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Uso de pruebas bioquímicas como método de identificación

bacteriana
Use of biochemical tests as a method of bacterial identification

Patricia M. Álvarez1, Daniel Salamone2, Jesús Vegas3

Universidad de Carabobo, Facultad Experimental de Ciencias y Tecnología,


Departamento de Biología. Naguanagua, EDO. Carabobo.

RESUMEN. Se realizó una serie de INTRODUCCIÓN.


pruebas bioquímicas a una cepa problema
Desde su origen, la microbiología se ha
(CP) obtenida de un caldo de cultivo puro y
enfocado en el descubrimiento,
se estudió la morfología bacteriana a través
caracterización e identificación de
de una tinción de Gram. Tras incubar en
aerobiósis por 24h a 37°C se interpretaron microorganismos [1], hoy en día sigue
los resultados de cada prueba realizada siendo uno de los procesos más rutinarios
comparándolos con una base de datos. Tras en el laboratorio de microbiología. La
el diagnostico la cepa bacteriana fue identificación de cepas ha marcado una gran
identificada como P. aeruginosa. importancia en áreas como la medicina,
agronomía e industria alimenticia, por
Palabras claves: Pruebas bioquímicas, cuanto algunos organismos se relacionan
diagnóstico, cepa, medio selectivo, medio fuertemente con estas [1,2,3]. Muchas
diferencial. bacterias por ejemplo son patógenas para
animales y seres humanos, causando un
ABSTRACT. A series of biochemical tests problema de salud pública e interés por
was performed on a test strain (CP) parte de las ciencias médicas en conocer las
obtained from a pure culture broth and the propiedades y características del patógeno.
bacterial morphology was studied through a De modo semejante la industria alimenticia
Gram stain. After incubation in aerobiosis conjunto con los avances biotecnológicos
for 24 h at 37 ° C, the results of each test han desarrollado intereses enfocados en el
were interpreted by comparing them with a uso de determinados microorganismos para
database. After the diagnosis, the bacterial la elaboración de productos de importancia
strain was identified as P. aeruginosa.
comercial, tales como derivados lácteos,
Key words: Biochemical tests, diagnosis, bebidas alcohólicas y productos
strain, selective medium, differential farmacéuticos [1,3,4].
médium.
La caracterización se bacterias se ha
enfocado por un tiempo en la observación y
descripción de la morfología celular y
forma y color de las colonias,
correspondiendo a un enfoque clásico. Con MATERIALES Y MÉTODOS.
el avance y desarrollo de nuevos
conocimiento y tecnologías se han Se dispuso de un caldo de cultivo puro con
una cepa problema a la cual se le realizaron
perfeccionado y elaborado nuevas técnicas
las pruebas que aparecen en la Tabla 1, con
de identificación bacteriana [5]. Las formas
el propósito de identificar la bacteria. La
más rápidas de identificación con gran
eficiencia es el uso de pruebas bioquímicas. acidificación de hidratos de carbono y
producción de gas se estudiaron empleando
Las pruebas bioquímicas permiten realizar el medio KIA (Kliger Iron Agar), para
un diagnóstico en corto tiempo y de gran evidenciar la presencia de entorabacterias se
precisión sobre el organismo estudiado. usó un Agar Mac Conkey, la producción de
Consisten en una seria de pruebas y medios sulfídrico fue estudiada en los medios KIA
de cultivos especiales que discriminan y y SIIM, en este último también se estudio la
ponen en evidencia algún aspecto fenotípico motilidad y la producción de indol. Se
de la bacteria, estos aspectos generalmente empleó el medio MS (Manitol salado) para
son metabólicos. El estudio del el aislamiento de estafilococos. También se
metabolismo bacteriano se basa en la realizó una tinción de Gram para observar la
detección de enzimas que actúan sobre un morfología del organismo en cuestión.
