QUÍMICA ANALÍTICA II

GUIA DE ESPECTROSCOPÍA

2018
 Espectroscopía UV-visible
Problemas

1.- Completar los espacios en blanco de la siguiente tabla. Cuando sea necesario suponer que el PM
de la especie química que absorbe es 280,00.

A %T  b(cm) M mg/L
a 0,296 2,50 123
b 19,6 1,50 6,91 10-3
c 6,42 103 1,10 7,84 10-5

2.- ¿Cuál será la M de una solución de KMnO4 si se tomaron 5,00 mL, se llevaron a 20,00 mL y al
medir la T se observó un valor del 40,0%? Una solución testigo de KMnO4 cuya concentración
expresada en Mn(II) es 5,50 g/L presenta una T = 30,0%. PA Mn = 55,000.

3.- Calcular la concentración de una solución de Cr2O72- expresada en g % de Cr, si una dilución al
décimo de la misma tiene una transmitancia del 30,0%. Un testigo de Cr2O72- de concentración
1,0010-3 M presenta una T = 45,0%. PA Cr = 52,000.

4.- ¿Cuál será la concentración de una solución de FeSO4 expresada en moles por litro, si una
dilución 3/8 de la misma, realizada empleando un reactivo de color, tiene una T = 20,0%? El testigo
se obtuvo disolviendo 5,6 mg de Fe en de ácido y llevando a volumen final de 10,00 mL con el
reactivo de color, siendo su transmitancia de 40,0%. PA Fe = 56,000.

5.- El Cu2+ forma con el NH3 en exceso un complejo de color azul intenso que muestra un máximo
de absorción a 613 nm.
Cu2+ + 4 NH3 Cu(NH3)42+
Calcular la concentración de cobre en g/L presente en una muestra incógnita, si se empleó el
siguiente protocolo:

Muestra (mL) Testigo 8,00 g/L (mL) NH3 (mL) HAc (mL) T%
5,00 - 2,00 5,00 30,0
- 3,00 2,00 7,00 40,0
- - 2,00 10,00 Ajuste de 100 % T
Nota: Se utiliza HAc para dar la fuerza iónica que asegura la estabilidad del complejo.

6.- Se determina el contenido de fósforo de un mineral mediante espectrofotometría. Para ello se

disuelven 8,3475 g de muestra, se tratan de manera que todo el fósforo se transforme en el
complejo azul de ortofosfato y se completa con agua destilada a volumen final de 100,00 mL. La
transmitancia de la solución resultante es 30,6 %. Si la solución patrón de ortofosfato de sodio, que
se trata de igual manera, y que tiene una concentración final de 2,467 10-4 M dio una transmitancia
de 20,5 %, calcular el contenido de fósforo en la muestra expresado en ppm de Na3PO4.
PM Na3PO4 = 164,00

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7.- Se quiere determinar PO43- en una muestra industrial. Se toman 3,250 g de dicha muestra, se
disuelven y se llevan a volumen final de 250,00 mL. A 200 l de la solución anterior se le agregan
los reactivos correspondientes llegando a un volumen final de 5,00 mL, obteniéndose una T = 42,3
%. Si 100 l de un testigo de fósforo (2,500 mg %) procesado de la misma forma que la muestra
(llevando a volumen final de 5,00 mL) presentó una T = 27,6 %. ¿Qué cantidad de PO43- tenía la
muestra en estudio? Expresar el resultado en ppm de P.

8.- Calcular el % P/P de Ni en una muestra de un derivado de petróleo que se procesó del siguiente
modo: 1,090 g se descompusieron por calcinación húmeda y luego se diluyó a 1000,00 mL en
matraz. Para determinar el Ni, el protocolo de trabajo fue:

Muestra (mL) Testigo Ni 3,00 ppm Ligando (mL) H2O (mL) Absorbancia
(mL) c.s.p.
50,00 - 20,00 100,00 0,555
- 10,00 20,00 100,00 0,260
- - 20,00 100,00 0,010

9.- En la determinación en sangre de HDL-colesterol se precipitan proteínas, por adición de 50,0 L

de solución de Mg2+ a 500 L de suero. El sobrenadante se procesa según el siguiente protocolo:

Muestra (mL) Testigo 200 mg/dL Reactivo color (mL) H2O (mL) Absorbancia
(mL)
0,100 - 2,00 - 0,378
- - 2,00 0,100 0,012
- 0,0200 2,00 0,0800 0,244

Calcule la concentración de HDL colesterol en suero expresando el resultado en g/L.

10.- En la determinación espectrofotométrica de hierro en suero, 1,00 mL de la muestra de suero

se trata con 2,00 mL de un agente reductor y 2,00 mL de ácido para separar el metal de la
transferrina. Luego se precipitan y separan las proteínas por adición de 1,00 mL de ácido
tricloroacético (30%) y posterior centrifugación (considerar que este paso no cambia el volumen
total). El protocolo de trabajo para la reacción de color es el siguiente:

Muestra (mL) Rvo. Color (mL) Testigo Fe (45,00 mg/dL) (mL) Agua Absorbancia
4,00 1,00 - - 0,198
- 1,00 1,00 1,00 0,245
- 1,00 - 4,00 0,012
- 1,00 - 2,00 0,020
Calcular la concentración de hierro en suero expresada en mg/dL.

