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TP 1
II. RECHERCHE DES MOLÉCULES ALIMENTAIRES
Substance à mettre
Réactif utilisé Résultat
en évidence
Protides
Présence d’au moins Réaction du biuret Coloration allant du rouge au violet.
deux liaisons • 3 à 4 mL de solution protéique
peptidiques • 1 mL de soude NaOH à 20 % – quelques
gouttes de sulfate de cuivre à 1 %
• agiter doucement.
Présence de noyaux Réaction xanthoprotéique Coloration jaune.
aromatiques • 3 à 4 mL de solution protéique
(benzéniques) - • 1 mL d’acide nitrique concentré
acides aminés de • porter à ébullition pendant une ou
la série aromatique : deux minutes.
tyrosine, tryptophane,
phénylalanine
Glucides
Oses (glucose, Test de Fehling Précipité d’oxyde cuivreux dont la teinte
fructose), diosides • 2 mL de solution glucidique varie du jaune au rouge orangé.
(lactose) • 2 mL de solution de Fehling
Le saccharose est un • (solution A : sulfate de cuivre –
sucre non réducteur, solution B : tartrate de potassium-
non décelable par sodium et soude - mélanger les deux
ces techniques solutions à volumes égaux).
• Chauffer.
Bandelettes test spécifiques au glucose Le test repose sur une double réaction
• Introduire la bandelette dans enzymatique :
la solution à tester, la retirer immé- La glucose-oxydase catalyse l’oxydation
diatement, la tapoter sur le rebord du glucose en acide gluconique et
du tube à essai et lire le résultat après peroxyde d’hydrogène.
dix secondes. La peroxydase catalyse l’oxydation d’un
chromogène (iodure de potassium) par
le peroxyde d’hydrogène avec apparition
d’une coloration violacée.
Polyosides Réaction à l’eau iodée En présence d’amidon, l’eau iodée vire
(glycogène, amidon) • Quelques mL de solution (empois au noir-violacé.
d’amidon, glycogène) et 2 à 3 gouttes En présence de glycogène, elle vire au
de réactif iodo-ioduré. brun.
341
TP 1 • Mise en évidence de quelques constituants de la matière
Substance à mettre
Réactif utilisé Résultat
en évidence
Lipides
Tous les lipides Rouge soudan III Coloration des gouttelettes d’huile en
rouge-orangé
Test du papier
• Frotter le composant sur une feuille Il apparaît une tache translucide
de papier. indélébile.
• Laisser sécher.
Acides gras insaturés, Test au lugol (et empois d’amidon)
c’est-à-dire avec au • Verser dans un tube à essai 5 mL Le mélange devient brun- rougeâtre.
moins une double d’huile et dix gouttes de lugol, agiter
liaison isolée. • Chauffer au bain-marie bouillant La coloration vire au jaune.
Acide oléique, acide ou à la flamme du bec bunsen.
linoléique : (huile • Lorsque le virage est terminé, laisser Il ne se produit pas de coloration bleue.
d’olive). refroidir et ajouter quelques gouttes
d’empois d’amidon (l’iode est masqué
par sa combinaison avec les acides
gras)
• Ajouter un excès d’eau iodée. La coloration bleue apparaît.
Eau et sels minéraux
Eau Chauffage
• Faire chauffer l’échantillon dans Dépôt de vapeur d’eau sur les parois
un tube à essai. du tube à essai.
342
Travaux pratiques
Substance à mettre
Réactif utilisé Résultat
en évidence
Eau et sels minéraux (suite)
Cation ammonium Réactif de Nessler
NH4+ • Ajouter quelques gouttes de réactif Coloration jaune à brun.
dans la solution à tester.
Cation ferrique Thyocyanate de potassium
Fe3+ • Ajouter quelques gouttes de réactif Coloration rouge.
dans la solution à tester.
TP 1
Alcool
Alcool Dichromate de potassium L’éthanol s’oxyde en éthanal et acide
• Dilué à 5 % dans l’acide nitrique con- éthanoïque en présence des ions
centré (avec gants et sous la haute dichromates. Ceux-ci de couleur orange
aspirante). sont réduits en ions chrome, de couleur
verte.
343
TRAVAUX PRATIQUES
2 Mise en évidence
des organites cellulaires
Matériel
Organite Colorant Manipulation
biologique
Noyau Bulbe d’oignon Aucun • Prélever l’épiderme d’une tunique charnue.
