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Postcosecha
ISSN: 1665-0204
rebasa@hmo.megared.net.mx
Asociación Iberoamericana de Tecnología
Postcosecha, S.C.
México
Figueroa, Ricardo; Tamayo, Jorge; González, Sara; Moreno, Gabriela; Vargas, Lourdes
Actividad antioxidante de antocianinas presentes en cáscara de pitahaya (Hylocereus undatus)
Revista Iberoamericana de Tecnología Postcosecha, vol. 12, núm. 1, junio, 2011, pp. 44-50
Asociación Iberoamericana de Tecnología Postcosecha, S.C.
Hermosillo, México
following
the
methodology
of
differential
pH,
whereas
the
antioxidant
activity
was
determined
by
the
method
of
DPPH
(2,2-‐diphenyl-‐1-‐picryl
hidrailo)
and
ABTS
(2
acid,
2
'azino-‐bis
(3-‐etilbenzotiazolin)
-‐6
-‐
sulfonic
acid).
The
results
indicate
that
the
content
of
anthocyanins
in
the
skin
of
pitahaya
presented
a
mean
value
of
323.9087
mg
cyanidin
3-‐glucósido/100
g
fresh
weight
of
sample,
in
terms
of
antioxidant
capacity,
the
samples
analyzed
by
DPPH
method
had
a
higher
percentage
of
inhibition
or
radical
reduction
(31.5157%)
compared
with
the
ABTS
method
in
which
the
percentage
of
inhibition
was
lower
(12.17%).
The
results
obtained
in
this
work
show
that
the
shell
of
pitahaya
(Hylocereus
undatus)
may
be
a
natural
source
of
antioxidants
with
potential
applications
in
food
or
pharmaceutical
industry,
given
the
activity
found
in
extracts
of
anthocyanins
under
the
two
methods
(DPPH,
ABTS)
evaluated.
INTRODUCCION
numerosas
enfermedades
que
provocan
México
contiene
una
gran
diversidad
de
reacciones
en
cadena,
estas
reacciones
solo
cactáceas,
la
cual
nos
identifica,
no
solo
por
su
son
eliminadas
por
la
acción
de
otras
belleza
como
plantas
de
ornato,
si
no
porque
moléculas
en
estos
procesos
tóxicos
en
el
constituyen
una
fuente
de
alimento
y
a
la
vez
organismo,
los
llamados
sistemas
una
actividad
redituable,
para
algunas
antioxidantes
defensivos.
Se
ha
demostrado
regiones.
Dentro
de
las
cactáceas
con
futuro
que
el
organismo
posee
un
número
de
productivo
y
económico
se
encuentra
el
mecanismos
a
través
de
los
cuales
produce
y
a
género
Hylocereus
undatus,
cuyos
frutos
son
la
vez
limita
la
producción
de
especies
conocidos
como
pitahaya.
La
Pitahaya,
es
una
reactivas
de
oxígeno.
Un
exceso
de
radicales
fruta
exótica,
silvestre
y
de
intenso
colorido
libres
suele
iniciar
el
daño
de
la
pared
vascular
que
la
convierte
en
una
obra
del
arte
de
la
(Céspedes
y
Sánchez.,
2000).
Un
antioxidante
naturaleza.
Se
puede
utilizar
para
preparar
es
una
molécula
capaz
de
retardar
o
prevenir
gelatina,
helado,
yogurt,
jarabe,
dulces,
la
oxidación
de
otras
moléculas
El
sistema
de
mermelada,
jalea
o
refresco,
así
como
también
defensa
antioxidante
está
constituido
por
se
puede
disfrutar
comiéndola
sola.
Sin
compuestos
de
naturaleza
enzimática
como:
embargo
la
parte
comestible
del
fruto
que
es
superóxido
dismutasa,
catalasa,
glutation
utilizado
para
la
realización
de
estos
productos
peroxidasa,
y
compuestos
de
naturaleza
no
solo
representa
aproximadamente
el
55%
del
enzimática
como:
vitamina
E,
beta-‐caroteno,
peso
total
del
fruto,
siendo
el
otro
45%
del
vitamina
C,
glutation
reducido,
albúmina,
peso
restante
de
la
cáscara,
que
en
el
mejor
de
flavonoides,
antocininas
y
metales
de
los
casos
es
utilizada
como
forraje
para
el
transición
como
Se,
Cu,
Zn,
entre
otros.
