Republica Bolivariana de Venezuela

Ministerio del Poder Popular Para la E ducacion Universitarea

Universidad Nacional Experimental “Romulo Gallegos”

Area de Ing. Arquitectura y Tecnologia Programas de Ing. Civil e Hidrocarburo

San Juan de los Morros, Edo. Guarico.

Asignatura: Mecanica de suelos.

Profesor: Integrante:

Ing. Hernando Rodriguez Sherley Diaz C.I: 25.573.916

Julio, 2019
 DENSIDAD DE CAMPO MÉTODO DENSÍMETRO NUCLEAR

Densidad de campo método del densímetro nuclear índice ASTM d 2922 y d 3017

OBJETIVO

Determinar la Humedad y la Densidad Seca de los suelos en el campo mediante métodos

nucleares, sin tener que recurrir a métodos de intervención física.

DESCRIPCIÓN DEL MÉTODO

Como se ha mencionado anteriormente, el presente método nos permite determinar

rápidamente y con precisión la Densidad Seca y la Humedad de los suelos en el campo, sin
tener que recurrir a métodos de intervención física, tales como la extracción de testigos. El
equipo utilizado para este ensayo, determina la Densidad mediante la trasmisión, directa o
retro dispersada, de los rayos gamma, cuantificando el número de fotones emitidos por una
fuente de Cesio- 137. Los detectores ubicados en la base del medidor detectan los rayos
gamma y un microprocesador convierte los conteos en una medida de Densidad.

Por el contrario, para determinar la Humedad de los suelos y materiales semejantes, se

utiliza el principio de termalización de neutrones. El Hidrógeno (agua) en el material frena
los neutrones emitidos por una fuente construida de Americio 241: Berilio. La detección de
los neutrones frenados se hace mediante detectores de Helio-3 situados en la base de la
sonda. La utilización de instrumentos nucleares para la determinación de densidades y
humedades ha sido aprobada por la ASTM (American Society of Testing and Materials).
Funcionamiento del Densímetro El Densímetro tiene dos modos de operación: el modo de
Transmisión Directa (la varilla con la fuente perforando el material) y el modo de
Retrodispersión (la varilla se encuentra próxima a la fuente, pero no perforando el
material). Estos dos modos se explican más ampliamente a continuación:

En el modo de Transmisión Directa, la varilla con la fuente de Cesio-173 se introduce en

el terreno hasta la profundidad deseada. Los detectores en la base de la sonda cuantifican la
radiación emitida por la varilla con la fuente. Para llegar a los detectores, los fotones
gamma deben primero pasar a través del material, donde chocan con los electrones ahí
presentes. Una alta densidad del material supone un alto número de choques
correspondientes, lo que reduce el número de fotones que llegan a los detectores, es decir,
mientras menor sea de Número de Fotones que alcancen a los detectores, mayor será la
Densidad del material.
 Transmisión Directa En el modo de Retrodispersión, los fotones gamma deben ser
dispersados (o reflejados) por lo menos una vez, antes de alcanzar a los detectores en la
sonda. Para efectuar este proceso, se coloca la varilla de manera que, la fuente y los
detectores se encuentran en el mismo plano, denominado Posición de Retrodispersión. Los
fototes provenientes de la fuente penetran en el material, y los que se dispersan son
medidos por los detectores. A fin de evitar que los fotones puedan acceder a los detectores
directamente, sin ser dispersados por el material, la sonda dispone de blindajes entre la
fuente y los detectores.

RETRODISPERSIÓN

Operación del Densímetro El teclado del equipo tiene 10 teclas, 8 que corresponden a
funciones y las teclas <ENCENDER/SI> y <APAGAR/NO>. La sonda dispone de un
“beeper”, que suena cada ves que se registra una tecla presionada. Siempre que no se
produzac dichos sonido, signufica que la máquina no registró la tecla presionada y, por lo
tanto, se debe presionar otra vez. Las teclas <ENCENDER/SI> y <APAGAR/NO> se usan
para responder presguntas específicas que se ven en la pantalla, y para activar y desactivar
la sonda. Las flechas hacia arriba y hacia abajo permiten el desplazamiento por las listas de
funciones visualizadas en la pantalla.

