Manual de prácticas de laboratorio de Biología General.

Universidad del Valle

Departamento de Biología
PRACTICA 1.
INSTRUMENTACION PARA LA INVESTIGACION EN BIOLOGIA

1. EL MICROSCOPIO COMPUESTO

INTRODUCCION
El Microscopio es un instrumento óptico que permite observar. medir y cuantificar objetos y organismos
muy pequeños. El microscopio tiene dos propiedades importantes: El aumento y la resolución.
El poder resolutivo o de resolución es la capacidad que tiene un microscopio (o el ojo humano, etc.) de
percibir por separado dos puntos pequeños, adyacentes y cercanos, es decir, la capacidad para percibir
detalles. El poder resolutivo aumenta a medida que disminuye la distancia que separa dichos puntos. Es
decir, si dos puntos distan 1cm uno del otro y yo los veo como un solo punto borroso tendré menor poder
resolutivo que alguien que los distingue por separado o que distingue perfectamente puntos que distan de
0,5cm entre si. Cuanto mayor sea el poder resolutivo, mayor será la definición de un objeto. Los
microscopios de gran poder resolutivo son especialmente buenos para ver pequeña estructuras.
El poder de aumento se define como la relación entre el diámetro aparente de la imagen y el diámetro o
longitud del objeto. Esto quiere decir que si el microscopio aumenta 100 diámetros un objeto, la imagen
que estamos viendo es 100 veces mayor que el tamaño real del objeto. Para calcular el aumento de un
microscopio, basta multiplicar el aumento del ocular por el aumento del objetivo. Por ejemplo. si estamos
utilizando un ocular de I0X y un objetivo de 40X, el aumento a que estamos viendo la preparación será:
10X x 40X = 400X, lo cual quiere decir que la imagen del objeto está ampliada 400 veces.
Existen diferentes tipos de Microscopios los cuales varían en su poder de resolución y aumento Los rangos
aproximados de magnificación se encuentran entre 4X y 40X (Microscopio Estereoscópico), 20X-25X
(Microscopio Simple o Lupa), 40X-1500X (Microscopio Compuesto). I0.000X-16.000X (Microscopio
Electrónico), donde X es el numero de veces que se aumenta el tamaño real del objeto. Además de estos
existen algunos microscopios especiales como los Microscopios de Contraste de fase y los microscopios
Invertidos. Una comparación entre la forma como actúan los Microscopios Óptico, Electrónico de
Transmisión y Microscopio Electrónico de Barrido.

OBJETIVO
El propósito del siguiente ejercicio es la adquisición de experiencia sobre el uso y cuidado del Microscopio.
Así, podremos aprender; Primero: como disponer el equipo para las observaciones; Segundo: los nombres
de las diferentes partes del Microscopio v sus funciones; Tercero: la técnica de observar objetos y de
preparar materiales para la observación, así como el ajuste y enfoque correctos; Finalmente, estudiaremos
las formas de medir los tamaños de los objetos microscópicos. Al finalizar el Laboratorio Usted deberá
haber adquirido destreza en el cuidado y uso del Microscopio.
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MATERIALES
Cada grupo de trabajo debe traer:
Tijeras y/o bisturí
Laminas porta objetos
Cada estudiante debe traer un cuaderno de notas
Laminillas cubre objetos
Lápiz y borrador
Bayetilla y toallas de papel absorbente

Suministrado por el laboratorio:

Papel de revista
Microscopio
Granos de Azúcar y/o sal
Papel milimetrado
Aceite de inmersión
Papel periódico

