ESTERILIZACIÓN Y PREPARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO

Nicole Valeria Calambas, Valentina Valencia Bacca, Leidy Marcela Güilón, Marco
Antonio Marulanda López.
Sena- Centro ASTIN
Tecnología en Química Aplicada a la Industria
Ficha: 1619390
Nvcalambas@misena.edu.co Vvalencia885@misena.edu.co lmgilon@misena.edu.co
mamarulanda74@misena.edu.co

Resumen: En la práctica se llevó a cabo la realización de actividades como la esterilización

y desinfección de diferentes materiales de vidrio usados en el laboratorio con el fin de
adquirir conocimientos y familiarizarse con este proceso, así mismo, como herramientas
fundamentales para evitar la contaminación en la preparación de medios de cultivo y
materiales de laboratorio, adicional a esto el manejo de la autoclave, siempre en el
desarrollo adecuado de los protocolos para el uso adecuado del mismo minimizando los
riesgos, además de ser un instrumento de vital importancia para la desinfección de los
materiales del laboratorio y específicamente para el área de microbiología. Después de
realizarse la esterilización se prosiguió a la preparación de los medios de cultivo asignados
para cada grupo, en este caso correspondió la preparación de agar papa dextrosa (PDA),
teniendo como base fundamental los cálculos previos expresados en su ficha técnica, así
como las aplicaciones correctas de técnicas como el calentamiento, agitación, flameado y
disposición para su envasado en cajas Petri de manera correcta. Después se realizó la
identificación morfológica de los microrganismos en este caso del hongo penicillum y la
bacteria Staphylococcus aureus y así el procedimiento de aislamiento mediante la técnica
de punción y técnica de agotamiento por cuadrante en los diferentes medios de cultivos.

Palabras claves: Esterilización, desinfección, Autoclave, Medios de cultivo, Agar para

dextrosa y Agar nutritivo, aislamiento, microrganismo, bacterias, morfología.

INTRODUCCIÓN (o antisépticos de acuerdo al uso). La

DESINFECCION Y AGENTES
DESINFECTANTES
Desinfección, describe la destrucción
de microorganismos presentes en la
superficie de implementos, equipos y
manipuladores, utilizando sustancias
químicas denominadas desinfectantes
desinfección no implica esterilización,
pues no siempre se eliminan todos los
microorganismos y sus estructuras de
resistencia. Los desinfectantes son
sustancias químicas aplicadas sobre
objetos y superficies; los antisépticos
son sustancias químicas aplicadas
sobre la piel y mucosas. (Triviño,
2011)
Todo buen método de desinfección  Ser económico
deberá cumplir con varias  No debe ser corrosivo, tóxico o
condiciones: irritante para los tejidos.
 Ser al menos solubles en agua.
 Eliminar el mayor número de
microorganismos.
.

