Microbiologia

Dirección Nacional Área Salud
Carrera “Técnico en Laboratorio Clínico, Banco de Sangre e Imagenología”

Asignatura: “Microbiología Aplicada al Laboratorio” TLC – 119 Plan 3
PORTAFOLIO EVIDENCIAS
2016
PORTAFOLIO EVIDENCIAS
MANUAL
MICROBIOLOGÍA APLICADA AL
LABORATORIO
Versión 1
Próxima Revisión de Actualización 2020
TM Carolina Sepúlveda B.
TM Valeska Troncoso O.
Revisado por TM Benjamín Riveros C.
Coordinador Nacional TNS LABI
1
1
INDICE
I N D I C E .............................................................................................................................. 2
INTRODUCCIÓN .................................................................................................................. 4
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA................................. 5
MÉTODOS DE DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN ................................................. 15
Antisépticos y Desinfectantes. .............................................................................................. 17
Niveles de Acción de los Desinfectantes. ............................................................................. 20
Métodos de Desinfección de Alto Nivel............................................................................... 21
Métodos de desinfección de Nivel Intermedio ..................................................................... 23
Método de Desinfección de Bajo Nivel. ............................................................................... 24
Esterilización. ....................................................................................................................... 29
Métodos de Esterilización a Altas Temperaturas. ................................................................ 29
Clasificación de los Autoclaves. ........................................................................................... 30
Esterilización a Baja Temperatura. ....................................................................................... 31
Esterilización por Radiaciones Ionizantes. ........................................................................... 32
TRABAJO PERSONAL DEL ESTUDIANTE I ................................................................. 34
El uso de Indicadores Biológicos en La Esterilización con Óxido De Etileno. ................... 43
MICROBIOLOGÍA. ............................................................................................................. 48
¿Qué es un Microorganismo? ............................................................................................... 49
TRABAJO PERSONAL DEL ESTUDIANTE II ................................................................ 55
2ª Actividad Teórica Práctica: Observación Microscópica. ................................................. 64
MEDIOS DE CULTIVOS. ................................................................................................... 65
Medios Usados en la Identificación Bioquímica de Enterobacterias (bacilos gram
negativos). Baterías bioquímicas. ......................................................................................... 76
Clasificación de las Bacterias. .............................................................................................. 81
TRABAJO PERSONAL DEL ESTUDIANTE III ............................................................... 84
Taller Teórico Práctico N° 1................................................................................................. 86
“Reconocimiento y Uso Procedimental de Medios de Cultivo”. ......................................... 86
CONCEPTOS GENERALES DE SALUD. ......................................................................... 92
MUESTRAS MICROBIOLÓGICAS. ................................................................................. 95
Siembra de Muestras. ........................................................................................................... 97
Cultivo de Koch: ........................................................................................................... 101
Descontaminación de la Muestra .............................................................................. 101
ETAPAS DE REALIZACIÓN DE UN FROTIS PARA TINCIÓN. ................................. 107
Frotis de Muestra Primaria ......................................................................................... 107
Frotis de Colonias ........................................................................................................ 108
Frotis de Líquido Cefalorraquídeo............................................................................. 108
 Centrifugar la muestra a 3000 r.p.m. por 15 minutos. .................................... 108
REALIZACION Y ESTUDIO DE ANTIBIOGRAMAS. ................................................. 109
Taller Teórico Práctico N° 1 “Técnica del Asa Calibrada”. .............................................. 113
Clasificación de los Parásitos. ............................................................................................ 125
2
Parasitosis por Protozoos. ................................................................................................... 134

TRABAJO PERSONAL DEL ESTUDIANTE V. ............................................................. 156
“Atención de Urgencia Integral” ............................................................................... 168
BIBLIOGRAFÍA. ............................................................................................................... 172
3
INTRODUCCIÓN
El presente Manual de Apoyo Microbiológico, tiene por finalidad establecer

las directrices de bioseguridad que norman el trabajo en un Laboratorio de
Microbiología, junto con aprender a realizar las diferentes técnicas de competencia
del Técnico en Laboratorio Clínico, promoviendo un trabajo fácil, seguro y
técnicamente correcto.
Se mostrarán las diferentes técnicas y sus fundamentos, para poder así

relacionar lo que estamos haciendo con la importancia que radica el trabajo que
realizamos con la salud del paciente.
No debemos olvidar el cuidado que hay que tener al manejar las muestras
clínicas, ya que un mal manejo de éstas puede generar un resultado erróneo para
el paciente y ver afectada nuestra salud.
En este sentido, aparece el concepto de Bioseguridad, que se define como

el conjunto de medidas preventivas destinadas a disminuir o eliminar el riesgo de
exposición a agentes biológicos, físicos y químicos potencialmente peligrosos.
4
BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA
Los riesgos a los cuales se puede estar expuesto en el Laboratorio de

Microbiología, ya sea por las infecciones adquiridas en éste o por la liberación al
medio ambiente, deben ser reducidos con la capacitación de todo el personal de
salud, desde su formación empírica como desde la formación curricular
académica.
Las competencias que se adquieren al capacitar al personal pueden ser medibles

y éstas, a su vez, se pueden relacionar con las habilidades de las personas que
trabajen ahí. Es importante evaluar el nivel de riesgo del laboratorio, clasificándolo
según las actividades técnicas que se realizan (tipos de microorganismos a
trabajar) y el nivel de seguridad que se requiere según el tipo de laboratorio que
es.
Gran parte de los accidentes están relacionados con:
 el carácter potencialmente peligroso de las muestras,

 el poco compromiso con el uso de elementos de protección (pecheras,
guantes de procedimientos, antiparras),
 el mal manejo de las muestras,
 errores humanos,
 malos hábitos del personal y
 el compromiso de los funcionarios con el seguimiento de las normas de
bioseguridad.
5
Para prevenir algún tipo de accidente relacionado con las enfermedades

infecciosas dentro del laboratorio, es muy importante implementar medidas de
buenas prácticas de bioseguridad, tales como:
 No comer ni beber absolutamente nada,

 No maquillarse,
 Usar guantes de procedimientos cada vez que manipule una muestra,
 Usar antiparras en el caso de existir riesgo de salpicaduras,
 Usar mascarillas de alta eficiencia si hay generación de aerosoles (Ej:
muestras respiratorias, líquido cefalorraquídeo).
 Usar pecheras desechables por un eventual derrame y proteger nuestros
uniformes,
 Lavado de manos antes y después de manipular muestras y en forma
recurrente.
Cada laboratorio se clasifica según los riesgos a los cuales está expuesto, de
acuerdo al tipo de microorganismos que ahí se trabaje. Según la OMS1, la
clasificación es la siguiente:
6
I. Tabla 1. Clasificación de Microorganismos Infecciosos (MO) por

Grupo de Riesgo
Grupo Riesgo Tipo de Microorganismos Aislados
Riesgo individual y Microorganismos con poca probabilidad de producir daño en el ser

1
poblacional escaso o nulo humano o animales.
Riesgo individual Microorganismo que pueden producir infecciones en el ser humano

2 moderado y poblacional pero con baja probabilidad en el personal debido a medidas
bajo preventivas y terapéuticas existentes.
Microorganismo que producen infecciones graves pero no

Riesgo individual elevado
3 propagables de un ser humano a otro.
y poblacional bajo
Existen medidas preventivas y terapéuticas.
Microorganismos que producen infecciones graves y se propagan de

Riesgo individual y
4 un ser humano a otro.
poblacional alto
No existen medidas preventivas y terapéuticas.
1
Organización Mundial de la Salud.
7
II. Tabla 2. Relación de los Grupos de Riesgo con los Niveles de

Bioseguridad, Prácticas de Laboratorio y Equipo de Seguridad
Nivel de Tipo de
Grupo Practica de Laboratorio Equipo de Seguridad
Bioseguridad Laboratorio
Enseñanza Básica, Ninguno, trabajo en mesa de

1 Básico TMA*
Investigación laboratorio al descubierto
Nivel 1
Servicios de Trabajo en mesa de
Básico Atención Primaria, TMA y ropa protectora, señal laboratorio al descubierto y
2
Nivel 2 Diagnóstico, de riesgo biológico CBS** para posibles
Investigación aerosoles.
Diagnóstico Prácticas de Nivel 2 más ropa CBS además de otros medios
Contención
3 Especial, especial, acceso controlado y de contención primaria para
Nivel 3
Investigación flujo direccional todas las actividades
Prácticas de Nivel 3, más CBS Clase III o trajes
Contención Unidad de cámara de entrada con cierre presurizados junto con CBS
4 Máxima Patógenos hermético, salida con ducha y de Clase II, autoclave de
Nivel 4 Peligrosos eliminación de residuos doble puerta (a través de la
especiales pared), aire filtrado.
* TMA: Técnicas Microbiológicas Aplicadas

** CBS: Cabina de Bioseguridad
8
Cabe destacar que existen conceptos que se deben manejar al momento de hablar de
bioseguridad y éstos son los siguientes:
 Accidente Laboral: Aquél que sucede al trabajador durante su jornada laboral

pudiendo ser de origen biológico, físico y/o químico que puede revestir algún riesgo
para su salud. La exposición laboral a fluidos corporales de riesgo biológico es
considerada accidente laboral por lo que se encuentra amparada por el Seguro Social
contra Riegos de Accidente Laboral y Enfermedades Profesionales2.
 Accidente Cortopunzante: Aquél derivado de la manipulación de elementos o

material cortopunzante, contaminado o no, que concurre en heridas que pudieran
constituir puerta de entrada de diversos agentes infecciosos deletéreos para la salud
del funcionario. Se considera como el principal agente de riesgo de transmisión el
Virus de la Hepatitis B (10 a 40%), Virus de la Hepatitis C (3 a 10%) y Virus de la
Inmunodeficiencia Humana (0,2-0,5%).
 Área de Trabajo: Lugar delimitado físicamente (pared, panel, mesón) en el cual se

manipulen y procesen muestras clínicas.
 Área Limpia: Espacio físico libre de muestras clínicas y material relacionado con ellas
(implementos para el procesamiento de ellas, desechos biológicos, etc.).
 Área Sucia: Área de trabajo del laboratorio donde se depositen muestras clínicas.
 Riesgo Biológico: Posibilidad de sufrir algún daño (infección) debido a agentes

infecciosos como bacterias, virus, hongos y parásitos.
 Riesgo Físico: Posibilidad de sufrir algún daño debido a fuego, radiaciones, ruidos,
vibraciones, etc.
2
Ley 16.744
9
 Riesgo Químico: Posibilidad de sufrir algún daño debido a agentes químicos como
ácidos, álcalis, etc.
 Fluidos Corporales: Se clasifican según el riesgo de transmitir enfermedades de

importancia epidemiológica con bajo riesgo de transmisión (saliva, sudor,
deposiciones, orina).
Respecto a la planta física de un laboratorio, es muy importante tener en consideración

ciertos requisitos para evitar accidentes y así trabajar de forma segura.
Es por este motivo que se debe tener puertas de acceso y escape del laboratorio con
apertura interna y debidamente señalizadas como acceso restringido a personal
autorizado.
Las áreas de trabajo deben estar separadas por murallas o paneles con las puertas
señalizadas con el tipo de estudio que se realiza ahí. Las superficies deben ser lavables,
iluminación adecuada, sala para descontaminar material y para lavado de material. Baños
y duchas de emergencia
III. Sistema de Precauciones Universales:
Se entiende como un conjunto de técnicas y procedimientos destinados a proteger al

personal que conforma el equipo de salud de la posible infección con ciertos agentes,
principalmente Virus de la Inmunodeficiencia Humana, Virus de la Hepatitis B, Virus de la
Hepatitis C, entre otros, durante las actividades de atención a pacientes o durante el
trabajo con sus fluidos o tejidos corporales.
Toda muestra debe considerarse como potencialmente infecciosa por lo que se deben
utilizar las precauciones estándar mínimas al manejar cualquier tipo de estas.
10
Lavado de Manos:
Debe realizarse siempre antes y después de colación y eliminación de guantes. Examinar
o realizar procedimiento en un paciente. Ej.: punciones, manipular fluidos corporales.
Tipos de Lavado de Manos:

o Lavado de alta frecuencia
o Lavado clínico
o Lavado en seco.
Lavado de Alta Frecuencia usado para:

o Toma de muestras que involucran procedimientos no invasivos: Expectoración,
deposición, orina en paciente incontinente, etc.
o Manejo de muestras clínicas en general.
Instrucciones:
- Subir las mangas de la ropa hasta el codo y retire las joyas.
- Adoptar posición cómoda frente al lavamanos.
- Abrir la llave del agua y déjela corriendo.
- Mojar las manos y muñecas antes de aplicar jabón de glicerina
- Depositar gotas de jabón en la palma de la mano
- Jabonar las manos y muñecas friccionando 15 segundos las manos para
obtener espuma especialmente entre los dedos.
- Enjuagar con abundante agua corriente, desde la punta de los dedos hacia
las muñecas.
- Secar con toalla de papel desechable.
- Cerrar la llave con la toalla de papel y elimínela.
11
Lavado Clínico usado para:

o Toma de muestras que involucran procedimientos medianamente invasivos y/o de
corta duración
o Toma de muestras microbiológicas (urocultivos, hemocultivos, punción venosa o
arterial, etc.)
o Atención de pacientes con precauciones de transmisión
o Manipulación de muestras microbiológicas durante su análisis
Instrucciones:
- Subir mangas de la ropa hasta el codo y retire las joyas.
- Adoptar una posición cómoda frente al lavamanos.
- Abrir la llave del agua.
- Mojar las manos y muñecas antes de aplicar jabón antiséptico
- Dispensar jabón desde el dispensador
- Jabonar sus manos y muñecas, friccionando 30 segundos para obtener
espuma especialmente entre los dedos.
- Enjuagar con abundante agua corriente, desde la punta de los dedos hacia
la muñeca.
- Secar las manos con 1 a 2 hojas de toalla de papel desechable.
- Cerrar llave de agua con la toalla de papel y elimínela.
Lavado en Seco con Alcohol Gel:

o Se usa hasta 3 veces seguidas con manos visiblemente limpias y secas entre
lavado de manos.
o Usado para:
- Realización de procedimientos no invasivos o invasivos de corta duración
- Atención de pacientes con precauciones de transmisión
- Manejo de muestras biológicas en general.
Este se debe friccionar durante 15 minutos.
12
Uso de Guantes de Procedimientos:

Se debe tener en cuenta que los guantes de procedimientos nunca deben sustituir el
lavado de manos. Tampoco estos deben ser lavados, ya que el látex no esta fabricado
para ser lavado y reutilizado, ya que puede formar microporos cuando es expuesto a este
estrés.
Siempre utilizar al manipular cualquier tipo de muestra.
Manejo de Derrames de Muestras en Superficies:

o Cubrir con toalla de papel zona derramada.
o Verter solución de cloro al 0,5% sobre el papel absorbente.
o Dejar actuar por 20 minutos.
o Recoger con mano enguantada papeles embebidos con solución de cloro y
desechos biológicos (basureros amarillos).
o Retirar con pala y espátula o cepillo si hay material corto punzante.
o Rociar 2 a 3 veces más con solución de cloro al 0,5%, secar con papel y eliminar
en desechos biológicos (contenedores de color amarillos).
Manejo de Derrames Relacionados a Centrífugas:

o Esperar detención total de la centrífuga. Si el derrame se produce por quiebre de
tubos con material potencialmente infeccioso se debe detener la marcha de la
centrífuga y mantener ésta cerrada por lo menos 30 minutos, antes de su
apertura.
o Antes de destapar la centrífuga, colocarse lentes, mascarilla, guantes y pechera.
o Abrir y cubrir base con toalla de papel.
o Rociar abundantemente solución de alcohol 70° en paredes y base.
o Dejar actuar 10 minutos.
o Retirar con mano enguantada (doble guante si hay presencia de material
cortopunzante) papeles embebidos con solución de alcohol 70°.
o Eliminar restos según corresponda a material cortopunzante (cajas amarillas) o
desechos biológicos (contenedores de color amarillos).
13
o Rociar 2 a 3 veces más con alcohol 70°, secar con papel y eliminar en basura
común.
Manejo de Derrame de Muestras con Sospecha de Agentes de Transmisión Aérea