11.- Para determinar el contenido de principio activo en una cápsula se utiliza espectroscopia
UV-Visible. Se pesan 104,0 mg del contenido de la cápsula (peso total del contenido 500 mg), se
agrega 2,0 mL de NaOH 0,05 M, se filtra en matraz y se enrasa hasta 25,00 mL con NaOH. La
transmitancia medida de esta solución es de 38,0%. El testigo de la droga se prepara disolviendo
10,0 mg de patrón en 25,00 mL de NaOH 0,005 M, luego se toman 10,00 mL de esa solución y
se diluyen a un volumen final de 50,00 mL siendo la transmitancia obtenida de 44,0%. Calcular
el contenido de principio activo en la cápsula.
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12.- Para cuantificar el contenido de piroxicam en un comprimido se utiliza HPLC con detección
UV-visible. Se pesan 12,9 mg de un comprimido que pesa 632,0 mg (peso promedio de 20
comprimidos), se disuelven en 1 mL de HCl en matraz, se enrasa con HCl hasta 5,00 mL, y se
inyectan 25,0 L de esta solución en el cromatógrafo, midiéndose una señal de 30,5 unidades de
mili-absorbancia (mA). De un testigo de piroxicam que contiene 6,80 mg de patrón en 25,00 mL
de HCl se toman 10,00 mL y se diluyen a 50,00 mL con HCl. La señal cromatográfica después de
inyectar 25,0 L de testigo es de 41,0 mA. Calcular el contenido de piroxicam en el comprimido
(en mg).

13.- La calibración de una micropipeta se realiza empleando un colorante orgánico según el

siguiente protocolo: se emite 10 veces el volumen de la micropipeta en un matraz de 100,00 mL y
se enrasa con solvente apropiado. De esta dilución se toma una alícuota y se lee una T = 42,0%.
Calcule el volumen real de la micropipeta expresado en L, si un volumen de 1,00 mL medido con
una pipeta perfectamente calibrada llevada a 100,00 mL en un matraz, dio una T = 45,0%.

14.- Se desea determinar el contenido de Fe(III) en una muestra problema, disponiéndose de un

fotocolorímetro. Para ello, a 3,00 mL de muestra se adicionan 2,00 mL de o-fenantrolina,
obteniéndose una lectura de transmitancia de 7,0 %. Un testigo conteniendo 28,0 ppm de Fe(III) se
procesa del mismo modo que la muestra incógnita, obteniéndose una lectura de transmitancia de
30,5 %. En virtud de los resultados obtenidos, el analista realiza una segunda lectura de la muestra
incógnita, luego de realizar una dilución 1/5 de la misma y de procesar de la misma manera que la
primera muestra y el testigo. La nueva lectura de transmitancia de la muestra es de 51,2 %.
a) Justificar el proceder del analista.
b) Calcular la concentración de la muestra, expresada en mg% de Fe.

15.-
A- Elegir cuál/es de las siguientes aseveraciones es/son correcta/s:
1- Siendo el error fotométrico: (C/C) /  T = 0,434 / T logT
El término  T es:
a) La incertidumbre en la lectura T.
b) Un factor constante para todos los aparatos que depende del desvío de la ley de Beer.
c) La variación de la T al cambiar en una unidad de concentración.

2- El error fotométrico en un instrumento dado es:

a) Dependiente de la naturaleza de la muestra analizada.
b) Dependiente de la concentración de la muestra.

B- ¿Cómo calcula experimentalmente el T?

16.-
a) Calcule la incertidumbre en la lectura de la T, cuando una T = 0,450 produjo un error relativo
en la concentración de 1,50 %.
b) En qué se diferencia la curva de error relativo de concentración (C/C) vs. A de un fotómetro
de baja calidad y lectura analógica, de la de un espectrofotómetro de buena calidad y lectura
digital. ¿A qué se debe dicha diferencia?

17.- Se desea determinar la concentración de Cr3+ en una muestra de agua, mediante formación de
un complejo coloreado. Para la construcción de la curva de calibración, se miden distintos
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volúmenes de solución patrón de 5,00 ppm de Cr3+, se agrega un exceso de complejante y se
completa a volumen final de 15,00 mL. Las absorbancias medidas de las soluciones de testigos son:

Vol. de Cr3+ patrón (mL) 1,00 2,00 3,00 4,00

Absorbancia 0,123 0,246 0,369 0,492

a) Verifique si se cumple la ley de Beer, justifique su respuesta. Calcular el coeficiente de

absortividad molar del complejo.
PM del complejo = 350,00; PA Cr = 53,00; b = 1,00 cm.
b) Una muestra incógnita de 5,00 mL de agua residual de una industria se trata con el complejante
anterior, se diluye a 15,00 mL, obteniéndose una absorbancia de 0,287. Determine la concentración
de Cr3+ en la muestra, expresada en ppm.

18.- Un compuesto coloreado tiene dos bandas de absorción en el visible. La banda A tiene max =
550 nm, correspondiente al verde, con un ancho espectral de 50 nm; la banda B tiene max = 680
nm, correspondiente al rojo, con un ancho espectral de 140 nm. Los siguientes resultados se
obtuvieron mediante un fotómetro de filtro (longitud de paso óptico = 1,00 cm).