Tabla 1: Agentes desinfectantes utilizados en microbiología y su mecanismo de

acción
Al igual que la desinfección la
esterilización es un proceso esencial
en la destrucción y pérdida irreversible
de la capacidad reproductiva del
microorganismo.
ESTERILIZACIÓN
La esterilización es la eliminación o
muerte de todos los microorganismos
que contiene un objeto o sustancia,
por lo general se acondicionan de tal
forma que no puedan contaminarse
nuevamente. El material que se utiliza
para determinación de
microorganismos debe esterilizarse
previamente para liberarlo del
microbiota ambiental. Existen varios
métodos de esterilización, los agentes
físicos tales como: (Calor seco, calor
húmedo, radiaciones) y agentes
químicos tales como: (Cloro y
compuestos clorados, aldehídos,
óxido de etileno, compuestos
fenólicos, ácidos y álcalis). (Triviño,
2011)
El agente más empleado es el calor,
ya sea húmedo o seco; la efectividad
del calor depende de la temperatura y
el tiempo de exposición. Todos los
microorganismos son susceptibles en
distinto grado a la acción de calor.
(Triviño, 2011)
Métodos empleados en la
esterilización:
Tabla 2: Métodos, fuentes y tipos de agentes esterilizantes empleados en microbiología
Como equipo fundamental en la
esterilización y desinfección se tiene la
autoclave: que es un recipiente
metálico de paredes gruesas con
cierre hermético que permite trabajar
con vapor de agua a alta presión y alta
temperatura que sirve para esterilizar
instrumental (material médico, de
laboratorio, etc.) o alimentos.
(Servicios de salud y riesgos , s.f.)
Una autoclave está constituida
básicamente por una cámara rígida y
hermética que incluye una puerta con
dispositivos de seguridad para permitir
introducir los objetos a esterilizar. Esta
cámara lleva adosados dispositivos
para medida de presión y temperatura
y elementos calefactores para
mantenerla caliente. (Servicios de
salud y riesgos , s.f.)
Las autoclaves piden un cierto tiempo
desde el momento de conectarlos a la
red con el fin de estar preparados
térmicamente para los ciclos.
El método de esterilización y
desinfección se hace con el fin de
tener nuestros materiales libres de
patógenos y sustancias que puedan
contaminar nuestro material a la hora
de realizar una práctica, para la
realización de los medios de cultivo
primero se debe hacer la desinfección
y esterilización para poder obtener
unos resultados óptimos cuando se
realice el medio de cultivo.
Como todos los organismos vivos, los
microorganismos requieren ciertos
nutrientes básicos y factores físicos
para el mantenimiento de su vida,
estas necesidades varían según el
tipo de microorganismo y es necesario
conocerlas para cultivarlos en el
laboratorio.
MEDIOS DE CULTIVO
Puede ser de tipos líquidos o
semisólidos, estos constan de
nutrientes necesarios para el
crecimiento o desarrollo de: Bacterias,
virus, hongos, tejidos, etc. (Triviño,
2011)
se caracterizan porque deben
contener: una fuente de carbono,
fuente de nitrógeno, elementos no
metálicos, elementos metálicos,
vitaminas, agua y energía. (Triviño,
2011)
Estos siempre van a tratar de
favorecer el pH y las condiciones
necesarias para los microorganismos,
en el caso de las bacterias los medios
de cultivo pueden ser específicos
según la bacteria, ya sea Gram
positivas o Gram negativas, y algunos
de estos son los agares.
Fig 1: Medio de cultivo
TIPOS DE AGARES EN LOS
MEDIOS DE CULTIVO
El agar se utiliza como agente
gelificante para dar solidez a los
medios de cultivo.
Generalmente los agares más usados
son el agar nutritivo y el agar para
destroza.
Agar nutritivo: El agar nutritivo se
utiliza para el cultivo de una variedad
de microorganismos en un entorno de
laboratorio. El agar nutritivo cumple
con los métodos estándar de la APHA
y la Asociación de Químicos Analíticos
Oficiales (AOAC). El agar nutritivo se
especifica en muchos métodos
estándar para pruebas de alimentos,
agua y otros materiales. (Neogen,
2018)
Tabla 3 Composición del agar
Agar para dextrosa: Es un medio de
propósito general para levaduras y
mohos que puede ser suplementado
con ácidos o antibióticos para inhibir el
crecimiento bacteriano. (Neogen,
2018)
Es recomendado para uso con
métodos de conteo en placa para
alimentos, productos lácteos y
pruebas realizadas en cosméticos.
Tabla 4 Composición de agar PDA
Tabla 5 Clasificación de los medios de cultivo
 MICRORGANISMOS
Los microorganismos son seres vivos
que solo pueden visualizarse con el
microscopio; se encuentran en todos
lados: en el suelo, agua, superficies
corporales, alimentos e incluso en el
aire. La mayoría son unicelulares sin
