UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

CARRERA DE LABORATORIO CLINICO E
HISTOPATOLOGICO

INFORME DE PRÁCTICA DE LABORATORIO

PERÍODO ACADÉMICO Abril – agosto 2019
ASIGNATURA MICRORIBOLOGIA I SEMESTRE: TERCERO PARALELO: B
NOMBRE DEL DOCENTE Ing. Félix Falconí O., Mgs.
NÚMERO DE PRÁCTICA 15 FECHA: 10-07-2019 HORA: 07H00 - 10H00 DURACIÓN: 3 HORAS
NOMBRE DE LOS ESTUDIANTES.
GRUPO 1 GRUPO 2
1. ALMACHI CHUQUILLA RICARDO ALONSO 1. MALACATUS VALDIVIEZO JOEL ALEXANDDER
2. ALMEIDA ENRIQUEZ ADRIANA ESTEFANIA 2. MOROCHO NINABANDA EMMA PATRICIA
3. BARRIGAS PEÑAFIEL EVELYN KATHERYNE 3. MUÑOZ GUEVARA ALEJANDRO
4. CARRASCO TIERRA JOSELYN TATIANA 4. PUCHA ALDAZ JHOSSELYN GABRIELA
5. CARRILLO BECERRA JENNIFER IVETTE 5. PUJOS AGUALONGO ARIANA ESTEFANIA
6. CHINCHE ADRIANO YESENIA MARIBEL 6. PUNINA CHIMBORAZO JHONNY GUSTAVO
7. GARZON SALAZAR KAREN VERONICA 7. SALAN BARRERA SAYANARA TERESA
8. GUAMAN ÑAMO EVELYN KATHERIN 8. SERRANO PACA ELVIS ALEXANDER
9. LEMA ROJAS LADY DIANA 9. UGSIÑA FLORES NELLY ELIZABETH
10. LOPEZ ALDAZ SOFIA ALEXANDRA 10.ULLOA AGUILERA MYLENA ALEJANDRA
11. LOPEZ LLUAY MIREYA ALEXANDRA 11.VISTIN GARCIA JESSICA ANDREA

LUGAR DE LA PRÁCTICA LAB. E302 laboratorio de Microbiología

TÍTULO DE LA UNIDAD BACTERIOLOGÍA
Determinación de características en medios de cultivos
TEMA DE LA PRÁCTICA
Reacciones según el tipo de medio de cultivo.

RESULTADO DE APRENDIZAJE.
Valora adecuadamente los conocimientos en la preparación de los medios de cultivo bacteriano, a través de
la interpretación de cultivos, con control de calidad apropiados para garantizar un resultado.