Concentración Filtro verde T (%) Concentración Testigo Filtro rojo T (%)

Testigo (M)
(M)

5,00 10-6 63,1 1,00 10-4 77,6

1,00 10-5 42,7 2,50 10-4 53,1
1,50 10-5 31,6 4,00 10-4 36,3
2,00 10-5 26,9 5,00 10-4 28,2

a) Justificar si se cumple o no la ley de Beer para la banda A. Calcule el valor de  para la solución
más diluida.
b) Justificar si se cumple o no la ley de Beer para la banda B. Calcule el valor de  para la solución
más diluida.
c) Justificar que filtro utilizaría para la determinación cuantitativa del compuesto en cuestión.
d) Si dispusiera de un espectrofotómetro con red de difracción como monocromador, justifique a
qué longitud de onda realizaría las mediciones para la determinación cuantitativa del compuesto.
Suponga que la única causa de desvío de la ley de Beer es la falta de monocromaticidad de la luz.

19.- Se desea determinar la concentración de un antibiótico utilizado en el tratamiento de

infecciones urinarias, pues se sospecha que el medicamento está siendo adulterado. Se conoce que
el fármaco presenta un espectro de absorción de las siguientes características:

Pico A:  340 nm; ancho de banda medio: 10 nm;  = 780 (cm M)-1
Pico B:  546 nm; ancho de banda medio: 90 nm;  = 90 (cm M)-1
Pico C:  280 nm; ancho de banda medio: 20 nm;  = 14000 (cm M)-1

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a) Realice un diagrama en bloques del instrumento que debió utilizar para realizar el espectro
anterior, justificando los requisitos de cada componente.
b) Justifique la  que seleccionaría para la determinación cuantitativa, sabiendo que las
concentraciones de trabajo oscilan entre 0,5 M y 10-5 M.
c) El análisis cuantitativo se llevó adelante según el siguiente protocolo utilizando la  de trabajo:

Muestra (mL) Testigo 6,43 10-3 M (mL) H2O (mL) Absorbancia

- 0,0250 5,00 0,439
0,0500 - 7,00 0,319

¿Cuál será la concentración de la muestra expresada en ppm si el PM del antibiótico es de 48,000?

20.- Un instrumento de doble haz posee 2 fuentes para trabajar (deuterio, tungsteno), filtros de
interferencia con un ancho de banda de 8 nm.
a) ¿Qué  eligiría para una determinación cuantitativa, si en el espectro de absorción de una
sustancia B, ésta presenta 2 máximos de absorción, uno a 290 nm ( = 15000, ancho de banda
espectral 20 nm) y otro a 550 nm ( = 48000, ancho de banda espectral 75 nm). Justifique su
elección.
b) ¿Cuál será la concentración de B si 8,00 mL de una solución incógnita al llevarse a un Vf de
25,00 mL presenta una T = 45,0% y 10,00 mL de una solución testigo de 15,00 mg/L de B al
llevarse a igual volumen final que la muestra, tiene una T = 54,0%?

21.- 5,00 mL de una muestra de K2Cr2O7 presenta una T = 48,2% medida en una celda de 0,80 cm.
Calcular la concentración de K2Cr2O7 en la muestra, si luego de agregarle 1,00 mL de K2Cr2O7 2,00
10-3 M su absorbancia fue de 0,432, medida en la misma celda.

22.- Para determinar el contenido de hierro en tejidos blandos se pesa 1,1500 g del tejido, se
mineraliza con ácido nítrico y se lleva a volumen final de 10,00 mL en matraz.
La solución resultante se procesa de la siguiente manera:

Muestra (mL) Testigo 10,00 mg/dL Reactivo color (mL) H2O (mL) Absorbancia
(mL)
1,00 - 3,00 1,00 0,250
1,00 1,00 3,00 - 0,450
- - 3,00 2,00 0,030

¿Cuál es la concentración de mineral en la muestra original expresada en mg Fe/g de tejido?

23.- Se desea determinar el contenido de fosfato en una muestra de orina. Para ello 2,00 mL de
muestra se trata con reactivos para generar color y se completa a volumen final de 100,00 mL. La
absorbancia de una alícuota de 25,00 mL de dicha solución fue igual a 0,428. La adición de 1,00
mL de una solución que contiene 0,0500 mg de fosfato a una segunda alícuota de 25,00 mL dio una
A = 0,517. Calcule los mg/mL de fosfato en orina.

24.- Para verificar el grado de contaminación de los empleados de una empresa metalúrgica se
mide el contenido de cobre en orina. Para la determinación se emplea la siguiente reacción:

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 Cu2+ + Y4- CuY2-

El complejo CuY2- presenta un máximo de absorción a 750 nm y cumple con la ley de Beer en un
amplio rango de concentraciones. Tanto el Cu2+ como el ligando no absorben a dicha . El
protocolo de trabajo empleado fue: 100,00 mL de orina se llevan a volumen final de 500,00 mL y
luego se procesan de acuerdo al siguiente esquema:

Muestra (mL) Sol. de Y4- (mL) Testigo (1,00 ppm) (mL) Agua Absorbancia
5,00 10,00 - 5,00 0,195
- 10,00 - 10,00 0,015
5,00 10,00 1,00 4,00 0,485

Expresar el contenido de Cu en orina en g/L.

