Kr

omat
ogr
afi
Cai
rKi
ner
jaTi
nggi

Umumny amet odekr omat ografiseper t

iadsor psi,par ti
si,danpenukari onadal ahcont oh-contoh
dari kromat ogr af ikolom.Padamet odekr oma-t ogr aficairi
ni Parti
kel dengandi mensi yang
berv ariasidigunakansebagai penunj angst asioner .Bany aknyacai ranpadakol om juml ahnya
sedemi kianr upasehi nggahany acukupmenghasi l
kansedi kittekananunt ukmemel ihar aali
ran
faseber geraky angser agam.Secar akesel uruhanpemi sahani nimemakanwakt ulama.
Ber bagai usahat elahdilakukanunt ukmenambahl ajual i
rantanpamengubaht inggi piringan
teor et
iskol om.Penur unanukur anpar ti
kel penunj angst asionert i
daksel alumengunt ungkan.
Kromat ograf i
cai rkiner j
atinggi atauphy( HPLC)ber bedadar i kromat ograficairklasik.HPLC
menggunakankol om dengandi amet erumumny akeci l
,2-8mm denganukur anpar tikel
penunj ang50m, sedangkanl ajualirandi pertinggi dengant ekanany angt inggiBilàdi bandingkan
terhadapkr omat ogr afigas-cair/gasl iqui
dchr o-mat ography( GLC) ,makaHPLCl ebih
bermanf aatunt uki solasizatt i
dakmudahmenguap, demikianj ugazaty angsecar at ermal t
idak
stabi l
Tet api ditinjaudar ikecepat andankeseder hanaan, GClebi hbaik.Keduat ekniki ni
kompl ement ersat usamasel ektifhany amemer lukansampel ber j
uml ahsedi ki
tser t
akeduany a
dapatdi gunakanunt ukanal isiskuant i
tati
f.digunakankol om tabunggel asdenganber macam
diamet er.highper formancel i
quidchr omat ogr alainny a,keduany aefisien,sangat

Pr
insi
pHPLC

Luaspuncakkr omat ografipadakorvaelusidipengar

uhioleht
igapro-sesper
pindahanmassa
yait
udif
usi Eddy,dif
usilongitudi
naldantransfermassatidakseti
mbang.Sedangkanparameter-
paramcteryangmenent ukanberl
angsungriyaproses-
prosester
sebutadal
ah:laj
uali
ran,ukur
an
parti
kel
,laj
udifusidariketebalanst
asioner.VanDeemet ermenghubungkanket i
gaprosesdi
atasdenganef i
siensikolom dalam suat
uper samaan.

Persamaaninit
elaht
eruj
idenganmet odekr
omatogr
afigas.Menur
utl
ajual
ir
an(VanDeemet
er
hubunganantar
adengantinggipi
ri
ngandapatdi
nyat
akandengan:(
rumus)

Asuat uv ariabely angber asal daridif

usiEddy ,Bv ariabelyangberhubungandengandi fusi
l
ongi t
udinal, Cmeny angkutt ransfermassat i
dakset imbang.Hubunganant aradiamet erpartikel
rat
a-ratadengandi fusi Eddy( A)adalahA21dR, di manaAadal ahfaktorpenj ej
alankol om
Sedangkandi f
usi longitudi nal(B)diti
mbul kansebagai akibatdarikecender unganmol ekuluntuk
berpindahdar ibagi antengahpenampangpi ringankol om yangkonsent rasinyal
ebi htinggi ke
bagiantepi pi r
ingany angkonsent r
asinyalebihr endah.Besar nyadifusi l
ongi t
udinal adalahB2D
dimanaadal ahf aktory angmer upakanukur anr ent angansuat umol ekul bebasunt ukber di
fusi,
sedangkanDadal ahkoef isiendi f
usizatterlarutdal am faseber gerak.Tr ansfermassat idak
setimbang( C)akanmel ebar kanpuncakaki batger akanf aseber geraky angt i
nggi Fakt orC
dalam per samaanVanDeemet erinidapatdi nyatakandengan( rumus)