OBJETIVO GENERAL Preparar diferentes medios de cultivo

Objetivos específicos Evaluar las colonias microbianas resultantes en cada medio de cultivo
FUNDAMENTO TEÓRICO:
MacConkey
El agar MacConkey es un medio de cultivo selectivo y diferencial para bacterias diseñado para aislar selectivamente bacilos Gram
negativos y entéricos (encontrados normalmente en el tracto intestinal) y diferenciarlos sobre la base de la fermentación de la
lactosa. El cristal violeta y las sales biliares (que son agentes tensioactivos que desorganizan muchas membranas externas) inhiben
el crecimiento de organismos grampositivos, lo que permite la selección y el aislamiento de bacterias gramnegativas. Las bacterias
entéricas que tienen la habilidad de fermentar lactosa pueden ser detectadas utilizando el carbohidrato lactosa y el indicador de pH
rojo neutro. El agar es el agente solidificante.
En cambio, las Enterobacterias están evolutivamente adaptadas a soportar sales biliares en su hábitat natural (el intestino de
vertebrados superiores), y pueden crecer en este medio. En su faceta de medio diferencial, el agar MacConkey permite visualizar
dos tipos de Enterobacterias según que puedan o no fermentar la lactosa, con producción de ácidos. Las bacterias fermentadoras de
lactosa (Lac+), excretan al medio gran cantidad de ácidos orgánicos, lo que provoca que sus colonias, y sus alrededores aparezcan
de color rojo intenso, debido al viraje del rojo neutro; además, se forma un halo turbio a cierta distancia de estas colonias, fenómeno
ocasionado por la precipitación de las sales biliares inducida por la acidez. En cambio, las bacterias Lac-, al no poder usar la lactosa,
recurren como fuente de C a las peptonas, a las que desaminan: incorporan el esqueleto carbonado, excretando iones NH4+, que
alcalinizan el medio de cultivo, lo cual se traduce en que el indicador rojo neutro vira a amarillo.
TCBS Agar
TCBS Agar (agar tiosulfato citrato bilis sacarosa) es un medio selectivo de diferenciación para el aislamiento y cultivo de Vibrio
cholerae, Vibrio p arahaemolyticus y otras especies Vibrio a partir de muestras clínicas y de otras clases. La mayoría de
Enterobacterias encontradas en heces, son inhibidas totalmente como mínimo en 24 horas. Un leve crecimiento de especies de
Proteus y E. faecalis puede ocurrir pero las colonias son fácilmente reconocibles comparando con las colonias de Vibrio. No
requiere aditivos especiales como sangre; es por esto que muestra una ventaja sobre el Agar Lauryl Sulfato Telurito el cual requiere
más aditivos después de la esterilización. Aparte de este factor conveniente, también posee características de crecimiento superiores
para especies de Vibrio comparado con el medio Telurito. Mientras que son inhibidos Non-Vibrios, se promueve el rápido
crecimiento de Vibrios patógenos después de incubación por 24 horas a 35ºC. Para el aislamiento de otros Vibrios a partir de
muestras ambientales, la incubación a bajas temperaturas de 20ºC y 30ºC es necesaria.
Agar sangre
El Agar sangre contiene sangre de mamíferos (generalmente oveja, conejo, humanos) a una concentración de 5 a 10%. El agar
sangre, es un medio enriquecido, diferencial, usado para aislar microorganismos fastidiosos y detectar actividad hemolítica. La β-
hemolisis, se manifiesta como una lisis y digestión completa de los eritrocitos que rodean la colonia, por ejemplo, algunas bacterias
del género Streptococcus. La α-hemolisis, aparece solo como lisis parcial (los eritrocitos, no son lisados completamente o la
digestión no fue completa), por tanto, la hemoglobina aparece como un halo verdoso alrededor de la colonia. Contiene extracto de
carne, triptona, cloruro de sodio y agar.
El agar sangre es una combinación de un agar base (agar nutritivo) con el agregado de 5 % de sangre ovina, también puede usarse
sangre humana, para cultivos en una placa de Agar. El agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Se usa también para
ver la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos (que es un factor de virulencia). Observando los halos hemolíticos
alrededor de las colonias se determina el tipo de hemólisis que posee:
alfa: halos verdosos (oxidación de la hemoglobina de los glóbulos rojos a metahemoglobina en el medio), por Streptococcus mitis.
La colonia está rodeada por una zona de eritrocitos parcialmente lisados (la hemoglobina pasa a metahemoglobina), generalmente
acompañada por una Staphylococcus epidermidis, Colonias negras, forma irregular. Después de 24 hs., presencia de zonas opacas
alrededor de las colonias. Coloración verdosa. Neumococcus y Estreptococcus alfa hemolítico
beta: halos incoloros (hemolisis total), por Streptococcus. Pyogenes. La colonia presenta, alrededor una zona clara que indica la
lisis completa de los eritrocitos. La propiedad hemolítica se debe a la acción de dos hemolisinas. La estreptolisina O, es antigénica
y oxígeno lábil, la estreptolisina S, no es antigénica pero es oxígeno estable.
gamma: inexistencia de halos (sin hemolisis) es decir no existe hemólisis aparente ni coloración por Streptococcus. salivarius.