El
ganado
o
simplemente
es
desechada.
estrés
oxidativo
ha
sido
asociado
a
la
Los
fenoles,
especialmente
los
flavonoides
y
patogénesis
de
muchas
enfermedades
los
antocianos
(Heim
y
col.,2002),
muestran
humanas,
es
por
ello
que
el
uso
de
una
gran
capacidad
para
captar
radicales
libres
antioxidantes
en
farmacología
es
estudiado
de
causantes
del
estrés
oxidativo,
forma
intensiva,
particularmentecomo
atribuyéndoseles
a
su
vez
un
efecto
tratamiento
para
accidentes
cerebrovasculares
beneficioso
en
la
prevención
de
enfermedades
y
enfermedades
neurodegenerativas.
tales
como:
cardiovasculares,
circulatorias,
(Kuskoski
y
col.,
2004))
cancerígenas
y
neurológicas
(Katsube
y
col.,
Actualmente
existen
diversos
métodos
2003).
Poseen
actividades
anti-‐inflamatoria,
para
determinar
la
actividad
antioxidante,
los
antialérgica,
antitrombótica,
antimicrobiana
y
cuales
se
basan
en
su
capacidad
para
captar
antineoplásica
(Sánchez,
2002)
radicales
libres.
Entre
ellos
se
pueden
Los
radicales
libres
son
protagonistas
de
mencionar
el
uso
del
2,2-‐difenil-‐
1-‐picril
hidrailo
(DPPH),
ácido
2,2´,
azino-‐bis
(3-‐ colorantes
artificiales,
para
crear
un
color
etilbenzotiazolin)-‐6-‐
sulfónico
(ABTS),
la
agradable
a
la
vista
del
consumidor.
El
objetivo
reacción
con
el
óxido
nitroso
(test
NO),
de
este
trabajo
fue
cuantificar
y
determinar
la
dicloridrato
de
N,N-‐Dimetilp-‐
fenilendiamina
capacidad
antioxidante
de
las
antocianinas
(DMPD),
generación
de
radicales
peroxilo,
presentes
en
la
cáscara
de
pitahaya.
superóxido
e
hidroxilo,
y
otros.
(Kuskoski
y
col.,
2005).
Las
antocianinas
son
uno
de
los
METODOLOGÍA
grupos
más
importantes
de
pigmentos,
que
Se
seleccionaron
las
pitahayas
(Hylocereus
pertenecen
a
la
clase
de
los
compuestos
undatus)
cerciorándose
de
que
no
tuvieran
fenólicos
llamados
flavonoides.
Las
daño
en
la
cáscara,
que
sean
de
similar
antocianinas
son
probablemente
los
tamaño
y
color,
posteriormente
se
procedió
a
colorantes
naturales
más
conocidos
y
que
separar
la
cáscara
del
fruto,
la
cual
fue
trozada
presentan
una
gama
de
colores
más
amplia
en
pequeños
fragmentos
para
ser
colocadas
presentándose
en
la
mayoría
de
las
frutas
y
en
la
estufa
a
45ºC
durante
24
horas
para
su
vegetales.
Son
los
colorantes
responsables
en
secado.
Una
vez
secos
los
trozos
de
cáscara,
plantas
de
colores:
naranja
brillante,
rosa,
estos
fueron
molidos
Todas
las
moliendas
rojo,
violeta
y
el
azul
de
los
pétalos
de
las
fueron
mezcladas
y
homogenizadas,
teniendo
flores
y
de
frutas
(Saldaña,
2004).
Pueden
como
resultado
un
único
polvo
homogéneo
de
estar
en
órganos
de
plantas,
tales
como
la
raíz
la
cáscara
de
pitahaya,
el
cual
fue
la
fuente
de
y
hojas,
acumuladas
en
las
vacuolas
(Quintero,
extracción
del
pigmento.