embargo también existen
microorganismos multicelulares como
algunas algas u hongos, cabe
mencionar que también los virus
forman parte de los microorganismos
en el campo de estudio de la
microbiología, aunque no son
considerados seres vivos. La
supervivencia y crecimiento continuo
de microorganismos depende de un
suministro adecuado de nutrientes y
un ambiente favorable para su
crecimiento. Un medio de cultivo es
una solución que contiene los
nutrientes necesarios para permitir el
crecimiento de microorganismos, en
condiciones favorables de pH y
temperatura (Triviño, 2011)
FORMAS DE LAS BACTERIAS
Las bacterias pueden ser observadas
individualmente a través de un
microscopio o a simple vista si estas
están en conjunto al formar colonias.
Vistas al microscopio, por lo general,
las bacterias presentan tres formas
básicas: las bacterias esféricas se
denominarán cocos, las alargadas
serán bacilos, las bacterias curvadas y
las que tienen forma de espiral serán
los espirilos, espiroquetas, comas o
vibriones; cada una de ellas
presentarán distintas características
(tatiana, 2014)
COCOS
Estas bacterias presentan formas casi
esféricas y sus agrupaciones son
homogéneas. El tamaño de los cocos
oscila entre los 0,8 a 1,0 m. y puede
presentar y tomar diversas formas,
producto de dos factores importantes
como son la tendencia de las células a
mantenerse unidas, una vez sucedida
la división y el o los planos de división
celular. (tatiana, 2014)
BACILOS
Estas bacterias forman agrupaciones
bastante heterogéneas por su
variedad de subtipos morfológicos,
que pueden ser cilíndricos, en forma
de bastón, largos y delgados,
pequeños y gruesos, también pueden
presentar variaciones en sus extremos
pudiendo ser rectos, afilados o
redondeados. (tatiana, 2014)
ESPIRILOS
Dentro de este tipo de bacterias se
encuentran aquellas que en su forma
presentan una o más curvaturas,
algunas pueden presentar forma de
hélices (tatiana, 2014)
FORMA DE LAS COLONIAS
BACTERIANAS
Las colonias son la manera
macroscópica de observar la
morfología que constituye una
agrupación de bacterias, que se
constituyen en agrupaciones
formadas por la reproducción de las
bacterias en un medio en el cual son
incubadas por espacio de 24 horas
aproximadamente; algunas bacterias
requieren semanas de incubación
para su desarrollo y pueden estar
formadas por millones de bacterias, de
esta manera el tamaño de las colonias
puede variar desde 0,5 a 4,0 mm de
diámetro. (tatiana, 2014)
Fig. 2 descripción morfológica macroscópica
realizado en colonias creciendo sobre agar
nutritivo.
Existen varios métodos de siembra de
microorganismos
TECNICAS DE SIEMBRA PARA
HONGOS Y BACTERIAS
La técnica más usada en el laboratorio
de microbiología es probablemente la
trasferencia del microrganismo de un
ambiente a otro con el propósito de
cultivarlos. Para determinar los
caracteres de cultivo de las bacterias,
hongos y otros cultivables, es preciso
obtenerlas en cultivo anexico, existen
varios métodos para aislar las
bacterias en cultivo puro con el fin de
evaluar sus características en estos
medios. (tatiana, 2014)
Siembra en cajas de Petri por la
técnica de agotamiento,
aislamiento o de estría cruzada.
Es un buen método para el aislamiento
de colonias (obtención de colonias
aisladas); mediante esta técnica
buscamos obtener colonias separadas
a partir de un inóculo.
Para su realización:
(i) Se toma la caja de Petri en la palma
de la mano y ligeramente inclinada;
con la mano contraria, se manipula el
asa de argolla previamente
esterilizada por flameado directo a la
llama y con ella se recoge el material
de cultivo, para colocarlo en un área
periférica de la caja haciendo
movimientos circulares para
homogeneizar el inóculo.
(ii) El asa debe ser nuevamente
flameada y enfriada en un lateral del
agar (procurando no dañarlo); a
continuación, se realiza una estría
partiendo de la primera y arrastrando
los microorganismos presentes en ella
hacia el extremo contrario de la
superficie del agar. Se debe procurar
que, en cada sección de la caja, las
estrías queden trazadas con mayor
separación.
(iii) Repita el paso ii, por tres veces
(algunos autores reportan solo dos),
recordando flamear y enfriar el asa
cada vez que culmine una estría y solo
tocar con el asa la estría
inmediatamente anterior, con el
objetivo de ir reduciendo la carga
microbiana arrastrada por la argolla. Fig. 3. Técnica de siembra en cuadrantes, donde
se observan las cuatro estrías realizadas una a
Finalmente se esteriliza el asa antes
continuación de la otra y sin cargar el asa
de descartarla. (Triviño, 2011) nuevamente (Fuente: Rojas, A.).