(muestras respiratorias, sangre, LCR)
o Cubrir zona de boca y nariz con delantal y contener respiración.
o Evacuar lugar de derrame y cerrar sección.
o Avisar a Jefatura o Supervisión.
o Esperar 60 minutos antes de entrar (para decantación de partículas en
suspensión).
o Cubrir derrame con toalla de papel.
o Rociar abundante Cloro al 2% y dejar actuar 10 a 15 minutos.
Precauciones Generales Durante las Actividades Prácticas:

Uso de guantes de procedimientos, y todo tipo de barrera de protección, según la
actividad a realizar.
Pipeteo: Está prohibido pipetear con la boca, debido a los riesgos que involucra el uso
de pipetas porque existe la posibilidad de succión bucal. Solo se deben ocupar con
propipetas.
Extensiones y Frotis para el Examen al Microscopio: Estas fijaciones se deben utilizar

con guantes de procedimientos y deben ser eliminadas en contenedores amarillos de
material cortopunzante.
Mecheros: Se deben encender en el momento en que comienza el trabajo en el

laboratorio, es decir cuando realicemos siembra de muestras, tinciones, antibiogramas.
Las asas metálicas se deben incinerar siempre al utilizarlas.
14
MÉTODOS DE DESINFECCIÓN Y ESTERILIZACIÓN
En los ambientes hospitalarios podemos encontrar gran variedad de microorganismos. La

presencia de éstos por si solos no constituye un riesgo para los pacientes al menos que,
mediante una dosis infectante, puedan afectar a un huésped susceptible. La mayoría de
los objetos inanimados destinados a la atención de pacientes requieren de algún tipo de
procedimiento que elimine o disminuya los microorganismos con el fin de interrumpir la
cadena de transmisión y ofrecer una práctica segura para el paciente.
Los objetos inanimados destinados a la atención de pacientes requieren de

procedimientos que ayuden a disminuir o eliminar los microorganismos con el fin de
interrumpir la cadena de transmisión y ofrecer una práctica segura para el paciente.
Los distintos procedimientos que se utilizan para la eliminación o disminución de la carga

de microorganismos deben ser seleccionados adecuadamente para los distintos artículos
dependiendo de la naturaleza del material y a la vez los procedimientos a realizar. Dentro
de los principales procedimientos podemos encontrar la descontaminación, desinfección y
esterilización.
Semmelweis3 fue un médico húngaro, de origen alemán, que consiguió disminuir

drásticamente la tasa de mortalidad (en un 70 %) por sepsis puerperal entre las mujeres
que daban a luz en su hospital mediante la recomendación a los obstetras que se lavaran
las manos con una solución de cal clorurada antes de atender los partos.
En 1862, Luis Pasteur publicaría la hipótesis microbiana, planteando que las infección
están producidas por agentes causales. Y Joseph Lister en 1865, extendería la
práctica quirúrgica higiénica al resto de especialidades médicas destacando la
importancia de las medidas asépticas. Introdujo los términos de asepsia y antisepsia,
utilizando el fenol como primer antiséptico.
3
Ignác Semmelweis 1918-1865.
15
En la actualidad cada recinto de salud se debe regir bajo las normas establecidas por la
“Norma General Técnica Sobre Esterilización y Desinfección de Elementos
Clínicos” del Ministerio de Salud4. Estas normas tienen por objetivo uniformar los
procesos de esterilización y desinfección en el país, asegurar la calidad del material de
uso clínico y recomendar sistemas para una mayor eficiencia de estas actividades.
En la atención directa se utilizan numerosos artículos y equipos que tienen contacto con el
paciente por distintas vías. El método de eliminación de microorganismos requerido por
cada artículo, está directamente relacionado con el riesgo potencial que tiene ese artículo
en particular de producir infección en el paciente. En 1968, Spaulding clasificó los
artículos en tres categorías de acuerdo al riesgo antes mencionado:
Artículos Críticos: Corresponden a artículos que se ponen en contacto con cavidades

normalmente estériles del organismo o el tejido vascular. Éstos deben ser siempre
estériles.
Artículos Semicríticos: Corresponden a artículos que entran en contacto con piel no

intacta o con mucosas. Estos artículos, deben estar libres de los microorganismos antes
mencionados y de preferencia deben ser estériles. En caso que la esterilización no sea
posible deben ser sometidos al menos a desinfección de alto nivel. Ejemplos de artículos
en esta categoría son circuitos de las máquinas de anestesia, y endoscopios.
Artículos No Críticos: Estos artículos toman sólo contacto con piel sana o no se ponen
en contacto con pacientes por lo que el riesgo de producir infecciones es mínimo o
inexistente. En general sólo requieren limpieza y secado.
Para entender los aspectos relacionados con la higiene del medio sanitario es importante
que se tengan claro el significado de diversos términos:
4
http://juridico1.minsal.cl/RESOLUCION_1665_01.doc
16
Infección
Se denomina infección a la penetración en un huésped de un microorganismo o agente
infeccioso. Los agentes infecciosos son los microorganismos y pueden encontrarse en
cualquier parte del medio ambiente pudiendo ser bacterias, hongos, virus y protozoos.
La infección no siempre produce una enfermedad ya que el organismo dispone de
mecanismos de defensa producidos por el sistema inmunológico capaces de actuar sobre
el agente agresor. Cuando el sistema inmunológico es sobrepasado por los agentes
infecciosos aparecen los diversos signos y síntomas de las distintas enfermedades.
Asepsia
La asepsia es un conjunto de medidas y técnicas que tiene como finalidad impedir la
proliferación de microorganismos, así impidiendo la contaminación del material, personas
y ambiente hospitalario. Se logra una ausencia total de microorganismos patógenos que
causan enfermedades.
Antisepsia
Utilización de agentes químicos sobre la piel o sobre tejidos vivos para inhibir o eliminar
los microorganismos (no implica una acción esporicida).
Limpieza
Procedimiento físico por arrastre del material orgánico contenido en los utensilios.
Antisépticos y Desinfectantes.
Los antisépticos y los desinfectantes son usados ampliamente en los hospitales y otros
centros del cuidado de la salud. Son parte esencial de las prácticas de control de la
infección y ayudan en la prevención de las infecciones nosocomiales. Los agentes
antisépticos rápidamente desinfectan superficies por disminución de la cantidad de
bacterias sobre la piel intacta.
Cuando se usan pre-quirúrgicamente, los antisépticos sirven como profilácticos para la
prevención de la infección.
17
Se denomina desinfección a la técnica de saneamiento que tiene como objetivo la

destrucción de formas vegetativas de microorganismos en objetos inanimados y no
necesariamente esporas. Esta destrucción se realiza por métodos químicos o físico
siendo muy útil para la mayoría de los microorganismos.
Existen agentes desinfectantes que se clasifican dependiendo del tipo de destrucción
frente a los microorganismos vegetativos. De acuerdo al tipo de agentes que es capaz de
destruir, se han definido tres niveles de desinfección:
Desinfección de Bajo Nivel:

La desinfección de nivel bajo elimina bacterias patógenas en su forma vegetativa y
algunos hongos, no elimina el Mycobacterium tuberculosis ni los virus de tamaño pequeño
no lipídico. Existen desinfectantes de nivel bajo que no destruyen las formas vegetativas
de todas las bacterias.
Desinfección de Nivel Intermedio:

La desinfección de nivel intermedio elimina formas vegetativas de bacterias, hongos y
virus pero no de tamaño pequeño no lipídico. En circunstancias especiales puede eliminar
Mycobacterium tuberculosis.
Desinfección de Alto Nivel:

La Desinfección de alto nivel elimina todos los microorganismos incluyendo los virus
resistentes y Mycobacterium tuberculosis. No elimina esporas bacterianas.
Entre los principales métodos de desinfección podemos encontrar Desinfección Térmica

por Medio de Vapor a Baja Temperatura y la Desinfección por Métodos Químicos.
Desinfección Térmica por Medio de Vapor a Baja Temperatura:

Esta consiste en procesar el material en autoclave de vapor a temperatura de 73ºC. El
equipamiento usado para este proceso es una autoclave a vapor común con
modificaciones para efectuar ciclos a menor temperatura.
18
Este método puede utilizarse para la desinfección de artículos que resistan la temperatura
requerida y al poder utilizar material empaquetado permite su posterior almacenaje. Para
obtener una desinfección de alto nivel se debe procesar en la autoclave por un tiempo de
12 a 15 minutos.
Desinfección por Métodos Químicos:

Consiste en poner en contacto el material o superficies con agentes químicos. Para la
desinfección de alto nivel, el material debe permanecer en inmersión por un tiempo
determinado de acuerdo al producto.
La institución de salud debe tener definido el listado de desinfectantes en uso y a su vez

los desinfectantes de alto nivel deben estar aprobados por el Ministerio de Salud, estando
sujetos a una seria de normas (Normas Técnicas Sobre Esterilización y Desinfección de
Elementos Químicos” del MINSAL)
Las propiedades que podemos encontrar en un desinfectante ideal son:
 Amplio espectro
 Rápida acción
 No se afecta por factores del medio ambiente
 Sin toxicidad
 Compatibles con las superficies
 Dentro de los desinfectantes usados con mayor frecuencia en los recintos
hospitalarios podemos encontrar ácido Peracético, alcoholes, amonios
cuaternarios, cloro y compuestos clorados, fenoles, formaldehído, Glutaraldehido,
orthophtalaldehido y peróxido de hidrógeno estabilizado
19
Niveles de Acción de los Desinfectantes.
Alto Nivel.
El procedimiento de desinfección de alto nivel es complejo porque se aplica en numerosas
oportunidades a equipos que son difíciles de manipular como son los endoscopios. En
general dado que el proceso de desinfección de alto nivel es engorroso, difícil de evaluar
y sujeto a falla humana, dentro de lo posible deben preferirse los métodos vigentes de
esterilización para los artículos de uso médico. Los artículos no críticos y las superficies
inanimadas (Ej. muebles, suelo y muros) en general no han sido involucradas en la
transmisión de infecciones y se pueden tratar con limpieza y en situaciones excepcionales
con desinfectantes de nivel bajo o intermedio.
Los agentes desinfectantes apropiados para desinfección de alto nivel deben cumplir
varias características:
 Amplio espectro
 Estabilidad frente a materia orgánica
 Compatibilidad con el material de los equipos
 Posibilidad de medir su actividad o concentración por medio de indicadores
químicos
Idealmente estos desinfectantes deben tener rapidez en su acción, baja toxicidad, vida
media prolongada, degradabilidad en el medio ambiente y ausencia de olor.
El personal a cargo del procesamiento de estos equipos, debe estar capacitado y ser
evaluado en forma constante. Para obtener buenos resultados, se deben lavar todas las
superficies (internas y externas) usando detergentes enzimáticos o neutros que aseguren
la eliminación de materia orgánica sin dañar los equipos.
Si se procesan por inmersión, se debe asegurar que tanto superficies internas como
externas se pongan en contacto con el agente desinfectante. Para el enjuague se debe
utilizar agua estéril y en el caso de no contar con este suministro, se debe usar agua
potable y posteriormente aspirar alcohol por los canales.
20
El secado debe ser realizado con aire filtrado para evitar su re contaminación, se
recomienda procesar los equipos inmediatamente antes de su uso para evitar
contaminación de los mismos. No obstante si no se utilizan inmediatamente de
procesados, el almacenamiento debe ser en un sitio libre de polvo y las superficies
externas protegidas con cubiertas estériles
Métodos de Desinfección de Alto Nivel
Glutaraldehido.
Corresponde a un di aldehído saturado que se utiliza como desinfectante de alto nivel.
Las formulaciones convencionales de Glutaraldehido tienen una duración aproximada de
14 días. Existen formulaciones nuevas en las que se han agregado agentes estabilizantes
para prolongar la vida útil a alrededor de 28 días. El mecanismo de acción de
Glutaraldehido se debe a la alquilación de los grupos amino, sulfidrilo, hidroxilo y
carboxilo, los cuales alteran el ARN, el ADN y la síntesis proteica en los microorganismos.
Cloro y Compuestos Derivados del Cloro.

Los agentes clorados tienen amplio espectro microbicida. Su uso está limitado porque se
inactivan en presencia de materia orgánica, son inestables y corroen el material metálico.
Por otra parte, son tóxicos en contacto con piel y mucosas.
Los hipocloritos son los desinfectantes clorados más utilizados. Su presentación líquida
como hipoclorito de sodio es la más conocida, y existe una forma sólida como hipoclorito
de calcio. Las soluciones de cloro no deben conservarse en envases destapados por más
de 12 horas debido a la evaporación del producto activo, haciendo que las
concentraciones de cloro disponible disminuyan.
Ácido Peracético/Peróxido de Hidrógeno.

Mezcla de Ácido Peracético al 0.08% y Peróxido de Hidrógeno al 1%. No requiere
activación, su duración es de 14 días. Buena compatibilidad con el material. Experiencia
limitada en endoscopios.
21
Formaldehído.
Este agente inactiva los microorganismos por alquilación de los grupos aminos y sulfidrilo
de las proteínas y el anillo del átomo de nitrógeno de las bases purínicas. El formaldehído
con alcohol es un desinfectante de alto nivel y fue usado en el pasado para la
desinfección de equipos. En la actualidad su uso está discontinuado debido a su alta
toxicidad y el olor penetrante que aparece aún a muy bajas concentraciones.
Características y tiempo de inmersión de productos vigentes disponibles en Chile

para Desinfección de Alto Nivel.
22
Para efectuar los procedimientos de Desinfección de Alto Nivel siempre deben

cumplirse los siguientes aspectos
 El material debe estar totalmente libre de materia orgánica, porque ésta interfiere
en el proceso de desinfección.
 Se recomienda la utilización de detergentes de tipo enzimático y sumergir el
endoscopio inmediatamente después de ser utilizado.
 Enjuagar y secar prolijamente para evitar dilución del desinfectante y alterar su
concentración.
 El tiempo de desinfección de alto nivel debe ser establecido de acuerdo a las
características propias de cada desinfectante.
 No es recomendable enjuagar los artículos desinfectado con agua corriente debido
a la posibilidad de contacto con superficies contaminadas.
 En caso de no contar con agua estéril para este fin debe usarse alcohol etílico o
isopropílico para el último enjuague.
Nivel Intermedio:
Se utiliza para la limpieza de superficies o de instrumentos en los que es poco probable la
contaminación por esporas bacterianas o por microorganismos con alto grado de
resistencia.
Métodos de desinfección de Nivel Intermedio
Alcoholes
Destruyen rápidamente formas vegetativas de bacterias, hongos, virus y M. tuberculosis.
El alcohol se considera un desinfectante de nivel intermedio y se usa en la desinfección

de superficies y artículos no críticos. Se utiliza en la desinfección de termómetros orales y
rectales, laringoscopios y pequeñas superficies como las tapas de goma de algunos
frascos de medicamentos y para el enjuague de canales de endoscopios.
23
Fenoles
Estos productos fueron de los primeros usados en desinfección hospitalaria. En
concentraciones altas, el fenol actúa como un gran tóxico del protoplasma penetrando y
destruyendo la pared celular y precipitando las proteínas celulares. Se usa para limpieza
de superficies hospitalarias y elementos no críticos.
Compuestos Yodados
Similares a los alcoholes, pero ligeramente más tóxicos, También se desactivan con las
sustancias orgánicas.
Bajo Nivel
Se utilizan para tratar instrumentos no críticos, no traspasan las mucosas ni los tejidos
estériles de los pacientes.
Método de Desinfección de Bajo Nivel.
Amonios Cuaternarios (AC)

