CAPITULO III

8. METODOLOGÍA

8.1 Tipo

Experimental

8.2 Diseño de la investigación

Enfoque cualitativo

Se utiliza el enfoque cualitativo en los estudios de los diferentes tipos de

métodos y técnicas para la extracción del aceite de fresa. Comprobar su
propiedad exfoliante de las partículas de la semilla de la fresa al ser
utilizado para la higiene corporal y remover células muertas.

Enfoque cuantitativo

Se aplica el enfoque cuantitativo a los datos experimentales y a los análisis

microbiológicos que permitirán comprobar la eficiencia del jabón exfoliante
de fresa como agente desinfectante.

8.3 Materia prima

Fresa(Fragaria Vasca)
8.4 Resultados estadísticos
Resultados obtenidos en nuestras placas con plate count

Colonias sin muestra del jabón

Colonias con la muestra del jabón

Se hizo un muestreo tomando como factores a la temperatura, el tiempo de
incubación y los dos tipos de muestras así generamos un cuadro con 32
ejemplares del total de placas sembradas para sacar un estimado.
Grados de libertad del numerador: 1

Grados de libertad del denominador: 11

Para obtener un diagrama de Pareto utilizamos el nombre de los factores, y las

cantidades que nos dan en el Delta de las medias y del ruido como se observa

Se puede observar que el factor de longitud en la robustez se encuentra inactivo

debido a que el estadístico de prueba F (0.66) está en el área de no rechazo, al
igual con el factor de tiempo con F (2.32 y el de las muestras éstas no están en
el área de rechazo).
Con estos diagramas de Pareto se puede llegar a la conclusión que la muestra
es el factor más importante.
8.5 Análisis microbiológico:

I. Método de Siembra en placas :

AGUA PEPTONADA

1. Luego de hervir por 15 minutos aproximadamente, dejar enfriar y remojar

las manos en el medio, luego macerarlo por 72h.
2. Se debe verter de la muestra 9ml a cada uno de los tres tubos de ensayo
y luego, del primer tubo de ensayo se debe repartir 1ml al segundo tubo y
al final, de ese tubo se debe repartir 1ml al tercero tubo de ensayo.

PLATE COUNT AGAR

1. Luego de hervir por 15 minutos aproximadamente, con una pipeta extraer

15 ml de Plate Count Agar y colocarlo en tres placas Petri.
2. Dejar solidificar
3. Extraer con una pipeta 1ml de la muestra mezclada (y agregar en las tres
placas) procurando ocupar todo el espacio.
4. Sellar las placas y llevar a la incubadora por 24h y 48h

II. Calculo del recuento en placa:

Calculo de la UFC/ml o UFC/g:

𝒎𝒆𝒅𝒊𝒂 𝒅𝒆𝒍 𝒏𝒖𝒎𝒆𝒓𝒐 𝒅𝒆 𝒄𝒐𝒍𝒐𝒏𝒊𝒂𝒔 𝒅𝒆 𝒑𝒍𝒂𝒄𝒂𝒔 𝒅𝒖𝒑𝒍𝒊𝒄𝒂𝒅𝒂𝒔

Recuento=
𝒇𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓 𝒅𝒆 𝒅𝒊𝒍𝒖𝒄𝒊𝒐𝒏 𝒙 𝒗𝒐𝒍𝒖𝒎𝒆𝒏 𝒊𝒏𝒐𝒄𝒖𝒍𝒂𝒅𝒐 𝒆𝒏 𝒍𝒂 𝒑𝒍𝒂𝒄𝒂

III. Placas con un número de colonias en el intervalo de 20 a 200:

Se calcula la UFC/ml o UFC/g de la muestra original utilizando números

de colonias de la placa en vez de la media.
Diluciones consecutivas: si las placas de 2 diluciones consecutivas
presentan entre 20 y 200 colonias, debe hallarse los recuentos estándar
de cada dilución y el resultado se obtendrá de la media de los 2 valores
resultantes; a menos que uno de ellos sea superior al doble del otro, en
cuyo caso se reportará como recuento estándar en placa el valor más
bajo.
IV. Placas con numero de colonia entre 1-20:

Si el recuento proporciona solamente placas con menos de 20 colonias,

registrase el número real de colonias de las placas que procedan de la
dilución más baja y aplique la fórmula para el cálculo UFC/ml o UFC/g.

