CURSO: Análisis Clínicos II

DOCENTE: Q.F. Nelson Arteaga

ESTUDIANTE: Jessyca Mayta Jaliri

CODIGO: 2014-125024

AÑO: Quinto

INFORME: “EXAMEN PARASITOLÓGICO”

Tacna-Perú

2019
 PRÁCTICA 8
EXAMEN PARASITOLÓGICO DIRECTO, SERIADO
Y CONCENTRADO. EXAMEN DE GOTA GRUESA Y
COLORACIÓN DE GIEMSA

INTRODUCCIÓN

El parasitismo intestinal se encuentra ampliamente distribuido en el mundo, clasificándose entre el

tipo de infecciones más frecuentes en los países en vía de desarrollo. Aunque este tipo de parasitosis
no ocasionan una alta mortalidad, la morbilidad tiene características notables, por su ocurrencia en
personas de todas las edades, mayor incidencia en zonas rurales, además de tener una relación
estrecha con condiciones sociodemográficas desfavorables y de saneamiento básico deficientes que
evidencian inestabilidad económica y social de las poblaciones que lo padecen, por lo que su
diagnóstico y control se convierten en un componente básico de las políticas públicas de países como
Colombia. Las técnicas de diagnóstico etiológico de las parasitosis intestinales empleadas de manera
rutinaria en los laboratorios clínicos no han evolucionado desde hace varias décadas, por lo cual, el
coprológico o examen directo de heces sigue siendo la prueba más empleada para la detección de
patógenos intestinales en muestras de materia fecal. Sin embargo, existen limitaciones respecto a su
utilidad cuando la carga parasitaria es baja en las heces del individuo, y a menudo para aumentar la
capacidad de detección de la técnica se emplea la combinación con métodos de concentración de las
muestras de materia fecal, como el método de Formol-éter o Ritchie modificado.

I. EXAMEN DIRECTO DE HECES (COPROLÓGICO)

Este método se basa en la identificación, macroscópica y microscópica de elementos

parasitarios presentes en la materia fecal. Para la identificación microscópica se depositó en
un portaobjetos una gota de solución salina isotónica al 0.85% estéril y una gota de solución
yodada (lugol). Luego con un palillo de madera se homogenizó la muestra, se tomó
aproximadamente 2mg con la punta del palillo y se mezcló inicialmente en la solución salina
y luego en lugol. Finalmente se colocó sobre cada gota un cubre-objetos y se procedió a la
lectura del montaje en búsqueda de parásitos intestinales recorriendo las dos preparaciones
de una forma sistemática, utilizando el objetivo de 10X y de 40X. El informe de resultados
fue consignado como presencia/positivo o ausencia/negativo para cada especie de parásito
observado.
 EXAMEN MICROSCÓPICO

EXAMEN PARASITOLÓGICO DIRECTO:

a) En un portaobjetos limpio, se colocan separadamente, una gota

de solución salina y otra de lugol. NOTA: si se sospecha la
presencia de trofozoitos amebianos, debe de utilizarse solución
salina tibia a 37°C.

b) Con el aplicador de madera se toma una muestra de 1 a 4 mg

de heces y se mezcla con la solución salina, con el mismo aplicador se
retiran las fibras y otros fragmentos gruesos, procurando hacer una
suspensión.

NOTA: del excremento es formado tómese la porción de excremento de modo que contenga
material del exterior y del interior de la muestra.

c) Cúbrase la gota de solución salina y la gota de solución yodada con

laminillas portaobjetos, se apoya este sobre el portaobjeto en posición
inclinada, se toca él borde de la gota y se hace descender lentamente
hasta que quede sobre el portaobjeto. Con ello se recudirá al mínimo la
posibilidad de que se forme burbujas de aire en la preparación.