Utilidad: Diferenciación de Streptococcus según su hemólisis y de Staphylococcus según coloración (no totalmente característico).
Si en la preparación se agrega asépticamente 5% de sangre desfibrinada estéril luego de fundir el medio base y dejarlo enfriar a
45ºC, se homogeneiza con movimiento de rotación, evitando la formación de espuma.
Agar Chocolate
El Agar Chocolate es un medio no selectivo para cultivo y aislamiento de microorganismos exigentes, especialmente de Neisseria
y Haemophilus spp de muestras clínicas. La base del Agar Chocolate contiene caseína y peptonas seleccionadas como fuentes de
nitrógeno, con un pH controlado, la hemoglobina aporta la hemina (factor X) y el suplemento vitamínico que aporta entre otros el
factor V (nicotinamida adenina dinucleótido), esencial para las diferentes especies de Haemophilus, además de vitaminas,
aminoácidos, coenzimas, glucosa, factores esenciales para el crecimiento de Neisserias patógenas y otros microorganismos
exigentes.
El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla almedio base. Por esta razón el agar chocolate contiene
hemoglobina, que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El agar chocolate
es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos y meningococos) y Haemophilus, pero en él pueden
crecer muchos otros microorganismos exigentes. El agar chocolate puede convertirse quizás en uno de los medios más enriquecidos
si añadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre. Estas mezclas, denominadas de forma diferente
según las casas comerciales (Polivitex, Isovitalex, etc.) contienen más de una docena de compuestos que confieren a este medio
unas cualidades nutritivas extraordinarias. Por adición de uno o varios antibióticos pueden lograrse medio sin hibidores o selectivos
para el crecimiento de determinados microorganismos. Un ejemplo clásico es el Thayer-Martin, utilizado para el aislamiento del
gonococo y que no es otra cosa que un agar chocolate enriquecido al cual se ha añadido una mezcla de tres antibióticos específicos
que impedirán el crecimiento del resto de la flora acompañante. La sangre de carnero es la más adecuada para la preparación de
Agar Sangre y Agar Chocolate. Comúnmente se utiliza la sangre de carnero entre 5 - 10% como un medio de enriquecimiento
nutritivo en la preparación de medios de cultivo. Éste es utilizado principalmente para el crecimiento, identificación y observación
de las reacciones hemolíticas causadas por algunas bacterias con importancia clínica.
El Agar chocolate lleva Hemoglobina que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o Hemina
termoestable. Otros factores, en particular el factor V (dicotín-adenina nucleótido) termosensible, que no se encuentran en el Agar
chocolate pueden aportarse en una mezcla química mentedefinida: el PolyViteX.El Agar chocolate con PolyViteX permite el cultivo
de la mayor parte de los gérmenes encontrados en patología humana o veterinaria. La siembra de líquidos cefalorraquídeos, pus,
resiembra de hemocultivos, etc., es favorable en este medio, pero está particularmente indicado para aislamiento de las Neisserias
patógenas y de los Haemophilus. Aislamiento e identificación de Haemophilus.
Los microorganismos del género Haemophilus se cultivan en Agar chocolate con PolyVitex. Como en el caso del gonococo el
cultivo es rápido y abundante sobre todo en atmósfera rica en C02. Estos gérmenes encuentran en este medio los factores X y V
necesarios para su crecimiento. El diagnóstico de la serie al respecto puede conducirse de la manera siguiente: Si se siembra en
cuatro medios diferentes:
- Agar Trypcase-soja que no contenga ni factor V, ni factor X.
- Agar Trypcase-soja con PolyViteX (factor V)

Agar Manitol Salado

Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. &os estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el
manitol acidificando el medio' las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos,
presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura. Las colonias sospechosas, se repicarán en un medio sin exceso de cloruro
de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona,
constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de
sodio (que se encuentra en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y el rojo fenol
es el indicador de pH. Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos,
con lo que se modifica el p- del medio y vira el indicador de p- del color rojo al amarillo. Los estafilococos crecen en altas
concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol. Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se
visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color. Los estafilococos que no fermentan el manitol, se
visualizan como colonias ro(as, rodeadas de una zona del mismo color o púrpura

