UNIVERSIDAD ICESI

Facultad de Ciencias naturales

Laboratorio de Quimica Organica
Periodo I de 2017

CROMATOGRAFÍA: AISLAMIENTO, PURIFICACÍON E IDENTIFICACIÓN DE CLOROFILA

Y CAROTENOS DE LAS HOJAS DE ESPINACA

Holy James Mina Olaya1, Jose Hernandez2

1,2
Quimica farmaceutica, Facultad de ciencias naturales, Universidad Icesi, dirección de la facultad,
Cali Colombia

Recibido: 04 de abril de 2017

RESUMEN

En esta práctica de laboratorio se empleó la técnica de cromatografía para la purficación e identificación de cada
uno de los componentes principales de un extracto de espinaca, empleando silica gel como fase estacionaria y
varias mezclas de elución a diferentes proporciones de hexano:acetona. La identificaciòn de dichos componentes
se hizo por medio de la cromatografìa de capa fina teniendo en cuenta el desplazamiento que cada componenete
presentaba con respecto al frente del eluyente, el cual consistía en una mezcla 70:30, para asi determinar sus
factores de retención (Rf)

Palabras claves: Cromatografía, silica gel, factor de retención, polaridad, adsorción, absorción
__________________________________________________________________________________________

INTRODUCCIÓN particularmente bien adaptada para la separación de

La cromatografia se define como un método físico de
separación en el que los componentes a separar se
disribuyen entre dos fases, una estacionaria, y otra móvil.
El proceso de separación de cada sustancia se da como
resultado de repetidos procesos de adsorción-desorción
durante el movimiento de los componentes de la mezcla
arrastrados por la fase móvil a lo largo de la fase
estacionaria, produciéndose la separación debido a las
diferencias en las constantes de distribución de los
componentes de la mezca entre la fase estacionaria y la
fase móvil.
La fuerza en la que es adsorbido un componente
depende de su polaridad, de la actividad del adsorbente
y también de la polaridad de la fase móvil. En general,
entre más polar es un compuesto más facilmente será
adsorbido. Éste tipo de cromatografía está
compuestos de polaridad baja y media.
En esta practica se procedera a purificar e identificar
cada uno de los componentes principales de un extracto
de espinaca empleando la cromatografia en columna
(CC) para su separación y la cromatografia en capa fina
(CCF) para su identificación.
DATOS, CALCULOS Y RESULTADOS
Para la identificación de cada uno de los componentes
obtenidos en la cromatografia en columna, se procedió
a determinar los factores de retención (Rf) de cada uno
de ellos por medio de la cromatografia en capa delgada
que se obtuvo (imagen 1) empleando la siguiente
ecucacion:
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑐𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜
𝑅𝑓 =
𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑑𝑖𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒

1
 Imagen 1. Placa cromatografica realizada en el
En la tabla 1 se reportan las distancias recorridas por laboratorio
cada uno de los compuestos y el valor obtenido de su
Rf

Tabla 1. Distancias recorridas por cada uno de

los compuestos, el valor obtenido en su Rf y el
pigmento mostrado en placa de capa fina
Dista Distan Factor
Tabla de ncia cia de Color
resultado recorr recorri retenc
s ida da por ión
del c/u (Rf)
diluen Imagen 2. Grafico de representación de Rf’s en
te la placa cromatografica, con el valor de factor de
Caroteno 4,1 0,69 Naranja retención y pigmento mostrado
Xantofila 2,4 0,41 Verde
5,9 Oscuro
α clorofila 1,6 0,27 Verde
esmeralda
β clorofila 1,4 0,24 Verde claro

Tabla 2. Estructura de compuestos y momentos

de polares (Fuerzas de Debyes huckel)

Component Estructura Momen

es to
dipolar

0
Hexano (No
polar) Calculo 1. Valores para los Rf’s, basados en la
ecuación para el calculo del factor de retención

𝟒, 𝟏
𝑹𝒇 𝒄𝒂𝒓𝒐𝒕𝒆𝒏𝒐 = = 𝟎, 𝟔𝟗
𝟓, 𝟗
Acetona 2,72
(polar) 𝟐, 𝟒
𝑹𝒇 𝒙𝒂𝒏𝒕𝒐𝒇𝒊𝒍𝒂 = = 𝟎, 𝟒𝟏
𝟓, 𝟗

𝟏, 𝟔
𝑹𝒇 𝒄𝒍𝒐𝒓𝒐𝒇𝒊𝒍𝒂 𝜶 = = 𝟎, 𝟐𝟕
𝟓, 𝟗

2
 𝟏, 𝟒
𝑹𝒇 𝒄𝒍𝒐𝒓𝒐𝒇𝒊𝒍𝒂 𝜷 = = 𝟎, 𝟐𝟒
𝟓, 𝟗
DISCUSIÓN DE RESULTADOS
Para la cromatografía de columna se uso para la fase
movil la mezcla de hexano y acetona. La razón por la
que se uso una mezcla de un disolvente apolar y uno
con pequeña porción polar (compuesto apolar hexano,
compuesto con pequeña porción polar, acetona. Ver
tabla 2) como eluyente se debio a que la muestra de
espinaca estaba conformada por compuestos de baja
polaridad y estos se retienen en la fase estacionaria. En
la practica el eluyente por su estructura química
contribuye a que los pigmentos se separen mediante
equilibrios sucesivos de adsorción, de no ser así las
clorofilas no se separarían ya que cuentan con
estructura similar (clorofila α con un radical metilo, y,
clorofila β con un grupo aldehido) que provoca una
mayor polaridad de clorofila β con respecto a la clorofila
α. De aquí tenemos que el pigmento verde claro
(clorofila β) es más de mayor polaridad y el pigmento
naranja (caroteno) es el de menor polaridad.
De esta manera, las moleculas del soluto se absorben
en la fase estacionaria, y mientras se produce la elución
van siendo desplazadas por las moleculas del
disolvente de la fase movil. Los componentes del soluto
más polares se retienen más rapidos que aquellos con
menos polaridad.
Con todo esto tambien podemos determinar que las
interacciones formadas entre los pigmentos más
polares son del tipo dipolo – dipolo inducido. Mientras
que los pigmentos menos polares y la fase movil son del
tipo de fuerzas de Van der Waals.
CONCLUSIONES
La separación de pigmentos mediante mediante
cromatografía se da por medio de un mecanismo de
adsorción, donde se establecen equilibros de adsorción
– desorción que depende de la polaridad de los
pigmentos y el tipo de fuerzas establecer con los
componentes de la fase estacionaria y la estructura del
disolvente de fase móvil. Así tenemos que la clorofila β
es más polar que la clorofila α, se adsorbe más
intensamente más intensamente y presenta un factor de
retención (Rf) menor. Los carotenos por su parte son
hidrocarburos, y aunque la deslocalización de
electrones provoca fuerzas de Van der Whaals, no son
suficientemente fuertes como para interactuar con la
fase estacionaria, por lo que quedan disueltos en la fase
movil y se arrastran con esta, presentando un mayor
factor de retención (Rf).
Así tenemos que la separación de componentes de la
mezcla se determina por las interacciones polares
(dipolo – dipolo o fuerzas de Van der Waals) de los
componentes de la misma con fases estacionaria y
móvil.
REFERENCIAS
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