Estos productos han sido utilizados ampliamente como desinfectantes y hasta hace
algunos años como antisépticos. No deben usarse como antiséptico ni como
desinfectante de alto nivel, debido a que existe evidencia que las soluciones pueden
contaminarse con bacilos gram negativos ya que el agente activo es absorbido por textiles
como los géneros y gasas. La acción microbicida de los amonios cuaternarios es en
general muy limitada. La mayoría de las formulaciones son como
detergentes/desinfectantes y su uso se limita al saneamiento ambiental común de
superficies.
Antisépticos
Los antisépticos son biosidas o sustancias químicas que se aplican sobre los tejidos
vivos, con la finalidad de destruir o inhibir el crecimiento de microorganismos patógenos.
No tienen actividad selectiva ya que eliminan todo tipo de gérmenes.
24
Un antiséptico ideal debería cumplir con los siguientes atributos para su elección:
 Amplio espectro
 Bajo costo
 Inocuo para tejidos vivos
 No debe ser toxico
 Rapidez y eficacia en materia orgánica
 Efecto acumulativo y residual
 Baja capacidad de generar resistencia
 No irritante, ni sensibilizante
Los antisépticos y desinfectantes se clasifican más en la actualidad según el grupo

químico a las que pertenecen:
Jabón Corriente
Por remoción mecánica (arrastre) tiene la capacidad de eliminar a los microorganismos
presentes en la microbiota transitoria.
Jabón Antiséptico
A diferencia del jabón corriente, el jabón antiséptico tiene la capacidad de eliminar los
microorganismos presentes en la microbiota residente. Este debe ser utilizado en los
siguientes momentos:
 Antes de hacer un procedimiento con cualquier paciente

 Antes de procedimientos invasivos
 Antes de atender pacientes en unidades críticas
 Antes y después de atender pacientes en aislamiento
 Después de un procedimiento
25
Alcoholes
El mecanismo de acción de los alcoholes es la desnaturalización de las proteínas de los
microorganismos. La desnaturalización proteica sólo es posible en presencia de agua; por
este motivo el alcohol absoluto presenta un poder bactericida mucho menor que las
mezclas de alcoholes con agua. Podría tener cierta acción bacteriostática al inhibir la
producción de metabolitos esenciales para la división celular rápida. Tiene acción
bactericida pero poco efecto residual. Los alcoholes tienen excelente actividad frente a
todos los microorganismos, exceptuando las esporas, se inactiva por sustancias
orgánicas por lo que se debe limpiar la piel antes de ser usados y no son tóxicos. Dentro
de los efectos adversos que se pueden destacar por el uso de alcoholes podemos
destacar que al ser aplicado brevemente a la piel no causa daño, pero irrita si se deja
mucho tiempo. En superficies lesionadas empeora el daño y causa un coágulo bajo el
cual pueden crecer bacterias, por lo que no se utiliza como antiséptico para heridas
abiertas. Su utilización puede provocar irritación y sequedad de la piel. Al volatilizarse
puede causar irritación de la mucosa nasal y lagrimal.
Alcohol 70%- 90%

Se utiliza principalmente para el lavado de manos en preparación preoperatorio y
preparación de piel en procedimientos invasivos de corta duración. Dentro de sus ventajas
podemos destacar su acción rápida y amplio espectro y sus limitantes es la rápida
evaporación, inflamable, produce sequedad de piel y no tiene efecto residual
Alcohol Gel
Reemplaza lavado de manos clínico (solo 3 veces el lavado clínico) tiene gran aceptación
por los usuarios y mejora la adherencia.
Compuestos Yodados
El yodo y sus compuestos han sido usados ampliamente para la prevención de las
infecciones y el tratamiento de heridas. Los compuestos yodados son agentes oxidantes,
precipitan las proteínas bacterianas y ácidos nucleicos.
26
El yodo tiene una poderosa actividad germicida, ataca bacterias gram positivas y gram
negativas, Micobacterias, esporas, hongos, virus, quistes y protozoos. Hay varios tipos de
preparaciones de yodo, según la zona que haya que desinfectar. La actividad antiséptica
de todas las preparaciones depende del yodo en forma libre. Se emplea en: la
desinfección de la piel sana, el tratamiento de afecciones de la piel causadas por
bacterias y hongos, la limpieza de las heridas en solución acuosa, etc.
Alcohol Yodado (Alcohol 70% + Yodo 0,5%)

Se utiliza en el lavado de manos preparación preoperatoria y preparación de piel. Tiene
como ventaja su amplio espectro, acción rápida, Delimitación de zonas por coloración;
puede producir sequedad de piel, Irritación, alergia y se puede evaporar.
Clorhexidina
Constituye uno de los tres antisépticos quirúrgicos más importantes y es el
antiséptico bucal que más se usa actualmente. La clorhexidina posee amplio espectro
de acción. Es bactericida sobre bacterias gram positivas y gram negativas.
Las ventajas que justifican el empleo de la clorhexidina son la acción germicida rápida y
su duración prolongada, gracias a que ésta sustancia tiene gran adhesividad a la piel y
buen índice terapéutico.
Clorhexidina (2% / 4%)

Se utiliza en lavado quirúrgico de manos, preparación de piel preoperatoria y
procedimientos invasivos. Dentro de los beneficios podemos encontrar: acción bactericida
rápida, actividad residual duradera entre 6 y 8 horas, reducción rápida del número de
bacterias de la piel, efecto antiséptico prolongado, amplio espectro de actividad.
Dentro de las limitaciones se encuentran su poco efecto frente a Micobacterias, efecto
lento (3 minutos en adherirse al estrato corneo), produce ototoxicidad e irritación de
córnea.
27
Triclosán
Es un derivado fenólico, poco soluble en agua su mecanismo de acción es disrupción de
la membrana bacteriana a través del bloqueo de la síntesis de lípidos. El Triclosán ha
demostrado actividad contra bacterias gram positivas y gram negativas, bacterias
multiresistentes donde se destaca su acción frente al Staphylococcus aureus
meticilinorresistente.
Entre sus propiedades, el Triclosán tiene rápida acción y son útiles frente a la microbiota
residente y transitoria. Su eficacia es inhibida mínimamente por la presencia de materia
orgánica, y tiene gran afinidad con la piel, no produciendo irritación ni efectos tóxicos.
El Triclosán está disponible en un amplio rango de productos, incluyendo jabones para la
preparación pre quirúrgica de la piel, lavado de manos y antisépticos se utiliza además
como desinfectantes de superficies y lavado de manos en la industria de la alimentación.
Triclosán (0,5% al 1%)

Se utiliza en el lavado clínico de manos. Tiene como ventajas su buen efecto residual,
buena aceptación de usuarios y amplio espectro. Dentro de sus limitantes podemos
encontrar su nulo efecto frente a Pseudomonas spp.
Consideraciones en el uso de un antiséptico y desinfectantes

 Su almacenaje (Fecha de Vencimiento y Condiciones )
 Contaminación intrínseca (al momento de utilizar )
 Inactivación : Materia orgánica, agua, jabones, Resistencias
 Los desinfectantes deben usarse solo en objetos inanimados o superficies.
 Los antisépticos deben usarse solo para piel indemne
 No rellenar ni trasvasijar antisépticos ni desinfectantes
 No deben hacerse mezclas (altera su acción, inactivándolos)
 Deben usarse respetando las instrucciones del fabricante respecto a la duración
del producto, conservación, dilución y tiempo de contacto
 Previo a su uso, limpiar la superficie
28
Esterilización.
La esterilización del material de uso médico es un componente clave en la prevención y
control de infecciones. Históricamente han sido utilizados métodos físicos para la
destrucción de microorganismos que actúan por medio de altas temperaturas como son la
autoclave a vapor y las estufas por calor seco (Pupinel).
En los últimos años ha habido un aumento progresivo de artículos críticos que no pueden
ser sometidos a calor. Por lo anterior, se han desarrollado nuevas tecnologías de
esterilización a bajas temperaturas.
Los métodos validados que se utilizan en la actualidad en los hospitales para la

esterilización del material pueden clasificarse en métodos de esterilización a altas
temperaturas: calor seco (Pupinel) y calor húmedo (Autoclave a Vapor), y métodos de
esterilización a bajas temperaturas: Inmersión en Ácido Peracético, Óxido de Etileno,
vapor de Formaldehido, Plasma de Peróxido de Hidrógeno y Plasma combinado
(Peróxido de Hidrógeno y Ácido Peracético).
Métodos de Esterilización a Altas Temperaturas.
Esterilización por Calor Húmedo:

Este método de esterilización elimina microorganismos por desnaturalización de las
proteínas, proceso que es acelerado por la presencia de agua, requiriendo temperaturas y
tiempos menores de exposición que el calor seco. Este método de esterilización se
considera el método más efectivo, económico y rápido disponible en la actualidad, por lo
que debe ser la primera opción en la selección de métodos de esterilización; el equipo
más utilizado es el autoclave a vapor.
Existe una gran variedad de modelos de autoclaves. Estos tienen diferencias en cuanto a
operación, tiempos de esterilización y forma de acción.
29
Clasificación de los Autoclaves.
1. Según Sistema de Operación:

 Manuales
 Semiautomáticos
 Automáticos
2. De acuerdo a la Producción de Vapor:

 Vapor centralizado
 Generador eléctrico incorporado
 Vapor centralizado y generador eléctrico incorporado
 Generador a gas
3. En relación al Funcionamiento:
 Desplazamiento por gravedad
 Con vacío previo
 De sistema pulsante
Esterilización por Calor Seco:

Para la esterilización con calor seco se utilizan estufas que comúnmente reciben el
nombre de Pupinel.
Este sistema elimina microorganismos por coagulación de las proteínas. La acción

microbicida del calor seco está condicionada por la presencia de materia orgánica o
suciedad en el artículo. El calor seco penetra lentamente en los materiales por lo que se
requieren largos períodos de exposición. El uso del calor seco debe limitarse a materiales
que no pueden ser esterilizados en autoclave.
Los materiales que pueden esterilizarse en Pupinel y no pueden esterilizarse en autoclave
son sólo aceites, vaselina, petrolatos y polvos.
30
Existen dos tipos de equipos que obtienen el calor a través de la energía eléctrica:
 Convección gravitatoria
 Convección mecánica
Esterilización a Baja Temperatura.
Esterilización por Óxido de Etileno (ETO)

El óxido de etileno es un agente químico con alto poder microbicida que puede ser
utilizado para esterilizar artículos sensibles al calor y a la humedad. Su acción microbicida
se produce por alquilación de la pared celular del microorganismo que inhabilita a la célula
para tener un metabolismo normal o reproducirse.
La esterilización por óxido de etileno debe ser realizada en equipos que reúnen los
parámetros para lograr la esterilización. Los equipos existentes son automáticos con
dispositivos de seguridad que impiden abrir el equipo mientras no se haya completado el
ciclo. Están dotados de un sistema de vacío para facilitar la introducción del gas en la
cámara y la evacuación después del período de exposición. Existen unidades de distintos
tamaños y cada establecimiento deberá seleccionar el adecuado de acuerdo a sus
necesidades.
Esterilización por Peróxido de Hidrógeno en estado de Plasma:

El Peróxido de Hidrógeno (H2O2) es un agente químico que se ha utilizado por muchos
años como desinfectante de alto nivel. Elimina los microorganismos por oxidación.
La esterilización por peróxido de hidrógeno se realiza en equipos automáticos.

Es compatible con la mayoría de los materiales de uso médico. No son compatibles con el
método los derivados de la celulosa como el papel, género, lino, ni tampoco líquidos y
polvos.
31
Esterilización Por Acido Peracético

El Ácido Peracético es un agente químico oxidante soluble en agua, efectivo en forma
rápida contra un amplio espectro de microorganismos a bajas concentraciones. Tiene
poder bactericida, fungicida y esporicida. No deja residuos tóxicos. Se ha utilizado desde
hace años como desinfectante de alto nivel.
Esterilización con Formaldehído

El formaldehído esteriliza a temperaturas entre 60 y 80°C. Elimina los microorganismos
por alquilación, requiere equipos especiales.
Esterilización por Radiaciones Ionizantes.

La esterilización se obtiene sometiendo los materiales a dosis predeterminadas de
radiaciones. Hasta la fecha se han utilizado tecnologías con rayos gamma. Este tipo de
proceso es de alta complejidad y sólo puede ser realizado bajo estrictas condiciones de
seguridad. Requiere infraestructura especializada que en general no es posible ni se
justifica en centros de salud.
32
Ventajas y Limitaciones de los distintos Métodos de Esterilización.
Método Ventajas Limitaciones

Autoclave a vapor Ciclos más cortos. Menor costo de Método no compatible con material
operación. Efectivo frente a la eliminación Termosensible.
de priones. No elimina pirógenos.
No presenta toxicidad para el personal ni No esteriliza sustancias oleosas ni polvos.
para el ambiente. Certificable.
Calor seco Equipamiento de menor costo que el Daño del material por exposición a
autoclave Temperaturas elevadas.
Facilidad de operación de los equipos Tiempos de exposición prolongados en
Comparación con la esterilización a vapor.
Dificultad en la certificación del método.
Costos de operación elevados.
No hay información respecto a su
efectividad contra priones
Óxido de etileno Permite la esterilización de material Requieren períodos prolongados de
Termosensible Proceso y aireación.
Certificable No es un método efectivo contra priones.
Penetración Tóxico para el personal, pacientes y ambiente
Plasma Baja temperatura. Incompatibilidad con algunos materiales.
Ciclos de corta duración. Controversia respecto a su utilización en
No tóxico para las personas ni para el artículos con lúmenes largos entre 1
Ambiente. y 2mt. y angostos (entre 1 y 3mm).
No requiere instalaciones especiales No elimina priones
Ácido Peracético Rápido. Efectivo en la esterilización Sólo puede ser utilizado para material
líquido de endoscopios y laparoscopios sumergible
Equipo automático estandarizado Esteriliza un solo contenedor por ciclo por lo
No contamina al medio ambiente que no puede ser utilizado para cantidades
Mayores de material.
No elimina priones
Debe ser utilizado en forma inmediata
Formaldehído Baja temperatura. Incompatibilidad con algunos materiales.
Ciclos de corta duración. Método no aprobado para su utilización en
Certificable USA
No elimina priones
33
TRABAJO PERSONAL DEL ESTUDIANTE I

“Bioseguridad en el Laboratorio de
Microbiología”
34
Desarrolle los siguientes Talleres o Actividades de acuerdo a

instrucciones dadas para cada uno de ellos.
El desarrollo de estos talleres le ayudará a estudiar y a
comprender lo relevante que serán en su quehacer técnico y
cuidado personal.
La base del conocimiento está en esta etapa del proceso,
después solo quedará el aplicar y agregar su proactividad,
dándole el sello que lo debe caracterizar en su Práctica
Curricular y Laboral.
35
Taller Formativo N° 1 “Asepsia y Antisepsia” I Parte.
I Ítem: Respuesta Breve
1.- ¿Qué representa una Norma?
2.- ¿A quién le corresponde la responsabilidad en un Centro Asistencial de entregar

los elementos estériles y desinfectados, sin que ellos involucren un riesgo para el
paciente?
3.- Defina los siguientes conceptos:
 Esterilización:
 Desinfección:
 Asepsia:
 Antisepsia:
 Limpieza:
 Descontaminación:
 Empaque:
36
4.- ¿Qué importancia le atribuye Ud. a la presencia de materia orgánica en los

elementos que van a ser sometidos al proceso de esterilización?
5.- Realice un listado de microorganismos considerando su capacidad de resistencia

a los procesos de esterilización (de mayor a menor resistencia)
6.- ¿Qué métodos de esterilización son recomendables para esterilizar los siguientes
materiales?:
 Líquidos :
 Plásticos :
 Vidrios :
 Goma :
7.- Identifique en orden las etapas del proceso de esterilización:
8.- ¿Cómo se realiza la recepción y distribución del material en una Central de

Esterilización?:
37
9.- ¿Cuáles son las etapas del proceso de lavado?:
10.- Mencione los dos elementos más importantes para el lavado de material y
describa sus características más relevantes:
11.- ¿Cómo se clasifican los tipos de empaques a preparar en una Central de