25.- Para determinar el contenido de Pb en una muestra de un efluente industrial, se toman 2

alícuotas de 100,00 ml de la muestra y se realiza una extracción del metal, según el siguiente
protocolo de trabajo:
a) A la primera alícuota se le adiciona una sol. de un quelante para formar un complejo coloreado
y neutro con el ión. Todo el complejo se extrae con 5,00 ml de un solvente orgánico no miscible
con agua. La transmitancia de la solución orgánica es de 42,5 %.
b) A la segunda alícuota se le adicionan 0,0100 ml de una sol. patrón que contiene 15,00 ppm de
plomo (despreciar el cambio de volumen producido por esta operación). Luego se realiza el
mismo tratamiento que en a), siendo la T % de 35,5.
c) 100,00 ml de H2O destilada que no contiene plomo se tratan del mismo modo que el descrito
en a), obteniéndose una T % de 95,3.
Determinar el contenido de plomo en el líquido efluente, expresándolo en ppm de Pb.

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 Resoluciones

1.- De acuerdo a la ecuación de la Ley de Lambert y Beer:

A = - log T = a b c

Donde:
A = absorbancia b = camino óptico
T = transmitancia c = concentración molar
a = coeficiente de absortividad
Si la concentración está expresada en M y el paso óptico en cm a =  = coeficiente de absortividad
molar (cm-1 M-1).

A %T  b(cm) M mg/L

a 0,296 50,6 2,68 102 2,50 4,41 10-4 123

b 0,708 19,6 6,83 101 1,50 6,91 10-3 1935

c 0,554 27,9 6,42 103 1,10 7,84 10-5 21,9

2.-
55,00 g ------ 1 mol
5,50 g ------ x = 0,10 mol
AT = a b CT
AM dil = a b CM dil
Dividiendo miembro a miembro:
AT/AM dil = CT/CM dil
CM dil = AM dil CT/AT = 0,398  0,1 M / 0,523 = 0,076 M
1000 mL ------ 0,381 moles 5,00 mL ------ 7,61 10-3 moles
20,00 mL ------ x = 1,52 10-3 moles 1000 mL ------ x = 0,30 moles
0,30 M
3.- AT/AM dil = CT/CM dil
CM dil = AM dil CT/AT = 0,523  1,00 10-3 M / 0,347 = 1,51 10-3 M
CM/ CM dil = 10
CM = 10  1,51 10 -3 M = 1,51 10-2 M

1000 mL ------ 1,51 10-2 moles 1 mol Cr2O72- ------ 2 moles Cr

100 mL ------ x = 1,51 10-3 moles 1,51 10-3 moles ------ x = 3,02 10-3 moles
1 mol ------52,000 g
3,02 10-3 moles ------ x = 0,1568 g
0,157 g %

8
4.- 56,000 g ------ 1 mol
5,6 10-3 g ------ x = 1,00 10-4 moles
10 mL ------ 1,00 10-4 mol
1000 mL ------ x = 0,010 moles

AT/AM dil = CT/CM dil

CM dil = 0,699  0,01 M / 0,398 = 0,0176 M
Vi/Vf = CM dil / CM = 3/8
CM = 0,0469 M 0,047 M

5.- [Cu2+]testigo = 8,00 g/L

3,00 mL testigo + 7,00 mL HAc + 2,00 mL NH3 Vf = 12,00 mL
5,00 mL muestra + 5,00 mL HAc + 2,00 mL NH3 Vf = 12,00 mL
AM = a b (VMi CM / Vf)
AT = a b (VTi CT / Vf)
AM/AT = (VMi CM / Vf) / (VTi CT / Vf) = (VMi CM ) / (VTi CT)
CM = 6,31 g/L 6,31 g/L

6.- muestra = 8,3475 g se procesó llevando a volumen final de 100,00 mL

TM = 30,6 %  AM = 0,514
TT = 20,5 %  AT = 0,688
CT = 2,46710-4 M

0,5140 CM
AM/AT = CM / CT    CM = 1,84610-4 M
0,688 2,467  10-4 M

1000 mL ------- 1,84610-4 moles de Na3PO4 1 mol -------- 164000 mg

100 mL ------- x = 1,84510-5 moles -5
1,84510 moles ------- x = 3,025 mg
8,3475 g ---------- 3,025 mg
1000 g ---------- x = 362,5 mg 3,62 x 102 ppm

7.- [Testigo] = 2,500 mg %

0,200 ml de muestra  Vf = 5,00 mL
0,100 ml de testigo  Vf = 5,00 mL
AM = a b (VMi CM / Vf)
AT = a b (VTi CT / Vf)
AM/AT = (VMi CM / Vf) / (VTi CT / Vf) = (VMi CM ) / (VTi CT)
CM = 0,8453 mg%

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0,8453 mg ------ 100 mL 3,250 g ------ 2,11 mg
2,11 mg = x ------ 250 mL 1000 g ------ x = 650,2 mg
6,5 102 ppm

8.- A’M = AM - ABco = 0,555 – 0,010 = 0,545

A’T = AT - ABco = 0,260 – 0,010 = 0,250
A’M = a b (50/100) CM
A’T = a b (10/100) 3 ppm
dividiendo miembro a miembro y despejando: CM = 1,31 ppm
1,090 g muestra ---------- 0,00131 g Ni
100 g ---------- x = 0,120 g
0,120 % P/P

