DILUCIONES SERIADAS

J. Trujillo1, J. García2

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Estudiante de Ingeniería Agroindustrial, Universidad Surcolombiana, Facultad de
Ingeniería, Neiva-Colombia

RESUMEN

En el presente artículo se hablará sobre las diluciones seriadas con tres medios de cultivo
tales como plate count agar, sabouraud agar y macconkey agar. Entre sus características se
pueden identificar la colonia, dentro del proceso se hará uso de medios de cultivo artificial
tipo agar y de diluciones seriadas, con tres tipos de agar para la obtención de un ambiente
óptimo de crecimiento y reproducción de microorganismos, donde en las muestras extraídas
por medio de la dilución seriada para sus análisis, se hicieron visible, colonias de levaduras.

Palabras clave: Dilución seriada, Medio de cultivo, colonia, levaduras.

ABSTRACT

In this article we will talk about serial dilutions with culture media such as the agar agar plate,
sabouraud agar and macconkey agar. Among its characteristics can be identified the colony,
within the process can be used the use of artificial agar type media and serial dilutions, with
three types of agar to obtain an optimal environment for growth and reproduction of
microorganisms, where in the Samples extracted by means of serial dilution for analysis,
yeasts were made visible.

Key Word: Serial dilution, culture medium, colony, yeast.

 1. MARCO TEÓRICO: Lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y
la mezcla de sales biliares y el Cristal violeta son
Es un hecho que en la mayoría de los los agentes selectivos que inhiben el desarrollo
ambientes, la densidad microbiana suele de gran parte de la flora Gram positiva. El agar
ser demasiado elevada o baja para poder es el agente solidificante, todas las especies de
realizar una siembra directa de la muestra la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el
que de buenos resultados en la mismo, por fermentación de la lactosa,
enumeración de microorganismos. Esta disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto
situación hace necesaria la dilución o la produce un viraje del color del indicador de pH
concentración de la muestra previa a la (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la
realización de cualquier estudio. Además, precipitación de las sales biliares. Los
las muestras sólidas requieren su dilución microorganismos no fermentadores de lactosa
para facilitar la manipulación y permitir producen colonias incoloras (Britania
trabajar con ellas como si fueran muestras Laboratorios, 2019).
líquidas (Arana, Orruño, & Barcina, 2012).
El plate count agar Plate Count Agar (Agar
El sabouraud agar medio de cultivo de métodos estándar) se utiliza para la
recomendado para el aislamiento y enumeración de bacterias en el agua, aguas
desarrollo de hongos, particularmente los residuales, alimentos y productos lácteos en un
asociados con infecciones cutáneas (piel, entorno de laboratorio. Plate Count Agar no está
pelo). En el medio de cultivo, la peptona, la diseñado para su uso en el diagnóstico de
tripteína y la glucosa son los nutrientes para enfermedades u otras afecciones en humanos.
el desarrollo de microorganismos. El alto Esta fórmula cumple con las normas ISO 4833-
contenido de glucosa, la presencia de 1 y 2: 2 0 1 3 , ISO 17410: 2 0 0 1 , Asociación
cloranfenicol y el pH ácido, inhiben el Americana de Salud Pública (APHA),
desarrollo bacteriano y favorecen el Asociación de Químicos Analíticos Oficiales
crecimiento de hongos y levaduras. El agar (AOAC) y Manual de Análisis Bacteriológico
es el agente solidificante. Puede ser de la FDA, Plate Count Agar (Agar de métodos
suplementado con otros agentes selectivos estándar) está libre de suplementos selectivos y
de crecimiento (Britania, 2019). es relativamente rico en nutrientes, lo que lo
hace ideal para la enumeración de organismos
viables, ya sea siguiendo un método de placa de
El mac Conky agar el medio de vertido o un método de placa de superficie que
cultivo, las peptonas, aportán los nutrientes se puede acoplar con una bandeja de espiral.
necesarios para el desarrollo bacteriano, la Plate Count Agar (Agar de métodos estándar)
también se
Conoce como Tryptone Glucose Yeast
Agar. Esta fórmula se especifica en los
Procedimientos del método estándar
(Neogen Seguridad Alimentaria, 2018)
2. MATERIALES:
 Mac Conkey Agar
 Sabouraud Agar
 Erlenmeyer
 Agua Peptonada
 Probeta
 Pipeta
3. METODOLOGÍA:
Se prepara dos medios de cultivos en
este caso EMB agar y lisina agar, siguiendo
las indicaciones de la etiqueta se deben
agregar 36 g/L de EMB agar y 66 g/L de
lisina agar, como se van a preparar 10 cajas
de Petri por cada medio de cultivo, se
realiza los cálculos:
EMB agar= 36 g/L
 Autoclave
 Plate Count Agar
Se pesan en una balanza y se mezclan cada
uno en un Erlenmeyer, a continuación se tapan
las bocas de los Erlenmeyer con papel kraft, se
agita y se lleva cada uno a una placa de
calentamiento a 300°C hasta que hierva y
posteriormente junto con las cajas de Petri
envueltas en papel kraft se introducen en un
autoclave a 120°C y 7 lb de presión durante 7
minutos (Figura 1).
Figura 1. Autoclave
Luego de que se esterilicen se sacan del
autoclave, se dejan enfriar y se sirve en las cajas
de Petri hasta que se solidifiquen e
inmediatamente se procede a cultivar, en
seguida se introducen en una caja de galletas
junto con un reloj de vidrio que contiene
aguardiente y alka-seltzer, después de esperar
varios días a que crezcan microorganismos
(Figura 2) se hace un frotis a cada caja de Petri,
en unas se hace tinción de Gram y en otras
se agrega lugol y se cubre con un
cubreobjetos.