d) Colóquese el portaobjetos con la muestra en la platina del microscopio y enfóquese la

preparación con el objetivo de 10X o uno de menor aumento.
e) Examine toda la zona del cubreobjetos con el objetivo de 10X, enfóquese en el ángulo
superior izquierdo y mueva el portaobjeto con movimientos regulares en horizontal o en
vertical.
f) Cuando se vea un microorganismo sospechoso, pase al objetico de 40X y aumente la
iluminación del diafragma para observar la morfología en detalle.
g) Este es un examen sistemático. Por este método podrá
localizar todo parasito que esté presente. Si la
preparación no se examina sistemáticamente cabe la
posibilidad de pasar por alto algún parasito, Examine
cada campo microscópico.
II. EXAMEN PARASITOLÓGICO, SERIADO Y CONCENTRADO

Recolectar la materia fecal como se indica a continuación:

Es una técnica de sedimentación en la cual se utiliza una solución salina de menor

densidad mayor a la de los parásitos para que estos se concentren en el sedimento

El primer día que se inicia la recolección:

Con la cucharita que está dentro del recipiente juntar 2 cucharaditas de la materia fecal de
una sola deposición del día, colocarla dentro del envase con tapa a rosca, cerrar bien y
mezclar agitando enérgicamente, para deshacer la muestra fecal en el líquido conservante.

 En total se necesitan 3 días de recolección, pero no deben ser días seguidos, sino
que día por medio.

Ejemplo: si comienza el día lunes, se vuelve a juntar el miércoles y el viernes.

 Una vez completa la recolección, colocar el apellido y nombre del paciente en el

envase.

PROCESO

Muestra:

 Se le proporciona frascos adecuados al paciente para la toma de la muestra, con

10 ml de formol-sal (fijador)

 La muestra debe ser fresca, recién emitida y no mezclada con orina.

 No se debe consumir 6 días previos a al examen antibióticos, antiparasitarios,

carbón ni bario.

 Las muestras deben ser tomadas día por medio y mezclarse con el fijador.
Procesamiento de la muestra

1. Resuspender la emulsión fecal.

2. Vaciar la mitad del contenido de cada frasco en un vaso.

3. Depositar una gota de la emulsión en un portaobjeto (Preparación directa)

4. Tamizar la emulsión fecal a través de una malla, estando atento de que aparezca algún
elemento macroscópico.

5. En un tubo de centrífuga agregar 10 ml de tamizado diluido + 1 ml de acetato de etilo.

Centrifugar

6. Eliminar sobrenadante. Depositar una gota del sedimento en un portaobjeto.

7. cubrir con un cubre objeto y ver al microscopio

III. MÉTODO DE CONCENTRACIÓN POR SEDIMENTACIÓN RITCHIE

El empleo de éter y formaldehído, permite con el primero, liberar las formas parasitarias de
las grasas, por disolución de las mismas y con el formol se fijan y conservan. La
concentración se hace por centrifugaciones sucesivas. Unas ventajas que tiene este método
es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y almacenamiento
de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica
para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia.

METODO

1.- Con el aplicador de madera se coloca aproximadamente 1 gr. de la materia fecal

en el vaso de precipitado, se añaden 10 ml de solución salina y se homogeniza.

2.- Se filtra la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo, recogiendo el

filtrado en el tubo cónico.

3.- Se centrífuga la suspensión durante 1 min a 2000 rpm.

4.- Se decanta el sobrenadante y se resuspende el sedimento con solución salina,

centrifugando, decantando y resuspendiendo las veces necesarias hasta que el
sobrenadante sea claro.

5.- Al último sedimento se agregan 10 ml de solución de formaldehído al 10%, se

mezcla y se deja reposar durante 10 min.

6.- Se añaden después 5 ml de éter, se tapan los tubos con tapones de caucho y se
agitan enérgicamente durante 30 segundos.
7.- Se centrífuga durante 2 minutos a 1500 rpm.

8.- Después de centrifugar se observan 4 capas:

 éter en la superficial,
 un tapón de restos fecales,
 formaldehído,
 sedimento en el fondo del tubo, conteniendo los elementos parasitarios.

9.- Se introduce la pipeta Pasteur hasta la capa d, se extrae con cuidado una gota del sedimento y se
coloca en un portaobjetos.

10.-Se le añade una gota de lugol y con uno de los ángulos del cubreobjetos, se homogeniza,
cubriéndolo con el mismo.