2004)
de
las
células
epidérmicas
o
La
extracción
de
la
antocianina
se
realizó
subepidérmicas,
que
se
localizan
en
organelos
mediante
la
utilización
de
metanol
acidificado
esféricos
conocidos
como
antocianoplastos.
al
0.01%,
homogenizando
por
10
min
para
Sin
embargo,
no
son
totalmente
estables
luego
refrigerar
durante
24
hrs.
Transcurrido
químicamente
ya
que
una
vez
alterado
el
este
tiempo
se
homogeniza
de
nuevo
y
se
tejido
que
las
contiene
son
susceptibles
a
la
filtra
a
vacío,
el
sobrenadante
se
concentra
en
degradación
por
factores
como
enzimas,
pH,
un
rotavapor
a
40ºC
durante
8
min..
El
luz,
sulfitos,
temperatura
(Wesche-‐Ebeling
y
extracto
obtenido
anteriormente
contiene
la
Montgomery,
1990),
son
difíciles
de
purificar
y
antocianina
de
interés
pero
a
su
vez
contiene
no
se
encuentran
en
grandes
cantidades
interferencias
para
su
análisis
tales
como
todavía
para
su
uso
comercial
(Saldaña,
2004).
fenólicos,
azúcares
y
ácidos
por
lo
que
para
A
pesar
de
esto,
poseen
a
su
vez
ventajas
ya
eliminarlas
se
utilizó
el
siguiente
método:
que
las
antocianinas
son
de
origen
natural,
son
solubles
en
agua,
no
son
tóxicas
y
forman
Resina
PVPP
(Polivinil-‐poli-‐pirrolidona)
complejos
no
covalentes
intensamente
Su
uso
principalmente
se
enfoca
al
coloreados
con
algunos
metabolitos
aislamiento
de
compuestos
polares
no
secundarios
de
las
plantas
tales
como
los
fenólicos.
Este
procedimiento
consiste
en
flavonoides
y
ciertos
metales
como
el
colocar
en
un
crisol
horadado
un
filtro
de
aluminio,
fenómeno
denominado
Whatman
No.1
junto
con
una
cama
de
1
cm
de
copigmentación.
la
resina.
Ésta
se
activa
por
medio
de
20
ml
de
Por
estas
razones
se
propone
que
las
agua
acidificada
al
0.01%
con
HCl
seguido
de
antocianinas
extraídas
de
la
cáscara
de
20
ml
de
metanol
acidificado
al
0.01%.
El
pitahaya
(Hylocereus
undatus)
pueden
ser
un
extracto
se
pasa
por
la
resina
recuperando
la
medio
importante
en
la
industria
de
los
antocianina
con
el
metanol
acidificado.
alimentos
como
colorantes
rojos,
Posteriormente
se
concentra
la
antocianina
considerándolos
como
alternativas
a
los
purificada
evaporando
en
rotavapor
a
40°C
-‐1 -‐1
durante
4
minutos
para
eliminar
la
porción
extinción
molar
(M
cm ).
PM:
peso
metanólica.
molecular.
Para
los
cálculos
se
tomó
en
consideración
que
la
antocianina
mayoritaria
Cartuchos
fase
reversa
C18.
es
cianidina-‐3-‐glucósido
(Van
Buren,
1970),
Su
propósito
es
separar
compuestos
-‐1 -‐1
cuyo
ε
es
de
29600
M
cm ,
de
peso
relativamente
hidrofóbicos
como
las
molecular
445.2
según
reporta
Jurd
&
Asen,
antocianinas
de
azúcares
y
ácidos.
Se
junto
con
un
factor
de
dilución
de
5.
acondiciona
el
cartucho
con
agua
acidificada
seguido
de
metanol
acidificado
y
nuevamente
Actividad
Antioxidante
por
Ensayo
ABTS+
(Re
agua
acidificada,
para
remover
el
metanol
y
col.,
1999)
restante.
