Mass spectrometry Imaging : a construção de imagens utilizando aquisição de dados por

MS

O imageamento por espectrometria de massas permite a visualização

bidimensional ou tridimensional da distribuição espacial de moléculas em uma amostra.
A técnica teve início em 1997, onde Caprioli et al realizou o imageamento 2D de tecidos
utilizando MALDI como fonte de ionização. A luz da época, as limitações de
sensibilidade, resolução e limites de detecção restringiram a popularização da técnica. A
partir de 2010, acompanhando o aprimoramento tecnológico dos últimos anos, o uso de
espectrometria de massas para construção de imagens teve aumento expressivo. Entre
2010 e 2018, houve aumento de aproximadamente seis vezes no número de publicações
(figura), explicitando uma crescente aplicação da técnica nos últimos anos.

PUBLICAÇÕES COM O TERMO "MASS

SPECTROMETRY IMAGING"
300

250 273

200 226
214 204
150 166
156
100 119

50 80
61
1 4 3 1 1 1 3 3 6 9 15 24 50
0
1998

2014
1997

1999
2000
2002
2003
2004
2005
2006
2007
2008
2009
2010
2011
2012
2013

2015
2016
2017
2018
2019

Figura . Número de publicações com o termo “Mass spectrometry imaging” de

1997 a 2019. D

Fonte: Scopus, 2019.

A técnica é denominada MSI, do inglês, Mass spectrometry Imaging, ou

Imageamento por Espectrometria de Massas (ISM). Em suma, técnica de MSI gera uma
fotografia química das moléculas da superfície, pela combinação da análise da massa
molecular e informações espaciais. Em acoplamento com outras técnicas, é possível a
obtenção de imagens tridimensionais.

Usualmente, a fonte de ionização em MSI é do tipo MALDI. A ionização por MALDI

consiste na deposição da amostra em uma matriz capaz de fornecer prótons para que ocorra a
ionização da amostra. Uma fonte do tipo laser incide sob esta matriz, transferindo os prótons
para a amostra depositada. Os compostos da amostra passam então pelo processo de
desligamento da matriz (dessorção) e passagem para o estado gasoso. Estes componentes são
então encaminhados ao analisador e separados de acordo a massa/carga até a chegada ao
detector.

A técnica de imageamento consiste na obtenção de dados de massa/carga de

analitos (drogas, metabólitos, biomoléculas) em uma matriz biológica – como um corte
histológico de órgãos ou plantas. A utilização de MALDI-IMS é uma variação da técnica
de MALDI. Para imageamento, porém, a amostra contida na matriz de MALDI é
movimentada nos eixos x e y, onde cada posição da amostra é analisada. O espectro de
massas de cada ponto é então armazenado e o perfil dos analitos da amostra em função
do espaço pode ser obtido. De modo geral, MALDI-MSI soma as aquisições de modo
computadorizado, montando uma imagem química superficial da amostra. As imagens
obtidas podem ser bidimensionais ou tridimensionais.

ARTIGO : IMPRESSÃO DIGITAL, MALDI-MSI

https://www.nature.com/articles/s41598-018-23544-7

Outras fontes de ionização também são muito utilizadas na técnica de MSI, como
DSI – ionização por dessorção de eletrospray - e SIMS -espectrometria de massas por íon
secundário-. A fonte de ionização por DSI é emergente, sendo recente sua aplicação e
evolução. A figura demostra as principais diferenças no processo de ionização para
imageamento dessas técnicas.( https://www.researchgate.net/figure/Fig-2-Overview-of-
DESI-SIMS-and-MALDI-MSI-workflow-The-organ-is-harvested-from-the_fig2_312302629)
 O uso de DSI

https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acs.analchem.8b00967

http://sci-hub.tw/https://doi.org/10.1016/j.cbpa.2016.12.018 ***********

Estudos recentes mostram que a combinação de MALDI e ESI tem aplicação

emergente com aumento de sensibilidade e possibilidade de quantificação e melhorias
nas análises qualitativas (https://www.nature.com/articles/srep25289).

Recentemente integrada a espectrometria de massas, a fonte de ionização por ESI

trouxe grande avanços. A ionização por ESI inclui a formação de uma spray eletrostático, fonte
de gotículas carregadas. Utiliza-se uma alta voltagem para criação do aerossol. Este método de
ionização é a possibilidade de formação de múltiplas cargas, especialmente importante para
análise de macromoléculas. O processo de ionização ocorre pela solubilização do analito em um
líquido. Esta solução é submetida a alta voltagem, produzindo uma gota carregada na ponta do
capilar. A gota sofre um processo de dessolvatação e desintegração, formando partículas
menores e fase gasosa, onde então, ocorre a formação dos íons.
(https://revistaanalytica.com.br/a-tecnica-de-ionizacao-por-electrospray-na-espectrometria-
de-massas/)

Chung, 2016, discute pela primeira vez sobre a utilização do acoplamento

MALDI-ESI-MSI para imageamento de gangliosideos cerebrais. O uso de técnicas de
ionização requer análise frente suas limitações. Por isso, o acoplamento de ambas as
fontes MALDI e ESI é um modo de contornar as limitações intrínsecas a cada uma delas
e otimizar o processo analítico. O uso de ambas as fontes de ionização permitem o
acoplamento das vantagens de cada uma delas, como aumento da sensibilidade,
específicas da da molécula, possibilidade de quantificação in-situ e obtenção de dados
mais acurados. Os autores testaram a eficiência de extração de lipídios cerebrais pelo
cálculo da área do pico obtido em UHPLC, utilizando ESI como fonte de ionização e MS
para detecção. A massa exata foi obtida com erro de 5ppm, e os tempos de retenção de
cada lipídio de interessa foram obtidos por LC-ESI-MS. Utilizando padrão interno foi
possível estabelecer um método para quantificação dos analitos cromatograficamente
separados e identificados por MS. Com esses dados, os autores realizaram a análise do
extrato por MALDI-MS. Foram realizadas otimizações dos parâmetros, matriz e preparo
de amostra até os dados serem condizentes com os obtidos por LC-ESI-MS. A matriz de
trabalho foi definida como 3-AQ (30mg/mL) com formiato de amônio (125mM). Para
imageamento, 6 camundongos (5 meses de vida) foram selecionados. Sessões históligicas
do cérebro de espécimes com doença de Alzheimer e grupos controle foram obtidas.
Foram identificados 20 tipos de gangliosideos no método MSI, condizentes com o método
ESI-MS, confirmando a confiança no método MSI. Foram identificados padrões alterados
de distribuição de determinados glicosídeos. Os autores identificaram que a alteração
corre devido ao acúmulo de proteína amyloide-beta, destacando que os resultados podem
sinalizar para avanços na pesquisa da doença de Alzheimer.
(https://www.nature.com/articles/srep25289)

A utilização de cromatografia aliada a espectrometria de massas para

imageamento é descrita por Falcetta et all como um processo de “passado-no-futuro”. Os
autores discutem a importância da detecção de picos e integração para aprimoramento de
imageamento com alvo (target-MSI).

EXEMPLO ARTIGO

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0003267018308328
Aplicações interessantes

Astronomia

https://link.springer.com/article/10.1007%2Fs13361-014-0930-z

https://sci-hub.tw/10.1038/s41586-018-0246-4