9.- 500,0 L suero + 50,0 L precipitante  Vf = 550,0 L  100,0 L de muestra

A’M = AM - ABco = 0,378 – 0,012 = 0,366

A’T = AT - ABco = 0,244 – 0,012 = 0,232

A' M 0,100 mL CM / 2,1 mL

  CM = 63,10 mg/dL
A' T (0,020 mL 200 mg/dL)/2,1 mL

100 mL------- 63,10 mg HDL-colesterol 0,500 mL -------- 0,34705 mg

0,550 mL------- x = 0,34705 mg 1000 mL ------- x = 694,1 mg = 0,6941 g
0,69 g/L

10.- 1,00 mL suero + 2,00 mL de reductor + 2,00 mL ácido + 1,00 mL TCA  Vf = 6,00 mL

A’M = AM - ABco M = 0,198 – 0,012 = 0,186

A’T = AT - ABco T = 0,245 – 0,020 = 0,225
A´M 4,00 mL CM / 5,00 mL
  CM = 15,5 mg/dL
A´T (1,00mL 45 mg /dL) / 3,00 mL

100 mL------- 15,5 mg Fe 1,00 mL -------- 0,93 mg

6,00 mL------- x = 0,93 mg 100 mL ------- x = 93 mg
93 mg/dL

10
11.-
Muestra procesada: 104 mg de principio activo (2,0 mL de NaOH) en Vf= 25,00 mL CM pro

TM pro = 38,0 %  AM pro = 0,420

TM pro = 44,0 %  AM pro = 0,356

25,00 mL ------ 10,0 mg patrón

1 mL ------ x = 0,400 mg patrón
De la solución patrón se realiza una dilución al quinto CT final =CT/5 =0,08 mg/mL
CM pro = AM pro CT final/AT = (0,420x 0,08 mg/mL)/0,356
CM pro = 0,094 mg/mL

1 mL ------ 0,094 mg 104 mg pesados ------ 2,359 mg principio activo

25,00 mL ------ x = 2,359 mg 500 mg ------ x = 11,3 mg

11,3 mg principio activo/cápsula

12.-
AM = 0,0305
AT = 0,0410
Testigo: 6,8 mg de patrón en 25 mL = 0,272 mg/mL, a esta solución patrón se realiza una dilución
al quinto CT final =CT/5 =0,054 mg/mL (Solución inyectada en el HPLC)
CM = AM CT final/AT = (0,0305 x 0,054 mg/mL)/0,0410
CM = 0,0402 mg/mL (Concentración de la solución de la muestra inyectada en el HPLC)
0,0402 mg de piroxicam -------1 mL 0,201 mg (piroxicam)-------12,9 mg (comprimido)
X ---------5 mL X --------632 mg
X = 0,201 X = 9,9 mg

Rta.: 9,9 mg de piroxicam/comprimido

13.- 10 VMP colorante  Vf = 100 mL A1 = 0,377 = a b C1

1,00 mL colorante  Vf = 100 mL A2 = 0,347 = a b C2
Donde: C1  C col 10 VMP 100 y C 2  C col 1 100

A2  C col 1 100 
Dividiendo miembro a miembro:   
A 1  C col 10 VMP 100 

VMP = 0,109 mL 109 L

11
14.-
a) Se realizó una dilución de la muestra debido a que la transmitancia obtenida (7%) presenta
un error fotométrico importante.

b) 3,00 mL de muestra + 2,00 mL de reactivo  Vf = 5,00 mL

3,00 mL de testigo Fe (III) 28,0 ppm + 2,00 mL de reactivo  Vf = 5,00 mL
3,00 mL de muestra dil 1/5 + 2,00 mL de reactivo  Vf = 5,00 mL

TM dil = 51,2 %  AM dil = 0,291

TT = 30,5 %  AT = 0,516

A´M 3,00 mL CM dil/5,00 mL

  CM dil = 15,79 ppm
A´T (3,00 mL 28,0 ppm)/5,00 mL
CM = 5  CM dil = 78,95 ppm

1000 mL------- 78,95 mg Fe

100 mL------- x = 7,865 mg

7,9 mg %
15.-
A- 1- a) Correcto
b) Incorrecto
c) Incorrecto
2- a) Incorrecto
b) Correcto

B- Para determinar T experimentalmente:

 Se mide 20 veces la transmitancia de una solución a una dada longitud de onda, llevando antes
de cada lectura a 0 y 100%T , este último ajuste se realiza con el blanco.
 Se calcula T:

Tmedia =  Ti / 20
T = sT = [  (Ti - Tmedia)2 / (20 - 1) ]½

16.-
a) siendo:
C 0,434  T
 T 
C C T log T

C T log T 0,434

T= 5,39 10-3  0,5 %

12
b)

C/C  100

Espectrofotómetro de
baja calidad

Espectrofotómetro de
alta calidad

Absorbancia

La incertidumbre en la lectura de la T (T) en un instrumento es la resultante de todas las fuentes

de ruido instrumental. Según los componentes de cada instrumento prevalece alguna de las
distintas fuentes de ruido, en consecuencia, la curva de (C/C)100 vs. A presentará una forma
diferente de acuerdo a las características de cada equipo.
Si observamos las curvas anteriores podemos ver que las mediciones de concentraciones a
absorbancias menores a 0,1 no son muy confiables y deben evitarse independientemente de la
calidad del equipo; mientras que las mediciones de concentraciones a absorbancias mayores a 1,2
los errores son grandes en un equipo de baja calidad pero no así en un instrumento de mayor
calidad y lectura digital.