Siembras en cajas de Petri por la

Figura 2: Pasos para la siembra de bacterias por la
técnica de agotamiento (y otros microorganismos
emulsionables como las levaduras) (Fuente: Rojas,
A.).
Siembra en cajas de Petri por la
Técnica de siembra en cuadrantes.
El objetivo de esta técnica, es el de
diluir el inóculo a medida que se
realizan estrías en la superficie del
agar. Para realizar la siembra, la caja
se divide en cuatro cuadrantes
(imaginariamente o con un marcador
vidriográfico por la base de la caja); se
procede a esterilizar el asa en el
mechero, se toma el inóculo y se inicia
el rayado de la superficie del agar, en
cuatro cuadrantes consecutivos (sin
esterilizar el asa posteriormente o
tomar nuevamente inóculo). Las cajas
así sembradas, se incuban a la
temperatura adecuada de acuerdo a la
bacteria. (Triviño, 2011)
Técnica de siembra masiva.
Este método es muy utilizado para
obtener un gran número de
microorganismos (incremento de
inóculo), en la superficie de un agar.
Esta técnica de siembra utiliza un
hisopo, el cual se pasa por toda la
superficie de la placa en distintas
direcciones y finalmente por el borde
para que, el crecimiento de los
microorganismos sea total en la
superficie de la placa (Triviño, 2011)
Fig. 4. Procedimiento para la realización de una
siembra por la técnica masiva, utilizando hisopos
estériles y sobre la superficie de un agar en caja
Petri (Fuente: Rojas, A.).
Siembras en cajas de Petri por la
Técnica de punción.
Método de siembra utilizado para
observar el crecimiento de hongos y
así más adelante establecer su
morfología; así como, para la
transferencia o subcultivo de cepas
previamente almacenadas y /o
conservadas. Consiste en tomar parte
de micelio con un asa micológica (o
asa recta), y por una punción suave en
el centro de la caja inocular el
microorganismo a estudiar.
Dependiendo del objetivo, pueden
hacerse múltiples picaduras en el agar
(varios puntos de siembra) (Triviño,
2011)
Fig. 5. Procedimiento para la realización de una
siembra por la técnica de punción, utilizando asa
micológica y sobre la superficie de un agar en caja
Petri (Fuente: Rojas, A.).
TÉCNICAS DE SIEMBRA EN
MEDIOS CONTENIDOS EN TUBOS
Siembra en tubos por estría
simple.
Se realiza en un tubo con medio sólido
inclinado (en bisel o pico de flauta), y
deslizando el asa sobre la superficie
expuesta del agar de manera que se
marquen surcos o estrías. (Triviño,
2011)
Siembra mixta en tubos.
Se realiza sobre medios inclinados o
en bisel, haciendo una picadura hasta
el fondo del tubo con asa recta y luego
haciendo una siembra en estría sobre
la superficie expuesta del agar,
deslizando el asa por la superficie en
bisel marcando las estrías; de tal
manera que, con el asa cargada se
realizan los dos tipos de siembra y sin
retirarla del tubo (Triviño, 2011)
Siembra en tubos por picadura.
Se designa con este nombre a la
siembra que se realiza con asa recta
en tubos con medios sólidos y
semisólidos generalmente sin inclinar.
Se realiza introduciendo el asa
cargada con el microorganismo al
medio de cultivo por el centro de la
superficie y llegando con el extremo
del asa al fondo del tubo (Triviño,
2011)
Siembra en tubo en medio líquido.
Para transferir material a partir de un
medio líquido o sólido a otro líquido,
puede usarse el asa bacteriológica (de
argolla), o en algunos casos, pipetas
estériles o hisopos. Si Usted utiliza
asas bacteriológicas, inocule el
microorganismo en el medio líquido
haciéndola rotar del mango (Triviño,
2011)
Fig. 6. Técnicas de siembras aplicadas a medios de
cultivo contenidos en tubos, donde: (A) Siembra por
estría simple, (B) siembra mixta (picadura y estría),
(C y D) siembra por picadura en agar inclinado y
recto y, (E) siembra con asa bacteriológica en
medio líquido (Fuente: Rojas, A.).
 MATERIALES Y MÉTODOS
ESTERILIZACIÓN Y DESINFECCIÓN
DE MATERIALES DEL LABORATORIO
Inicialmente se procedió a lavar las
Cajas Petri y el Erlenmeyer con
alcohol y agua destilada para ser
previamente esterilizado y donde se volteo la figura, se dobló la
desinfectado para así crear el medio
de cultivo.
Erlenmeyer
Primeramente, se realizó una torunda
para el Erlenmeyer, la torunda fue
elaborada por medio de una cantidad
de algodón y de gasa para que
ayudara a mantener su forma.
Posteriormente se doblaron las
esquinas del algodón para evitar que
se desprendieran las fibras, luego se
enrollo firmemente el algodón junto
con la gasa para formar la torunda, se
introdujo con un movimiento giratorio
al Erlenmeyer, asegurándose que
penetre casi la totalidad del cuello del
matraz, se verifico que quedara bien
elaborada la torunda, tomando el
matraz por la torunda donde sí se
mantenía tapado significaba que
estaba bien hecha.
Después de realizar la torunda se
procedió a realizar un capuchón de
papel kraft, debido a que la torunda se
moja durante el proceso de
esterilización. Este capuchón se
elaboró con papel kraft con unas
medidas de aproximadamente 20*14
cm, se inició doblándolo a la mitad,
marcando un segundo doble donde se
abrió el papel y se llevó las esquinas
hacia la marca del doble formando un
triángulo, posterior a esto se dobló
hacia arriba una de las esquinas, se
calculó el ancho de acuerdo a la
torunda y el matraz a cubrir. por último,
se dobló las esquinas hacia atrás