Esterilización? Mencione 3 ejemplos de cada uno de ellos.
38
Taller Formativo N° 2 “Esterilización y Desinfección”.
I Ítem: Respuesta Breve
1.- ¿Cuáles son los métodos de Esterilización a Alta Temperatura?
2.- ¿Cuáles son los métodos de Esterilización de Baja Temperatura?
39
3.- Describa las características del Método de Esterilización por Calor Húmedo:
4.- Identifique la Clasificación de los Autoclaves:
40
5.- ¿Qué variables o parámetros participan en el proceso?:
6.- ¿En qué consisten los Esterilizadores “Flash” y cuando se utilizan?:
7.- Desarrolle un comentario referido a los esterilizadores por Calor Seco:
41
II Ítem: Completación de Oraciones
 Tiempo de esterilización es aquella que comienza

cuando………………………………………………………………………………….
 La relación de tiempo / temperatura para el Pupinel es………°C por…..….. min.
 El Óxido de Etileno se caracteriza por………………………………………………..
 La exposición al ETO puede ocurrir por…………………… y………………………
 La aireación es fundamental en.………………………………………………………
 La tecnología más barata y efectiva para esterilizar es…………………………….
 La esterilización por radiaciones ionizantes es en base a rayos………………….
 Los controles mecánicos de un autoclave son………………… - …………………
 Las etapas del proceso de lavado son:……………… - ……………… - ………….
 El uso de agua dura en los materiales se detecta por la presencia
de…………………………………………………………………………………………
42
Taller Formativo Individual N° 3

Mapa Conceptual “Indicador Biológico”
Realice la lectura del siguiente artículo “El uso de Indicadores Biológicos en la

Esterilización con Óxido de Etileno”, y desarrolle con posterioridad un “Mapa
Conceptual” una vez finalizada su revisión y comprensión lectora.
El uso de Indicadores Biológicos en La Esterilización con Óxido De

Etileno.
Introducción
El óxido de etileno desde los años 50 ha sido el agente esterilizante por excelencia y desde que
comenzó a utilizarse ha demostrado ser uno de los métodos más sencillos, seguros y
económicos para esterilizar a baja temperatura toda una gama de dispositivos médicos, en
fábricas como así también e todas las instituciones hospitalarias tanto privadas como estatales.
Este método de esterilización aún no ha podido ser superado por otras tecnologías, lo que lo
hace imprescindible para la esterilización de elementos termo sensibles.
El desarrollo de nuevos materiales y por lo tanto de nuevos productos, para uso médico
principalmente, ha hecho que esta técnica de esterilización se adapte y actualice
permanentemente para poder satisfacer las necesidades que demanda el mercado.
Mecanismo de Acción
Es por muchas conocidas su actividad sobre bacterias, hongos, levaduras, virus.
En la célula bacteriana existen tres sitios principales susceptibles de ser atacados por los agentes
químicos: las capas superficiales, las enzimas, y el material nuclear. El funcionamiento correcto
de cada uno de estos sectores es esencial para la vida del microorganismo. Las proteínas
enzimáticas contienen cierto número de grupos reactivos esenciales para su actividad. Entre
éstos están los grupos ácidos y básicos de las nucleoproteínas, grupos carboxilos, hidroxilos y
aminos, sulfidrilo, amino y otros.
El óxido de etileno actúa químicamente como un agente alquilante reemplazando átomos lábiles,
de hidrógeno de los grupos antes mencionados, por radicales hidroxietilos.
Debido a sus características químicas es uno de los más efectivos métodos de esterilización
gaseosa.
43
Las características fisicoquímicas del gas lo hacen muy activo principalmente por su alta
capacidad de penetración que permite la mortalidad de los microorganismos en lugares de muy
difícil acceso.
Además podemos decir que penetra en sustancias porosas como así también permitiendo la
esterilización de superficies que no se puede lograr por otros métodos.
Monitoreo del proceso de esterilización
Existen básicamente tres tipos de controles o indicadores de un proceso de esterilización:
 Físicos
 Químicos
 Biológicos
Los físicos, son los instrumentos con que el fabricante diseña el esterilizador, que monitorizan y
además deben registrar, es decir, imprimir y/o graficar curvas del proceso de esterilización donde
provee información sobre las condiciones internas de la cámara de esterilización.
El instrumental debe ser validado y fundamentalmente sensible.
Los indicadores químicos para óxido de etileno deben definir los parámetros críticos siguientes:
 Concentración del gas

 Tiempo de exposición
 Temperatura
 Humedad relativa
El cambio que se debe observar en el indicador después de la exposición al proceso debe ser
perfectamente definido para poder realizar una lectura segura.
Los indicadores biológicos para monitorear un proceso de esterilización, consisten en obtener

una población estandarizada de microorganismos viable, usualmente esporos microbianos, de
conocida resistencia al proceso de esterilización que se destina.
Con los indicadores biológicos se intenta demostrar si las condiciones del proceso fueron las
adecuadas para alcanzar la esterilización.
Un indicador biológico negativo no prueba que todos los items del ciclo son estériles, solo que
ellos fueron expuestos a condiciones adecuadas de esterilización.
Utilización
La esterilidad absoluta de un lote de esterilización no puede demostrarse sin realizar prueba de

esterilidad de cada elemento que componen dicho lote, lo que es un imposible.
En consecuencia, la esterilidad de un lote se define en términos probabilísticos, donde la

probabilidad que un elemento esté no estéril es prácticamente remota.
44
Por lo tanto para establecer condiciones óptimas de garantía de la esterilización, pueden

implementarse mediante el uso de procesos adecuados, es decir validados, y buenas prácticas
donde se debe establecer:
 Equipamiento adecuado
 Demostrar que se opera dentro de los parámetros establecidos
 Demostrar que la probabilidad de supervivencia microbiana no es mayor que los limites
establecidos
 Controlar diariamente y protocolizar los resultados
Es por lo anteriormente expuesto, que los indicadores biológicos cumplen como un único sistema
integrador de todas las variables que concurren en un ciclo de esterilización, y sin dudarlo es el
indicador más válido para un proceso con óxido de etileno.
Desarrollo de los indicadores biológicos
Diferentes pruebas se realizaron antes de aceptar internacionalmente al Bacillus subtilis o

Globigii, como comúnmente también se lo conoce, antes de su uso como indicador biológico para
la esterilización gaseosa con óxido de etileno.
Generalmente el soporte utilizado para transportar las esporas microbianas son tiras de papel de
filtro que después de inoculadas son colocadas en sobres, y una vez terminada la esterilización
son llevadas al laboratorio y preferiblemente en cabina de flujo laminar son transferidas a un
medio de cultivo líquido.
Posteriormente son incubadas a 37º C durante 5 o 7 días para recién ser leídos, observando la
turbidez producida por el crecimiento de microorganismos.
La desventaja de éste método es el largo período de incubación, puesto que se necesita observar
turbidez, es decir que el desarrollo microbiano debía ser abundante, por lo tanto su período de
incubación, largo.
En una segunda etapa se introdujeron mejoras a éste método, evitando la transferencia de la tira
de papel porque se envasa en una unidad plástica la tira y el medio de cultivo líquido contenido
en una ampolla de vidrio, que después del ciclo se rompe logrando así impregnar la tira y luego
incubar.
Con este método también se ve facilitada la lectura, porque al medio de cultivo líquido se le
adiciona o incluye un indicador de pH, púrpura de bromocresol que cambia de color cuando
existe desarrollo microbiano, puesto que el medio de cultivo se acidifica.
Existen algunas ventajas con este método porque el cambio permite una mejor y segura lectura
del resultado, la reducción del tiempo de incubación de 24 a 48 hs, la no transferencia de la tira
de papel inoculada del sobre al medio de cultivo, lo que podría ser motivo de introducir
contaminación, teniendo por resultado posibles falsos positivos.
45
Finalmente en los últimos años se ha introducido en el mercado indicadores biológicos de lectura

rápida para el monitoreo de la esterilización con óxido de etileno.
Estos indicadores detectan la presencia de una enzima: a D-glucosidasa contenida en las

esporas, lo que permite una lectura fluorescente al cabo de 4 hr de incubación.
Esta lectura se realiza en la misma incubadora mediante un sistema de luces que de acuerdo a
color indica si la esterilización ha sido satisfactoria, es decir, si existen indicios de desarrollo
microbiano o no. Este método todavía no ha sido suficientemente aceptado.
Existen diferentes tipos de indicadores biológicos y su elección depende para el uso que se lo
destine:
 Desarrollo de ciclo
 Validación de ciclo
 Monitoreo de rutina
La carga microbiana utilizada por indicador biológico es de no menos de 10 (4) y no más de 10

(9) d esporas de Bacillus subtilis-variedad niger.
En la fabricación y validación de los indicadores biológicos se emplean equipos altamente

especializados de esterilización, por lo tanto las características de resistencia del indicador
utilizado por el usuario pueden no coincidir con las especificadas en la etiqueta del mismo debido
a diferencias entre las condiciones del usuario y las condiciones de esterilización empleadas por
el fabricante.
Por lo tanto la elección de un indicador biológico es crítica y requiere que se le de debida

importancia, conociendo la resistencia de la población microbiana del indicador biológico en
relación al proceso de esterilización específico, para que cuando se lo emplee dentro de sus
características de desempeño constituya un desafío para el proceso de esterilización, mayor que
el desafío representado por la carga microbiana contenida en el producto a procesar.
La determinación de diferentes niveles de carga microbiana está basada en recuperar

microorganismos y esporos del producto a ser esterilizado, teniendo en cuenta la eficiencia del
método utilizado en la toma de la muestra en orden que los resultados obtenidos reflejen con
exactitud la carga existente.
Generalmente el indicador biológico seleccionado para monitorear rutinariamente ciclos de

esterilización debería ser el mismo que se utilizó en el programa de desarrollo del ciclo,
estableciéndose así una íntima relación y conocimiento de la resistencia del indicador.
Destacamos además que no es probable que microorganismos aislados de la carga microbiana

sean más resistentes al empleado en la fabricación de indicadores biológicos.
Por último este escrito informativo de indicadores biológicos para la esterilización con óxido de
etileno, intenta proporcionar una descripción general de conceptos y principios a tener en cuenta
46
en el momento de elegir un indicador para la rutina en la esterilización y su importancia en la

información que nos proporciona.
Luis Barlassina
VISION. Vol.4 Nº 14 - Octubre 99
Referencias
 USP 23 - Esterilización y garantía de esterilidad

 USP 23 - Indicadores Biológicos
 American Nacional Standard - ANSI / AAMI ST 34
 Barlassina, Luis - III Congreso Nacional de Microbiología de Barcelona
 Barlassina, Luis - Esterilización Gaseosa con Óxido de Etileno, 1ra Edición
47
MICROBIOLOGÍA.
Es la ciencia de la biología dedicada al estudio y análisis de los MICROORGANISMOS en

su naturaleza, vida y acción.
Estos seres no se pueden visualizar a ojo desnudo, por tanto van a ser visibles solo a
través del Microscopio.
 En 1674 el biólogo holandés Antón van Leeuwenhoek examinó una gota de agua y
descubrió un mundo formado por millones de diminutos animáculos
(microorganismos).
 Cien años después el biólogo danés Otto Müller amplió los estudios de van
Leeuwenhoek y, siguiendo los métodos de clasificación de Carlos Linneo, organizó
a las bacterias en géneros y especies.
 En 1840, el alemán Friedrich Henle propuso unos criterios y demostró que los
microorganismos eran responsables de la aparición de enfermedades en el ser
humano.
 En los años setenta y ochenta del mismo siglo, Robert Koch y Louis Pasteur
confirmaron esta teoría demostrando que los microorganismos eran responsables
de la aparición del carbunco, la rabia, la peste, el cólera y la tuberculosis.
 La era de la quimioterapia comenzó en 1910, cuando el químico alemán Paul

Ehrlich descubrió el primer compuesto antibacteriano, un compuesto que resultó
efectivo contra la espiroqueta causante de la sífilis.
 Alexander Fleming en 1928 descubrió de la Penicilina.
48
 Así, en la actualidad se sabe que existen miles de diferentes tipos de

microorganismos que viven en el interior, en la superficie o alrededor del ser
humano y, asimismo, pueden contarse por centenares los que son capaces de
provocar en él enfermedades graves.
¿Qué es un Microorganismo?
 Un microorganismo, también llamado microbio, es un ser vivo que solo puede

visualizarse con el microscopio.
 El concepto de microorganismo carece de cualquier implicación taxonómica dado

que engloba organismos:
Unicelulares: compuesto por una sola célula.
Procariotas: (células sin núcleo definido) como las bacterias.
Eucariotas: (células con núcleo) como los protozoos, una parte de las algas y los
hongos. Entidades biológicas de tamaño ultramicroscópico, como los virus.
 Los microorganismos se hallan capacitados para cometer una extensa gama de
reacciones metabólicas y adaptarse a muchos ambientes diferentes y
temperaturas extremas
 Por su poco peso pueden ser transportados por las corrientes de aire y estar en
todas partes
49
Estos pueden subdividirse en cuatro grupos:

 Virus
 Bacterias
 Hongos
 Parásitos
Virus.
Los virus son las partículas infecciosas de menor tamaño, con un diámetro que oscila
entre los 18 a 300 nm5 (el tamaño de la mayor parte de los virus es inferior a 200 nm y
no pueden visualizarse mediante el microscopio óptico).
Se han descrito más de 25 familias víricas que contienen más de 1.550 especies de
virus, muchas de las cuales se asocian a enfermedad en el ser humano.
Los virus están formados por ácido desoxirribonucleico (ADN) o ácido ribonucleico
(ARN) (no por ambos a la vez) así como por las proteínas, necesarias para su
replicación y patogenia.
Estos microorganismos son verdaderos parásitos cuya replicación exige la existencia
de unas células anfitrionas.
5
Nanómetros.
50
Bacterias.
Son microorganismos procariotas, es decir unos microorganismos unicelulares
sencillos, sin membrana nuclear, mitocondrias, aparato de Golgi ni retículo
endoplásmico
Se reproducen por división asexual.
Poseen una pared celular que las rodea, la cual es compleja.
Los microorganismos procarióticos poseen una cubierta celular muy diferente de la de
los eucariotas.
Las paredes celulares de muchos de los procariotas poseen un componente químico
común, el peptidoglucano (mureína), que es el responsable de la forma y
consistencia de la pared.
El peptidoglucano es un extenso polímero que se halla integrado por subunidades
alternas de N-acetil glucosamina (que es también el constituyente de la quitina en los
eucariotas) y el ácido N-acetilmurámico.
Existen 2 formas básicas:
Pared celular Gram positiva con una gruesa capa de peptidoglucano

Pared celular Gram negativo con una delgada capa de peptidoglucano, la cual posee
una membrana externa.
Tinciones.
Tinciones utilizadas en microbiología para observar bacterias y hongos en el microscopio
óptico.
Lo primero que debemos tener en cuenta es el nivel de toxicidad de los colorantes a
utilizar, en este caso los que se ocupan para realizar Tinción de Gram y de Ziehl-Neelsen
son reactivos tóxicos que deben ser eliminados en recipientes adecuados para esto
(contenedores de color rojo), nunca al desagüe.
Se deben utilizar con guantes de procedimientos y pechera desechable, durante su
manipulación.
51
El proceso de tinción se debe a reacciones químicas entre el colorante y la célula o de

alguna estructura celular. Para realizar una tinción de un microorganismo se debe realizar
siempre la siguiente secuencia de pasos:
1. Preparación del frotis (Extensión de la Muestra)

2. Secado de la preparación
3. Fijación de la muestra
4. Tinción propiamente tal
1.- Preparación del Frotis (Extensión de la Muestra):

Sobre un portaobjeto limpio, se debe colocar una gota de la muestra directa (en el caso
que sea de un cultivo, debo agregar previamente una gota de agua o suero fisiológico
estéril y luego una colonia bacteriana directa del cultivo).
2.- Secado del Frotis:

Esta se seca con calor de la llama del mechero, a una distancia en la cual no nos
quememos las manos, y el vidrio resista, ya que si lo exponemos a mucho calor directo
podemos destruir la pared bacteriana, lo que impediría la lectura correcta de la Tinción de
Gram.
Otro modo es dejarlo secar al ambiente al lado del mechero Bunsen. Es muy importante
que no quede muy grueso, ya que al haber muchas bacterias, estas estarían mal
distribuidas y sería dificultoso observar sus características morfológicas y no quedara bien
teñido.
3.- Fijación del Extendido al Portaobjetos:

Ya realizado el frotis y seco, se procede a la etapa de fijación, la cual se hace en la llama
del mechero, flameándolo 2 a 3 veces. Este se toma con una pinza de madera para evitar
algún accidente.
4.- Tinción:
52
Esto tiene por objetivo demostrar microscópicamente la morfología, agrupación y afinidad

tintorial de las bacterias a través de la fijación de los colorantes a las bacterias y así de
esta forma, resistan cuando se realiza el lavado durante la tinción.
Una de las principales tinciones que utilizamos en microbiología es la Tinción de Gram.
Tinción de Gram.
Una característica taxonómica importante de las bacterias es su respuesta a la Tinción de

Gram.
Esta característica parece ser fundamental, ya que la reacción a la tinción se correlaciona
con muchas otras propiedades morfológicas en maneras relacionadas filogenéticamente.
Un microorganismo potencialmente gram positivo puede verse como tal solo cuando
concurren un conjunto particular de condiciones ambientales en un cultivo joven.
El procedimiento para la Tinción de Gram se inicia con la aplicación de un colorante
básico, el Cristal Violeta.
Luego se aplica una Solución de Iodo; en este momento todas las bacterias se tiñen de
azul. A continuación se agrega Alcohol Acetona, se lava y finalmente se agrega un contra
colorante, como es la Safranina (colorante rojo).
Esta tinción se basa en la capacidad que presenta la pared bacteriana de las bacterias
para retener el colorante al cual se expone, ya sean gram positivas o gram negativas.
En el caso de las bacterias gram positivas, la pared contiene una gruesa capa de
peptidoglicano que ayuda a retener el colorante Cristal Violeta, lo que a su vez impide la
decoloración, cuando agregamos Alcohol Acetona durante la realización de la tinción. Es
por esto que al ser observadas al microscopios las bacterias se ven de color morado
(Gram +).
Las bacterias Gram Negativas a diferencia de las Gram Positivas, tienen una delgada
capa de peptidoglicano, que no retiene el colorante Cristal Violeta y al ser decoloradas
con el Alcohol Acetona, se destiñe y se vuelva a teñir cuando se agrega el contra
colorante Safranina, tiñéndose de color rojo. (Gram -).
53
Tinción de Gram.
Se colocan sobre un portaobjetos bacterias fijadas por calor o secadas de algún otro
modo
 Se tiñen con Cristal violeta para teñir morado. (aplicar por 1minuto)
LAVAR
 Se añade una solución yodada que actúa como mordiente. (1 minuto)
LAVAR
 Agregar decolorante (alcohol/acetona) con el fin de eliminar el colorante
no fijado. (10 segundos)
LAVAR
 Posteriormente se cubre con un colorante de contraste, Safranina, para
teñir de rojo las células que no hayan retenido el Cristal Violeta. (30
segundos)
Algunos ejemplos de bacterias Gram Positivas:

Todas las formas Cocaceas como:
Staphylococcus, Streptococcus, Micrococcus, excepto las de la familia Neisseriaceae y
Moraxellaceae que son formas cocaceas Gram Negativas.
Todos los bacilos esporulados, tales como:
Clostridium, Bacillus
Otros bacilos como Corynebacterium, Listeria, Lactobacillus.
Importante destacar que a pesar de no ser bacterias se tiñen Gram Positivos las
Levaduras.
54
TRABAJO PERSONAL DEL ESTUDIANTE II

“Microbiología: Morfología Bacteriana”
55

El desarrollo de estos talleres le ayudará a relacionar la teoría
con la realidad procedimental del diario vivir en su quehacer
técnico.
Recuerde que es Ud. el único forjador de su aprendizaje,
aplique su proceso activo con apego absoluto a lo indicado en la
técnica y obtendrá un resultado absoluto y confiable, como
espejo de la condición de la muestra en estudio.
56
Taller Teórico Práctico Formativo N° 1

“Flujograma Procedimental Tinción de Gram”
I Ítem: Flujograma de Proceso Preparación de la Muestra a Teñir
Desarrolle un Flujograma de proceso de la preparación de la muestra, de acuerdo a

las características de esta, según lo indicado:
a) Preparación del Extendido desde una Muestra Líquida:
57
b) Preparación del Extendido de una Muestra obtenida de una

colonia:
58
Taller Práctico Formativo N° 2

“Preparación del Extendido y Tinción de Gram”.
1ª Actividad Teórica Práctica:

I Ítem: Preparación de la Muestra a Teñir
Realice la preparación de la muestra indicada por el docente, para efectuar con

posterioridad la Tinción de Gram.
Recuerde aplicar todas las medidas de bioseguridad que se han mencionado
reiteradamente para su seguridad y de sus compañeros de trabajo.
Aplique los elementos de protección personal en la sección de procesamiento, tenga
especial cuidado al momento de hacer abandono del Laboratorio.
a) Extendido de una Muestra Líquida (agua, caldo, orina, etc.)
Describa brevemente como realizará el procedimiento:
59
b) Extendido de una Muestra obtenida de una colonia:
c) Extendido de una Muestra de Secreción de Herida (recolectada en

tórula):
60
II Ítem: Secado de la Preparación:
Realice un comentario de análisis conforme a lo realizado para esta etapa de secado

según los tipos de muestras extendidos:
III Ítem: Fijado de la Preparación:
Identifique los riesgos asociados a esta etapa del proceso y mencione las medidas de
prevención que deberá tener presente en todo momento:
61
IV Ítem: Tinción:
1.- Identifique con claridad cuáles son los componentes de la Tinción de Gram,
diferenciando sus colorantes, fijador y decolorante respectivamente.
2.- Desarrolle un comentario en referencia a un cambio del orden en su aplicación.

Fundamente su observación.
62
3.- Observe con detención el siguiente esquema y fundamente las diferencias que se
observan y como se manifiestan estas en la actividad práctica procedimental que Ud.
realiza y en la observación microscópica:
63
2ª Actividad Teórica Práctica: Observación Microscópica.
Observe la preparación dispuesta en el Microscopio y esquematice en el recuadro

lo observado, destacando su afinidad tintorial coloreando según lo observado.
Asocie a especie de importancia médica lo observado
Describa morfología, agrupación y afinidad tintorial.
Cocaceas gram (-) cocaceas gram + Bacilos gram (-) bacilos gram +
Morfología Morfología
Bacteriana Bacteriana
Agrupación Agrupación
Afinidad Afinidad
Tintorial Tintorial
Especies Especies
Asociadas Asociadas
64
MEDIOS DE CULTIVOS.
Para el aislamiento estudio y clasificación de los microorganismos es necesario

mantenerlos en un medio en el que dispongan de las sustancias orgánicas e inorgánicas
necesarias e indispensables para el normal desarrollo de su metabolismo. En estos
medios además de su desarrollo, los microorganismos pueden manifestar sus
características de crecimiento y sus propiedades bioquímicas, aspectos bien importantes
para su clasificación.
Los medios de cultivos son soluciones en estado de gel, que poseen todas las sustancias
que se requieren para el desarrollo de los microorganismos.
Estos medios son imprescindibles paran el laboratorio de microbiología, por lo que su
buena preparación, mantención y control nos entregan confiabilidad en los resultados.
Para que las bacterias se puedan desarrollar de forma adecuada en los medios, estos
deben cumplir ciertas condiciones, es decir temperatura adecuada, Ph y deben ser
estériles (libres de cualquier microorganismo).
Estos según sus componentes se dividen en:

o Agar nutritivos, agar selectivos, agar diferencial, agar enriquecidos.
o Existen medios de cultivos sintéticos o artificiales de composición química definida
y medios naturales que se preparan en base a sustancias naturales. (Por Ej: agua
Peptonada, caldo común, leche, etc.)
Según el estado físico se clasifican en:

o Medios líquidos,
o Medios sólidos,
o Medios semisólidos
65
Los medios de cultivos, según sus componentes pueden clasificarse en cuatro tipos:
 medios de enriquecimiento,
 medios nutrientes o de soporte,
 medios selectivos y
 medios diferenciales
Medios de Enriquecimiento
Favorecen el sobrecreciendo de un determinado microrganismo a partir de una muestra
que lo tiene en escasa cantidad, con predominio de la microbiota habitual.
Medios Nutrientes o de Soporte

Contienen nutrientes que permiten que la mayoría de los microorganismos no fastidiosos
crezcan en la misma proporción en que se encuentran en la muestra, sin permitir que otro
microorganismo crezca exageradamente (agar nutriente, agar cerebro corazón).
Medios Selectivos
Contiene uno o más agentes inhibitorios (antibiótico-colorantes) que inhiben a los
microorganismos excepto al que se desea recuperar (Fenil-Etil-Alcohol).
66
Medios Diferenciales
Emplean metabolitos que permiten a los microorganismos expresar características
metabólicas o de cultivo que hacen posible distinguirlos de otros con características
diferentes (Ej: el agar sangre cordero permite el crecimiento y diferenciación según tipo de
hemólisis y/o producción de pigmento)
67
Mantención de los Medios de Cultivos.
Los medios de cultivos deshidratados deben mantenerse en un lugar seco y oscuro, a una
temperatura aproximadamente de 15ºC a 25ºC, en frascos bien cerrados para evitar la
entrada de humedad, ya que la absorción de agua lleva a una alteración del Ph y
eventualmente a formación de precipitados.
Bajo condiciones ideales, los medios de cultivos deshidratados, en sus frascos originales
sellados, pueden ser mantenidos al menos hasta 5 años sin deteriorarse.
68
Preparación del medio de cultivo deshidratado:

Se debe usar agua destilada con pH lo más cercano posible a 7,0. Los receptáculos
destinados para usar deben ser absolutamente limpios y lo suficientemente grande para
poder mezclar el medio de cultivo con facilidad. En lo posible, no se debe prepara más de
1-2 litros por recipiente.
El medio de cultivo se debe pesar según los ml a preparar y según indicación del
fabricante. A este ya pesado se le añade aproximadamente la mitad del agua necesaria
para su reconstitución y se mezcla hasta conseguir una suspensión homogénea.
Después se incorpora la cantidad restante del agua.
Luego de esto se llevan al autoclave para su posterior esterilización (se debe tener en
cuenta que hay medios de cultivos que no se esterilizan)
Los medios de cultivos que no contienen ni agar ni gelatina, se pueden disolver en

general en agua fría o con un ligero calentamiento.
Los medios nutritivos que contiene agar o gelatina, deben ser calentados al baño María
hasta conseguir su disolución. Debe evitarse el calor excesivo. En los medios de cultivos
que no necesitan ser sometidos a ulterior esterilización en autoclave, es imprescindible
lograr su completa disolución.
Ajuste del pH:
69
El valor del pH depende mucho de la composición del medio de cultivo, de su temperatura

y del tratamiento al que ha sido sometido (disolución, esterilización)
Debido a que los microorganismos encontrados en muestras clínicas crecen mejor a un
pH cercano al pH neutro, es esencial controlarlo en forma regular después de autoclavar.
En los medios de cultivos sólidos, la medición del pH se realiza a 45-50ºC (medios liquido
aun) y en los medios nutritivos líquidos se hace a temperatura ambiente.
Esterilización de los Medios de Cultivos:
Esta puede realizarse en un autoclave o por filtración. Volúmenes de hasta 500ml de la

mayoría de los medios son autoclavados a 121ºC por 15 minutos. Volúmenes más
grandes pueden necesitar de 20-30 minutos o más. Deberían usarse temperaturas de
116-118º C para medios conteniendo carbohidratos termoestables. Los carbohidratos
termolábiles, deberían ser esterilizados por filtración y agregarse al medio ya autoclavado
y enfriado, en forma aséptica.
Si las normas de preparación no indican otra cosa, la esterilización se hace en autoclave

a 121ºc durante 15 minutos.
Los medios de cultivo deben sacarse de inmediato del autoclave y enfriarlos rápidamente.
70
Vertido del Medio de Cultivo en Placas:

Para evitar la formación de gotitas de agua de condensación en la tapa de las placas, se
debe verter en ella el medio de cultivo a una temperatura de 45-55º C. Previamente hay
que mezclar bien el medio de cultivo. La repartición debe ser hecha cuidadosamente para
evitar la formación de burbujas. Si estas se producen, se puede pasar la llama del
mechero sobre la superficie del agar antes de que este se solidifique.
Cuando el agar haya solidificado, dar vuelta las placas.
Tubos de Agar Inclinado:

Los tubos llenos con medio de cultivo esterilizado, todavía líquido, se colocan en una
posición inclinada, de tal manera que quede una parte cilíndrica de aproximadamente 3
cm y otra parte en pico de flauta de igual dimensión.
Control de Calidad de los Medios de Cultivo:
Cada vez que se preparan medios de cultivo de un nuevo lote o de un nuevo frasco,
deben efectuarse cultivos de control que aseguren su esterilidad, un pH adecuado y
reacciones bioquímicas correspondientes a los controles de calidad establecidos.
71
En aquellos medios en que se agregan materiales después de la esterilización (por

ejemplo agar Thayer Martin, Agar Chocolate, Agar Campylobacter) en cada preparación
deberá realizarse control de calidad, sembrando los microorganismos sugeridos para el
control de cada medio.
Para controlar las esterilidad de las placas preparadas, incubar el 1% de las placas a 36º
C durante la noche (luego de esto, estas se deben eliminar). El control de calidad debería
ser visual y por subcultivo. Si se observa consistentemente que no hay contaminación,
este control de esterilidad puede discontinuarse. Deberá reiniciarse el control cada vez
que se vuelva a observar contaminación y hasta que el problema se haya resuelto.
Cada tubo, placa o reactivo preparado, debe tener una etiqueta que indique la fecha de
preparación.
Conservación de Medios de Cultivos Preparados, listos para su uso.

