UNIVERSIDAD NACIONAL DE UCAYALI

FACULTAD DE CIENCIAS FORESTALES Y AMBIENTALES

ESCUELA PROFESIONAL DE ING. AMBIENTAL

Docente:

Alumno: Espinoza Egoavil Yeyshon Viler

Área: Biología (Laboratorio)

Tema: Observamos Organismos Microbiológicos en el Microscopio

Año – 2019

“Año de la lucha contra la corrupción e impunidad”

ÍNDICE:
Introducción: ................................................................................................................................. 3
Desarrollo: ..................................................................................................................................... 4
I.- EL MICROSCOPIO: ................................................................................................................. 4
II.- MICROSCOPIO OPTICO:........................................................................................................ 4
III.- MICROSCOPIO ELECTRONICO: ............................................................................................ 5
IV.- MICROSCOPIA OPTICA: ....................................................................................................... 7
V.- OBSERVACION DE LOS MICROORGANISMOS: ..................................................................... 7
Conclusiones: .............................................................................................................................. 10
Introducción:

En este resumen más pequeño daré a conocer sobre lo que hicimos la clase pasada, que fue
sobre la observación de bacterias u organismos microbiológicos en el microscopio en la cual
utilizamos agua empozada o agua del alcantarillado.

Para el cual utilizamos el microscopio, porta objetos, cubre objetos y lo principal que fue el agua
con desechos.

El microscopio es una herramienta de gran importancia para la observación e identificación de

los microorganismos. Debemos distinguir entre las técnicas para observación de
microorganismos vivos y las preparaciones para tinción. Las tinciones ofrecen una información
adicional a la simple observación de la morfología, ya que ponen de manifiesto características
de la pared celular o la existencia de estructuras especiales, como las esporas bacterianas.

Para observar bacterias al microscopio se utiliza el objetivo de inmersión (máximo aumento).

Para ello se coloca sobre la preparación una gota de aceite de inmersión. Para enfocar con este
objetivo, colocar la preparación con el aceite en la platina del microscopio, aproximarla con el
tornillo micrométrico mirando desde fuera, hasta que el objetivo toque el aceite.

Posteriormente, ya mirando por el ocular, hacer un enfoque grosero con ayuda del mismo
tornillo. Cuando se aprecie una imagen más o menos clara, ajustar el enfoque con el tornillo
micrométrico.
Desarrollo:

I.- EL MICROSCOPIO:

El microscopio es un instrumento óptico que amplifica la imagen de un objeto pequeño. Es el

instrumento que más se usa en los laboratorios que estudian los microorganismos. Mediante un
sistema de lentes y fuentes de iluminación se puede hacer visible un objeto microscópico. Los
microscopios pueden aumentar de 100 a cientos de miles de veces el tamaño original.

Actualmente existen dos tipos de microscopios: el óptico y el electrónico. En el microscopio

óptico el aumento del objeto se consigue usando un sistema de lentes que manipula el paso de
los rayos de luz entre el objeto y los ojos. El microscopio electrónico utiliza un rayo de electrones
controlado por un campo magnético.

II.- MICROSCOPIO OPTICO:

Los microscopios de este tipo generalmente producen un aumento de 1000 veces el tamaño
original. El límite lo tienen en unas 2000 veces.

Las lentes de un microscopio óptico son el condensador, el objetivo y el ocular. La luz que entra
en el sistema debe enfocarse sobre la preparación y para esto se utiliza el condensador.
Elevando o bajando el condensador puede alterarse el plano del foco de luz y elegirse una
posición que consiga el foco preciso. El objetivo es la lente situada cerca del objeto que se
observa. El aumento primario del objeto es producido por la lente objetivo y la imagen se
transmite al ocular, donde se realiza el aumento final.

Los microscopios que se usan normalmente en microbiología están equipados con tres
objetivos: bajo poder, alto poder y objetivo de inmersión. Estos objetivos están montados sobre
una pieza que se llama revolver que puede rotarse para alinear el objetivo deseado con el
condensador.