Encender si MA PR ESTANDAR especial apagar no periodo profund comenzar enter

teclado del equipo

A continuación se muestra una lista detallada de las teclas específicas y las funciones
correspondientes: Para iniciar una medición, o para finalizar la introducción de datos o una
respuesta COMENZAR/ENTER Para acceder a las funciones especiales ESPECIAL Para
introducir la profundidad de la varilla con la fuente PROFUND Para entrar en el modo de
Conteo Estándar ESTANDAR Para cambiar el tiempo de conteo PERIODO Para habilitar
un valor Proctor o MarshallMA/PR Para desplazarse hacia abajo Para desplazarse hacia
arriba Desactiva la sonda y sirve como respuesta negativa a la indicaciones en la pantalla
APAGAR/NO Activa la sonda y sirve como respuesta afirmativa a la indicaciones en la
pantalla ENCENDER/SI DESCRIPCIÓNTECLAS Activación del Densímetro  La sonda
utiliza baterías recargables de Níquel- Cadmio como fuente de alimentación. Cuando se
activa la sonda, la pantalla del panel de control visualiza varios caracteres de prueba, y
luego pasa inmediatamente al proceso de auto prueba.  Para activar la sonda, presionar la
tecla <ENCENDER>. La prueba en la “LCD” (pantalla de cristal líquido) será:

 Una vez completada la auto prueba, la cual dura 300 segundos, el instrumento pasa a
modo Preparado. En este estado se puede acceder a cualquiera de las funciones de la sonda.
La pantalla para el modo Preparado muestra: La primera línea en la pantalla indica el
tiempo de conteo actual. La segunda línea indica la profundidad seleccionada para la varilla
con la fuente.

Equipo  Densímetro, un instrumento portátil que contiene todos los módulos electrónicos,
conjuntos de baterías recargables, detectores y fuentes radiactivas.  Bloque de Referencia,
proporciona un material que sirve de referencia constante, que sirve para efectuar los
ajustes en la sonda, los cuales son necesarios para compensar la desintegración progresiva
de la fuente.  Placa para Alisado/Guía de la Varilla de Perforación, se utiliza para preparar
el terreno de emplazamiento, o la porción de suelo sobre la cual se va colocar el equipo, y
para guiar la varilla al hacer la perforación.

 Varilla de Perforación, se utiliza para preparar un orificio cuando se va efectuar una

medición de Transmisión Directa.  Cargadores/Adaptadores, uno para CC (12 VCC) y
otro para CA (115/230 VCA 50/60 Hz).  Batería de Repuesto.  Caja de Transporte. 
Extractor.

PARTES Y ACCESORIOS, DENSÍMETRO MODELO 3430

TÉCNICA DEL ENSAYO

Preparación del Terreno de Emplazamiento Colocación del Densímetro  Puesto que las
condiciones de la superficie del suelo pueden afectar mucho a la precisión de la medición,
es importante localizar un lugar plano, sin agujeros grandes, grietas o restos de cualquier
índole.  Allanar la superficie del suelo moviendo hacia delante y hacia atrás la placa para
respaldo. Retirar dicha placa y rellenar todos los agujeros y desigualdades con arena fina,
polvo de cemento o de cal, aplanándolos para que sean bien nivelados.  Colocar la placa
para respaldo de nuevo en el mismo lugar, y presionar hasta conseguir que la superficie esté
plana.

 En el caso de las mediciones de Transmisión Directa, colocar la varilla de tal manera que
pase por la herramienta de perforación y luego por una de las guías de la placa.

 Protegerse con el equipo de Seguridad necesario. Sujetar la placa con el pie y golpear con
un martillo el extremo de la varilla de perforación, hasta que esta alcance una profundidad
que sea, por lo menos, 50 mm (2 plg.) que la profundidad necesaria para la medición. 
Para que se coloque el instrumento con la precisión máxima, marque en el suelo el contorno
de la placa de respaldo/guía, antes de retirar la varilla de perforación.
 Retirar la varilla de perforación en línea recta y hacia arriba, y al mismo tiempo, girando
hacia los lados, la herramienta de extracción.  Con cuidado, levantar la placa para
respaldo y colocar la sonda sobre la misma superficie. Insertar la varilla con a fuente en el
orificio creado por la varilla de perforación.  Introducir la varilla con la fuente en el
orificio. Liberar entonces el disparador y bloquear la varilla con la fuente en la posición
correcta. La indicación de que se ha logrado esta posición es un “click” producido por el
elemento de fijación.