PROCEDIMIENTO
1. Disposición del Microscopio: Al recoger el Microscopio tómelo con ambas manos, de tal forma que
una lo sostenga por el Brazo, y la otra por debajo de la Base. Deposite o descargue el instrumento
suavemente y oriéntelo de manera que el Brazo quede mirando hacia Usted. Enciéndalo y apáguelo con la
menor intensidad lumínica: no mover ni golpear cuando este encendido.
2. Partes del Microscopio: Utilizando la figura 1 distinga los nombres de las distintas partes del
Microscopio localizándolas en su propio aparato: Oculares, Objetivos, Revolver, Porta-Objetos, Diafragma
- iris, Condensador, Fuente de iluminación, Base, Brazo, Platina, Carro Mecánico. Tomillo Macro y
Micrométrico.
Coloque el Objetivo de Menor Aumento (4x), haciendo rotar únicamente el Revolver. Gradúe la intensidad
de la luz . reflejada y observable con el Condensador. Observe a través del Microscopio y ajuste el
Diafragma, de manera que el Campo Visual se encuentre iluminado en forma homogénea. Si el Ocular o
el Objetivo se encuentran empolvados o empañados, límpielos cuidadosamente con una porción de Papel
Lente. NO USE en ningún caso, otro tipo de material para tal efecto. Si la visión no se aclara consulte al
Instructor.
3. Preparación de Materiales: Los materiales para Observación Microscópica .se colocan en una Lamina
de Vidrio que generalmente es de 1 " x 3 " y tiene el nombre de Porta-Objeto y/o Lamina y se cubren con
Laminillas y/o Cubre-Objetos. Tanto el porta objetos como el cubre Objetos deben estar ópticamente
limpios, la limpieza del Porta-Objetos debe hacerse con agua y sosteniéndolo por los bordes y luego se
frota suavemente con una Toalla de Papel Absorbente para secarlo. Los Cubre-Objetos son muy frágiles y
por tanto deben manejarse con mucho cuidado, su limpieza debe hacerse en forma similar a la descrita
antes teniendo así mismo el cuidado de no tocar la superficie con los dedos.
Corte un cuadro de papel periódico de 7 mm, que contenga la letra e. Colóquelo en el centro del Porta-
Objetos con el lado derecho de la letra e hacia arriba. Ponga una gota de agua sobre el papel. Después
de esperar unos segundos hasta que el agua haya empapado el papel, coloque la Laminilla o Cubre-
Objetos sobre la preparación; evitando que queden burbujas de aire que pueden dificultar la observación.
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4- Como enfocar el Microscopio: Coloque la preparación sobre la Platina en forma tal que el cuadro de
papel quede justamente encima de la abertura y luego fije la Lamina mediante las Pinzas que hay en la
Platina. Enfoque la letra e con la ayuda del movimiento de los Tornillos Macro y Micrométrico. Es
importante tener en cuenta que siempre que se haga una observación al Microscopio debe usarse en
primer lugar el Objetivo de Menor Aumento (4X). Describa la posición de la letra e (como es la imagen o su
orientación) Mueva ahora la Lamina sobre la Platina de derecha a izquierda, mueva la Platina hacia
delante y hacia atrás (en qué dirección se mueve la imagen?). Suba ahora la platina usando el Tomillo
Macrométrico y rote el Revolver para cambiar a un Objetivo de Mayor Aumento (40X), enfoque
nuevamente en forma lenta evitando quebrar la Lamina Porta-Objetos, conteste:
¿Ha cambiado la posición de la imagen con respecto a la observada con el Objetivo de Menor Aumento?,
¿Es el Campo de Observación mayor o menor?, ¿ES la iluminación mas o menos brillante que con el
Objetivo de Menor Aumento?, Describa y compare lo observado en el Campo de Menor y Mayor Aumento.
Retire la preparación cuidadosamente de la Platina y consérvela para observaciones posteriores.
5. Medidas Microscópicas: La Unidad de Longitud mas frecuentemente usada en Microscopia es la micra
o micrón "µ" que equivale a 1/1000 mm o 1/1'000.000 m. En los Laboratorios de Investigación se utiliza un
instrumento, el Micrómetro o Retículo Micrométrico, sin embargo, es posible estimar el tamaño de los
Objetos Microscópicos conociendo el diámetro del Campo correspondiente a cada Objetivo.

Ejercicios:
1- Coloque un pedazo de papel milimetrado sobre la Platina de tal manera que al enfocar el Microscopio
pueda observarlo, mida entonces el diámetro del campo correspondiente al objetivo de menor aumento en
milímetros y su conversión en micras. Repita el procedimiento con los otros aumentos disponibles.
2- Con el dato anterior es posible determinar el diámetro del Campo correspondiente a cualquiera de los
Objetivos
ópticos; se divide el diámetro encontrado por la razón entre las magnificaciones del Objetivo de trabajo y
del Objetivo de menor aumento. Por ejemplo, si el aumento del Objetivo de Mayor Aumento es de 100X y
el otro es de 4.0 X, la razón mencionada será 100/4.0 = 25. Si el campo correspondiente al objetivo de
menor aumento tiene un diámetro de 1.500 µm, el diámetro del campo para el de mayor aumento es, de
1.500/25 = 60 µm. calcule ahora el diámetro del campo correspondiente a todos los objetivos de su
Microscopio, complete la información de la tabla de datos.

3- ¿Cual es la dimensión de la letra e observada anteriormente en milímetros y en micras?

4- Monte ahora un pedazo de un grabado de una revista. ¿Cuántos puntos puede ver en el Campo del
Objetivo de Menor Aumento? ¿Qué distancia hay en promedio entre cada dos puntos?