otra esquina hacia arriba para evitar
que se deshiciera el capuchón y se
procedió a ubicarlo en el matraz con la
torunda para quedar listo a esterilizar
en la autoclave.
Cajas Petri
Inicialmente se recortó
aproximadamente un rectángulo de
papel kraft de 22*32cm que
correspondía a longitudes de dos por
tres diámetros de la caja de Petri, se
colocó la caja Petri en posición
invertida en el centro del rectángulo de
papel, se levantó los extremos más
angostos del papel y se juntaron,
donde posteriormente se doblaron
hacia abajo y hacia el centro ajustando
el dobles de la caja, adicional se dobló
las esquinas de los extremos para
formar un triángulo donde finalmente
se dobló los extremos hacia debajo de
la caja y se fijó con cinta adhesiva para
ser listo a esterilizar en la autoclave.
Después de haber realizado el
empaque del material de vidrio
anterior se llevó a la autoclave,
primero se reconocieron las partes de
este equipo, se encendió y se verifico
que los niveles de agua del tanque
estuvieran en el rango máximo
permitido, si no contenía el nivel
suficiente se volvía a llenar solamente
con agua destilada, después se abrió
la puerta de la cámara, se introdujo el
material a esterilizar dentro de las
rejillas de la camisa, se cerró la puerta
de la cámara y se revisó que el
manómetro de presión llegue a cero
luego se ajustó la temperatura a 121°c
y el tiempo de 15 minutos y comenzó
el proceso esterilización en la
autoclave, al finalizar el tiempo de
esterilización se apaga el calentador
,se espera unos minutos y se deja que
la autoclave se enfrié luego se abre la
espita de descarga despacio para
liberar los vapores de la cámara
manteniendo distancia ,se utiliza
guantes de seguridad contra altas
temperaturas de calor y se saca el
material de la cámara para después
ser llevado a la cabina de flujo laminar
hasta ser usado para la práctica con el
fin de evitar la contaminación en el
material y ser usado en la preparación
para el agar .
PREPARACIÓN DEL MEDIO DE
CULTIVO POTATO DEXTROSA AGAR
En primer lugar, se pesó 1,97 gramos
de potato dextrosa agar en la balanza
analítica, luego fue transferido al
Erlenmeyer con la ayuda de una
espátula para no dejar residuo del
agar, adicional a esto se midió en una
probeta una cantidad de agua
necesaria para ser mezclado con el
medio deshidratado, se mezcló bien
esta preparación, donde
posteriormente se añadió un agitador
magnético para ayudar a la completa
dilución del agar, por último se colocó
a calentar en una plancha de
calentamiento a una temperatura de
200°C hasta su ebullición, ya
completado el proceso de ebullición se
procedió a sacar el agitador
magnético, y se tapó el Erlenmeyer
con papel aluminio sin quitar el tapón
de gasa y algodón, ya finalmente este
medio se llevó al autoclave para ser
esterilizado a una temperatura de
121°C durante 15 minutos.
Pasado este tiempo se llevó a cabo la
preparación a la cabina de flujo, donde
Se dejó enfriar para poder ser
manipulada la sustancia. Posterior a
esto se procedió a realizar un
flameado de las Cajas Petri con la
ayuda de un mechero, este flameado
se realizó por la parte inferior de ella,
adicional a esto lo mismo también se
hizo para el Erlenmeyer, el flameado
del Erlenmeyer se hizo por el borde de
la boquilla.
Por último, se vacío el medio en cada
una de las cajas Petri en forma circular
para que el medio quedara totalmente
disperso en la caja y quedara
aproximadamente con la mitad del
agar, ya finalizado esto se procedió a
tapar las cajas Petri y a rotularlas para
ser depositadas a un medio frio en
este caso la nevera.
PREPARACION DEL CALDO
Se realizó el caldo nutritivo para la
activación de la bacteria, primero se
peso1,06 g de agar Müller hitón en 50
ml de agua destilada, se llevó a
calentamiento y agitación hasta que
observar burbujas, luego se introdujo
a la autoclave a un tiempo de quince
minutos y temperatura de 125°c,
después se pasó a la cabina de flujo
laminar, se tomó 10 ml del caldo y se
pasó a un tubo de ensayo con 1 ml de
la bacteria Staphylococcus aureus y
se introdujo dentro de la incubadora.
SIEMBRA EN CAJAS PETRI POR
LA TÉCNICA DE PUNCION
Se escogió como microorganismo el
hongo penicillum de queso azul, con
un asa recta se tomó parte de él,
mediante la técnica de punción que
consistió primero en la esterilización
del asa utilizando un mechero en la
cabina de flujo laminar se introdujo el
asa hasta observar un color rojo de
calor, después se procedió a inocular
el microorganismo, se tomó una
pequeña muestra del hongo, por una
punción suave en un extremo de la
caja dentro el agar PDA estéril ,luego
se volvió a esterilizar el asa y se
realizó otra punción al otro extremo del
cultivo hasta completar cuatro puntos
alrededor del cultivo ,finalmente se
llevó a la incubadora a 30 °c.
SIEMBRA EN CAJAS PETRI POR
LA TÉCNICA DE AGOTAMIENTO
POR CUADRANTE
La caja Petri se dividió en cuatro
cuadrantes con un marcador, se
realizó la esterilización del asa con el
mechero se tomó una parte de la
bacteria Staphylococcus aureus, y se
comenzó a realizar el rayado en la
superficie del agar nutritivo en el
primer cuadrante consecutivas hasta
llegar al último cuadrante, por terminar
se esterilizar el asa y se incuba a una
temperatura de 30 °c.
RESULTADOS Y DISCUSION