 En el caso de Superficies de Hormigón Asfáltico, la preparación del emplazamiento no

requiere el uso de la placa para respaldo, siguiéndose entonces el siguiente procedimiento:
 Buscar una zona igualada y plana del hormigón asfáltico. En el caso de mezclas abiertas,
se puede rellenar todos los agujeros con arena o con polvo de cemento, procurando que el
hormigón asfáltico quede siempre al descubierto. La parte de la base de la sonda debe
apoyarse sobre el hormigón asfáltico, no sobre el material de relleno.

 La sonda debe mantenerse estable y firme. Si no es posible lograr estas condiciones, se

debe buscar otro emplazamiento. En el caso de hacer una medición alrededor de un testigo,
se puede mover la sonda hasta estar a unas pulgadas del testigo, para que quede firme.

Medición de los Parámetros de Densidad Proctor  Colocar la sonda sobre el

emplazamiento. Liberar el mango y empujarlo hacia abajo hasta alcanzar la posición
correcta. Verificar que la clavija se enganche con la señal en la varilla indicadora. 
Presionar <COMENZAR> Una vez expirado el tiempo de conteo, la pantalla mostrará:

 Densidad Húmeda  Densidad Seca y Porcentaje % de Proctor  Humedad y % de

Humedad  Volumen de Vacíos y Relación de Vacíos Medición de los Parámetros de
Densidad Marshall (Asfaltos)  Colocar la sonda sobre el emplazamiento. Liberar el mango
y empujarlo hasta alcanzar la posición de Retrodispersión. Verificar que la clavija se
enganche con la señal en la varilla indicadora.  Presionar <COMENZAR> Una vez
expirado el tiempo de conteo, la pantalla mostrará:

 Densidad Húmeda y % de Marshall  Densidad Seca  Humedad y % de Humedad  %

de Vacíos y % de Marshall.

CÁLCULOS
 Como hemos visto los datos de Densidad Seca y % de Humedad se obtienen
directamente del aparato de medición.  Adicionalmente debe realizarse un ensayo de
Compactación Proctor, con una muestra del suelo ensayado, en el laboratorio, para poder
determinar el parámetro de grado de Compactación del suelo.

DETERMINACIÓN DE LA HUMEDAD Y DENSIDAD DE UN SUELO POR

ISÓTOPOS RADIOACTIVOS. TRAMO EXPERIMENTAL DE CARRETERA EN
LA RADIAL CN-II

Se enumeran en el presente artículo los principios en que se basan los modernos métodos
de la determinación de la densidad y contenido de humedad de un suelo, mediante isótopos
radioactivos. Se hace una somera decripción del equipo de la Nuclear Chicago Corporation,
recientemente adquirido por el Laboratorio del Transporte y Mecánica del Suelo, y de los
ensayos comparativos efectuados en el tramo experimental de carretera de la CN-II de
Madrid a Barcelona, entre los aparatos nucleares y los métodos geotécnicos clásicos,
haciéndose un balance de las ventajas e inconvenientes de unos y otros.

TÉCNICAS ISOTÓPICAS.

Las técnicas que emplean isótopos (generalmente los radiactivos) permiten la detección
de moléculas en cantidades muy inferiores a las que se pueden detectar mediante métodos
químicos de análisis. A modo de orientación: los análisis químicos no bajan de 10−7 mol,
mientras que la radiactividad detecta 10−12 mol sin problemas y puede bajar aún más.

Recordatorio:

¡Atención! estamos alcanzando la escala molecular: 1 zmol (un zeptomol) son sólo 602
moléculas, y 1 ymol (un yoctomol) no existe, es menos de una molécula).

ISÓTOPOS

Isótopos = mismo lugar (en la tabla periódica). Son formas de un mismo elemento químico
con distinta masa atómica (diferente número de neutrones en el núcleo). Químicamente son
indistinguibles.
La mayor parte de los isótopos utilizados como marcadores en bioquímica se producen
artificialmente, en reactores nucleares. Los compuestos simples obtenidos se transforman
luego en productos bioquímicos mediante síntesis química y enzimática.

ISÓTOPOS ESTABLES

Se usan con menor frecuencia que los isótopos radiactivos (pues su detección es más
difícil).