Los medios de cultivos preparados tienen un tiempo limitado de conservación; cuando no
se indica otra cosa y bajo condiciones adecuadas, éste es de varios meses.
Los medios que no contienen suplementos ni enriquecimientos son estables hasta por un
año si se conservan en tubos con tapa rosca. Estos mismos medios en placa pueden
mantenerse hasta por 6 meses. Los medios como Agar Sangre, Agar Chocolate y Thayer
Martin se consideran estables hasta por 3 meses. Se recomienda su almacenamiento a 4-
12ºC, cuando van a mantenerse por periodos de tiempos prolongados. No deben
guardarse a temperatura por debajo a 0ºC.
Es posible su conservación durante 1 semana a temperatura ambiente y siempre que
estén protegidos de la luz.
Las placas pueden ser refrigeradas durante una semana sin deteriorarse, pero deberían
envolverse en bolsas de plásticos o papel para minimizar la perdida de agua.
Por otro lado, luego de utilizar estos medios con cultivos bacterianos, se deberá efectuar
la esterilización en autoclave (73º C por 12-15 minutos), antes de ser eliminados.
72
Agar Sangre
El agar sangre de cordero al 5% es el medio de cultivo más comúnmente usado para el
aislamiento primario de la mayoría de las
bacterias aeróbicas no fastidiosas.
Por su contenido en nutrientes, permite el
buen desarrollo de las bacterias. Por otra
parte, es posible realizar una identificación
primaria de las bacterias por las
características morfológicas de las colonias
en el agar sangre.
Agar Chocolate
Es un medio de cultivo usado para el aislamiento primario de la mayoría de las bacterias
aeróbicas incluyendo además a algunos fastidiosos
(Haemophilus, Gardnerella, Neisseria).
El agar chocolate es preparado agregando sangre de
cordero a un medio de agar base enriquecido, el que
está a una alta temperatura (aprox. 80º C) para lisar
los glóbulos rojos y liberar los factores X y V, lo que
lleva a mejorar el desarrollo de las bacterias y permite
además el aislamiento de Haemophilus.
Agar Mac Conkey

Es un medio de cultivo selectivo y diferencial más usado
para inhibir microorganismos gram positivos. Permite la
selección y recuperación de las Enterobacterias y
bacilos gram negativos entéricos relacionados.
Las sales biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo
de las bacterias gram positivas y de algunas bacterias
73
gram negativas fastidiosas. El indicador de pH, rojo neutro, da las características

diferenciales. La lactosa es el único carbohidrato presente en el medio.
Agar Salmonella-Shigella (SS)

Es uh medio selectivo usado para el aislamiento de
Salmonella y Shigella, inhibiendo el desarrollo de
bacterias coliformes.
Agar TCBS
Medio selectivo para recuperar cepas de Vibrio a partir de muestras clínicas.
Las altas concentraciones de tiosulfato y citrato férrico, junto con la fuerte alcalinidad del
medio inhiben el crecimiento de las Enterobacterias, haciendo de este un medio selectivo
para el desarrollo de Vibrio.
74
Caldo Selenito
Es recomendable para el aislamiento de Salmonella, de muestras tales como:
deposiciones, orina o aguas sucias que tiene altas concentraciones de bacterias mixtas.
Agar Thayer Martin

Este medio es recomendado para el aislamiento de Neisseria gonorrhoeae de todos
aquellos sitios que podrían tener microbiota mixta, y de Neisseria meningitidis de
muestras nasales y bucofaríngeas.
Es un medio enriquecido que contiene 3 antibióticos y un antifúngico, los que actúan
como agentes selectivos para la inhibición de la microbiota.
75
Medios Usados en la Identificación Bioquímica de Enterobacterias

(bacilos gram negativos). Baterías bioquímicas.
TSI (Triple Sugar Iron)
Medio usado para determinar la fermentación de carbohidratos y producción de H2S

como primer paso en la identificación de bacilos gram negativos.
Preparación del Medio:
Suspender los componentes en un litro de agua destilada.
Calentar hasta disolver.
Distribuir en tubos y esterilizar a 121°C por 15 min.
Disponer en posición inclinada y enfriar a temperatura ambiente hasta que solidifique,

para obtener un extremo inferior profundo y un tendido superior corto.
76
LIA (Lysine Iron Agar)
Medio diferencial usado para ver la habilidad de las Enterobacterias para producir H2S,
descarboxilar y deaminar la lisina.
Preparación del medio:
Disolver el medio en agua destilada, repartir en tubos, esterilizar, poner los tubos
semitendidos.
MIO (Motilidad Indol Ornitina)

Permite determinar tres importantes características en la identificación de las
Enterobacterias: movilidad, Indol, descarboxilación de la Ornitina.
Preparación del Medio:

Suspender los componentes en un litro de agua destilada y calentar hasta disolver
completamente. Repartir en tubos y esterilizar por 15 min a 121°C (estos se mantienen en
90°, no inclinados como los anteriores).
77
Urea (Urea de Stuart (Caldo) y Urea de Christensen (Agar)

Medio utilizado para ver que microorganismos poseen la enzima ureasa y actúan
hidrolizando la urea presente en el medio, liberando amoniaco
Citrato de Simmons
Medio utilizado para ver la capacidad de ciertas bacterias de utilizar el citrato como única
fuente de carbono.
Preparación del Medio de Cultivo:

Disolver los componentes en un litro de agua destilada. Repartir en tubos, esterilizar a 15
minutos a 121°C y dejar enfriar los tubos en agar tendido. El medio listo para usar es de
color verde claro.
78
PRUEBAS ESPECIALES QUE PODEMOS REALIZAR PARA LA

IDENTIFICACIÓN BACTERIANA.
Prueba Coagulasa:
Permite separar S. aureus que es capaz de producir la enzima coagulasa, de las otras
especies de Staphylococcus.
El S. aureus posee dos tipos de coagulasa, la que realizamos es la exo coagulasa o
coagulasa libre que actúa mediante la activación de un factor, formándose un complejo
coagulasa, el cual reacciona con el fibrinógeno produciéndose un coagulo de fibrina (esta
prueba se realiza en tubo con plasma de conejo idealmente).
Test en Tubo
Se emulsionan varias colonias en un tubo con 0.5 ml de plama citratado de conejo.
Se incuba a 35º C y se examina la formación del coagulo a las 4 horas.
Si es negativo se re incuba toda la noche y se procede a su lectura a las 18-24 horas. La
lectura a las 4 horas es fundamental porque en alguna oportunidad puede suceder que las
fibrinolisinas de S. aureus lisen el coagulo luego de 18 horas de incubación y de esta
maneras se produzcan un test falso negativo.
79
Prueba de la Catalasa
Se agrega una gota de agua oxigenada y una colonia de la bacteria a estudiar, todo esto
una lámina limpia de vidrio.
Se utiliza para comprobar la presencia de la enzima citocromo oxidasa que se encuentra

en la mayoría de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen
citocromo. La principal excepción es Streptococcus.
Una reacción positiva se evidencia por la formación de burbujas por el desprendimiento

de oxigeno molecular libre.
80
Clasificación de las Bacterias.
Para realizar una clasificación preliminar de las bacterias se utiliza la tinción de gram:
 Tamaño
 Forma (esferas, bastoncillos, espirales)
 Disposición espacial (células aisladas, en cadenas y formando acúmulos)
 Afinidad tintorial (gram positiva o negativa)
Su clasificación definitiva se refiere a sus propiedades fenotípicas y genotípicas.
Bacilos Gram Positivos:

Formadores de Esporas: Bacillus y Clostridium
No formadores de Esporas: Corynebacterium, Listeria, Propionibacterium
Bacilos Gram Negativos:

Enterobacterias, Vibrio cholerae, Pasteurella.
Bacilo No Fermentador de Azúcares: como Pseudomona, Acinetobacter, Burkolderia,
Helicobacter, Stenotrophomonas, Campylobacter, Haemophilus, Bordetella, Brucella etc.
Cocaceas Gram Positivas:

Catalasa Positivas: Staphylococcus (aureus o coagulasa negativa), Micrococcus.
Catalasa Negativa: Enterococcus, Streptococcus.
Cocaceas Gram Negativas:

Neisserias spp (gonorrhoeae o meningitidis), Moraxella spp.
Anaerobios:
Se desarrollan en ausencia de oxígeno.
Bacilos Gram Negativos: Bacteroides fragilis, Prevotella melaninogenica,
Fusobacterium
Bacilos Gram Positivos: Actinomyces, Lactobacillus, Propionibacterium, Clostridium.
Cocaceas Gram Negativas: Veillonella
81
Cocaceas Gram Positivas: Peptostreptococcus
Necesidades Metabólicas de las Bacterias.

El crecimiento bacteriano requiere una fuente de energía y la materia prima necesaria
para fabricar las proteínas, las estructuras y las membranas que conforman la maquinaria
estructural y bioquímica de la célula.
Las bacterias deben obtener o sintetizar:
 Aminoácidos
 Hidratos de carbono
 Lípidos utilizados
Las necesidades mínimas para el crecimiento son una fuente de carbono y nitrógeno, otra
fuente de energía son el agua y diversos iones.
El oxígeno es esencial para el ser humano. Constituye una sustancia tóxica para muchas
bacterias.
Algunos microorganismos (p. ej., Clostridium perfringens, causante de gangrena gaseosa)
no pueden crecer en presencia de oxígeno.
Este tipo de bacterias son conocidas como Anaerobias Estrictas
Hay otras que requieren la presencia de oxígeno molecular para su crecimiento y en
consecuencia, se denominan Aerobias Estrictas.
Sin embargo, la mayor parte de las bacterias puede crecer tanto en presencia como en
ausencia de oxígeno, en cuyo caso reciben el nombre de Anaerobias Facultativas.
Hongos.
La estructura celular de los hongos es más compleja.
Son microorganismos eucariotas que poseen un núcleo bien definido, mitocondrias,
aparato de Golgi y retículo endoplásmico.
Los hongos pueden existir en una forma unicelular (levadura) capaz de replicarse de
manera asexual, o en una forma filamentosa (moho). (Reproducción tanto sexual como
asexual).
82
HONGOS FILAMENTOSOS
HONGOS LEVADURIFORMES
83
TRABAJO PERSONAL DEL ESTUDIANTE III
“Microbiología: Medios de Cultivo”
84

El desarrollo de estos talleres le permitirá comprender lo
relevante que son estos elementos de diagnóstico
microbiológico en el quehacer de su competencia.
técnica y obtendrá un resultado absoluto y confiable, como
espejo de la condición de la muestra en estudio.
85
Taller Teórico Práctico N° 1

“Reconocimiento y Uso Procedimental de Medios de Cultivo”.
I Ítem: Recuadro Temático I
Ud. encontrará una serie de medios de cultivo en el mesón de trabajo en el Laboratorio

Clínico Experimental, identifíquelos uno por uno y desarrolle el siguiente recuadro, de
acuerdo a instrucciones.
Disposición Nombre del Clasificación

(Placa / Tubo) Medio de Estado Composición Objetivo de su Uso
(Dibuje y Coloree) Cultivo Físico
86
Disposición Nombre del Clasificación

(Placa / Tubo) Medio de Estado Composición Objetivo de su Uso
(Dibuje y Coloree) Cultivo Físico
87
II Ítem: Recuadro Temático II

Ud. ya ha identificado los medios de cultivo, por lo tanto; es momento de aplicar sus
conocimientos prácticos referidos al uso que les dará en el proceso de las muestras para
cultivar, aislar e identificar los microorganismos.
MEDIOS DE CULTIVO ENRIQUECIDOS Y SELECTIVOS
Nombre del Medio Técnica de Siembre Diagrame y coloree el Desarrollo

de Cultivo (Dibuje el medio de cultivo y Microbiano
esquematice la Técnica de En el medio de cultivo
Siembra)
88
MEDIOS DE CULTIVO DIFERENCIALES Y CROMOGÉNICOS
Nombre del Medio Técnica de Siembre Diagrame y coloree el Desarrollo

de Cultivo (Dibuje el medio de cultivo y Microbiano
esquematice la Técnica de En el medio de cultivo
Siembra)
89
III Ítem: RECUADRO TEMÁTICO

Realice la lectura del siguiente recuadro con detención y luego responda lo solicitado.
Posibles Defectos en la Preparación y Manipulación de los Medios de Cultivo
Defecto Causal
Apelmazamiento del medio de cultivo  Conservación en atmósfera
excesivamente húmeda
 Envase ha permanecido abierto
demasiado tiempo
 El envase no quedó suficientemente
cerrado después de su uso
 El medio de cultivo deshidratado está
muy pasado de la fecha de vencimiento
Desviación del pH  Agua no neutra
 Envase insuficientemente bien cerrado
 Medio de cultivo deshidratado muy
pasado de la fecha de vencimiento
Turbidez, Precipitación  Defecto de preparación
 Agua insuficientemente desionizada
 Sobrecalentamiento del medio durante su
preparación
 Envases de preparación
insuficientemente limpios
 pH incorrecto o desajustado
Punto de Solidificación Demasiado  Excesiva proporción de medio de cultivo
Elevado deshidratado
 Agar-agar no adecuado
Escasa estabilidad del Gel  Proporción demasiado pequeña de
medio de cultivo deshidratado
 Medio de cultivo deshidratado no disuelto
completamente
 Medio de cultivo deshidratado
sobrecalentado durante su preparación
 El medio de cultivo no se mezcló o fue
insuficiente cuando fue vertido a las
placa de Petri
 En el caso que el medio de cultivo es
preparado por el usuario, muy poca
cantidad de Agar-agar
 Medios de cultivo ácidos
Desviación del Color  Error en la medición o ajuste de pH
 Sobrecalentamiento del medio de cultivo
o envase de preparación sucio
90
Posibles Defectos en la Preparación y Manipulación de los Medios de Cultivo
Defecto Causal
Medios de Cultivo Contaminados  Esterilización insuficiente
 Contaminación accidental posterior a la
esterilización. Por ej.: en el vertido de
placa, placas de Petri no estéril
Crecimiento Demasiado Pobre en  Residuos de sustancias inhibidoras del
Bacterias crecimiento (Ej.: detergentes)
 pH incorrecto
 medio de cultivo sobrecalentado durante
su preparación
Crecimiento Demasiado Intenso de  Medio de cultivo sobrecalentado durante
Bacterias su preparación
 Medio de cultivo sembrado con excesiva
cantidad de muestra
Desarrolle un “MAPA CONCEPTUAL” del recuadro considerando las diversas variables y

sus causas, que se consideran con respecto a la preparación y uso de los medios de
cultivo
91
CONCEPTOS GENERALES DE SALUD.
La salud es un estado de completo bienestar físico, mental y social, y no solamente la

ausencia de afecciones o enfermedades (1946).
En 1992 un investigador agregó a la definición de la OMS: "y en armonía con el medio
ambiente“.
Enfermedad
Alteración o desviación del estado fisiológico en una o varias partes del cuerpo, por
causas en general conocidas, manifestada por síntomas y signos característicos, y cuya
evolución es más o menos previsible.
Agente Infeccioso
Microorganismo causante de la infección: Bacterias, virus, hongos, parásitos.
Reservorio
Hábitat natural del agente infeccioso. El lugar donde pueden sobrevivir (crece y se
reproduce).
Puerta de salida del agente.
Desde el reservorio (líquido, gotas) hacia el exterior por vía aérea, digestiva y piel.
Mecanismos de Transmisión
Vía de Transmisión Contacto Directo.
Vía de Transmisión Indirecta.
A través del aire.
Vía de Transmisión Contacto Directo: el Reservorio es la Fuente de Infección. No

existen intermediarios en la transmisión.
Personas Enfermas (Reservorio Humano) Varicela, Rubéola. (De una persona a
otra).
Animales Enfermos (Reservorio Animal) la Rabia.
92
Vía de Transmisión Indirecta

El Reservorio no es la Fuente de Infección. Los agentes llegan a través de elementos
contaminados o vectores.
Animales Enfermos: contaminan con sus heces alimentos y agua que se convierten
en la fuente de infección o elemento directamente infectante Ej: Hidatidosis,
Triquinosis, salmonelosis.
Vehículos de Transmisión: objetos o materiales contaminados como juguetes, ropa
de cama, agua, tierra, utensilios: bacterias
Vectores Vivos: Este tipo de transmisión incluye un huésped intermediario. Ej: un
insecto, un animal o planta.
A través del Aire: diseminación de aerosoles microbianos, son suspensiones aéreas
de partículas constituidas total o parcialmente por microorganismos: gotillas o polvo (>
de 5 micras) Ej: Tuberculosis.
Pueden difundirse por:
 Tos
 Estornudo
 Conversación
Mecanismo de Infección
 INFECCION DIRECTA
Contacto de piel a piel, desde un paciente a otro o de un trabajador de salud. (Ej.: el
saludo con las manos, el baño de pacientes, control de signos vitales).
 INFECCION INDIRECTA (VECTORIAL)
Tocar objetos o artículos que estuvieron en contacto directo con el paciente contaminado
(Ej: termómetro, chatas, patos, esfigmomanómetro, utensilios de alimentación).
 INFECCION CRUZADA
Trasmisión de agentes infecciosos entre pacientes y el personal que les proporcionan
atención en un entorno clínico.
Ello puede ser resultado del contacto directo, persona a persona, o indirecto, mediante
objetos contaminados llamados fómites.
93
Otros mecanismos de infección:

 TRANSFUSIONAL
• LACTANCIA
• TRANSPLACENTARIO O VERTICAL
Los agentes infecciosos presentan cuatro características que los identifican:

 Patogenicidad
 Contagiosidad
 Virulencia
 Poder de invasión
Los agentes infecciosos presentan cuatro características que los identifican:
 Patogenicidad: capacidad de un agente infeccioso de producir la enfermedad en

un huésped susceptible.
Características:
- Transmisibilidad.
- Capacidad para adherirse a las células huésped.
- Invasión de células o tejidos.
- Toxigenicidad (exotoxinas).
- Capacidad de evadir el sistema inmunitario del huésped.
 Virulencia: Es el grado de patogenicidad de un agente infeccioso, indicado por las

tasas de letalidad y por su capacidad de invadir y lesionar los tejidos del huésped.
- Adherencia.
- Producción de toxinas.
- Producción de enzimas.
94
MUESTRAS MICROBIOLÓGICAS.
Para trabajar las muestras microbiológicas deben haber portaobjetos para realizar la
tinción de gram y para poder realizar los exámenes al directo (es decir cuando se carga
la muestra de forma directa en el portaobjeto y se cubre con una laminilla).
Para poder trabajar las muestras se deben utilizar medios de transporte estériles. Esto
es porque el medio debe estar libre de cualquier tipo de microorganismo, es decir;
asegurarnos de que si encontramos algún microorganismo en las muestras, este sí está
causando infección y no es algo que ha estado en el recolector en el cual se obtuvo.
Las muestras de orina, tejido, líquidos, catéter, muestras respiratorias se deben tomar
en:
 Contenedor de tapa rosca, estéril (para evitar derrame).
Las muestras de secreción de heridas, se deben tomar en:
 Tórula estéril con medio de transporte (Stuart).
95
Las muestras de raspado de piel:

 Placas de Petri estéril o contenedor estéril.
Las muestra de deposición para Coprocultivo:

 Tórula estéril con medio de transporte (Cary-Blair).
Los medios de transporte evitan la muerte de los microorganismos de interés, pues

mantienen el pH y la humedad, por su composición permiten la viabilidad de los
microorganismos pero no su multiplicación, ejemplos: Stuart, Cary y Blair, Amies, etc.
Medio de Transporte Stuart: medio usado para el transporte de secreciones,

permitiendo preservar la viabilidad de los agentes patógenos (el medio es esencialmente
una solución de buffers con carbohidratos, peptona y otros nutrientes).
96
Medio de Transporte Cary-Blair: medio usado para mantener muestras de deposición.

