios de la intensidad de la luz en contraste con un fondo oscuro. Sin
embargo, este método tiene como desventaja que con grandes cantidades de sólidos
disueltos en la muestra, se produce una dispersión múltiple que limita la cantidad de luz
que recibe el detector.13 A elevadas concentraciones de sólidos suspendidos, se deben
emplear métodos de medición alternativos, tales como los de absorción.13-14

Fig. 1. Efectos de luz al atravesar la muestra. 6 L1 Haz de luz incidente sobre la muestra. L2 Haz de luz que ha
pasado a través de la muestra. M Muestra en análisis. St Luz difundida por las partículas suspendidas en la
muestra. G y G1 Rayos periféricos del haz de luz difundido.

Técnicas turbidimétricas de medición

La turbidez se mide utilizando las técnicas de turbidimetría o nefelometría. La relación


directa entre los datos de turbidez y la concentración de sólidos suspendidos depende de
muchos factores, entre los cuales se incluye el tamaño de las partículas, la forma, la
distribución y el estado de la superficie, índice de refracción de las partículas de
dispersión y de la longitud de onda de la luz utilizada

El turbidímetro

Es uno de los instrumentos más utilizados y la técnica empleada consiste en el uso de


un cultivo de microorganismos en un medio líquido, que actúa como una suspensión
coloidal, la cual bloquea y refleja la luz que pasa a través de él. La luz es absorbida de
manera directamente proporcional a la concentración de células que hay en el cultivo o
fluidos biológicos.

Es la clave para obtener buenas características de rendimiento en las mediciones de


turbidez, así como una buena estabilidad, linealidad, sensibilidad, baja luz difusa y
rechazo del color.[ CITATION Day13 \l 12298 ]

Usos
-Se utiliza para el análisis de fibrinógeno, triglicéridos, complejos Ag-Ac y otras
sustancias.
-Aplicable cuando la dispersión es suficientemente grande (concentración alta de
partículas).

Bibliografía
1. Los métodos Turbidimétricos y sus aplicaciones en las ciencias de la vida. Dayana Acebo
González, Armando T. Hernández García. 1, 2013, CENIC, Vol. 44.

2.Análisis químico instrumental. 2014. Disponible


en:http://quimicabasica2014.blogspot.com/2014/10/nefelometria-y-turbidimetria.html