• Monter entre lame et lamelle dans une goutte d’eau
du robinet.
• Le noyau discret est visible lorsqu’on module l’intensité
de l’éclairage.
Vacuole Bulbe d’oignon Rouge • Réaliser le prélèvement d’une surface d’environ
blanc neutre 0,5 mm ¥ 0,5 mm de l’épiderme d’une tunique interne
du bulbe.
• Monter entre lame et lamelle dans du rouge neutre
(pour l’oignon blanc).
• La vacuole est colorée en rose et occupe l’essentiel
du volume cellulaire lorsque la cellule est turgescente.
Bulbe d’oignon Aucun • Détacher délicatement un lambeau de 0,5 mm ¥ 0,5 mm
rose ; d’épiderme de tunique d’oignon ou de pétale.
pétales rouges, • Monter entre lame et lamelle dans de l’eau.
bleu ou violets • Les vacuoles renferment des pigments, notamment
l’anthocyanine qui confère la couleur rouge ou bleu.
Chloroplaste Élodée du Aucun • Monter la feuille d’élodée directement entre lame et
Canada ; lamelle.
feuilles vertes • Les chloroplastes sont très nets dans le cytosol. Il est
fines possible d’observer les mouvements de cyclose de ces
organites.
Amyloplaste Pomme de Lugol • Gratter le tissu amylifère du parenchyme cortical
Terre ; de la pomme de terre, ou de l’albumen des semences.
graine de • Monter en lame et lamelle dans du lugol.
Haricot ; • Les amyloplastes sont très nombreux et dispersés
caryopse de dans la préparation, sous forme de masses ovoïdes
Maïs bleu-violet. Ils peuvent également être contenus dans
des cellules restées intactes.
Chromoplaste Tomate Aucun • Gratter la face interne des loges carpellaires du fruit
mûr.
• Monter entre lame et lamelle dans de l’eau.
• Les chromoplastes sont sous forme de vésicules claires
renfermant des masses rouges qui peuvent être parfois
organisées en aiguille.
Grains Graine de Ricin Aucun • Réaliser des coupes fines de la région corticale de la
d’aleurone graine.
• Monter entre lame et lamelle dans de l’huile de ricin.
• Les grains d’aleurone se différencient par leur forme :
les globoïdes sont sphériques tandis que les cristalloïdes
ont une forme plus anguleuse.
344
TRAVAUX PRATIQUES
3 Extraction des pigments
assimilateurs de la feuille
d’une Angiosperme
c Utiliser une bande de papier Whatman.
c Tracer 2 repères sur le papier :
– un à 2 cm du bord inférieur : le point de dépôt ;
TP 3
– un autre à 18 cm au-dessus du précédent : limite de migration du solvant.
c Écraser une petite surface de la feuille avec le bout arrondi d’une tige en verre (écraser
suffisamment de surface pour assurer un dépôt très vert et enlever les fragments de feuille
qui s’y trouvent).
c Laisser sécher.
c Remplir l’éprouvette d’un mélange de solvants organiques (85 % éther de pétrole + 10 %
acétone + 5 % cyclohexane). Isolement des lipides.
c Accrocher la bande et la descendre doucement dans l’éprouvette de telle sorte que le
niveau du solvant soit au-dessous du point de dépôt (le dépôt ne doit pas toucher le solvant
et la bande ne doit pas être en contact avec la paroi de l’éprouvette).
c Recouvrir l’éprouvette d’un cache en aluminium. (évite la dégradation des pigments par la
lumière).
c Attendre 1 heure et observer le chromatogramme obtenu par la coloration naturelle des
pigments photosynthétiques.
Front du solvant
Carotène
Xantophylle
Chlorophylle b
Dépôt initial
Mélange de solvants
Dépôt initial
Chromatogramme obtenu par migration des pigments photosynthétiques d’une feuille verte (épinard).
Les différents pigments liposolubles de la solution brute migrent de manière différente en fonction de leur
solubilité dans la phase mobile (mélange de solvants) et des interactions avec la phase stationnaire (papier
Whatman).
