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O autor SummaryCRK3 uma proteína cinase de serina / treonina relacionada com cdc2 da
famíliaCDK é essencial para a transição através do ponto de verificação G2-Mphase do ciclo de
Leishmaniacell. O sistema de expressão e purificação foi desenvolvido para produzir L ativo.
majorCRK3 em complexo com cyclinpartner CYC6. CRK3 O CYC6 foi utilizado para desenvolver
um teste de rastreio de alto rendimento (HTS) utilizando a tecnologia de polarizao por
fluoresccia IMAP. Foram pesquisadas duas bibliotecas quicas de composto contra CRK3 CYC6 e
o rastreio rastreado contra um complexo CDK2 CycA complexo de cinase dependente de
humano. Foram identificadas duas famílias químicas principais de inibidores que inibiram
especificamente quinase dependente de ciclina theleishmanial as azapurinas e os tiazoles. A
análise da relação entre a atividade da estrutura (SAR) dos achados identificou os grupos
químicos ligados ao arcabouço de zeazurina que são essenciais para a inibição da atividade da
proteína quinase CRK3 CYC6. Os resultados de CRK3 CYC6 foram subsequentemente testados
contra um painel de 11 cinases de mam�ero incluindo CDK1 humano CYCB CDCD2 humano
CYCA e CDK4 humano CYCD1 para determinar a sua selectividade. Compostos seletivos para
CRK3 CYC6 foram testados contra Leishmania. Progresso na sintetização dos derivados
potentes e seletivos dos achados do HTS é discutido com o intuito de avaliar seu potencial para
o desenvolvimento de novas terapêuticas contra a leishmaniose.
Várias doenças são atribuídas a defeitos nas vias de sinalização celular controladas por
proteína-quinase incluindo câncer e doença inflamatória 67 abrindo a possibilidade de projetar
inibidores da proteína quinase para corrigir esses defeitos. De fato o Imatinibe (Gleevec) que
inibe a tirosina quinase Ableson (Abl) já está licenciado para o tratamento da Leucemia
Mielóide Crônica (CML). 8 Vários inibidores químicos pequenos de quinases dependentes de
ciclina (CDKs) estão sendo submetidos a ensaios clínicos para avaliar sua eficácia. eficácia
intrometer câncer. A justificativa para o seu desenvolvimento decorre do fato de que a
desregulação da sinalização de CDK em muitos cânceres resulta em proliferação não-verificada
9. Exemplos notáveis incluem o alvocidibe (flavopiridol) e o seliciclibe (CYC202 ou R-
roscovitina). O alvocidibe foi o primeiro inibidor da CDK a atingir testes clínicos 10 é um
inibidor da CDK não purina que inibe uma ampla variedade de CDKs e outros alvos
intracelulares. 12. Pode induzir parada celular tanto nas fronteiras G1-S como G2-M 13 e
inibe o crescimento de várias linhagens de células tumorais sólidas 14. O seliciclib é um
inibidor mais seletivo da CDK e demonstrou uma maior atividade tumoral contra xenoenxertos
de tumores humanos. Estudos em ciclos de leveduras e mamíferos estabeleceram as
principais CDKs e ciclinas que estão envolvidas na regulação do ciclo celular. Este trabalho é
relevante para o estudo do ciclo celular do parasita uma vez que os homólogos de muitas
dessas proteínas reguladoras do ciclo celular foram identificados em protozoários. parasitas
por exemplo CRK3 inLeishmania 16 e T. brucei 17; ciclinas mitóticas emTrypanosomabrucei
18. Devido ao seu papel fundamental no ciclo celular estas proteínas oferecem uma área
atrativa para a descoberta e desenvolvimento de fármacos contra tripanosomatídeos. Análise
do genoma dos três parasitas tripanossomatídeos L. maior t. bruceiandT. cruzi revela que a
família CDK em tripanossomatídeos é relativamente grande comparada a outros organismos
unicelulares com 11 inT. bruceiandL. majorand 10 inT. cruzi. Além disso 10 cyclins putativos
CYC2-11 foram identificados em todos os três parasitas 4 .Leishmania tem uma ciclina
adicional CYCA que está ausente de ambos. bruceiandT. Cruzi
as proteínas foram determinadas tanto por coloração com Coomassie blue gel como por
Western blot e subsequentemente reunidas em conjunto. As fracções reunidas tinham glicerol
adicionado a 10% do volume final junto com os inibidores de protease completos livres de
EDTA da Roche foram quantificados e armazenados a 280 uC