MATERIALES Y MÉTODOS
Equipos Materiales Reactivos
Balanza Mechero Medios de identificación
Plancha de calentamiento. Cajas Petri
Autoclave. Matraz
Incubadora Balanza

PROCEDIMIENTO / TÉCNICA:
1. El cultivo que se nos fue entregado fue el de Mannitol Salt Agar Base:

2. En el cultivo obtenido se verifico en el envase las instrucciones que vienen dadas en la etiqueta que nos ayudara a calcular el
peso y volumen requerido para el medio de cultivo que se desea preparar.

111 𝑔𝑟 ∗ 60
= 6,66𝑔𝑟 𝑝𝑙𝑎𝑐𝑎𝑠
1000 𝑚𝑙

111 𝑔𝑟 15 𝑚𝑙
= 1,665 𝑔𝑟 𝑡𝑢𝑏𝑜𝑠
1000 𝑚𝑙

3 Usar la balanza analítica para pesar los 6,66gr y 1,66gr del agar Mannitol Salt Agar Base utilizando una espátula para poder
colocar en la balanza sobre un papel.
4 En una probeta procederemos a medir 75 ml de agua destilada para la creación del agar para luego proceder a trasvasarlo a un
matraz.

5 Posteriormente procederemos a disolver el medio de cultivo colocado en un frasco apropiado con el volumen total de agua
destilada a preparar.

6 Revisar las instrucciones de la etiqueta para proceder al preparado que generalmente es llevar a ebullición hasta poder observar
que este se encuentre hirviendo.
7. Para luego llevarlo a esterilización por autoclave a (121°C) a 1 atm durante 15-20 minutos muy bien envuelto respectivamente
con los tubos.

8 Una vez estéril el medio de cultivo se reparte los 20ml en cada caja de cultivo, siempre cerca del mechero y se espera que se
solidifique.

9 Mientras tanto se prepara un inoculo bacteriano a una turbidez de 0,5 de McFarland y se procede a la preparación según lo
indicado por el profesor

10 Se realizará la siembra en base a las instrucciones dadas por el profesor.

Una vez sembrado en las cajas Petri se deja en la incubadora por 18 a 24 a 37°C

RESULTADO (Gráficos, cálculos, etc.)

Agar Chocolate Agar Sangre Agar SS Agar McConkey Agar Salino Manitol

OBSERVACIONES
 Se observó el cambio de color que sufrió el agar que fue de amarillo a rosado.
 Se pudo observar además el cambio de consistencias que de estado líquido a un estado gelatinoso.
 Se pudo observar el crecimiento bacteriano en el agar después de haber dejado en la incubadora.
CONCLUSIONES
Evaluamos las colonias microbianas resultantes en cada medio de cultivo que son :por medio del agar
manitol obtuvimos un crecimiento bacteriano eficaz

RECOMENDACIONES
Se recomienda que todos los estudiantes utilizen todos las prendas de bioseguridad antes de entrar al laboratorio.

Recomendamos lavar todos los materiales, antes de usarlo para no tener contaminación, esterilizarlo como azas,
Y demas materiales utilizados en la practica.

BIBLIOGRAFÍA
• Microbiología Médica Brooks Editorial El Manual Moderno
• Virus Shors Médica Panamericana
• Microbiología médica. Ryan Mc Graw Hill Interamericana Editores
• Microbiología en Practica de Jawets, Melnick y Adelberg E. Alche Editorial Atlante s.r.l
• Recolección y transporte de muestras en microbiología clínica Zurita Organización Panamericana de la Salud

Mgs. Ximena Robalino. Ing. Félix Falconí O. Mgs Ing. Eliana de la Torre
DIRECTORA DE CARRERA DOCENTE RESPONSABLE DEL LABORATORIO