sustrato presente en el medio de cultivo,
algunas pruebas reaccionan directamente Una vez sembrados los medios empleados
con la enzima o con sus productos, los en la caracterización, se llevó a incubación
resultados son revelados por indicadores por 24h a 37°C. Los resultados de las
especiales presentes también en el medio. pruebas fueron comparados con una tabla
de datos.
Para identificar un organismo mediante
estas técnicas, es esencial la correcta RESULTADOS Y DISCUSIONES
elección y realización de pruebas Los resultados para pruebas bioquímicos y
secuenciales, el tipo de pruebas a realizarse tinción de Gram se registraron en la
depende del organismo del cual se tenga Tabla. 1.
sospecha. Los resultados son comparados
con una base de datos control en el que se En el Kliger no hubo cambio de color en la
encuentran registrados los rasgos inclinación y se observó un viraje de color
fenotípicos de organismos previamente muy tenue en el fondo del tubo, esto se debe
identificados [5]. a la capacidad de algunas bacterias no
fermentadoras de oxidar la glucosa [6],
En las ciencias biológicas es esencial el produciendo ácidos débiles que acidifiquen
estudio de los microorganismos y por ligeramente el medio. Sin embargo la
consiguiente los métodos de identificación y bacteria fue diagnosticada como Glucosa y
sus fundamentos, en la práctica llevada a Lactosa negativo.
cabo se realizaron diversas pruebas a un
cepa problema (CP) con el propósito de
identificar la.
Pruebas Resultados REFERENCIAS
Gram -
Ac. Glucosa - [1] Brock, T. D., & Madigan, M. T. (1993).
Ac. Lactosa - Microbiología. Prentice-Hall
Citrato + Hispanoamericana,.
Gas -
H2S - [2] Fraile, R., & Prieto Prieto, J. (2003).
Indol -
Gelatinasa +
Microbiología en ciencias de la salud:
Motilidad + conceptos y aplicaciones.
SIM -/-/+
Cetrimide No interpretable [3] Hayes, P. R., & Pérez, B. S. (1993).
Ausencia de Microbiología e higiene de los alimentos
Manitol
crecimiento (No. 576.163 HAYm). Zaragoza: Acribia.
Catalasa +
Hemólisis α [4] Bourgeois, C. M., & Larpent, J. (1995).
Tabla. 1: Resultado de las pruebas Microbiología alimentaria. Vol II
bioquímicas. Fermentaciones alimentarias. Acribia,
Zaragoza.
En el Agar Cetrimide se desarrollaron
colonias, el medio presentó una ligera [5] Bou, G., Fernández-Olmos, A., García,
pigmentación de tonalidad verde azulado. C., Sáez-Nieto, J. A., & Valdezate, S.
Esta característica es típica de Pseudomonas (2011). Métodos de identificación
spp [7], puesto que producen piocianina, un bacteriana en el laboratorio de
pigmento de mencionado color capaz de microbiología. Enfermedades infecciosas y
difundirse en el medio. microbiología clínica, 29(8), 601-608.
El agar sangre mostró desarrollo de colonias [6] Callicó, A., Cedré, B., Sifontes, S.,
grises, alrededor de las mismas se observó Torres, V., Pino, Y., & Callís, A. H. (2004).
un halo difuso de coloración verdosa, por lo Caracterización fenotípica y serológica de
que la hemólisis identificada como aislamientos clínicos de Pseudomonas
α - Hemólisis. aeruginosa. VacciMonitor, 13(3), 1-9.
CONCLUSIÓN [7] Prithiviraj, B., Bais, H. P., Weir, T.,
Con base en los resultados de las pruebas Suresh, B., Najarro, E. H., Dayakar, B. V.,
efectuadas, se identificó la bacteria como ... & Vivanco, J. M. (2005). Down
Pseudomonas aeruginosa. Todas las regulation of virulence factors of
pruebas realizadas evidenciaron las Pseudomonas aeruginosa by salicylic acid
características metabólicas de P. attenuates its virulence on Arabidopsis
aeruginosa. El uso de Cetrimide fue thaliana and Caenorhabditis elegans.
determinante en el diagnóstico en este caso, Infection and immunity, 73(9), 5319-5328.
ya que el medio aportó información
suficiente para identificar el género
bacteriano.