Figura 2. Microorganismos en medios

de cultivos

En la tinción de Gram se añade una gota

de aceite de inmersión y luego se observa
en el microscopio con objetivo a 100x
(Figura 3) y en el lugol se observa a 40x.

Figura 1. Siembra de papas fritas y de yogurt

Figura 3. Microscopio óptico con en Agar Plate Count. Técnica por estrías.
objetivo a 100x. Dilución 10-1, 10-2 y 10-3.

En la figura 2, se observa que no hubo

desarrollo de enterobacterias, esto se debe a que
4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN: no había presencia de estas bacterias en las
muestras de papas fritas y de yogurt.
Como se observa en la Figura 1, no hubo
desarrollo bacteriano ni fúngico en las
muestras de papas fritas y de yogur, esto se
debe a que posiblemente el agar estaba
vencido.
 Figura 3. Observación de levaduras.
Siembra de papas fritas en Agar Saburou.
Técnica por agotamiento. Dilución 10-3.

Como se puede observar en la Figura 4, hay

3 colonias de hongos, por su morfología se trata
Figura 2. Siembra de papas fritas y de de levaduras y haciendo un conteo de placa hay
yogurt en Agar MacConkey. Técnica por 3x102 UFC/ml.
cuadrantes. Dilución 10-1, 10-2 y 10-3.

En la Figura 3 se puede observar una

colonia de hongos, por su morfología se
trata de levaduras y haciendo un conteo de
placa hay 1x103 UFC/ml.

Figura 4. Observación de levaduras.

Siembra de yogurt en Agar Saburou. Técnica
por agotamiento. Dilución 10-2.

5. CONCLUSIONES:
De los medios de cultivo utilizados para
la proliferación de microorganismos se
denota crecimiento en el sabouraud agar
dadas su composición química, haciendo
posible las condiciones óptimas de
reproducción de los mismos.
En las muestras extraídas para sus
análisis se hicieron visible, levaduras ya
que en los otros dos medios como lo es el
macconkey agar, que sirve como medio
selectivo de enterobacterias, no se encontró
reproducción de los mismos, en la muestra
de alimentos (papas, yogurt), y en el plate
count agar al ser un medio enriquecido no
hubo proliferación por que de tanto tiempo
que tiene el agar en uso, se ha vencido y
pierde sus compuestos de enriquecimiento.
REFERENCIAS
1. Arana, I., Orruño , M., & Barcina, I. (05
de 2012). OpenCourseWare
Universidad del pais vasco. Obtenido de
OpenCourseWare Universidad del pais
vasco:
https://ocw.ehu.eus/pluginfile.php/1654
/mod_resource/content/1/Tema_1._Dilu
ciones_y_concentraciones.pdf
2. Britania. (20 de 06 de 2019). Sabouraud
Glucosado Agar. Obtenido de
Sabouraud Glucosado Agar:
https://www.britanialab.com/back/publi
c/upload/productos/upl_5a2971216486
e.pdf
3. Britania Laboratorios. (20 de 07 de
2019). Mac Conkey Agar. Obtenido de
https://www.britanialab.com/back/publi
c/upload/productos/upl_5a2ed674cf661
.pdf
4. Neogen Seguridad Alimentaria. (28 de
08 de 2018). Plate Count Agar
(Standard Methods). Obtenido de
https://foodsafety.neogen.com/pdf/ncm/
ncm0010_pi.pdf