PDA

El Agar Papa Dextrosa (PDA), al

prepararse presenta una apariencia
de trazas, de color pálido o amarillo
claro.

STAPHYLOCOCCUS AUREUS

Al observar la bacteria se formaron

colonias de 0.6 mm de diámetro
circulares, de superficie lisa y
elevadas, brillantes con bordes
enteros, presentan consistencia
cremosa y pigmentación amarilla y
baja elevación.

PENICILLIUM

El hongo penicilium al observarse

mostro las siguientes características:
forma Circular, de textura algodonosa,
sus bordes son curveados e
irregulares, La elevación de la colonia
es concéntrica, se extiende de manera
circular, por lo general de afuera hacia
adentro.
 CONCLUSIONES proliferación de los
microrganismos a estudiar.
 Se pudo concluir que la
aplicación de los procesos de
desinfección y esterilización
son fundamentales como
herramientas en el laboratorio
para evitar la contaminación de
medios de cultivo, placas y
demás materiales, por parte de
agentes patógenos y
microbianos presentes.

 Mediante el reconocimiento de
los diferentes medios de
cultivo, podremos asegurarnos
de elegir el más adecuado que
pueda proveer de los nutrientes
necesarios o requeridos por
nuestro microorganismo.

 Para este caso de un buen

desarrollo del protocolo para la
preparación del Agar Papa
Dextrosa (PDA), dependerá la
inhibición o fomento del
crecimiento excesivo de los
hongos (levaduras o mohos).

 Se debe tener en cuenta que

para la siembra de un
microorganismo es clave
identificar los nutrientes y las
diferentes técnicas que este
requiere para realizar un
correcto procedimiento en la
inoculación en el cultivo, así
mismo esterilizar
correctamente los materiales y
equipos a utilizar para evitar la
 BIBLIOGRAFIA

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