La imagen formada por el objetivo es finalmente aumentada por el ocular. El aumento total de
un microscopio compuesto es el producto del aumento de su objetivo y de su ocular. El
microscopio compuesto es capaz de conseguir aumentos considerablemente mayores que el
microscopio construido con una sola lente. Este último, llamado microscopio simple, se usa
principalmente como lupas y cristales de aumento.

Además del aumento, una propiedad importante de un microscopio es su poder resolutivo; esto
es la capacidad de mostrar distintos y separados dos puntos muy cercanos. Cuanto mayor sea el
poder resolutivo, mayor será la definición de un objeto. Los microscopios de gran poder
resolutivo son especialmente buenos para ver pequeñas estructuras. El poder resolutivo de un
microscopio compuesto depende de la longitud de onda utilizada y de una propiedad óptica de
la lente conocida como apertura numérica. Como los microscopios ópticos utilizan luz visible, la
longitud de onda está fijada y es por lo que la resolución de un objeto es función de la apertura
numérica; cuanto mayor sea la apertura, el objeto resuelto será más pequeño.

Un factor que afecta a la apertura numérica, además de la construcción de la lente, es el medio

a través del cual pasa la luz. Mientras que el objetivo esté separado del objeto por el aire, su
apertura numérica nunca será mayor de 1,0; para conseguir aperturas numéricas mayores que
ésta, el objetivo debe estar inmerso en un líquido de mayor índice de refracción que el aire. A
estos líquidos se les denomina aceites de inmersión que se utilizan con los objetivos de
inmersión obteniendo una apertura numérica entre 1,2 y 1,4. Aun así, al utilizarse la luz visible
(longitud de onda) estos microscopios llegan a tener un poder de resolución de
aproximadamente 0,25 µm, lo que significa que las partículas con un tamaño más pequeño de
0,25 µm no pueden distinguirse unas de otras.

III.- MICROSCOPIO ELECTRONICO:

Los microscopios electrónicos utilizan rayos de electrones en lugar de la luz, lo que les permite
tener un poder de resolución muy elevado. La longitud de onda de los rayos de electrones es de
0,005 - 0,0003 nm, muy corta comparada con la de la luz visible (426 - 750 nm; violeta - rojo). Es
posible con el microscopio electrónico resolver objetos separados por una distancia de 0,003
µm, comparado con los 0,25 µm de uno óptico. Los aumentos pueden llegar a ser de un millón
de veces.

A causa de la naturaleza de este instrumento sólo pueden examinarse objetos muy delgados;
incluso una sola bacteria es demasiado gruesa para ser observada directamente. Por lo que, para
preparar muestras para el microscopio electrónico se necesitan técnicas especiales de cortes
ultra finos. Para seccionar las células primero deben ser fijadas y deshidratadas (etanol o
acetona). Después de la deshidratación, la muestra se incluye en una resina y es aquí donde se
realizan cortes finos con un ultra micrótomo, por lo general equipado con una cuchilla de
diamante. Una sola célula bacteriana puede cortarse en cinco o seis secciones muy finas. Si sólo
tiene que observarse el contorno de un organismo, no son necesarias secciones finas por lo que
se montan células enteras que se recubren de una capa fina de un metal pesado (oro). El rayo
de electrones es dirigido sobre la preparación y los electrones dispersados por el metal pesado
activan una pantalla de observación produciendo una imagen. A la primera técnica se la
denomina Microscopía Electrónica de Transmisión (MET) y a la segunda Microscopía Electrónica
de Barrido (MEB).
IV.- MICROSCOPIA OPTICA:

Además del microscopio de campo claro existen otros microscopios ópticos como son el de
campo oscuro, fluorescencia y contraste de fases.

Microscopio de campo claro: usa como fuente de luz directa bien una bombilla bien la luz solar.
Ya que los microorganismos son transparentes es difícil distinguirlos con este tipo de
microscopía y es por lo que se suelen teñir.