17.- a) Para verificar el cumplimiento de la ley de Beer calculamos la absortividad para cada uno
de las soluciones testigo empleando la siguiente ecuación: a  A bC
La absortividad obtenida a partir de los todas las soluciones de testigo (expresadas en ppm de Cr)
es 0,369 mg-1 (Cr) L cm-1, lo que permite concluir que se cumple la ley de Beer en el rango de
concentraciones ensayado.
Otra forma de verificar el cumplimiento de la ley de Beer es realizando la gráfica de absorbancia
en función de concentración.
a = 0,369 mg-1 (Cr) L cm-1 y PA Cr = 53,00   = 19557 M-1 cm-1  = 195 102 M-1 cm-1

b) AMf = a b CMf
CMf = 0,287/0,369 mg-1 L cm-1 1 cm = 0, 777 mg/L = 0, 777 ppm
CM = CMf  15,00 / 5,00 = 2,33 ppm 2,33 ppm

18.- El cumplimiento de la ley de Beer se puede verificar a través del cálculo de los  para las
distintas concentraciones del testigo o construyendo la curva de calibración.

13
a) Filtro verde – Banda A
0,6
CT (M) A 

5,00  10-6 0,200 39994

Absorbancia
.0,4
-5 0,370 36957
1,00  10
1,50  10-5 0,500 33354 0,2

2,00  10-5 0,570 28512

-6 0
No se cumple la ley de Beer. Para 5,00  10 M 1 x 10-5 2 x 10-5
 = 4,00  104 M-1cm-1 Concentración (M)

0,6
b) Filtro rojo – Banda B

CT (M) A 

Absorbancia
0,4

1,10  10-4 0,110 1101

0,2
2,50  10-4 0,275 1100
4,00  10-4 0,440 1100
0 -4 -4
2,5 x 10 5,0 x 10
5,00  10-4 0,550 1100 Concentración (M)
Se cumple la ley de Beer. Para 1,00  10-4 M
 = 1,10  103 M-1 cm-1

c) Se debe usar el filtro rojo dado que a la longitud de onda seleccionada con dicho filtro se cumple
la ley de Beer. De acuerdo a las bandas de absorción del compuesto, banda A: max = 550 nm,
ancho espectral = 50 nm y banda B: max = 680 nm, ancho espectral = 140 nm, al trabajar con un
filtro de absorción a la max = 550 nm se producen desvíos de la ley de Beer por falta de
monocromaticidad de la luz.

d) Si se elimina la causa de desviación de la linealidad utilizando una red de difracción sería más
conveniente trabajar a max = 550 nm.

19.- a)

Fuente Monocromador Celda Detector Dispositivo

de lectura

Fuente: lámpara de deuterio (UV)-lámpara de tungsteno (visible).

Monocromador: red de difracción.
Celda: cubeta de cuarzo.
Detector: tubo fotomultiplicador.

14
b)  = 280 nm, debido a que para poder realizar medidas en el límite inferior del rango de
concentración (10-5 M) se requiere trabajar a una longitud de onda en la cual el valor del 
permita obtener valores de absorbancia apropiados.

c) AT = 0,439 =  b CT VT / VF
AM = 0,319 =  b CM VM / VF
Dividiendo miembro a miembro y despejando: CM = 3,28 10-3 M
1 mol --------- 48,000 g
-3
3,28 10 moles --------- x = 0,1573 g = 157,3 mg/L 157 ppm

20.- a)  = 550 nm debido a que tiene mayor epsilon con lo cual tendría una mayor sensibilidad.
b) AM dil = a b (VM CM / VF)
AT dil = a b (VT CT / VF )
Dividiendo miembro a miembro y despejando: CM = 24,30 mg/L 24,3 mg/L

21.- AM =  b CM
AM+T =  b CM+T  CM+T = [(VM CM + VT CT)/ (VM + VT) ]
dividiendo miembro a miembro:
A M  T  C M VM  C T VT 
  
AM  C M VM  VT  

 CM  CT VT  A M  T VM  VT    VM  = 6,29 10-4 M

 
6,3 10-4 M
 AM 
  

22.- A´M = 0,250 – 0,030 = a b (1/5 CM)

A´M+T = 0,450 – 0,030 = a. b (1/5 CM + 2 mg/dL)
dividiendo miembro a miembro y despejando: CM = 11 mg/ dL
100 mL ---------- 11 mg
10 mL ----------- x= 1,1 mg
1,15 g muestra--------- 1,1 mg Fe
1 g muestra --------- x= 0,956 mg Fe
0,96 mg Fe/ g muestra

23.- AM = a b CM
AM+T = a b (0,05 mg/mL 1/26 + CM 25/26)
dividiendo miembro a miembro y despejando CM = 7,73 10-3 mg/mL

15
1mL ----------- 7,73 10-3 mg 2 mL ------------ 0,773 mg
100 mL-------- x= 0,773 mg 1 mL ------------ x= 0,386 mg
0,39 mg /mL

24.- A´M = AM – ABco = 0,180 = a b (VM CM dil / VF )

A´M+T = AM+T – ABco = 0,470 = a b [(VM CM dil + VT CT)/ VF ]
dividiendo miembro a miembro y despejando: CM dil = 0,12414 mg/L = 1,2414 10-4 g/L
CM = CM dil (500/100)  CM = 6,207 10-4 g/L 6,2 10-4 g/L