345
TRAVAUX PRATIQUES
4 Mise en évidence de constituants
du noyau, dont l’ADN
I. MATÉRIEL BIOLOGIQUE « PROBANT »
c Oignon (origine végétale).
c Déposer le fragment, à plat, sur une lame mince, dans une goutte d’eau, et recouvrir d’une
lamelle sans former de bulle d’air.
c Observer au microscope optique (différents grossissements).
b) Extraction de l’ADN
c Couper un morceau d’écaille d’oignon en petits fragments avec des ciseaux fins et placer
ces fragments dans un mortier.
c Broyer avec un pilon de façon à obtenir un broyat.
c Dissoudre, dans un bécher de 100 mL, une cuillerée à café de sel fin.
c Ajouter cette eau salée au broyat d’oignon. (L’eau salée augmente la dissolution de
l’ADN).
c Ajouter quelques gouttes de liquide vaisselle, ce qui permet la dissolution des membranes.
c Filtrer sur une gaze (et non sur coton) dans un bécher.
c Ajouter dans chaque tube à essai contenant le filtrat, le même volume d’éthanol, ou de
méthanol très froid (favorise l’agrégation de l’ADN par évacuation d’eau de la structure).
en versant, lentement, sur le bord du tube, incliné, de façon à éviter de mélanger les
deux phases.
c Il apparaît, après quelques minutes un précipité blanchâtre, à l’interphase entre l’alcool
et l’eau, qui correspond à de l’ADN complexé aux protéines.
c Dans l’un des tubes à essai, révéler la présence d’ADN par du vert de méthyle.
c Dans l’autre tube à essai, révéler la présence de protéines complexées à l’ADN par un
test au biuret.
346
Travaux pratiques
TP 4
troisième segment) avec une pince et
la séparer du reste du corps afin de
dégager les glandes salivaires de la
larve.
c Placer sur cette zone ainsi séparée
Chromosome géant de larve de diptère.
du reste du corps, une goutte de vert
de méthyle acétique et laisser agir cinq minutes.
c Recouvrir l’échantillon d’une lamelle.
c Observer au microscope : présence de chromosomes polyténiques bien visibles, colorés
en vert.
347
TRAVAUX PRATIQUES
5 Mise en évidence de structures
nerveuses et musculaires
I. FIBRES NERVEUSES
c Prélever 1 cm de nerf sciatique de Grenouille :
– retirer la peau d’une patte postérieure ;
– placer l’animal sur la face ventrale ;
– séparez les deux principaux muscles de la cuisse avec les doigts ;
– le nerf sciatique apparaît sou forme d’un filament blanc bordé d’un vaisseau ;
– sectionner et prélever un centimètre de nerf.
c Placer le fragment de nerf sur une lame mince, dans une goutte de bleu de méthylène.
c Dilacérer (« peigner » dans le sens de la longueur) avec
l’extrémité pointue d’une aiguille fine de façon à
séparer les fibres nerveuses.
c Recouvrir d’une lamelle.
c Observer au microscope (¥ 400).
c Les fibres nerveuses apparaissent colorées en bleu.
b) Coloration de motoneurones
c Prélever avec un scalpel, sur la moelle fraîche de
poisson (ou de Grenouille), un petit fragment de
substance grise d’une corne antérieure.
c Étaler sur une lame en une seule fois.
c Laissez sécher.
c Recouvrir le frottis de bleu de méthylène.
c Laisser agir le colorant quelques minutes avant
de rincer.
c Observer au microscope.
c Les somas et dendrites principales de certains
motoneurones sont colorés en bleu.
III. FIBRES MUSCULAIRES
c Dilacérer un fragment de muscle de bœuf sur une
lame mince.
c Colorer au bleu de méthylène.
c Recouvrir d’une lamelle.
c Observer au microscope optique.
c Les fibres musculaires sont colorées en bleu, mettant
en évidence la striation transversale.
348
TRAVAUX PRATIQUES
6 Le rythme cardiaque
I. MISE EN ÉVIDENCE DE L’AUTOMATISME CARDIAQUE
ET EFFET D’UNE SUBSTANCE CARDIO-ACCÉLÉRATRICE À PARTIR D’UN CŒUR D’HUÎTRE
a) Dissection
c Placer l'huître ouverte horizontalement au-dessus d’une cuvette à dissection.
TP 6
c Enlever la valve supérieure en prenant soin de conserver « l'eau » de l'huître.
c Repérer les différents organes et notamment la position du cœur, situé à l'avant du muscle
adducteur.
c Dégager, à l'aide de pinces et de ciseaux, les bords du manteau de façon à voir le cœur
(translucide), repérable à ses battements lents. (remarque : le sang de l'huître est incolore).
