DETERMINACION DE PERFIL LIPIDICO

I. INTRODUCCION:

El colesterol es un componente importante de las biomembranas, regulando su fluidez. A partir de él se

forman los ácidos biliares y las hormonas esteroideas. Es transportado principalmente por la LDL que es
considerada aterogénica, y el resto en la VLDL y HDL. Los triglicéridos an ayunas circulan unidas a las
VLDL y son fuente de energía para los tejidos; su incremento también es considerado factor de riesgo
coronario. La HDL realiza el transporte reverso del colesterol, de los tejidos hacia el hígado y es
considerada antiaterogénica.

El III Panel de Expertos ha establecido los valores de referencia para el colesterol, el HDL, y el LDL. En el
colesterol se considera 3 niveles: Deseable < 200 mg/dl, limítrofe alto 200-239 y alto definitivo > 240
(Hipercolesterolemia > 200 mg/dl). El HDL colesterol, 3 niveles: Bajo o de riesgo < 40, normal a 40 a 59,
alto o protector mayor o igual a 60. El LDL colesterol, 5 niveles: Óptimo < 100 mg/dl. En los triglicéridos se
considera: normal menos de 150mg/dl, limítrofe de 150 a 199, Hipertrigliceridemia moderada de 200 a 499,
severa 500 o más

La hipercolesterolemia puede deberse a causas primarias o secundarias. Entre las hipercolesterolemias

primarias se señalan: La hipercolesterolemia familiar, la hipercolesterolemia poligénica, la hiperlipidemia
familiar combinada, la disbetalipoproteinemia. Entre las secundarias: La diabetes, el lipoteroidismo, el
síndrome nefrótico, ictericia obstructiva, cirrosis biliar.. La hipertrigliceridemia puede deberse a causa
primarias o familiares, o secundarias a otras enfermedades. Son hipertrigliceridemias primarias, la
hiperlipidemia familiar combinada la hiperkilomicronemia, la hipertrigliceridemia familiar. Son causas
secundarias: la diabetes, el hipotiroidismo, la gota, el alcoholismo, el uso de anticonceptivos orales, etc.
La hipertrigliceridemia se asocia a disminución de HDL, obesidad central, resistencia a la insulina,
hiperglicemia e hipertensión, en el denominado síndrome metabólico.

En la presente práctica, se realizará la determinación de colesterol sanguíneo, por el método enzimático y

la determinación de HDL, previa precipitación de las otras lipoproteínas.

II. MATERIALES Y REACTIVOS A UTILIZAR:

- Reactivo Standard para colesterol 50 mg/dl.
- Reactivo precipitante de HDL: ácido fosfotungstico, clorhidrato de magnesio.
- Precipitante para macro ensayos (PRECa)
- Precipitante para semimicro ensayos (PRECb)

III. ACTIVIDADES INSTRUCCIONALES (Procedimiento)

a. DETERMINACIÓN DE TRIGLICERIDOS:
Un alumno por cada mesa vendrá en ayunas de al menos 10 horas, a las 7 a.m. se les extraerá una
muestra basal. Ingerirán una dieta rica en grasas conteniendo un vaso de leche, un huevo, 2 panes y
10 aceitunas. A las 4 y 7 horas de la ingesta, se obtendrá una segunda muestra.

Armar el siguiente sistema.

COMPONENTES BLANCO STANDARD DESCONOCIDO

Muestra (suero) ----- ----- 10 ul
Standard ----- 10 ul -----
Reactivo 1ml 1 ml 1ml
Mezclar e incubar por 10 minutos a 37 °C o 20 minutos a temperatura
ambiente (18-25 °C). Enfriar y leer en espectrofotómetro a 505 nm llevando
el aparato a cero con agua destilada.
 Cálculos:
Triglicéridos (g/l) = (D-B) x F
2 g/l
Donde: 𝐹 = S
Conversión: Triglicéridos (g/l) = 0,01 x Triglicéridos (mg/dl)

Valores Referenciales:
- Deseable: < 1,50 g/l
- Moderadamente elevado a elevado: 1,50 – 1,99 g/l
- Elevado: 2,00 – 4,99 g/l
- Muy elevado: ≥ 5,00 g/l

b. DETERMINACIÓN DE COLESTEROL TOTAL:

Armar el siguiente sistema:

COMPONENTE BLANCO PROBLEMA ESTÁNDAR

Suero ----- 10 ul -----
Estándar ----- ----- 10 ul
Reactivo enzimático 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar e incubar por 10 minutos en baño de agua a 37 °C o 20 minutos
a temperatura ambiente (25 °C). Leer en espectrofotómetro a 505 nm,
llevando el aparato a cero con el blanco

Cálculos:
Colesterol (g/l) = (D-B) x F
2 g/l
Donde: 𝐹 = S

Conversión: Colesterol (g/l) = 0,01 x Colesterol (mg/dl)

Valores Referenciales:
- Deseable: < 2,00 g/l
- Moderadamente elevado: 2,00 – 2,39 g/l
- Elevado: ≥ 2,40 g/l

c. DETERMINACIÓN DE HDL-COLESTEROL:
En un tubo de Kahn medir 0.25 ml (250 ul) de muestra y agregar 25 ul de Reactivo Precipitante.
Homogenizar agitando sin invertir durante 20 segundos y dejar 30 a 40 minutos en refrigerador (2-10
°C) o 15 minutos en baño de agua helada. Luego, centrifugar por 15 minutos a 3000 r.p.m. usar el
sobrenadante como muestra.

Armar el siguiente sistema:

Componente Blanco Standard Desconocido

Standard ----- 10 ul -----
Sobrenadante ----- ----- 50 ul
Reactivo de trabajo 1 ml 1 ml 1 ml
Mezclar e incubar por 10 minutos a 37 °C si se usa reactivo de trabajo
Colestat enzimático AA. Retirar del baño y enfriar. Leer a 505 nm en
espectrofotómetro.

Cálculos:
HDL-Colesterol (g/l) = (D-B) x F

Valores Referenciales:
- Deseable: 0,4 – 0,60 g/l
 d. DETERMINACIÓN DE LDL-COLESTEROL:
Aplicar la Fórmula de Friedwald:
𝑇𝑟𝑖𝑔𝑙𝑖𝑐é𝑟𝑖𝑑𝑜𝑠
𝐿𝐷𝐿 𝑐𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 = 𝐶𝑜𝑙𝑒𝑡𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 − (𝐶𝑜𝑙𝑒𝑠𝑡𝑒𝑟𝑜𝑙 𝐻𝐷𝐿 + )
5

Valores Referenciales:
- Sospechoso: 1,5 – 1,9 g/l
- Elevado: ≥ 1,90 g/l

IV. CUESTIONARIO:
1. Señale la importancia fisiológica del colesterol.

2. Señale la importancia clínica del colesterol.

3. Realice una breve descripción de hipercolesterolemia familiar y su relación con la cardiopatía

isquémica.

4. Alteraciones del perfil lipídico en la diabetes y en el hipotiroidismo.

5. Señale las principales causas de HDL disminuido.

6. Realice una breve explicación del rol de la LDL en la aterogénesis.

7. Cuál es la importancia de la hipertrigliceridemia en la aterogenesis.

8. Cualés son las causas primarias de hipertrigliceridemia