I
nst
rument
asi
,Gambar14.
3menunj
ukkandi
agr
am dasarsuat
uHPLC,
Penampungpel
arut(
A,B,
C)dansi
stem pengeluar
angas(D,
E,F)i
sangat
lahpent
ing:
Penampangpel
arutA.B.Cdapat
menampungsebany ak2lit
er(
gambar)

pelar ut.Gasy angt er l

ar utpadapel arutdapatdi keluar kandengansi st em D, E, Fy angbeker ja
ber angkai andenganpompav akum Pemi sahandenganpel ar utt unggal disebutel usiisokr at ik,
sedangkanel usi gradi enduapel ar utdenganber bagai per ubahankomposi si di alirkan.Suat u
HPLCy angbai ksehar usny amempuny ai lebi hdar iduapenampangpel ar ut .Pel ar utdi alir
kanke
bot ol peny ampur( M)padaber bagai lajual i
r an.Sebagi anbesarpompaHPLCmempuny ai
keluar ant ekanan1000- 6000psi ,danmampumenghasi l
kanal i
r ansampai 20ml /meni t
.Pompa
j
eni spunt iransekr up( scr ewdr ivenpump)danpompat arikdor ong( reci pr ocat i
ngpump)ser ing
digunakan.Scr ewdr ivenpumpmenghasi lkanpengal iranpel ar utbebaspul sa.Sedangkanr eci
procat i
ngpumpl ebi hser ingdi gunakanmeski punmenghasi lkanal i
ranber pul say angkel ak
har usdi tiadakan.Reci pr ocat í
ngpumpl ebi hpopul erkar enadapatmenggunakanj uml ahv olume
yangt idakt er bat as, ti
dakseper tidi l
akukandengansi stem r eci pr ocat i
ngpump.Kadangkal a
pompapneumat i
kj ugadi gunakan.Cai rant idakmudabdi kompr esisehi nggat ekanant inggi
yangt er bent ukpadasi st em pompany at idakl ahber bahay aPr ekol om ber isi penunj angst asi oner
yangsamat ogr af i
ny a, hany asaj aukur anpar tikelny alebihbesar .Perananpr ekol om t erutama
menghi langkanpengot orpadapel arut.Sampel dimasukkanscr ewdr iv enpumpdanj ugael usi
gradi enhany adapatdengankol om kr omadal am si stem i njeksi denganpeny unt ikhi perdemi k.
Sampel sampai sej uml ah2- 100ul dapatdi tampungdal am si stem i njeksi ny aSeper tipada
kromat ogr af igascai r
, suat usept um dar i sil
ikonat aut eflondi gunakansehi nggasi stem i njeksi
dapatt er tut updengansendi r
iny a( selfseal ingsept um) .Kol omny adapatber upagel asat aubaj a
ti
dakber kar at.Kol om gel asdapatmenahant ekanansampai 600psi .Panj angkol om ber v ariasi
dar i15- 150cm.Pengi si kolom bi asany aadal ahsi l
ikagel , alumi nadanel it.Pengi sikol om
seper t ipar tikel pel li
cul ar ,yait
ubut i
rangel asy angdi lapisi denganmat er iber por i seper tisili
ka
gel, alumi naat aupenukari on, j
ugaser i
ngdi gunakan.Bi l
adi tinj audar iper samaanVanDeemet er,
makani l
ai Cakanbesarunt ukj eni skol om i ni, tetapi kapasi tasny arendah.Pemi sahandengan
HPLCbi asany adi l
akukanpadat emper at urkamarDet ekt ory angdi gunakanunt ukHPLC
ber gant ungpadat i
pesampel yangdi pisahkan.Dasarpengukur anUV, absor psi IR, pendarf l
uor ,
i
ndeksr efraksi , kondukt ansi ,
pol ar ograf i,gei gercount er ,
spekt roskopi dapatdi gunakan.Kecual i
i
ndeksr efraksi , det ektort ersebutdi at asber -si fatsangatsel ekt if.Det ekt orkondukt omet erdan
pol arogr af idi pengar uhi olehv ar i
asi lajual iran.Det ekt orspekt roskopi tidakdi pengar uhi
temper atur ,sedangkandet ektorUV, IRdanpendarf luorsedi ki tdi pengar uhi per ubahan
temper atur .Akur asi det ekt orfot omet eri ebi hr endahdar ipadadet ektorspekt rof otomet er.
Det ekt orUVumumny adi gunakanunt ukanal isisbahanor gani kber gugusf ungsi Detekt ori ndeks
refraksi akanmember ikanr esponst erhadapsemuamassamassadanr adi oakt ivit
asj eniszat
telarut .Kr omat ogr am di catatdenganpencat atpot ensiomet riky angdi adapt asi kankepada
det ektorpar tikel i
r.Jawabanmenj adi 0,5det ikat aul ebi hUnt ukskal apenuhunt uk
menghi ndar kandi st orsi kecepat anel usi .Kece-pat anhar usdi at ur.