Microscopio de campo oscuro: usa un microscopio óptico equipado con un condensador y

objetivo especial que iluminan los microorganismos en la muestra frente a un fondo oscuro. Este
método se utiliza para visualizar microorganismos vivos sin teñir.

Microscopio de fluorescencia: la muestra se tiñe con una sustancia fluorescente que absorbe la
energía de las ondas cortas de la luz (azul) y emite la luz de longitudes de ondas más largas
(verde). Se utiliza en inmunofluorescencia, técnica en la cual una sustancia fluorescente se une
a un anticuerpo específico de ciertos microorganismos. Si el anticuerpo fluorescente se une al
microorganismo, este microorganismo emite fluorescencia y se puede identificar. Esta técnica
se usa en clínica.

Microscopio de contraste de fases: es un microscopio óptico modificado que permite contrastar

sustancias de diferente grosor o densidad. Mediante un condensador y un objetivo especial se
controla la iluminación de tal manera que vaya en diferentes rutas a través de las distintas partes
de una célula. El resultado es una imagen con diferentes grados de brillo y oscuridad. Con este
método, el material denso aparece brillante, mientras que las partes de la célula que tienen una
densidad cercana al H2O (citoplasma) aparecen oscuras. Se utiliza para visualizar estructuras
celulares sin necesidad de usar colorantes o matar microorganismos.

V.- OBSERVACION DE LOS MICROORGANISMOS:

Todos los microorganismos, excepto los virus, pueden ser observados mediante microscopios
ópticos, por lo que nos vamos a limitar a describir las técnicas más comúnmente usadas para
realizar preparaciones para microscopios ópticos.

Preparación en fresco: para poder observar la movilidad de un microorganismo es preciso que

no esté fijado. Consiste en suspender una gota, tomada directamente de la muestra, sobre un
portaobjetos y cubriéndola, sin formar burbujas de aire, con un portaobjetos se observa al
microscopio de contraste de fases.

Técnicas de tinción:

En general, el proceso seguido en todas las tinciones conlleva las siguientes etapas: extensión,
fijación, tratamiento con colorantes y observación.

1.- Extensión: se realiza sobre un portaobjetos que ha de estar totalmente limpio. Si la muestra
es líquida se hace directamente y, si es sólida, hay que resuspenderla previamente en una gota
de H2O.
2.- Fijación: tiene por objeto adherir la muestra al portaobjetos y desnaturalizar las proteínas
para facilitar la acción del colorante. Normalmente se realiza con calor, pasando la muestra
repetidamente a 10 cm de la llama del mechero.

3.- Tinción: se realiza añadiendo los colorantes sobre los microorganismos sometidos a los
procesos anteriores. Puede ser de varios tipos:

Negativa: Los colorantes no tiñen el microorganismo, sino el entorno, aumentando de este

modo su contraste. La muestra se extiende sobre una gota del colorante (nigrosina).

Simple: Se utiliza un solo colorante que puede ser de cualquier tipo. Al igual que la tinción
negativa, sólo nos permite observar la forma, el tamaño y el tipo de agrupación de las células.

Diferencial: Intervienen dos o más colorantes y cada uno diferencia una estructura. El colorante
que se usa en segundo lugar es de color diferente al del primero, denominándose colorante de
contraste.

Bueno en nuestro caso utilizamos agua estancada de un desagüe en la cual extrajimos un poco
de esta sustancia y la pusimos en el portaobjetos y próximamente la cubrimos con el cubre
objetos, después nos dirigimos hacia el microscopio para poder observarlas y estos fueron
nuestros resultados:
Como podemos observar en las imágenes los puntos en formas de gotitas de agua son las
bacterias encontradas en este tipo de agua estancada del alcantarillado.
Conclusiones:

Para concluir el tema la observación de estos microorganismos fue un antecedente muy

interesante en la cual me gusto observar por primera vez organismos como se podían mover en
esa pequeña gota de agua en la cual fue un experimento muy divertido y también decir que la
observación de estas especies es importante por el cual podemos observar los peligro que puede
haber en nuestro diferentes tipos de agua.