Aplicaciones de los isótopos estables:

 Aumento de la densidad de la molécula, que permite la consiguiente separación.

Ejemplo: experimento de Meselson y Stahl para demostrar el carácter
semiconservador de la replicación: DNA marcado con 15N y separado por
ultracentrifugación isopícnica.
 Estudios de estructura y mecanismos de reacción mediante RMN. Ejemplo
principal: 13C.
 Trazador cuando no existe isótopo radiactivo para ese elemento. Ejemplo: 18O, 15N.

Su detección se lleva a cabo mediante espectrometría de masas.

ISÓTOPOS RADIACTIVOS

También llamados radionucleidos o radionúclidos. Se desintegran espontáneamente

(mediante una reacción nuclear, con emisión de partículas o de radiación y transformación
en otro elemento). La estabilidad de un isótopo depende de la proporción entre su número
de protones y neutrones.

Los compuestos marcados radiactivamente se llaman “trazadores”, porque permiten al

investigador seguir las transformaciones químicas o bioquímicas que se producen, en
presencia de un enorme exceso de material no radiactivo.

NATURALEZA DE LA DESINTEGRACIÓN RADIACTIVA

TIPO DE EMISIÓN
 El núcleo de un elemento inestable se desintegra dando lugar a uno o varios tipos de
radiación o partícula:

 α (núcleos de He, 42He, p2n2),

 β (electrones),
 γ (radiación electromagnética de alta energía).

La radiación siempre procede del núcleo. En bioquímica son útiles los emisores de β y
los de γ.

RADIACIÓN BETA:

se trata de electrones procedentes del núcleo ( n → p + e− + ν ), con energía diversa

dentro de una escala continua, desde cero hasta un valor máximo característico de cada
isótopo. Al atravesar la materia provoca ionización o excitación.

RADIACIÓN GAMMA:

Es radiación electromagnética (fotones) de alta energía. Se origina en el núcleo, a

diferencia de los rayos X, cuyo origen está en los electrones externos.

Un núcleo puede quedar en un estado energético excitado como consecuencia de una

reacción nuclear, incluyendo las desintegraciones α y β. Al regresar espontáneamente al
estado basal emite el exceso de energía en forma de rayo γ. Como los niveles energéticos
son discretos, los valores posibles de energía de la radiación gamma también lo son (no son
continuos como en la radiación beta).

Al no tener carga eléctrica, la radiación gamma no provoca ionización en la materia que

atraviesa, pero puede expulsar electrones de su órbita o, al chocar con un núcleo, producir
un par electrón-positrón; estos electrones secundarios en ambos casos son similares a la
radiación beta

* 1 MeV = 106 eV ; 1 eV (electrón-voltio) = energía cinética adquirida por un electrón

como consecuencia de ser sometido a un campo eléctrico creado por una diferencia de
potencial de un voltio, o trabajo necesario para trasladar un electrón entre dos puntos cuya
diferencia de potencial es de un voltio. 1 MeV = 1.602 · 10−13 J.

LEY DE LA DESINTEGRACIÓN RADIACTIVA

La radiactividad es un fenómeno aleatorio. La probabilidad de que un determinado núcleo
atómico se desintegre no se ve afectada por el número de fenómenos de desintegración que
se han producido previamente ni por la interacción con otros núcleos radiactivos. Se trata
más bien de una propiedad intrínseca de ese núcleo.

Como consecuencia, el número de desintegraciones que se producen en un determinado

intervalo de tiempo sólo depende del número de átomos presentes. Por ello, la
desintegración radiactiva es un proceso con cinética de orden 1, descrito por la ecuación
siguiente:

(la velocidad de disminución del número de núcleos es

proporcional al número existente)
λ = “constante de desintegración”, característica de cada isótopo
(y de cada modo de desintegración, si tuviese varios).
Sus unidades son (tiempo)−1
(el número de núcleos desciende exponencialmente con el tiempo)
integrando:
N0 = número de átomos existentes a tiempo cero
N = N0 e−λ t
N = número de átomos existentes a tiempo t
La fracción de núcleos que se desintegra en un determinado
intervalo de tiempo es constante.
consecuencias:
El número de núcleos que quedan sin desintegrar disminuye
exponencialmente.

¿Cuánto tarda una muestra en reducirse a la mitad? = ¿Cuánto tarda en desintegrarse la

mitad de los átomos de una muestra?

