Uso de pruebas bioquímicas como método de identificación

bacteriana
Use of biochemical tests as a method of bacterial identification

Patricia M. Álvarez1, Daniel Salamone2, Jesús Vegas3

Universidad de Carabobo, Facultad Experimental de Ciencias y Tecnología,

Departamento de Biología. Naguanagua, EDO. Carabobo.

RESUMEN. Se realizó una serie de INTRODUCCIÓN.

pruebas bioquímicas a una cepa problema
(CP) obtenida de un caldo de cultivo puro y
se estudió la morfología bacteriana a través
de una tinción de Gram. Tras incubar en
aerobiósis por 24h a 37°C se interpretaron
los resultados de cada prueba realizada
comparándolos con una base de datos. Tras
el diagnostico la cepa bacteriana fue
identificada como P. aeruginosa.
Palabras claves: Pruebas bioquímicas,
diagnóstico, cepa, medio selectivo, medio
diferencial.
ABSTRACT. A series of biochemical tests
was performed on a test strain (CP)
obtained from a pure culture broth and the
bacterial morphology was studied through a
Gram stain. After incubation in aerobiosis
for 24 h at 37 ° C, the results of each test
were interpreted by comparing them with a
database. After the diagnosis, the bacterial
strain was identified as P. aeruginosa.
Key words: Biochemical tests, diagnosis,
strain, selective medium, differential
médium.
Desde su origen, la microbiología se ha
enfocado en el descubrimiento,
caracterización e identificación de
microorganismos [1], hoy en día sigue
siendo uno de los procesos más rutinarios
en el laboratorio de microbiología. La
identificación de cepas ha marcado una gran
importancia en áreas como la medicina,
agronomía e industria alimenticia, por
cuanto algunos organismos se relacionan
fuertemente con estas [1,2,3]. Muchas
bacterias por ejemplo son patógenas para
animales y seres humanos, causando un
problema de salud pública e interés por
parte de las ciencias médicas en conocer las
propiedades y características del patógeno.
De modo semejante la industria alimenticia
conjunto con los avances biotecnológicos
han desarrollado intereses enfocados en el
uso de determinados microorganismos para
la elaboración de productos de importancia
comercial, tales como derivados lácteos,
bebidas alcohólicas y productos
farmacéuticos [1,3,4].
La caracterización se bacterias se ha
enfocado por un tiempo en la observación y
descripción de la morfología celular y
forma y color de las colonias,
correspondiendo a un enfoque clásico. Con
el avance y desarrollo de nuevos
conocimiento y tecnologías se han
perfeccionado y elaborado nuevas técnicas
de identificación bacteriana [5]. Las formas
más rápidas de identificación con gran
eficiencia es el uso de pruebas bioquímicas.
Las pruebas bioquímicas permiten realizar
un diagnóstico en corto tiempo y de gran
precisión sobre el organismo estudiado.
Consisten en una seria de pruebas y medios
de cultivos especiales que discriminan y
ponen en evidencia algún aspecto fenotípico
de la bacteria, estos aspectos generalmente
son metabólicos. El estudio del
metabolismo bacteriano se basa en la
detección de enzimas que actúan sobre un
sustrato presente en el medio de cultivo,
algunas pruebas reaccionan directamente
con la enzima o con sus productos, los
resultados son revelados por indicadores
especiales presentes también en el medio.
Para identificar un organismo mediante
estas técnicas, es esencial la correcta
elección y realización de pruebas
secuenciales, el tipo de pruebas a realizarse
depende del organismo del cual se tenga
sospecha. Los resultados son comparados
con una base de datos control en el que se
encuentran registrados los rasgos
fenotípicos de organismos previamente
identificados [5].
En las ciencias biológicas es esencial el
estudio de los microorganismos y por
consiguiente los métodos de identificación y