Se
coloca
el
extracto
obtenido
de
la
Este
método
se
basa
en
la
reducción
de
la
PVPP
y
en
seguida
se
eluye
la
antocianina
por
coloración
verde/azul
producida
por
la
el
cartucho
por
medio
de
metanol
acidificado.
reacción
del
ABTS•
+
(3.8
mg/mL)
con
88
μL
de
Como
siguiente
paso,
se
remueve
el
metanol
persulfato
potásico
(37.5
mg/mL)
incubados
a
para
obtener
el
extracto
puro
por
medio
de
un
temperatura
ambiente
(±25ºC)
y
en
la
rotavapor
a
40ºC
durante
2-‐3
minutos
para
oscuridad
durante
16
h.
Una
vez
formado
el
eliminar
la
porción
metanólica
restante.
La
radical
ABTS•
+
se
diluye
con
etanol
hasta
determinación
de
antocianinas
monoméricas
obtener
un
valor
de
absorbancia
comprendido
totales
se
llevó
a
cabo
de
acuerdo
a
la
entre
0.70
+
0.1
a
754
nm.
Las
muestras
metodología
del
pH
diferencial
descrita
por
filtradas
(0.1
mL
de
extracto)
se
diluyen
con
Giusti
y
Wrolstad
(2001).
Ésta
se
basa
en
las
3.9
mL
del
radical
y
se
homogeniza
por
1
transformaciones
estructurales
que
sufren
las
minuto.
La
absorbancia
se
mide
de
forma
antocianinas
monoméricas
con
un
cambio
en
continua
transcurridos
7
minutos
el
pH;
estos
compuestos
adquieren
la
El
porcentaje
de
capacidad
antioxidante
se
conformación
de
catión
flavilio
(color
rojo
calculó
con
la
siguiente
fórmula:
intenso)
a
pH
1
y
la
forma
hemicetal
(incolora)
a
pH
4.5.
Del
extracto
de
antocianina
concentrada
y
%
ABTS
=
purificada
en
metanol
acidificado
al
0.01%
con
HCl
se
tomaron
dos
muestras
de
0.5
mL
y
a
Donde:
A1.-‐
Absorbancia
del
patrón
de
una
de
las
muestras
se
le
añade
buffer
con
pH
referencia
(ABTS-‐Etanol).
A2.-‐
Absorbancia
de
4.5
y
a
la
otra
buffer
con
pH
1.Para
cada
la
muestra
a
los
7
minutos.
A3.-‐
Absorbancia
solución,
se
midió
la
absorbancia
a
520
nm
del
blanco
de
muestra.
(longitud
de
onda
de
máxima
absorbancia
de
las
antocianinas)
y
a
700
nm
en
un
Actividad
Antioxidante
por
Ensayo
DPPH
espectrofotómetro
UV-‐visible
usando
agua
La
actividad
antioxidante
se
determinó
destilada
como
blanco.
La
absorbancia
final
se
basándose
del
método
del
radical
libre
(Brand-‐
calculó
de
acuerdo
a
la
siguiente
ecuación:
Williams.,
1995)
que
se
realizó
de
la
siguiente
A=(A520
nm
–A700nm)
pH1
–
(A520
nm
–A700nm)
pH4.5
forma:
se
preparó
el
DPPH
a
una
Para
calcular
la
concentración
en
la
concentración
una
solución
de
concentración
muestra
original
se
sigue
la
siguiente
fórmula:
0.1
mM.
En
metanol
al
80%.
Para
la
preparación
de
la
muestra
se
tomó
0.2
ml
del
-‐1
Antocianina
monomérica
(mg
lt )
=
(A*PM*FD*1000)/(ε*1)
extracto
de
antocininas
y
se
mezcló
con
7.8
ml
Donde:
A:
absorbancia
antes
calculada
(nm).
de
la
solución
0.1
mM
de
DPPH
se
agitó
FD:
factor
de
disolución
(volumen
vigorosamente,
de
forma
inmediata
se
midió
total/volumen
del
extracto).ε:
coeficiente
de
su
absorbancia
a
una
longitud
de
onda
de
517
nm,
dicha
lectura
se
llevó
a
cabo
a
diferentes
En
cuanto
al
contenido
de
antocianinas
en
tiempos
de
la
reacción
(0,
30
y
60
minutos).