N0/2 = N0 e−λ t ; t = ln(½) / −λ = ln2 / λ = 0.693 / λ = t½, τ½ (tau griega) o T ,“periodo de

semidesintegración” (a veces llamado “semivida”, pero no se debe llamar “vida media”,
que es el promedio de vida de un átomo)

Cada vez que transcurre t½, se han desintegrado la mitad de los núcleos que quedaban:
 Es importante considerar el tiempo de semidesintegración del isótopo elegido para
realizar un experimento, porque nos indica si tendremos suficiente actividad para medirlo y
si esta actividad cambiará significativamente durante el experimento y la medida.

UNIDADES DE RADIACTIVIDAD

La emisión de radiactividad se cuantifica como número de desintegraciones por segundo

(dps) o por minuto (dpm). La unidad más habitual es el curio (abreviado Ci), que se define
como el número de desintegraciones por segundo que experimenta un gramo de radio, y
corresponde a 3.70 · 1010 dps = 2.22 · 1012 dpm

Las cantidades manejadas en las aplicaciones biológicas son muy inferiores, por lo que
se usan el milicurio y microcurio (1 μCi = 2.22 · 106 dpm).

La unidad de radiactividad en el Sistema Internacional es el becquerel (o becquerelio), 1

Bq = 1 dps; por tanto, 1 Ci = 3.70 · 1010 Bq.

Es bastante difícil detectar todas las desintegraciones, por lo que en la práctica se

manejan cuentas por minuto (cpm), que se relacionan con las dpm a través de
la eficiencia del recuento.

La actividad específica se define como la radiactividad por unidad de masa o de

cantidad de materia (mol). Indica la abundancia de un isótopo con respecto al total de
átomos de ese elemento.
MEDIDA DE LA RADIACTIVIDAD

Medida de la radiactividad beta mediante ionización de gases

Contador de Geiger-Müller

Una partícula beta que pasa a través de un gas puede desalojar un electrón de uno de los
átomos del gas, con lo que se produce un par iónico (el electrón desalojado y el catión
resultante). A menudo la partícula β tiene suficiente energía para seguir produciendo
sucesivas ionizaciones. En un detector de ionización, el gas está dentro de una cámara con
dos electrodos cargados, que atraen a los electrones secundarios y a los cationes,
registrándose una pequeña corriente eléctrica cada vez que se produce una desintegración.

Dependiendo de la diferencia de potencial que se establece entre los electrodos, el

detector trabaja en condiciones de respuesta distintas, lo que da lugar a diversos tipos de
detectores (no detallados aquí). Uno de ellos es el contador de Geiger-Müller, que resulta
muy eficiente para detectar emisores beta de alta energía, como el 32P, pero poco para los
de baja energía, como el 3H.

Para la detección por ionización, las muestras deben ser sólidas a fin de que puedan
ponerse en contacto con la ventana del detector.
MEDIDA DE LA RADIACTIVIDAD BETA MEDIANTE CENTELLEO LÍQUIDO

Contador de centelleo

Las razones de que la eficiencia sea reducida son: que la partículas beta no alcancen al
detector, que se emitan en direcciones que no impactan con él, o que su energía no sea
necesaria para provocar la ionización del gas. Una forma de intentar solventar esta
limitación es que la muestra esté contenida en el interior del detector; esto se consigue
disolviendo o suspendiendo la muestra en un líquido que contiene una o más sustancias
fluorescentes. Éstas, al recibir la radiación beta, emiten fluorescencia, que puede ser luego
detectada por un mecanismo óptico (un tubo fotomultiplicador).

Algunos componentes frecuentes de un líquido de centelleo:

(Se les suele añadir metanol, dimetilsulfóxido, etilenglicol... para aumentar la polaridad y
facilitar la disolución de muestras biológicas)

Compuestos fluorescentes (“centelleadores”):

¿Cómo una desintegración conduce a la producción de fluorescencia?