25.- Se realiza una extracción con solvente con concentración de la muestra, siendo VM =
100,00 mL y VF = 5,00 mL
A´M = AM – ABco = 0,351 = a b (VM CM / VF )
A´M+T = AM+T – ABco = 0,429= a b [(VM CM + VT CT)/ VF ]
dividiendo miembro a miembro y despejando: CM = 0,00676 mg/L
6,8 10-3 ppm

16
 Espectroscopía de absorción atómica

1.- Se trató una muestra de 5,00 mL de sangre con tricloroacético para precipitar las proteínas.
Después de centrifugar, la disolución resultante se llevó a pH 3 y se procedió a la extracción con
dos alícuotas de 5,00 mL de metil isobutil cetona conteniendo el agente orgánico complejante de
plomo APCD. El extracto se aspiró directamente en llama de aire/acetileno, dando una absorbancia
de 0,444 a 283,3 nm. Se trató de la misma forma una alícuota de 5,00 mL de un solución patrón
conteniendo 0,250 ppm de Pb, dando una absorbancia de 0,366. Calcular las ppm de Pb en la
muestra suponiendo que se cumple la ley de Beer.

2.- Se determinó el cromo en una muestra acuosa midiendo alícuotas de 10,00 mL de la muestra
en cinco matraces aforado de 50,00 mL. Antes de enrasar los matraces, se añadieron a cada uno
de ellos volúmenes distintos de patrón de 12,2 ppm de Cr.

Muestra (mL) Patrón (mL) Absorbancia

10,00 0,00 0,201
10,00 10,00 0,292
10,00 20,00 0,378
10,00 30,00 0,467
10,00 40,00 0,554

a) Deducir la expresión de la recta. Representar los datos.

b) Si luego de realizar un ajuste por mínimos cuadrados se obtuvo la siguiente ecuación:
y = 0,202 + 0,0362 x
Calcular las ppm de Cr en la muestra.

Resoluciones

1.- 5,00 mL de muestra se lleva a pH = 3 se realiza la extracción con solvente orgánico con un
complejante. Se procesan de la misma manera el testigo.

AM = 0,444
AT = 0,366  CT = 0,250 ppm

Considerando el cumplimiento de la ley de Beer

0,366 ------- 0,250 ppm

0,444 ------- x = 0,303 ppm CM = 0,303 ppm

AM 10mL CM/50 mL C' M AM C' M  AM C' T AM  T C' M

2.- a)     
AM  T (10mL CM  VT CT)/50 mL C' M  C' T C' M C' M

AM
AM  T  AM  C' T  Y=a+bX 1
C' M

Siendo la ordenada al origen a = AM y la pendiente b = AM/C’M, donde C’M es la concentración

de muestra diluida y AM es la absorbancia de dicha muestra.

17
 0.6

0.5

AM/C'M

Absorbancia
0.4

0.3

0.2 AM

0.1

CM
0.0
-6 -4 -2 0 2 4 6 8 10 12

-0.1 CT (ppm)

A partir del ajuste de los datos experimentales empleando la ecuación 1, se obtiene la siguiente
ecuación:
Y = 0,202 + 0,0362 X

b) A partir de la ecuación anterior se puede calcular la concentración de la muestra incógnita

diluida.
C’M = 5,58 ppm  CM = 5,58  5 = 27,9 ppm 27,9 ppm

18
 Espectroscopía de Fluorescencia

1.- Realice un diagrama en bloques de un equipo destinado a mediciones de fluorescencia,

indicando sus componentes y características particulares (fuente, tipo de selector de , material de
celda, detector). Para un compuesto que presenta fluorescencia, se realizó una curva de intensidad
vs. concentración, obteniéndose la siguiente gráfica:

I fluorescencia

concentración

Justifique y proponga las causas que dan origen a la forma de la gráfica obtenida.

2.- Una muestra de 10,00 mL de gaseosa conteniendo quinina (compuesto orgánico fluorescente)
presenta una intensidad de fluorescencia de 58,7. Luego de agregar a ese volumen de muestra 1,00
mL de un testigo de concentración 2,06 ppm en quinina, la intensidad de fluorescencia ascendió a
79,6 (medida en la misma celda). Al agregar a un idéntico volumen de la muestra original 1,00 mL
de otro testigo de concentración: 20,1 ppm en quinina, la intensidad de fluorescencia fue 59,5. En
otra experiencia, se observó que al agregar a la muestra original 2,00 mL de una solución 0,10 M de
anión Cl-, la muestra presentó una intensidad de fluorescencia de 17,2.
a) Utilizando los datos que Ud. considere pertinentes, calcule la concentración de quinina en la
muestra original de gaseosa.
b) Explicar con fundamentos teóricos los fenómenos observados al agregar cada uno de los
testigos de quinina y al agregar la solución de Cl-.

3.- Se determinará el contenido de quinina por espectrofluorometría. Para ello 0,50 mL de una
solución de concentración 1,56 ppm de quinina se agregan a 10 mL de H2SO4 1 M observándose
una intensidad de fluorescencia de 22,5. A una muestra de 20,00 mL de una gaseosa coloreada se le
agregaron 5,00 mL de agente decolorante. A una alícuota de 0,20 mL de la solución anterior, se
adicionan sobre 5,00 mL de H2SO4 y la intensidad de fluorescencia leída es 18,4. a) Indicar las ppm
de quinina en la gaseosa. b) Explique cómo afecta en la emisión de fluorescencia: b1- la rigidez
estructural de la molécula; b2- la temperatura; b3- el solvente; b4- la concentración.