Es un medio no nutritivo, semisólido que impide el sobre crecimiento de los
microorganismos, permitiendo a su vez recuperar cepas de: Salmonella, Shigella, Yersinia
y Vibrio.
Siembra de Muestras.
Para sembrar las muestras, se requiere de material estéril también y de un mechero para
poder sembrar alrededor de él.
Asa estériles de 1ul y 10 ul.
Asas de metal, que se puedan incinerar en la llama del mechero.
Medios de cultivos estériles.
Tubos con suero fisiológico estéril.
Estufas de cultivo.
97
Siembra: Muestras de Orina Aséptica (Urocultivo).

Sembrar en:
 Agar sangre de cordero
 Agar MacConkey y/o agar Cromogénico
Esta debe ser sembrada con asas estériles de 1 ul, ya que el estudio que se hace es
cuantitativo.
Factores a considerar:
 la orina si no es sembrada de forma inmediata se puede guardar hasta por 4 horas

en el refrigerador.
 El urocultivo es una muestra de orina, la cual se solicita para ver si existe infección
urinaria o no.
 La muestra debe ser de 2º chorro, (es decir se elimina el primer chorro y el

segundo se recoge en un frasco estéril tapa rosca). Previo a la toma de muestra,
el paciente debe hacerse aseo genital con agua y jabón de la zona genital).
 Puede ser por punción vesical o sondeo, y ese procedimiento lo realiza la

enfermera con técnica aséptica.
98
Siembra: Muestras de Herida.

Sembrar en:
 Agar Sangre de Cordero
 Agar MacConkey
 Caldo Thioglicolato
Realizar Tinción de Gram
 la muestra debe mantenerse a temperatura ambiente en el medio de transporte

hasta su siembra.
 esta muestra es obtenida cuando se sospecha de heridas infectadas.
 esta muestra se siembra de forma directa del medio de transporte Stuart.
Siembra: Muestras Respiratorias

Utilizar mascarilla N 95 (de alta eficiencia)
Sembrar en:
 Agar MacConkey
 Agar Chocolate
 debe venir en frasco o tubo estéril y en un volumen no inferior a 1-2 ml.
 debe sembrarse lo antes posible y si no, debe mantenerse en refrigeración.
Estas muestras pueden ser: expectoración, lavado bronquial, lavado broncoalveolar,

aspirado traqueal cuantitativo y faríngeo.
99
- Con una pipeta estéril agregar 10 μl de muestra en cada uno de los siguientes
medios: Placa Agar Sangre (Ambiente CO2), Placa chocolate (Ambiente CO2), Placa
Agar Mac Conkey y realizar siembra.
Realizar tinción de gram de las diferentes muestras:
- Se realiza tomando un asa de 10 ul, se introduce en la muestra y se pone en un
portaobjeto.
- Se deja secar para luego teñir.
- Incubar a 35 ºC en estufa de cultivo.
En caso que la muestra sea un Aspirado Traqueal Cuantitativo (ATC)

Realizar Tinción de Gram de las diferentes muestras.
- Se realiza tomando un asa de 10 ul.
- Se introduce en la muestra y se pone en un portaobjeto.
- Se deja secar para luego teñir.
Sacar del refrigerador:
- Dos placas de Agar Sangre de Cordero,
- Dos placas de Agar Mc Conkey, y un tubo que contenga 9.9 ml de Suero
Fisiológico.
- Dejar que logren temperatura ambiente.
Diluir la muestra en igual volumen de suero fisiológico (Dilución 1:2).
- Homogeneizar con perlas de vidrio.
- Agitar en Vortex durante 2 minutos.
- Extraer 0.1 ml de la muestra diluida y agregar a un tubo con 9.9 ml de suero
fisiológico.
- Agitar en Vortex por 2 minutos.
- Rotular una placa de Agar Sangre de Cordero y otra de Agar Mac Conkey con la
letra “A”.
- Rotular una placa de Agar Sangre de Cordero, Agar Chocolate y otra de Agar
Mac Conkey con la letra “B”.
- En las placas “A” sembrar 0.1 ml de la muestra homogeneizada.
- Diseminar con asa de 10 ul y dejar secar. (Dilución final de las placas: 1: 2000)
100
- En las placas “B” sembrar 0.01 ml de la muestra. Asa de color Azul calibrada para
10 ml (Dilución final de las placas: 1: 20000)
- Incubar las placas de Agar Sangre de Cordero en CO2 y las placas de Agar Mac
Conkey en atmósfera aeróbica a 35º C.
- Incubar por un máximo de 72 horas.
Muestras para Estudio de Koch.

Baciloscopía:
Si la muestra es para búsqueda de Bacilo de Koch, esta muestra debe ser tomada en un
frasco oscuro, ya que el bacilo es lábil a la luz.
Se debe tomar a primera hora en la mañana, en días consecutivos y se toman 2
muestras.
Se realiza el procedimiento en GBS (Gabinete de Bioseguridad A II), utilizando este de
acuerdo a protocolo.
Se abre la muestra numerada dentro del GBS y se coloca la porción más purulenta y
mucosa de la muestra sobre un portaobjeto previamente identificado con el número
correspondiente a la muestra.
Con un segundo portaobjeto presione la muestra, con el fin de extender la muestra
uniformemente en los portaobjetos.
Friccione suavemente entre ambas caras de las láminas que contiene la muestra.
Repetir este proceso hasta obtener una capa gruesa y homogénea de la muestra en 2/3
del portaobjeto.
Depositar la lámina sobre el agitador térmico para que se seque.

Realizar la tinción de Ziehl Neelsen bajo la campana extractora.
Cultivo de Koch:
Descontaminación de la Muestra
Poner las muestras a estudiar y los respectivos tubos cónicos de plástico de 50 ml
previamente identificados con el número de la muestra al GBS, en dos gradillas
independientes.
Etapas en común para las muestras naturalmente contaminadas:

 Agregar al tubo cónico previamente enumerado con el número de la muestra
un volumen de solución de Hidróxido de Sodio 3,5% con Rojo Fenol como
101
indicador, igual al volumen de muestra recolectada.

 Tapar el tubo cónico con su respectiva tapa.
 Trasladar los tubos cónicos que contienen la muestra con la solución de álcalis
a la cámara de incubación de la sección.
 Agitar los tubos cónicos en el agitador mecánico durante 20 minutos a 37°C.
 Trasladar los tubos cónicos de regreso al GBS.
 Neutralizar el pH de la muestra de inmediato. Para ello deberá agregar gota a
gota una solución de Ácido Sulfúrico 7%, hasta observar una leve tonalidad
amarilla en la mezcla de la muestra.
 Ajustar el pH de la solución con Hidróxido de Sodio 2%, gota a gota hasta
cuando esta obtenga un leve tono rosado que corresponde a un pH 6.6 a 7.2.
 Comprobar el pH con papel indicador.
 Esperar 5 a 10 minutos y tomar pH al azar a 2 ó 3 muestras de la serie para
ver si se estabilizo el pH, si no es así se vuelve a neutralizar.
Siembra de la Muestra.
 Se realiza la siembra de las muestras a continuación de la neutralización y

descontaminación de la muestra según se requiera, dentro del GBS.
 Identificar los tubos de Medio de Lowenstein-Jensen a utilizar durante la siembra de
las muestras respectivas.
 Trasvasijar 0,3 a 0,5 ml de la muestra en tubo cónico, en cada tubo de medio de
cultivo Lowenstein-Jensen
 Sembrar la muestra en cuatro tubos (a excepción de las muestras de expectoración
que se siembran en tres tubos y las muestras de orina que se siembran en 6 tubos).
 Incubar los tubos de medio de cultivo Lowenstein-Jensen en posición horizontal
inclinada, (cajas con inclinación de 10°) de manera que la muestra bañe la superficie
del medio.
Muestras de Deposición.
Coprocultivo
102
Deber ser sembrado en:
 Agar MacConkey
 Agar TCBS
 Agar Salmonella-Shigella
 Caldo selenito
Este examen se solicita cuando hay sospecha de infecciones por las siguientes
bacterias:
 Salmonella, Shigella, Yersinia y Campylobacter.
 Escherichia coli O157H7 en menores de 2 años
Se toma la muestra con medio de transporte Cary-Blair, se pasa la tórula por la región
perianal y se guarda en el medio hasta ser sembrada en el Laboratorio Clínico lo antes
posible.
Leucocitos Fecales:
Este se carga directamente en un portaobjeto en donde se ponen 2 gotas de la deposición

y encima se pone una laminilla para poder ser observada al microscopio por el Tecnólogo
Médico.
La muestra se toma en un recipiente con tapa rosca, y se deposita la muestra de forma

directa.
103
Muestra Secreciones.
Muestra: Secreción Ótica-Ocular

Sembrar en:
 Agar MacConkey
 Agar Chocolate
 Agar Thayer Martin (solo las oculares)
 Caldo Tioglicolato
La muestra debe mantenerse a temperatura ambiente hasta su siembra.
Estas muestras se toman en medio de transporte Stuart.
Muestras de Sangre (Hemocultivo).

Sembrar en:
 Agar MacConkey
 Agar Chocolate
Estas muestras se solicitan cuando hay sospecha de infección en la sangre, y se toman

de forma directa del paciente y pueden ser Hemocultivos Periféricos o de Catéter.
Se utiliza técnica aséptica. Se utilizan medios comerciales que tienen anticoagulantes

para depositar la muestra obtenida.
La cantidad en adultos debe ser de 5-10 ml y en recién nacidos de 0.5-2 ml de sangre.
104
Secreción Uretral
Se debe sembrar en:
 Agar Chocolate
Si solicitan cultivo de Neisseria, se debe sembrar además en Agar Thayer Martin.

Estas muestras se toman en medio de transporte Stuart.
Se realiza Tinción de Gram de la muestra.
IV. Muestras de Líquidos
Centrifugar muestra en centrifuga de siembra (3000 rpm por 10 minuto).

Eliminar sobrenandante y el sedimento sembrar.
Se debe sembrar en:
 Agar Chocolate
 Agar MacConkey
 Agar Thioglicolato.
Tinción de Gram (si es de LCR se debe informar de forma inmediata)
Todo se debe realizar alrededor de la llama del mechero.

Incubar placas sembradas a 35° C (las placas de Agar Sangre y Chocolate se incuban
en CO2), el resto de las placas solo en estufa de cultivo.
Lectura e informe de Tinción de Gram de forma inmediata en sistema informático.
Luego de haber transcurrido 24 horas se pueden sacar las placas de la estufa de cultivo
e identificar el agente aislado, realizar estudio de susceptibilidad. En caso de muestras
negativas, estudiar por 72 horas.
105
Estudio de Anaerobios.
 La muestra debe venir en jeringa tapada sin aire y ser procesada de forma rápida.
 Utilizar guantes de procedimientos para su realización.
 Etiquetar muestra a trabajar y todo el material seleccionado para siembra y
microscopía.
Realizar siembra de anaerobios en:
 Tioglicolato-hemina,
 PAS-anaerobio,
 PAS-Kanamicina (+hemina).
Incubar por 5 días a 35°C en estufa de cultivo para secreciones en anaerobiosis en
Jarra GAS-PACK
Realizar Tinción de Gram.
Además sembrar en:
 Agar sangre y Agar Mc Conkey que queda en aerobiosis.
Incubar 72 horas a 35°C en estufa de cultivo para secreciones.
 Realizar todo esto antes de 30 minutos, una vez llegada la muestra.
 Leer Tinción de Gram
Luego de 5 días de incubación, se deben retirar las placas de la estufa de cultivo
para la lectura de las placas.
Identificar agente aislado
106
ETAPAS DE REALIZACIÓN DE UN FROTIS PARA TINCIÓN.
Lo primero que debo hacer es:

 Prender mechero regulando llama azul.
 Flamear portaobjeto.
 Dejar enfriar portaobjeto.
 Enumerar la lámina con lápiz dermatográfico.
[Esterilizar asa metálica (si se decide utilizar ésta) hasta “rojo vivo”, dejar enfriar].
 Usar asa plástica estéril utilizada en siembra de la misma muestra.
 Expandir muestra sobre la superficie del portaobjetos (esta puede ser directa o del
cultivo).
 Fijar muestra al calor, flameando repetidas veces portaobjeto por la llama. También se
puede secar a temperatura ambiente.
 Proceder a hacer tinción (ver paso de tinciones)
 Los materiales a utilizar son: portaobjetos de 76 x 26 mm, asa estéril o asa metálica,
agua destilada, lápiz dermatográfico o marcador de vidrio, mechero Bunsen.
centrífuga, agua destilada.
Tipos de Frotis.
Frotis de Muestra Primaria

 Enumerar lámina con número de la muestra trazando una línea de separación para
evitar que el número se borre durante la tinción.
 Tomar desde la muestra una gota (con asa estéril) o un Torulado y distribuir en forma
circular al centro de la lámina.
 Fijar la lámina con calor en la llama del mechero.
 Teñir para Tinción de Gram.
 Si la muestra es para Coprocultivo, teñir con tinción para Campylobacter spp. (AX2).
107
Frotis de Colonias
 Enumerar lámina con número de la muestra.
 Colocar una gota de agua destilada estéril por cada colonia a la que se le realice frotis
 Flamear un asa o utilizar un asa estéril y tomar la colonia en estudio.
 Emulsionar la colonia.
 Fijar lámina al calor de la llama (mechero).
 Teñir con Tinción de Gram,
Frotis de Líquido Cefalorraquídeo

 Centrifugar la muestra a 3000 r.p.m. por 15 minutos.
 Traspasar el sobrenadante a un tubo Kahn
 Marcar una lámina con el número de la muestra y hacer dos círculos que servirán
para delimitar la muestra.
 Tomar una muestra desde el sedimento y extenderla dentro de las marcas.
 Fijar al calor de la llama del mechero.
 Teñir mediante Tinción de Gram.
Extendido de Hemocultivo
 Numerar una lámina de 76 x 26 mm con el número de petición en estudio.
 Homogeneizar el contenido de la botella, limpiar tapa con torunda con alcohol al
70%.
 Extraer una muestra de sangre desde la botella, pinchando con una jeringa
desechable.
 Eliminar la primera gota de sangre en solución de Hipoclorito de Sodio 0,5% para
evitar que la muestra salpique en la lámina.
 Depositar una gota de la muestra en la lámina enumerada.
 Eliminar el exceso de sangre en Hipoclorito de Sodio 0,5%.
 Eliminar la jeringa completa con aguja en caja para cortopunzantes.
 Con un cubreobjeto en ángulo de 45º extender una capa de sangre sobre la
lámina.
108
 Fijar al calor de la llama del mechero.