 1. Las partículas beta que abandonan la muestra y entran en el disolvente ceden su
energía a las moléculas de éste.
2. Las moléculas de disolvente pasan a un estado energético excitado.
3. Al regresar al estado basal emiten un fotón de luz, de baja longitud de onda.
4. Ese fotón es absorbido a su vez por el fluoróforo.
5. Unos nanosegundos después, el fluoróforo recupera su estado basal emitiendo un
fotón de longitud de onda mayor (fenómeno de fluorescencia).
6. Si este fotón es detectable por un tubo fotomultiplicador, se detecta la luz y se
convierte en un pequeño pulso de corriente.
7. Si la longitud de onda del fotón no puede ser detectada, es preciso un segundo
fluoróforo que absorba esa radiación y emita otra de aún mayor longitud de onda, a
la que el fotomultiplicador sí sea sensible.

Características deseables en un líquido de centelleo:

 Máxima solubilidad de las muestras.

 Eficiencia elevada y reproducible.
 Baja señal de fondo.
 Poca difusión a través de los viales.
 Toxicidad mínima.
 Biodegradabilidad.
 Alto punto de inflamación (poco inflamable).
 Baja fotoluminiscencia (activación del centelleador por radiación UV ambiental).
 Baja quimioluminiscencia (producción de luz como resultado de una reacción).

RUIDO DE FONDO

La señal, para ser detectable y fiable, debe ser suficientemente superior al ruido de
fondo del contador. Las causas de éste son diversas: limitaciones del fotomultiplicador y la
electrónica del sistema detector, radiación ambiental, presencia de 40K en el vidrio,
centelleo por la luz ambiental o por los rayos cósmicos (radiación de Cerenkov).
EXTINCIÓN (“QUENCHING”)

Se denomina así a la reducción de la eficiencia en la transferencia de energía desde las

partículas beta hasta el fotomultiplicador, en cualquier etapa y por cualquier medio.
Disminuye, por tanto, la señal detectada.

EXTINCIÓN QUÍMICA

Componentes de la muestra que absorban parte de la energía de las partículas beta sin
emitir fotones o que absorban los fotones sin emitir fluorescencia. Ejemplos: agua, ácidos,
sales, oxígeno disuelto.

EXTINCIÓN POR EL COLOR

Componentes de la muestra que absorben luz en la longitud de onda emitida por el

fluoróforo secundario: disminuyen los pulsos de luz que llegan al detector. El “color” puede
ser visible o ultravioleta cercano.

EXTINCIÓN POR DILUCIÓN

El disolvente y los fluoróforos resultan diluidos por la adición de muestra, lo que

disminuye la probabilidad de un centelleo. Especialmente importante con muestras líquidas.

DETECCIÓN SIMULTÁNEA DE DOS TRAZADORES RADIACTIVOS

La magnitud del pulso de corriente que se produce como resultado de la desintegración

es proporcional a la energía de la partícula beta emitida. Como consecuencia, se pueden
detectar simultáneamente dos trazadores coexistentes en la muestra. El contador de
radiactividad permite definir las “ventanas”, canales o intervalos de voltaje en los que
deben contarse las señales, correspondientes (tras una calibración adecuada) a “ventanas”
de energía de las partículas beta emitidas y, por tanto, a sendos isótopos. La definición de
estas ventanas debe ser cuidadosa, pues normalmente los espectros de energía de ambos
isótopos se solapan.
Ejemplo:

Cálculos para la muestra problema:

1) cpm de 3H en el canal B = 500 × 0.0015 = 0.75 ≈ 0 Verificación:

Importante: el canal B se ha elegido de modo que no hay cuentas de
tritio en él. cpm totales en
Por tanto, todas las cuentas del canal B son de carbono: canal B =
2) cpm de 14C en el canal B = 800 - 0.75 ≈ 800 = 0 + 800 = 800

La muestra problema repartirá sus cuentas de 14C de la misma forma

que el patrón (esto está determinado por la forma del espectro
de 14C): cpm totales en
3) cpm de 14C en el canal A = 800 × 0.416 = 333 canal A =
= 333 + 167 = 500
El resto de cuentas del canal A deben ser de tritio:
4) cpm de 3H en el canal A = 500 - 333 = 167
Sumando:
cpm totales =
5) cpm totales de 3H = 167 + 0.75 = 167
= 167+1133 =
6) cpm totales de 14C = 333 + 800 = 1133
= 1300 = 500+800
7) relación 3H / 14C (en cpm) = 167 / 1133 = 0.147

Continuando con el ejemplo: si hemos usado el 3H para marcar leucina, con una
actividad específica de 5 Ci/mmol, y el 14C para marcar tirosina, con una actividad de 4
Ci/mmol, y conocemos la eficiencia de nuestro contador de radiactividad, 30% para el 3H y
90% para el 14C, podremos calcular la proporción molar de ambos aminoácidos en la
muestra problema:

556 dpm / (5 × 2.22 · 1012 dpm/mmol) Leu / Tyr =

3
167 / 0.30 = 556 dpm H = = 5.0 / 14.1 =
= 5.0 · 10−11 mmol Leu 0.354
 1259 dpm / (4 × 2.22 ·
1133 / 0.90 = 1259
1012 dpm/mmol) =
dpm 14C
= 1.41 · 10−10 mmol Tyr

556 dpm / 5 Ci/mmol

o, directamente: Leu / Tyr = = 0.353
1259 dpm / 4 Ci/mmol

PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

Lo ideal es que esté disuelta en el líquido de centelleo, para maximizar el contacto con el
disolvente y así la eficiencia. Si no es posible, al menos que forme una suspensión. En
muchos casos, la muestra insoluble se recoge en un filtro (papel, fibra de vidrio o
nitrocelulosa), se seca (para eliminar la extinción que causaría el agua) y se introduce el
filtro en el líquido de centelleo.

MEDIDA DE LA RADIACTIVIDAD GAMMA

Los rayos γ se pueden detectar por centelleo sólido. Gracias a su mayor energía y poder
de penetración, no es tan crítico el contacto estrecho entre muestra y centelleador, por lo
que éste puede ser sólido y externo a la muestra; suele ser un gran cristal de yoduro sódico
con trazas de talio, que rodea el compartimento donde se introducirá la muestra.

Los rayos γ al ir atravesando el cristal de NaI producen electrones (β) que, a su vez,
excitan átomos adyacentes del cristal, terminando por producirse una fluorescencia
(fotones, hν) que es detectada por un tubo fotomultiplicador.

Al igual que en el centelleo líquido, se pueden hacer experimentos de marcaje doble.

Una de las aplicaciones más frecuentes en bioquímica del marcado con trazadores
gamma es la yodación de proteínas con 125I (su aplicación se estudia en el
radioinmunoensayo).
AUTORRADIOGRAFÍA

Se trata de un método que no sólo detecta la radiactividad, sino que permite un análisis
espacial: en qué zonas de la muestra se localiza el trazador. Se aplica a muestras de
organismos completos, órganos, tejidos, cortes histológicos, células, e incluso moléculas,
así como a placas de cromatografía plana o de electroforesis. Se requiere un contacto
directo de la muestra con el componente detector, que es una emulsión fotográfica
(habitualmente en forma de una película fotográfica del tipo empleado para radiografía). La
radiación emitida como consecuencia de la desintegración de los isótopos radiactivos activa
los granos de haluro de plata haciéndolos susceptibles para reducirse a plata metálica
durante el revelado fotográfico, sólo en los puntos de la emulsión situados sobre el punto
donde se ha producido la desintegración. Tras fijar la foto, los resultados se observan a
simple vista o al microscopio, dependiendo de la escala de la muestra.

Una película fotográfica consta de una suspensión en gelatina de cristales de haluro de

plata. La exposición de esos cristales a la luz o a la radiación los activa, de forma que
diversos agentes reductores (reveladores) son capaces de convertir la Ag+ en Ag metálica
(puntos de color oscuro). En ausencia de tal activación, el haluro es resistente a la
reducción química.

La autorradiografía resultante proporciona información sobre la distribución espacial del

material radiactivo y sobre su cantidad (a través de la intensidad de la señal).

El desarrollo de la autorradiografía requiere generalmente un tiempo prolongado (varias

horas o días), dependiendo de la cantidad de radiactividad contenida en la muestra y de la
energía propia del isótopo. Se realiza introduciendo muestra y película dentro de un
contenedor metálico cerrado (“cassette”) y con frecuencia en un congelador a −80°C, pues
a baja temperatura la energía de activación del haluro de plata es menor.

La detectabilidad se puede mejorar empleando pantallas intensificadoras, láminas que

contienen un compuesto fosforescente que al recibir la radiación beta emite varios fotones;
de ese modo se amplifica la señal. Puesto que los fotones tienen menor energía que la
radiación beta, es importante usar baja temperatura, así como una película cuyo espectro de
respuesta se adecue a esas energías. La película se sitúa entre la muestra y la pantalla
intensificadora. Las partículas beta, en consecuencia, deben atravesar la película, por lo que
las pantallas intensificadoras clásicas sólo sirven para 32P y 125I, pero no para 3H, 14C, 35S
o 33P, que emiten radiación beta menos energética.