349
TRAVAUX PRATIQUES
7 Expérience du foie lavé
de Claude Bernard
(Mise en évidence du rôle de stockage réversible du glucose dans le foie)
350
TRAVAUX PRATIQUES
8 La microphagie chez la Moule
c Monter entre lame et lamelle, dans de l’eau salée (30 g·L–1), un fragment de branchie de Moule
vivante.
c Observer au microscope
c Les cellules ciliées vibratiles entraînent les particules alimentaires en suspension (vers les
TP 8
palpes).
c En cas d’absence de particules alimentaires, l’addition d’une très petite goutte d’encre de
chine sur le côté de la lamelle permet de visualiser les mouvements des particules qu’elle
contient.
351
TRAVAUX PRATIQUES
9 ExAO (expérimentation
assistée par ordinateur)
L’Expérimentation Assistée par Ordinateur (ExAO) peut être utilisée avec profit dans certains
exposés scientifiques. Plusieurs matériels existent sur le marché, toutefois nous illustrerons
cette fiche avec le matériel Jeulin® qui est (jusqu’en 2007) le seul matériel disponible lors des
épreuves du CAPES SVT.
I. LA DÉMARCHE EXAO
c Il s’agit de mesurer certains paramètres d’un phénomène biologique et de les représenter
sur l’écran d’un ordinateur en temps réel.
®
c Avec le matériel Jeulin , les éléments de la chaîne ExAO sont les suivants :
Phénomène biologique
Capteur
Autres capteurs
Adaptateur et adaptateurs
Console ESAO
Ordinateur
c La chaîne d’acquisition qui comporte capteurs, adaptateurs, console et interface, peut être
plus ou moins complexe selon le nombre de paramètres mesurés simultanément (par ex. pCO2,
pO2, concentration d’éthanol et température dans une étude sur le métabolisme des levures).
c Le traitement des mesures est réalisé par un logiciel dédié qui affiche les résultats sur un
schéma donné pour l’expérience considérée (par exemple, variations de potentiel en fonction
du temps ou taux d’oxygène en fonction du temps).
II. EXEMPLE : ÉLECTROPHYSIOLOGIE DU NERF DE CRABE
L’expérience permet l’enregistrement et la visualisation de l’activité du nerf de crabe. On peut
mener une étude de l’excitabilité du nerf grâce à une expérience sur les effets de stimulations
d’intensités croissantes, ou une étude sur les périodes réfractaires en faisant varier le délai entre
deux stimulations.
a) Matériel
c Ordinateur
c Console ESAO
®
352
Travaux pratiques
c Logiciel Neuro©
c Nerf de crabe isolé et eau de mer
b) Préparation du nerf de crabe
c Prélevez l’une des pattes du crabe (hormis les pinces). Séparez délicatement les deux
derniers articles des articles précédents. Un filament blanc reste accroché aux deux
articles : il s’agit d’un morceau du nerf.
c Posez l’ensemble sur les électrodes de la table à nerf. N’utilisez que de l’eau de mer sur
le nerf au contact des électrodes.
c) Montage
TP 9
Circuit de stimulation
Ordinateur
Table à nerf
Console
353
TRAVAUX PRATIQUES
10 Symbiose des végétaux
chlorophylliens avec la microflore
I. SYMBIOSE DES VÉGÉTAUX AVEC LA MICROFLORE MYCÉLIENNE :
EXEMPLE D’ECTOMYCORHIZE
c Réaliser une coupe transversale de racine mycorhizée (sur des racines de hêtre ou de chêne
par exemple), dans de la moelle de sureau.
c Placer la sur une lame mince dans du bleu de toluidine, du bleu de méthylène phéniqué, ou
encore du Bleu coton C48 avec de l’acide lactique.
c Laisser agir cinq minutes.
c Observer la préparation au microscope (obj. ¥ 100, en immersion).
c Un réseau dense d’hyphes enveloppe la racine (ectomycorhizes)
354
TRAVAUX PRATIQUES
11 Recherche des acteurs
de la fermentation
Le lait frais contient plusieurs genres de bactéries lactiques (lactobacilles en bâtonnets, strepto-
coques en chaînettes), non toxiques pour l’Homme, mais qui transforment le lactose du lait
en acide lactique. Ce dernier fait alors coaguler la caséine du lait, transformant le lait en lait
caillé.
TP 11
Réaliser un frottis d’une goutte de yaourt
Lamelle
Lame
Observer au microscope
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