11.-Se observa la preparación en el microscopio con objetivos de 10X y 40X

IV. METODO DE GRAHAM

Generalidades:

Técnica basada en que la hembra adulta de Enterobius vermicularis no deposita sus

huevos en el interior del intestino, sino que por lo general emigra durante la noche,
hacia las márgenes del ano, depositando los huevos en los pliegues perianales. Es por
esto que la toma debe efectuarse en la mañana indicando que debe ir a defecar y no
debe bañarse.

Ocasionalmente se pueden encontrar huevos de Ascaris lumbricoides, Trichuris

trichiura, Hymenolepis nana, Taenia sp.

METODO

1.- Sobre un extremo se coloca la cinta Scotch con la parte adherente hacia fuera,
sujetándola con los dedos pulgar e índice.
2.- Se presiona la superficie sobre la región perianal hacia uno y otro lado, finalmente se
hace un frote perianal.

3.- Separar cuidadosamente la cinta y adherirlo sobre un portaobjetos.

4.- Observar con objetivo de 10X.

V. EXAMEN DE GOTA GRUESA Y COLORACIÓN DE GIEMSA

FUNDAMENTO

El diagnostico microscópico de Parásitos está basado en la identificación de los parásitos

coloreados libres (gota gruesa) o intracelulares en el eritrocito (extendido fino). Los parásitos
se identifican por su forma y por la coloración diferencial de sus componentes, es decir,
citoplasma, cromatina y pigmento, y se deben distinguir de los elementos de la sangre, de
otros microorganismos sanguíneos y de microorganismos o artefactos que puedan estar
presentes en la lámina o en el colorante.

TINCIONES

Las coloraciones de Giemsa y de Wright tienen colorantes ácidos (eosina) y básicos (azul de
metileno) que colorean los componentes celulares acidofilicos y basofilicos, respectivamente.
Así tenemos, que la gota gruesa es más sensible y el extendido fino es más específico. En
el laboratorio clínico se recomienda la utilización de ambas muestras en una sola
lámina.
 PROCEDIMIENTO

a. Realizar la punción capilar (se puede realizar también venosa,

aunque no se requiere de mucha sangre).

b. Colocar una gota en un portaobjetos y con el ancho de otro hacer

el extendido de sangre.

c. En otro portaobjetos, colocar una gota gruesa y hacer un cuadrado de

1.5 mm.

d. Dejar secar las 2 muestras.

a. Colocamos la gota gruesa en la gradilla de tinción, en posición horizontal.

b. Para fijar la muestra cubrimos el portaobjeto con metanol durante 3 minutos.

Escurrimos y lo dejamos secar al aire.

c. Se cubre el portaobjetos con el colorante Giemsa,

dejándolo actuar de 10-15 minutos.

d. Escurrimos y lavamos con agua destilada y se deja secar. Posteriormente se le coloca

una gota de aceite de inmersión y se observa al microscopio.

e. Teñir el frotis con 2.5 ml de colorante Wright por 5 minutos

e. Sin tirar el colorante, añadir 2ml de Solución de Buffer con pH de

6.8 y dejarlo reposar por 6 minutos

f. Homogeneizar soplando con una pipeta en

forma de zigzag

a. Enjuagar con abundante agua destilada y observar al

microscopio.

OBJETIVO DEL EXAMEN DE GOTA GRUESA

Es identificar parásitos sanguíneos. Principalmente podemos encontrar Plasmodium spp, Leishmania

spp, Tripanozoma cruzi, Toxoplasma Gondii y las Micro filarias.
VI. CONCLUSIONES

 La identificación de quistes, ooquistes o trofozoítos de protozoarios entero

parásitos puede necesitar, en circunstancias determinadas, de coloraciones
especiales.

 El o examen directo de heces sigue siendo la prueba más empleada para la

detección de patógenos intestinales en muestras de materia fecal.

VII. BIBLIOGRAFIA

 https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/003756.htm

 http://www.garrahan.gov.ar/lab/index.php/preanalitica/3-
nstructivosanalitica/12-materia-fecal-analisis-parasitologico

 https://es.slideshare.net/Fletcherxz/exmen-parasitolgico-seriado-de-
deposiciones-epsd