la
cáscara
de
Pitahaya
se
encontró,
un
valor
Se
leyó
de
la
misma
forma
la
absorbancia
medio
de
323,9088
±
62,4829
mg
cianidina
3-‐
de
la
solución
de
DPPH
0.1
mM.
glucósido/100
g
de
peso
fresco
de
muestra
El
porcentaje
de
DPPH
reducido
se
obtuvo
(utilizando
un
intervalo
de
confianza
de
95%),
con
ayuda
de
los
datos
obtenidos
(%DPPH),
este
valor
es
superior
a
lo
reportado
para
durante
la
reacción;
para
esto
se
uso
la
zarzamora
por
Leyva
(2009)
y
además
se
fórmula
propuesta
por
Soler-‐Rivas
et
al.,
encuentra
dentro
de
los
intervalos
de
(2000):
antocianinas
reportados
por
Rein
(2005)
para
%
DPPH
=
(absDPPH0
–
abst)
/
absDPPH0
arándanos
y
mora
azul.
En
la
figura
2
se
Donde
absDPPH0
es
la
absorbancia
de
la
solución
muestran
las
absorbancias
producidas
por
la
de
DPPH
0.1
mM
y
abst
es
la
absorbancia
de
decoloración
del
radical
como
efecto
de
la
las
muestras
a
diferentes
tiempos
reacción
con
la
muestra,
esto
se
realizó
tomando
tres
lecturas
a
517
nm,
al
minuto
0,
RESULTADOS
30
y
60
Como
se
puede
observar
en
la
figura
1,
las
mayores
absorbancias
de
antocianinas
a
partir
de
la
cáscara
de
pitahaya
en
polvo
se
observaron
en
la
región
visible
del
espectro
de
absorción
a
520
nm
y
a
pH
1,
lo
que
indica
es
que
a
este
pH
obtuvieron
su
máxima
expresión
de
color
las
debido
a
que
este
parámetro
es
uno
de
los
principales
factores
del
medio
que
hace
que
la
molécula
pueda
mantener
su
color.
La
antocianina
experimenta
una
Gráfica
2.-‐
Absorbancias
medias
de
las
muestras
transformación
reversible
con
los
cambios
de
con
DPPH
al
tiempo
de
0,
30
y
60
minutos.
pH
manifestado
por
un
llamativo
cambio
en
la
absorbancia.
La
forma
oxonium
predomina
a
Se
puede
observar
claramente
como
los
pH
1
y
el
hemiacetal
a
pH
4.5
(Hernández,
valores
de
las
absorbancias
van
disminuyendo
2003).
En
condiciones
ácidas
se
conserva
un
al
transcurrir
el
tiempo
de
reacción,
color
intenso
de
la
antocianina,
ya
que
existirá
obteniendo
valores
medios
de
0,9889,
0,8333
un
equilibrio
entre
las
cuatro
estructuras
de
la
y
0,8128
para
el
minuto
0,
30
y
60
misma
(Chandra
et
al.,
1992).
respectivamente,
lo
que
indica
que
las
muestras
utilizadas
para
inhibir
al
radical
DPPH,
están
cumpliendo
con
su
función
de
antioxidante
al
estabilizar
la
reacción
del
radical
libre
y
atenuando
el
color
de
la
solución
metanólica.
Utilizando
la
ecuación
descrita
en
la
metodología
del
radical
DPPH
y
las
absorbancias
se
obtuvo
una
capacidad
antioxidante
media
de
31,5157
%
de
reducción
ó
inhibición
del
radical
DPPH.
Para
el
método
de
ABTS
la
decoloración
del
radical
como
efecto
de
la
reacción
con
la
muestra
se
realizo
Figura
1.-‐
Absorbancias
medias
de
las
muestras
tomando
ocho
lecturas,
al
tiempo
cero
y
cada
obtenidas
por
el
método
de
pH
diferencial.
minuto
durante
los
primeros
7
minutos
de
reacción,
se
observó
una
disminución
de
las
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de
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la
expresión
de
color
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its
role
in
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de
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domestica).
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