sus fundamentos, en la práctica llevada a
cabo se realizaron diversas pruebas a un
cepa problema (CP) con el propósito de
identificar la.
MATERIALES Y MÉTODOS.
Se dispuso de un caldo de cultivo puro con
una cepa problema a la cual se le realizaron
las pruebas que aparecen en la Tabla 1, con
el propósito de identificar la bacteria. La
acidificación de hidratos de carbono y
producción de gas se estudiaron empleando
el medio KIA (Kliger Iron Agar), para
evidenciar la presencia de entorabacterias se
usó un Agar Mac Conkey, la producción de
sulfídrico fue estudiada en los medios KIA
y SIIM, en este último también se estudio la
motilidad y la producción de indol. Se
empleó el medio MS (Manitol salado) para
el aislamiento de estafilococos. También se
realizó una tinción de Gram para observar la
morfología del organismo en cuestión.
Una vez sembrados los medios empleados
en la caracterización, se llevó a incubación
por 24h a 37°C. Los resultados de las
pruebas fueron comparados con una tabla
de datos.
RESULTADOS Y DISCUSIONES
Los resultados para pruebas bioquímicos y
tinción de Gram se registraron en la
Tabla. 1.
En el Kliger no hubo cambio de color en la
inclinación y se observó un viraje de color
muy tenue en el fondo del tubo, esto se debe
a la capacidad de algunas bacterias no
fermentadoras de oxidar la glucosa [6],
produciendo ácidos débiles que acidifiquen
ligeramente el medio. Sin embargo la
bacteria fue diagnosticada como Glucosa y
Lactosa negativo.
 Pruebas Resultados REFERENCIAS
Gram -
Ac. Glucosa - [1] Brock, T. D., & Madigan, M. T. (1993).
Ac. Lactosa - Microbiología. Prentice-Hall
Citrato + Hispanoamericana,.
Gas -
H2S - [2] Fraile, R., & Prieto Prieto, J. (2003).
Indol -
Gelatinasa +
Microbiología en ciencias de la salud:
Motilidad + conceptos y aplicaciones.
SIM -/-/+
Cetrimide No interpretable [3] Hayes, P. R., & Pérez, B. S. (1993).
Ausencia de Microbiología e higiene de los alimentos
Manitol
crecimiento (No. 576.163 HAYm). Zaragoza: Acribia.
Catalasa +
Hemólisis α [4] Bourgeois, C. M., & Larpent, J. (1995).
Tabla. 1: Resultado de las pruebas Microbiología alimentaria. Vol II
bioquímicas. Fermentaciones alimentarias. Acribia,
Zaragoza.
En el Agar Cetrimide se desarrollaron
colonias, el medio presentó una ligera [5] Bou, G., Fernández-Olmos, A., García,
pigmentación de tonalidad verde azulado. C., Sáez-Nieto, J. A., & Valdezate, S.
Esta característica es típica de Pseudomonas (2011). Métodos de identificación
spp [7], puesto que producen piocianina, un bacteriana en el laboratorio de
pigmento de mencionado color capaz de microbiología. Enfermedades infecciosas y
difundirse en el medio. microbiología clínica, 29(8), 601-608.
El agar sangre mostró desarrollo de colonias [6] Callicó, A., Cedré, B., Sifontes, S.,
grises, alrededor de las mismas se observó Torres, V., Pino, Y., & Callís, A. H. (2004).
un halo difuso de coloración verdosa, por lo Caracterización fenotípica y serológica de
que la hemólisis identificada como aislamientos clínicos de Pseudomonas
α - Hemólisis. aeruginosa. VacciMonitor, 13(3), 1-9.
CONCLUSIÓN [7] Prithiviraj, B., Bais, H. P., Weir, T.,
Con base en los resultados de las pruebas Suresh, B., Najarro, E. H., Dayakar, B. V.,
efectuadas, se identificó la bacteria como ... & Vivanco, J. M. (2005). Down
Pseudomonas aeruginosa. Todas las regulation of virulence factors of
pruebas realizadas evidenciaron las Pseudomonas aeruginosa by salicylic acid
características metabólicas de P. attenuates its virulence on Arabidopsis
aeruginosa. El uso de Cetrimide fue thaliana and Caenorhabditis elegans.
determinante en el diagnóstico en este caso, Infection and immunity, 73(9), 5319-5328.
ya que el medio aportó información
suficiente para identificar el género
bacteriano.