Actualmente existen instrumentos capaces de detectar el patrón bidimensional de

radiactividad directamente, sin necesidad de la película fotográfica. Se emplean en especial
con placas de cromatografía, geles de electroforesis o membranas de transferencia Western,
Southern o Northern. (Véase en la figura anterior el ejemplo de imagen del tiroides, cuya
coloración indica la intensidad de la señal.)

ALGUNAS APLICACIONES

Las aplicaciones de los trazadores radiactivos en bioquímica y biología molecular son

innumerables. De forma ilustrativa, mencionaremos algunas a continuación.

Dependiendo del tiempo de exposición del sistema biológico al isótopo radiactivo, las
aplicaciones se pueden clasificar así:

MARCAJE DE EQUILIBRIO

La exposición es prolongada, de modo que cada especie molecular alcanza una

radiactividad específica constante.

MARCAJE DE PULSO

Se administra el trazador durante un tiempo corto con respecto a la duración del

proceso estudiado, analizando luego qué compuestos resultan marcados (aquellos
que derivan biosintéticamente de forma inmediata del suministrado).
MARCAJE DE PULSO Y CAZA

Se administra el trazador durante un tiempo corto y luego se sustituye por el mismo

compuesto no marcado, lo que permite seguir la evolución del marcaje a lo largo de
las rutas metabólicas a diversos tiempos.

De forma general, posibles usos de los isótopos radiactivos:

 Para detectar materiales en cantidades demasiado bajas para los ensayos químicos.
 Para distinguir moléculas idénticas que se encuentran en distintas localizaciones
químicas.
 Para analizar mezclas demasiado complejas para los análisis químicos
convencionales.
 Para demostrar la participación en una reacción en la que los productos no se
puedan distinguir químicamente de los reactivos.

Los radioisótopos se producen naturalmente o artificialmente en reactores

nucleares, ciclotrones, aceleradores de partículas o generadores de radioisótopos. Hay
alrededor de 730 radioisótopos con vidas medias de más de 60 minutos (ver lista de
radioisótopos). Treinta y dos de ellos son radioisótopos primigenios que fueron creados
antes de que se formara la tierra. Al menos otros 60 radioisótopos son detectables en la
naturaleza, ya sea como hijos de radioisótopos primigenios o como radioisótopos
producidos a través de la producción natural en la Tierra por la radiación cósmica. Más de
2.400 radioisótopos tienen una vida media inferior a 60 minutos. La mayoría de ellos se
producen solo artificialmente y tienen una vida media muy corta. Para la comparación, hay
cerca de 252 isótopos estables. (En teoría, solo 146 de ellos son estables, y se cree que los
otros 106 se desintegran (desintegración alfa o desintegración beta o doble desintegración
beta o captura electrónica o captura de doble electrón)).
Todos los elementos químicos pueden existir como radioisótopos. Incluso el elemento
más ligero, hidrógeno, tiene un conocido radioisótopo, tritio. Los elementos más pesados
que el plomo, y los elementos tecnecio y prometio, existen solo como radioisótopos. (En
teoría, los elementos más pesados que disprosio existen solo como radioisótopos, pero la
vida media de algunos de estos elementos (por ejemplo, oro y platino) es demasiado larga
para encontrarlos).
La exposición no planificada a los radioisótopos tiene generalmente un efecto nocivo
sobre los organismos vivos, incluidos los seres humanos, aunque los bajos niveles de
exposición se producen de forma natural y sin daños. El grado de daño dependerá de la
naturaleza y extensión de la radiación producida, de la cantidad y naturaleza de la
exposición (contacto cercano, inhalación o ingestión) y de las propiedades bioquímicas del
elemento, siendo la consecuencia más habitual el aumento del riesgo de cáncer. Sin
embargo, los radioisótopos con propiedades adecuadas se utilizan en medicina nuclear tanto
para el diagnóstico como para el tratamiento. Un marcador de imágenes hecho con
radioisótopos se llama marcador radioactivo. Un medicamento farmacéutico hecho con
radioisótopos se llama radiofármaco.