DETERMINACION DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES DE UNA MUESTRA DE AGUA POTABLE

DEL MUNICIPIO DE PAMPLONITA

INTEGRANTES:

EDWIN ANTONIO SAENZ PEÑALOSA

1121866165

CARLOS JULIAN ROJAS DIAZ

DOCENTE:

JORGE LUIS ORTIZ

DIPLOAMDO TRATAMIENTO AVANZADO DEL AGUA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

UNIVERSIDAD DE PAMPLONA

PAMPLONA NORTE DE SANTANDER

27/07/2019
 PRACTICA DE MICROBIOLOGIA

DETERMINACION DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN UNA MUESTRA DE AGUA POTABLE DEL

MUNICIPIO DE PAMPLONITA N.D.S

OBJETIVOS:

 DETERMINAR LA PRESENCIA DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES EN UNA MUESTRA DE

AGUA POTABLE DEL MUNICIPIO DE PAMPLONITA UTILIZANDO CALDO LMX
 SEMBRAR E IDENTIFICAR EL CRECIMENTO DE LA CEPA DE E. COLÍ EN DIFERENTE AGAR
MBD, ECDY CROMOCOULT

INTRODUCCION

Un agua para consumo humano debe ser de excelente calidad, por esta razón debe ser tratada
para que cumpla los estándares de calidad. En Colombia mediante el decreto 1575 de 2007 se
establece el Sistema para la protección y Control de Calidad del agua para consumo humano.
Además, por medio de la Resolución 2115 de 2007 se estipula que en el agua potable se debe
hacer investigación bacteriológica sobre Coliformes totales y E. Coli como indicadores de la
calidad sanitaria.

Su presencia en el agua se considera un índice evidente de la ocurrencia de polución fecal y, por

tanto, de contaminación con organismos patógenos [4]. Considerando la importancia que tiene el
agua para consumo humano, los laboratorios de análisis microbiológico de agua potable deben
implementar procedimientos que permitan emitir resultados confiables a sus clientes. El método
utilizado en el laboratorio de Aguas de Cartagena para el recuento de coliformes totales y E. coli es
el de Filtración por Membrana, el cual es aceptado y utilizado a nivel nacional e internacional por
los entes reguladores debido a su fácil manejo y empleo, descrito por la APHA-AWWA-WPCF
“Standard Methods” 1992 .
DETERMINACION DE COLIFORMES TOTALES Y FECALES
CALDO MLX

En la Identificación de Coliformes Totales y E. coli se utilizó caldo LMX el cual posee una
alta calidad alimenticia y debido al contenido en tampón de fosfato garantiza un rápido
crecimiento del Grupo de Coliformes. El contenido en laurilsulfato inhibe en gran medida
el crecimiento de bacterias Gram positivas(Merck, 2000).
La identificación simultánea de Coliformes Totales y E. coli se hace posible por

La adición del sustrato cromógeno 5-bromo-4-cloro-3-indolil-β-D-galactopiranósido

(X-GAL), el cual es escindido por Coliformes y produce un viraje de color del Caldo de
cultivo a verde azulado. La coloración verde azulada indica la presencia de bacterias
coniformes totales. El 1-isopropil-β-D-1-tiogalactopiranósido (IPTG) actúa como sustancia
intensificadora en la síntesis enzimática y aumenta el contenidode la actividad de β-D-
galactosidasa (Gaudet I., 1996).
El sustrato fluorógeno 4-metilumbeliferil-β-D-glucurónido (MUG) es escindido por la
enzima β-D-glucoronidasa altamente específica para E. coli, y se comprueba a la luz UV de
onda larga mediante fluorescencia. Con ello se da simultáneamente una indicación de la
presencia de E. coli. El contenido de triptófano mejora la reacción del indol para la
confirmación adicional de E. coli y aumenta con ello la sensibilidad de identificación en
combinación con la reacción X-GAL y la reacción MUG (Manafi M., 2000).

En la practica se utilizo una muestra de agua potable del municipio de Pamplonita,

utilizando como medio cultivo el caldo LMX para la determinacion y presencia de
coliformes totales y fecales. Este medio de cultivo detecta claramente si el agua esta
contaminda por la existencia de coliformes totales y fecales.