V. Placas sin colonias:

Cuando no aparecen colonias en las placas, el recuento que se estima es

como el más pequeño del límite de detección del procedimiento utilizado.
El límite de detección es el número que resultaría de la presencia de una
colonia en la placa que se depositó la más baja dilución de la muestra.
Aplique la ecuación para estimar el recuento utilizando la más baja
dilución depositada en las placas y sustituya el numerador por ˂1.

VI. Placas con más de 200 colonias:

Si la operación rinde solo placas que contengan un número de colonias

que esté dotado de rejillas de 1 cm.
Si hay menos de 10 colonias/𝑐𝑚2 cuente 13 cuadrados (7 consecutivos
en sentido horizontal y 6 en sentido vertical), la suma de las colonias de
los 13 cuadrados multiplicada por 5 es el recuento estimado de los 65
𝑐𝑚2 de la placa.
Recuento= suma x 5(factor de dilución x volumen depositado) = UFC/ml
(est).
Si hay más de 10 colonias/𝑐𝑚2 , cuente 4 caudrados representativos y
multiplique la media por 65 para calcular el recuento de placas.
Recuento= suma/4x65(factor de dilución x volumen depositado)=
UFC/ml (est).
Si hay más de 100 colonias por cuadrado, entonces el total ˃6.500
colinas/placa. El recuento es ˃6.5x103 /( factor de dilución x volumen
depositado).

VII. Contaje en placa:

Se toma 1 ml de la muestra y se colca en la placa estéril.

Luego se vierte de 10-12 ml. Del medio sobre la muestra y mover en forma
circular buscando homogeneidad.
Incubar a 37°C por 48 horas.
Proceder a la lectura de las placas.
VIII. Lectura de las placas:

Cuadricular las placas en 1𝑐𝑚2 .

Colocar la palca sobre el contador de colonias o con la ayuda de una
lupa contar y caracterizar las colonias existentes.
Luego del conteo multiplicar el número de colonias por el área de la
placa, luego se multiplica el número obtenido de la operación anterior
por la dilución de la muestra, obteniéndose finalmente el número de
colonias por mililitro de muestra.

NOMBRE PLATE COUNT AGAR (10−1)

(Agar-peptona de caseína – glucosa - extracto de levadura)

Descripción Medio de cultivo exento de sustancias inhibidoras y de

Y Uso: indicadores.
Concebido esencialmente para la determinación del número total
de gérmenes en leche, productos lácteos, aguas y otros
materiales.
NOMBRE PLATE COUNT AGAR (10−2)
(Agar-peptona de caseína – glucosa - extracto de levadura)

Descripción Medio de cultivo exento de sustancias inhibidoras y de

Y Uso: indicadores.
Concebido esencialmente para la determinación del número total
de gérmenes en leche, productos lácteos, aguas y otros
materiales.

NOMBRE PLATE COUNT AGAR (10−3)

(Agar-peptona de caseína – glucosa - extracto de levadura)

Descripción Medio de cultivo exento de sustancias inhibidoras y de

Y Uso: indicadores.
Concebido esencialmente para la determinación del número total
de gérmenes en leche, productos lácteos, aguas y otros
materiales.
Resultados: UFC

Se homogenizan 10 ml de muestra con 90 ml de agua peptonada

Se realizaron dos diluciones decimales sucesivas

Se siembra 1 ml de muestra

Se incuban en las palcas y trascurridas esta fase los resultados obtenidos son

Primera dilución: aprox. 200 colonias

Segunda dilución: aprox. 120 colonias

Tercera dilución: aprox. 70

Dilución inicial: 10/(10+90)= 10/100=1/10

Diluciones sucesivas: 10−2 y 10−3

FD= 1/10 x 1/10 x 1/10 = 1/1000

Factor decimal de dilución (FDD)= 1/FD = 1000/1= 1000

𝐧ú𝐦𝐞𝐫𝐨 𝐝𝐞 𝐜𝐨𝐥𝐨𝐧𝐢𝐚𝐬 𝐜𝐨𝐧𝐭𝐚𝐝𝐚𝐬 𝐱 𝐅𝐃𝐃
Ufc/g= =
𝐯𝐨𝐥ú𝐦𝐞𝐧 𝐝𝐞 𝐬𝐢𝐞𝐧𝐦𝐛𝐫𝐚

Ufc / g = 390x1000 ufc/g = 390x𝟏𝟎𝟓 ufc/g