Este ejercicio proporciona un ejemplo del Poder de Resolución. Así, a "simple vista" solo podemos ver las
diferente densidades del grabado, mientras que con el Microscopio nos es posible distinguir puntos, es
decir distinguimos o resolvemos los puntos.
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Tabla de ejercicio. Completar en la siguiente tabla los datos correspondientes:

OCULAR OBJETIVO AUMENTO DIAMETRO DIAMETRO RELACION

(mm) (µm)
4.0 X
10 X
40 X
100 X

5- Observación de cristales de Azúcar y/o sal: Sobre un portaobjetos deposite unos cuantos granos de
azúcar, en este caso no cubra la muestra con la laminilla. Monte en el microscopio y observe con los
objetivos 4X y 10X. Repita el procedimiento con los granos de sal.

BIBLIOGRAFIA

BINNGNG, G. & H. ROHRER. 1985. Microscopio de efecto de túnel. Investigación y Ciencia. Octubre de
1985. pág 30
HAWELLS, M.R. & J. KIRZ, 1991. Microscopia de Rayos X. Investigación y Ciencia. Abril 1991. pág 52.
LICHTMANN. J. W. 1994 Microscopia cofocal. Investigación y C'iencia Octubre 1994. pág 20.
MADER, SILVIA. 2004. Biología (Capitulo 1 paginas 1 a 4) McGraw Hill
WICKRAMASlNGHE, H. K. 1989 Microscopio de sonda de barrido. Investigación y Ciencia, Diciembre
1989. pág 28.

UN VISTAZO A LA RED
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http://www.crosswinds.net/~librostecnicoscomofunciona/comofunciona23.hlml
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Figura 1. Microscopio compuesto

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ANEXO 1
EL MICROSCOPIO

¿CÓMO FUNCIONA?
PARTES DEL MICROSCOPIO ÓPTICO

Aunque como es lógico, la forma y partes de un microscopio pueden variar y varían de un modelo a otro,
existen unas partes comunes que aparecen representadas a manera de esquema en el dibujo adjunto y
cuya definición vamos a comentar:
1. Lente Ocular:
Conjunto de lentes especializadas en aumentar la Imagen previamente formada por el objetivo. Puede
desmontarse para intercambiarse por otros con diferentes aumentos o funcionalidades; agujas para
señalar. retículos para recuento.

2. Cilindro o Tubo porta-ocular:

Tubo por cuyo interior avanza la Iuz, desde el Objetivo. En los modelos mas antiguos se movía, mediante
una Cremallera, para conseguir el enfoque de la muestra, cosa que hoy suele realizarse con la Platina. En
la actualidad suele estar sustituido por varias piezas entre las que se incluyen Prismas para conseguir el
uso en una postura mas cómoda.
3. Revolver:
Mecanismo Giratorio en el que se pueden situar varios Objetivos de manera que se consigan diferentes
aumentos.
4. Lente Objetivo:
Conjunto de Lentes responsables de aumentar y resolver (distinguir las diferentes partes) el objeto a
observar.
5. Muestra:
Objeto a observar que se coloca sobre una Iámina de vidrio (porta-objetos) y bajo otra aun mas fina
(Cubre-Objetos). La muestra ha de ser tan fina que la luz la atraviese (transparente) por ello se hace
imprescindible el uso de colorantes (Técnicas de Tinción).
6. Platina:
Soporte de la muestra. puede moverse mediante tornillos de Enfoque grueso (Macrométrico) y Fino
(Micrométrico).
7. Condensador
Conjunto de lentes que focalizan (condensan) la luz sobre la muestra.
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8.Diafragma:
Sistema para controlar la cantidad de luz que llega al objeto. De esta manera se puede controlar la
definición que, en muchas ocasiones se consigue reduciendo la intensidad de la luz.

Figura 2. Microscopio compuesto para inmunofluorescencia, con monitor LCD, se utilizan en la

enseñanza, la investigación y el diagnostico clínico.
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ESQUEMAS: PRÁCTICA 1. INSTRUMENTACIÓN PARA LA INVESTIGACIÓN EN BIOLOGÍA

1. DIAMETRO DEL CAMPO VISUAL: PAPEL MILIMETRADO

2. PODER DE AUMENTO: LA DIMENSIÓN DE LA LETRA e

3. PODER DE RESOLUCIÓN: TRAMADO DE LA REVISTA (PUNTOS DE COLORES)

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ESQUEMAS: PRÁCTICA 1. INSTRUMENTACIÓN PARA LA INVESTIGACIÓN EN BIOLOGÍA

4. OBSERVACION DE GRANOS DE AZUCAR

5. OBSERVACIÓN GRANOS DE SAL