19
 Resoluciones

1.-

Fuente Filtro o monocromador Cubeta

de excitación

Atenuador Filtro o monocromador de

emisión

Fotomultiplicado Fotomultiplicado
r de referencia r de muestra

Amplificador
diferencial

Dispositivo
de lectura

Las desviaciones se producen principalmente debido a que cuando la concentración aumenta por
encima de un cierto valor cobran importancia los términos de orden superior del desarrollo de la
serie. Otros dos factores que producen desviaciones negativas de la linealidad a alta concentración
son el autoapagamiento y la autoabsorción.

2.- a) F=KC
FM  KCM = 58,7
 CM VM  CT VT 
FM  T  K  = 79,6
 VM  VT 

 79,6  CMVM  CTVT

dividiendo miembro a miembro:    C M  0,419 ppm
 58,7  CM VM  VT 
0,419 ppm

20
b) Al agregar el patrón de 2,06 ppm de quinina se observa un incremento de la señal de
fluorescencia por dicho agregado, mientras que ante el agregado del patrón de 20,1 ppm se
observa un desvío negativo de la linealidad, posiblemente causado por los factores mencionados
en el problema 1.
Al agregar la solución de Cl- se observa una disminución de la señal de fluorescencia debido al
fenómeno de quenching.

3.- a) F=KC
 0,50mL 
FT  22,5  K 1,56ppm 
 10,50mL 

 0,20mL 
FM  18,4  K  C dil 
 5,20mL 

 1,56  0,50mL 5,20mL 

Dividiendo miembro a miembro: 1,2228    
 C dil  10,50mL 0,20mL 
C dil  1,579 ppm

 25mL 
CM   C dil   1,974 ppm 2,0 ppm
 20mL 

b1) En general, una mayor rigidez estructural aumenta la eficiencia cuántica de la fluorescencia
y por lo tanto la emisión de fluorescencia.
b2) En general, un aumento en la temperatura disminuye la eficiencia cuántica de la
fluorescencia y por lo tanto la emisión de fluorescencia.
b3) En general, un aumento en la viscosidad del solvente aumenta la eficiencia cuántica de la
fluorescencia y por lo tanto la emisión de fluorescencia.
b4) En general, un aumento en la concentración de la especie fluorescente aumenta la emisión de
fluorescencia, pero después de un cierto valor se produce una reducción de la intensidad de
fluorescencia.

21
Problemas integrados
1.- Fundamente cuál/es de los siguientes métodos puede utilizar y cuál considera como más
adecuado para determinar la concentración de calcio en agua mineral (concentración aproximada 10
ppm).
a) Espectroscopía de absorción atómica
b) Espectroscopía UV-visible
c) Espectroscopía de fluorescencia
Datos: PA Ca = 40,000
 CaQ = 10000 (660 nm)  CaQ = 7,8 1010
El ligando X presenta emisión de fluorescencia a 580 nm. La formación de complejo con el Ca2+ no
produce cambios significativos en sus características espectrales.

2.- Un laboratorio medicinal que envasa solución fisiológica (NaCl 8%) teme que por error el
producto esté contaminado con NiCl2, para descartar la presencia del contaminante la concentración
del mismo no debe ser superior a 0,1 ppm.
De los siguientes métodos cuál/es podrá utilizar y cuál/es no. Justifique en los casos afirmativos los
pasos adicionales, mencionando los reactivos necesarios.
a) Espectroscopía de absorción atómica
b) Espectroscopía UV-visible
c) Espectroscopía de fluorescencia
Datos: PA Ni = 58,70; PA Cl = 35,5
 NiQ = 1500  NiQ = 51014
Los compuestos que forman complejos con el Ni2+ no presentan emisión de fluorescencia

3.- Se desea determinar el contenido de Magnesio en un suplemento vitamínico que contiene

como aditivos (saborizantes) compuestos que presentan una importante absorbancia en la región
de 450 a 700 nm. Las vitaminas que forman parte del suplemento presentan emisión de
fluorescencia entre 400-560 nm.
De los siguientes métodos cuál/es podrá utilizar y cuál/es no. Justifique en los casos afirmativos los
pasos adicionales, mencionando los reactivos necesarios.
a) Espectroscopía de absorción atómica
b) Espectroscopía UV-visible
c) Espectroscopía de fluorescencia
Datos: PA Mg = 24,312  MgQ = 5800 a 560 nm  MgQ = 2,31010

4.- Se desea establecer si en los efluentes de una industria se encuentra presente el contaminante
A (compuesto orgánico) en concentraciones mayores al límite máximo permitido, siendo el
mismo de 0,05 ppm.
De los siguientes métodos cuál/es podrá utilizar y cuál/es no. Justifique en los casos afirmativos los
pasos adicionales, mencionando los reactivos necesarios.
a) Espectroscopía de absorción atómica
b) Espectroscopía UV-visible
c) Espectroscopía de fluorescencia
Datos: PM A = 250,00  absorción = 280 nm  A = 20000  emisión = 430 nm

22