En primer lugar se hizo una dilucion de la muestra de agua

Disolución a 0,1ml: Para la disolución de 0,1 ml se observa un

color verde azulado, lo cual indica que es positivo para coliformes
totales y del mismo modo se identificó la presencia de E.Coli ya que
se observa un poco de fluorescencia en los tubos inoculados
 Disolución a 1ml: Para la disolución de 1 ml se observa un color
verde azulado, lo cual indica que es positivo para coliformes totales
y del mismo modo se identificó la presencia de E.Coli ya que se
observa un poco de fluorescencia en los tubos inoculados

Disolución a 2ml: En disolución de 2ml se observa que para los

tubos inoculados 1 y 2 hay una ligera presencia de coliformes
totales y fecales identificados mediante el color fluorescente que
se identifica al ser observado por la luz. En el tubo numero 3 no
existe presencia de C.T ya que permanece incoloro luego de hacer
el recuento.

MUESTRA DILUIDA
Agua potable 0,1ml 1ml 2ml
Tubo 1 + + +
Tubo 2 + + +
Tubo 3 + + -
3+ 3+ 2+
SIEMBRE EN AGAR EMB

Se realizó la siembra de E. coli en el agar EMB, el cual se introdujo en una incubadora

durante aproximadamente 89 horas para revisar su posterior crecimiento bacteriano.
En el momento de realizar el recuento se pudo evidenciar el crecimiento de cepa E.Coli en
las diferentes cajas de Petri, en donde se observó que este fue afectado en cierta medida
por la humedad contenida dentro de las cajas y a su vez la mala manipulación a la hora de
la siembra y la incubación posteriormente.
El Agar EMB: Es un medio de cultivo usado para el aislamiento y diferenciación de E.coli,
tiene un aspecto purpúreo, aunque naranja tras su esterilización, es semisólido, y está
destinado al cultivo en placa.
Es un medio selectivo y diferencial, adecuado para el crecimiento de enterobacterias, que
inhibe el crecimiento de bacterias Gram positivas y permite la diferenciación de bacterias
fermentadoras y no fermentadoras de lactosa, dando lugar a colonias incoloras, las no
fermentadoras, y colonias de color azulado-negro con cierto brillo metálico, las
fermentadoras.
Las colonias de E. coli sobre agar EMB miden 2-3mm de diámetro, con centros oscuros,
casi negros, y pueden presentar o no cierto brillo verde metálico.

EMB: se observa el crecimiento bacteriano de E. Coli en el

agar y por lo tanto es positivo ya que este es un medio de
selectivo y diferencial, adecuado para este tipo de
bacterias.
 EMB: se observa el crecimiento bacteriano de E. Coli en el agar
y por lo tanto es positivo ya que este es un medio de selectivo y
diferencial, adecuado para este tipo de bacterias.

Sin embargo en las imágenes se observa el inadecuado manejo

del agar a la hora de la siembra, por lo que limita el crecimiento
bacteriano.

SIEMBRA EN AGAR ECD

ECD: la siembra en el agar ECD no tuvo ningún éxito por el

gran contenido de humedad que se presentó en las cajas de
Petri, por esta razón no se evidencia el crecimiento bacteriano
por lo tanto nos da como resultado NEGATIVO.
 ECD: la siembra en el agar ECD no
tuvo ningún éxito por el gran
contenido de humedad que se
presentó en las cajas de Petri, por
esta razón no se evidencia el
crecimiento bacteriano por lo tanto
nos da como resultado NEGATIVO.

SIEMBRA EN AGAR CHROMOCULT

El agar para coliformes Chromocult es un medio de cultivo cromógeno selectivo y diferencial

previsto para su uso en laboratorios de microbiología en los que se analizan alimentos y agua. En
un plazo de 24 horas este medio permite la detección, la diferenciación y el recuento simultáneos
de Escherichia coli y coliformes del agua potable y las matrices de alimentos procesados. Una
selección meticulosa de los inhibidores utilizados en los medios selectivos asegura el crecimiento y
la recuperación de esos microorganismos. El agar Chromocult para coliformes contiene Tergitol
como inhibidor de las bacterias Gram positivas, que no tiene efecto negativo sobre el crecimiento
de los coliformes buscados ni de E.coli. Por consiguiente, el agar Chromocult para coliformes es el
medio ideal para la detección de coliformes o E. coli en agua potable y alimentos procesados

CHROMOCULT: se observa un crecimiento bacteriano

en promedio de 15 UFC debido a la humedad contenida
en las cajas de Petri.
CHROMOCULT: se observa un crecimiento bacteriano en
promedio de 15 UFC debido a la humedad contenida en las
cajas de Petri.