Penunj
ang
Penunj angf asedi am harust ahant erhadapt ekanan.Bi asany apenunj anganor ganikber si
fat
stabil
dant ahansampai tekanan600at -mosf er.Strukturdenganpor i-
poriy angbesarakan
rusakbi l
adi beritekanant inggi.Penukari onmenmpuny ai permeabi lit
asy angr endahbi ladiberi
tekanan.Penunj angy angbai kadal ahsili
kagel danal umí naPenunj angdenganbahanki miadi
permukaanny a( bondedphase)mempuny aikelebihankar enat i
dakper ludijenuhkanl agi
permukaanny aol ehf asecai rdantidakmemer lukanpr ekol om.Fasedi am ter i
katsecar akov al
en
denganper mukaanzatpadapenunj angsehi nggadi har
apkant i
dakmudahl epasdan
mengkont ami nasi efl
uentPenunj angdengankemampuanpenukari onpemakai anny aterbatas,
karenamudaht erkompr esi ,
tetapisaatini bermacam r esinsi ntetisyangt ahant ekanansampai
200at mosf ersudahdapatdi per
oleh.Resi ndemi ki
anmempuny aikapasitaspenukarpenukar
i
onspesi f
iksaati ni sudahmul aidi
pasar kanPenunj angf asedi am untukkr omat ografieksklusi
l
ebihr umi tdaripadar esinpenukari on.Hampi rt i
dakt ahant ekanan.Peny usut anv olumeakan
terj
adi sehinggaper meabi li
tasnyat urundanaki batnyaef isiensi pemisahanmenur unionant ara
3sampai 5meq/ g.Resinsemuat i
pegel dal
am kol om unt ukj eniseksklusi.

Pemakai
an

HPLCdenganpr insipkromat ogr afiadsor psibanyakdi gunakanpadai ndustrifarmasi dan

pestisi
da.Zat -zatdengankepol aranber beda; yait
uant arasedi ki
tpolarsampai pol
ardapat
dipi
sahkandenganHPLCber dasar kanpar ti
sicair-
cair.Asam- asam nukleatdapatdi pisahkan
dengankol om penukari onyangdi kombi nasikandengankol om but ir
anber l
apiskanzatber por i
.
Penukari ongel sil
ikayangdi modi fi
kasi secarakimiadanpenukari onklasik.Asam- asam
nukleattelaht erpisahkanpadaPLB, wakt uanalisi
sny alebihpendek.Mor fi
n,heroindan
semacamny at elahdapatdi pisahkanpadadi modi f
ikasi secarakimiamempuny aikapasi t
as
tukartinggi,vi
tami n-vitaminy angl ar utdalam airmi sal
kant elahdapatdi pi
sahkan.Pemakai an
HPLCpadakr omat ografieksklusi dil
akukandengankol om panj ang,tuj
uanut amaker janyatetap
samamasal ah- masalahbi oki
mi a.Padaumumny atekniki nidapatdigunakanpadaset iap
met odekol om kr omat ografir
ezi nZi paxSAX.Penukari ongel sil
ikayangy ait
upenent uanber at
mol ekulpolimerdan