UNMSM FAC MED DPTO ACADÉMICO: CCDD

EP NUTRICION 2019-I
CURSO BIOQUÍMICA

PRACTICA 11: DETERMINACIÓN DE HEMOGLOBINA EN SANGRE

INTRODUCCIÓN

Metalproteína intraeritocitaria formada por un grupo proteínico, la globina, unido a un

grupo hemo. Su función es el transporte de oxígeno a los tejidos y de oxido de carbono
desde los tejidos a los pulmones. Capta oxígeno en los pulmones y lo transporta por la
sangre a los tejidos y células que rodean el lecho capilar del sistema vascular. La
hemoglobina normal de los mamíferos es un tetrámero compuesto por dos cadenas α y
otras dos cadenas distintas (β ó δ). En las personas adultas, el 95 % de la hemoglobina
es del tipo A y se observan también, en porcentaje menor, hemoglobina F y
hemoglobina A2. Durante la vida embrionaria se puede detectar otro tipo de
hemoglobinas: hemoglobina Gower I, Gower II y Portlan, tetrámeros formados por la
combinación de cadenas ε y γ o α, y durante la vida fetal, la hemoglobina predominante
es la F. Además, en ciertos estados patológicos se producen otras series de
hemoglobinas, como las hemoglobinas S, C, D, etc., generalmente por el cambio de un
aminoácido por otro en la cadena de globina.

REACTIVOS DE TRABAJO
Ferricianuro de K, Cianuro de K, Sterox-SE, Buffer, estabilizantes.

Estándar de Hb g%

OBSERVACIONES

El Rvo contiene CIANURO, manipular con precaución y en lo posible evitar pipetear con la boca.

FUNDAMENTO

Se basa en el método de la cianometahemoglobina. Los eritrocitos lisados por el tensio activo

(Srerox-SE) liberando a la Hb a la solución. La Hb liberada es oxidada a metaHb por el
ferricianuro, siendo esta última convertida en cianmetaHb por la presencia del cianuro. La
absorbancia de la cianmetaHb es medida a 540 nm, siendo la intensidad del color obtenida,
directamente proporcional a la concentración de Hb en la muestra.

MUESTRA

Sangre entera con anticuoagulante (EDTA 3 % o Citrato, oxalato, heparina)

PROTOCOLO

Colocar el los tubos marcados con (B), (St) y MP

B St MP
ml. St g% -- 0.010 --
ml. Sangre -- -- 0.010
ml. Agua dest 0.1 -- --
ml. Rvo T 2.5 2.5 2.
Mezclar e incubar 5 min a temperatura ambiente.
Leer en espectrofotómetro a 540 nm.
El color obtenido es estable hasta por 1 hora.

LINEALIDAD
La reacción es lineal hasta 20 g %

RANGOS DE REFERENCIA

Hombre: 14 a 18 g %
Mujer: 12 a 16 g %

Comente sus resultados.

CUESTIONARIO

1.- Función del reactivo Sterox-SE.

2.- Hay diferencia en la concentración de hemoglobinas entre los sexos?
2.- Cómo proceder ante una muestra que sobrepasa los límites de la linealidad, Ej una
concentración de 22 g %
3.- Calcular realmente la concentración del St en el tubo St