 Teñir para Tinción de Gram.
REALIZACION Y ESTUDIO DE ANTIBIOGRAMAS.
Los estudios de susceptibilidad están indicados para apoyar la terapia antimicrobiana de

tratamiento en procesos infecciosos por bacterias en las que la identidad del
microorganismo no es suficiente para predecir en forma confiable su susceptibilidad.
Método de Difusión en Agar

Reactivos para Método de Difusión en Agar o Kirby Bauer
• Medio Agar Müller Hinton
• Sensidiscos dependiendo del agente.
• Caldo Triptosa fosfato (Tripticase) o,
• Solución salina 0,9% estéril
• Etalón 0.5 Mcfarland de BaSO4
Técnica a realizar:
 Utilizar guantes desechables para realizar el procedimiento.
 Enumerar todo el material seleccionado para el procedimiento.
 Crear un campo de trabajo estéril encendiendo el mechero.
 El Técnico debe tomar 2-4 colonias de la cepa aislada para realizar el inóculo en un
tubo con Tripticase, el cual se debe ajustar a 0.5 Mcfarland (medir con turbidímetro)
 Con una tórula estéril, tomar inóculo y pasarlo a una placa de agar Müller Hinton
(sembrando toda la placa).
 Agregar los sensidiscos según el microorganismo a estudiar con pinzas estériles o
con el dispensador (los sensidiscos se guardan refrigerados a 4ºC).
 Incubar placas sembradas por 18-24 horas a 35° C en estufa para Antibiograma.
 El Tecnólogo Médico es el encargado de leer e interpretar los antibiogramas, pasada
24 horas.
109
Métodos Automatizados
En este momento existen varios sistemas que ofrecen diferentes niveles de
automatización para el estudio de susceptibilidad.
Utilizan una medición turbidimétrica o fluorométrica para detectar crecimiento bacteriano
en un medio líquido.
La mayoría de ellos emplea el método de micro dilución y períodos de incubación
menores que los habituales.
Estos métodos son bastante confiables para el estudio de Enterobacterias y otros
gérmenes de crecimiento rápido.
110
TRABAJO PERSONAL DEL ESTUDIANTE IV.
“Microbiología: Muestras Microbiológicas y

su Diagnóstico Procedimental”
111

relevante que es su quehacer en el proceso analítico de las
diversas muestras para el diagnóstico clínico y tratamiento
antimicrobiano de las diversas patologías infecciosas.

técnica y obtendrá un resultado exacto y confiable, como espejo
de la condición de la muestra en estudio.
112
Taller Teórico Práctico N° 1 “Técnica del Asa Calibrada”.
I Ítem: Actividad Procedimental
Realice la siguiente actividad práctica de acuerdo a las instrucciones:
1ª Actividad Práctica: Urocultivo
 Obtenga una muestra de Orina Aséptica y siémbrela según protocolo.

 Al día siguiente, observe su desarrollo microbiano y determine si
corresponde realizar el Antibiograma.
 Complemente su actividad con un análisis conceptual de la técnica
realizada y el resultado de su siembra bacteriológica.
113
2ª Actividad Práctica: Coprocultivo
 Obtenga una muestra de Deposición y siémbrela según protocolo.

 Observe su desarrollo microbiano al día siguiente y determine si
corresponde realizar estudio bacteriano al desarrollo obtenido.
Identifique las variables que determinan esta decisión.
 Desarrolle un “Flujograma de la Técnica” realizada e identifique potenciales
patógenos relacionados.
114
3ª Actividad Práctica: Hemocultivo
 Confeccione un “Mapa Conceptual” del Examen de Hemocultivo en relación

al rol que le corresponde realizar en su proceso analítico cuando es (+) .
 ¿Cuál es el rol que el compete a Ud. como Técnico en el proceso

automatizado?
115
4ª Actividad Práctica: Observación Temática 1
1 2
3 4
Observe con detención los esquemas, identifique la actividad, ordénelos según secuencia
procedimental e identifique posibles errores y/o etapas faltantes
116
5ª Actividad Práctica: Observación Temática 2
Observe con detención e identifique la actividad, destacando las etapas y pasos faltantes
para una correcta técnica aséptica.
117
6ª Actividad Práctica: Pruebas de Identificación Bioquímica Bacteriana
Observe el recuadro y complete de acuerdo a lo solicitado referente a Medios de Cultivo

Diferenciales.
Medios de Cultivo Diferenciales
Dibujo
Nombre Disposición
Medio Original Medio con Medio con
Del Medio (Tubo / Placa)
Técnica de Desarrollo
Siembra Microbiano
Desarrolle un breve comentario de la actividad realizada:
118
7ª Actividad Práctica: Pruebas de Susceptibilidad Microbiana (Antibiograma)
Observe con detención ambos esquemas e indique las diferencias de ambas técnicas:
119
PARASITOLOGÍA.
El hombre puede enfermar tanto por causas internas y externas. Dentro de las causas
externas están los agentes biológicos que reciben el nombre de “Parásitos” y el ser vivo
que los alberga se denomina “Huésped”.
Cuando un organismo parásito produce manifestaciones clínicas sobre el organismo

hospedador, decimos que se está produciendo un fenómeno de parasitosis. Hay que
tener muy en cuenta que todos los tipos de parasitosis son parasitismos, pero no todos
los tipos de parasitismos son necesariamente parasitosis.
Un parásito se puede definir como una de las partes de dos especies que interaccionan
teniendo integrados sus genomas hasta tal punto que el parásito depende, como mínimo,
de uno de los genes de la otra especie para sobrevivir.
Hay varios tipos de interacciones biológicas en las cuales dos organismos se asocian
para vivir. Las más importantes son:
Parasitismo:
Este tipo de asociación sucede cuando un ser vivo (parásito) se aloja en otro de diferente
especie (huésped u hospedero) del cual se alimenta. El parasitismo abarca desde los
virus hasta los artrópodos, pero por costumbre se ha restringido el término parásito para
aquellos organismos que pertenecen al reino animal.
Comensalismo:
Se presenta cuando dos especies diferentes se asocian en tal forma que solamente una
de las dos obtiene beneficio, pero ninguna sufre daño.
Inquilinismo:
Ocurre cuando un ser se aloja en otro sin producirle daño y sin derivar alimento de él.
120
Simbiosis:
Sucede cuando dos especies diferentes se asocian para obtener beneficio mutuo, sin el
cual no pueden subsistir.
Terminología
A continuación se presentaran las terminologías principales para entender el estudio de

parasitología:
 Huésped u Hospedero: Se conoce como el animal que recibe el parásito.

 Huésped Definitivo: Hospedero en el cual el parasito alcanza su madurez sexual.
 Huésped Intermediario: Hospedero en el cual el parasito desarrolla parte de su
ciclo evolutivo, sin alcanzar su madurez sexual.
 Reservorio: Se considera reservorio al hombre, animales, plantas o materia
inanimada, que contengan parásitos u otros microorganismos que puedan vivir y
multiplicarse en ellos y ser fuente de infección para un huésped susceptible.
 Vector: Se considera en parasitología que el vector es un artrópodo u otro animal
invertebrado que transmite el parásito al huésped, bien sea por inoculación al
picar, por depositar el material infectante en la piel o mucosas o por contaminar
alimentos u otros objetos.
Los vectores pueden ser sólo portadores mecánicos de los parásitos como en el
caso de moscas o cucarachas, o ser verdaderos portadores biológicos cuando
los parásitos se multiplican en ellos o las larvas se transforman para ser
infectantes.
 Infección Parasitaria: Sucede cuando el huésped tiene parásitos que no le
causan lesión o enfermedad, lo cual constituye el estado de portador sano.
 Enfermedad Parasitaria: Se presenta cuando el huésped sufre alteraciones
patológicas y sintomatología producidas por parásitos.
 Zoonosis: Infección que se trasmite en forma natural entre el hombre y los demás
vertebrados.
 Ciclo Evolutivo: etapas secuenciales del desarrollo de un parasito.
121
 Ciclo de Transmisión: Etapas por las cuales pasa un parasito desde la fuente de
infección hasta el susceptible.
 Forma Infectante: Fase del parasito capaz de infectar al huésped.
Clasificación
Los parásitos se pueden clasificar de distintas maneras:
Dependiendo del tiempo de permanencia del parásito en su huésped se dividen en:
 Permanentes (aquellos que indispensablemente deben permanecer toda su vida

en el huésped)
 Temporales (los habitan transitoriamente en el huésped)
Según la capacidad de producir lesión o enfermedad en el hombre, los parásitos pueden

dividir:
 Patógenos
 No patógenos
Según su ubicación topográfica:

 Ectoparásitos: infestaciones
 Endoparásitos: infecciones
Según su ubicación en órganos y sistemas:

 Enteroparásitos (ej: tubo digestivo)
 Histoparásitos (ej: en tejidos)
 Hemoparásitos (ej: en sangre)
Ciclo de Vida
Es el proceso que desarrolla el parasito para llegar al huésped, desarrollarse en él y
producir formas infectantes que perpetúan la especie.
122
Los protozoos intestinales desarrollan el ciclo de vida más simple, es aquél que permite a
los parásitos dividirse en el interior del huésped, para aumentar su número y a su vez
producir formas que salen al exterior para infectar nuevos huéspedes.
En los helmintos, se presentan otros tipos de ciclo que requieren la salida al exterior de
huevos o larvas, que en circunstancias propicias de temperatura y humedad, llegan a ser
infectantes.
En ciclos más complicados existen Huéspedes Intermediarios, en los cuales las formas
larvarias crecen o se multiplican antes de pasar a los nuevos huéspedes definitivos. En
algunos casos existen reservorios animales o más de un huésped intermediario y en
otros, es indispensable la presencia de vectores. Los pasos, a veces muy complicados, a
través de huéspedes o del organismo humano, están regidos por tropismos que llevan a
los parásitos por determinadas vías o los hacen permanecer en ciertos lugares.
Ciclo de Trasmisión
Son etapas que deben trascurrir en un parasito para pasar del huésped infectado (fuente
de infección) al huésped susceptible. Además pueden ser congénitos, connatales y
adquiridos.
Mecanismos Adquiridos:
a) Directo:
 Cutáneo
 Ciclo ano-mano-boca
b) Indirecto
 Vehículo: Alimento-agua; Tierra-cosas; Fómites-ropa; Utensilios
 Aire: Gotitas de flugge; polvo
c) Vectores
 Mecánico
 Biológico
123
Mecanismo de Acción.
Los parásitos afectan al organismo humano de maneras muy diversas, dependiendo del
tamaño, número, localización, etc.; los principales mecanismos por los cuales los
parásitos causan daño a sus huéspedes son:
 Mecánicos:
Los efectos mecánicos son producidos por obstrucción, ocupación de espacio y
compresión; el primero sucede con parásitos que se alojan en conductos del
organismo, y el segundo ocurre con aquellos que ocupan espacio en vísceras.
 Traumáticos:
Los parásitos pueden causar traumatismo en los órganos donde se localizan.
 Bioquímicos.:
Algunos parásitos producen sustancias tóxicas o metabólicas que tienen la
capacidad de destruir tejidos.
 Inmunológicos:
Los parásitos y sus productos de excreción derivados del metabolismo, producen
reacción de hipersensibilidad inmediata o tardía.
 Expoliativos:
Es el mecanismo por el cual el parasito consume elementos propios del huésped
124
Clasificación de los Parásitos.
Protozoos.
El reino Protista y el subreino Protozoa, agrupan los organismos unicelulares que se

denominan Protozoos o Protozoarios. Se pueden encontrar de diferentes formas, de vida
libre y otros siendo parásitos de animales y plantas. Son microscópicos y se localizan en
diferentes tejidos. Los protozoos constituyen uno de los reinos animales más primitivos de
la historia de la Tierra. En los protozoos se distinguen los Trofozoitos (forma vegetativa) y
Quistes (forma de resistencia).
Morfología
Los Trofozoitos constan de membrana, citoplasma y núcleo. La membrana varía de
espesor según las especies y sus principales funciones son: limitar el parásito, servir
como elemento protector y permitir el intercambio de sustancias alimenticias y de
excreción.
El citoplasma es una masa coloidal y representa el cuerpo del organismo, en algunas

especies se puede diferenciar claramente una parte interna, granulosa y vacuolada
llamada endoplasma y otra externa, hialina, refringente que es el ectoplasma.
En algunos protozoos existen vacuolas en el citoplasma, unas son alimenticias

encargadas del metabolismo de los nutrientes y otras excretoras que facilitan la
eliminación de sustancias. El núcleo es esférico u ovoide, se encuentra localizado en
cualquier parte del citoplasma.
Reproducción
Los protozoarios se multiplican por reproducción asexual y sólo algunos tienen
reproducción sexual. La asexual tiene dos modalidades división binaria y división múltiple.
125
Locomoción
Los protozoos presentan mecanismos diversos de locomoción, función que se tiene en
cuenta como uno de los parámetros para su clasificación. Según el modo que tienen para
desplazarse se habla de:
 Rizópodos o Amebianos: se desplazan emitiendo pseudópodos.

 Flagelados: Se desplazan mediante flagelos
 Ciliados: Se desplazan mediante cilios
 Esporozoos: al no tener organelos visibles de movilización, lo hacen mediante
deslizamiento.
126
Helmintos
Los helmintos, comúnmente llamados gusanos, son seres multicelulares o metazoarios,

ampliamente distribuidos en la naturaleza. Muchos de ellos viven libremente y otros se
han adaptado a llevar vida parasitaria en vegetales, animales o en el hombre.
Según su aspecto se dividen en: Nematodos y Platelmintos.
Morfología y Fisiología
Los Nematelmintos o Nemátodos y los Platelmintos difieren morfológicamente, los
primeros son gusanos cilíndricos, habitualmente de sexos separados y con dimorfismo
sexual. Al corte transversal presenta una envoltura externa, la cutícula, que impide que el
gusano sea destruido por las enzimas del huésped, a su vez la capa muscular es la que
proporciona movilidad al parasito.
127
A su vez los Platelmintos son gusanos acintados generalmente hermafroditas y sin

cavidad visceral. En este grupo podemos encontrar los Cestodos que son de cuerpo
plano, dividido en escólex o cabeza, cuello y estróbilo, formado por proglótidas
(inmaduras, maduras y grávidas) y los Trematodos que son de cuerpos planos no
segmentados.
128
Artrópodos
Son en su mayoría animales invertebrados, caracterizados por poseer patas articuladas,
pueden ser parásitos de forma permanente o temporales del hombre; actúan como
huésped intermediario.
Se pueden distinguir según la cantidad de patas que poseen:
 Insectos hexápodos con 6 patas,
 Arácnidos u octógodos con 8 patas y
 Crustáceos o decápodos con 10 patas
Insectos Hexápodos:
Los insectos adultos tienen el cuerpo dividido en tres regiones: a) cabeza que posee un
aparato bucal y un par de antenas; b) tórax, dividido en tres segmentos: protórax,
mesotórax y metatórax, de cada uno de los cuales sale un par de patas; en los insectos
que tienen alas se encuentran un par en el mesotórax y otro en el metatórax; c) abdomen;
dividido en segmentos.
129
Arácnidos u Octógodos:
Comprende las arañas, garrapatas, ácaros y escorpiones. El cuerpo de los adultos está
dividido en dos regiones, cefalotórax y abdomen.
130
Crustáceos o Decápodos:
Hay pocos crustáceos de importancia médica. Sirven como huésped intermediario de
algunos parásitos humanos.
Los artrópodos producen lesiones o enfermedades de intensidad muy variable y por

diferentes mecanismos que agrupamos en prurito, alergias cutáneas, alergias
respiratorias, intoxicaciones y lesiones destructivas e invasivas.
Además, podemos diferenciar en aquellos que realizan según su ciclo evolutivo,
Metamorfosis Incompleta y Metamorfosis Completa.
La Metamorfosis Incompleta es aquella donde se produce un desarrollo gradual de un

insecto en etapa adulta. Se caracteriza por la ausencia de la fase de pupa. Consta de tres
etapas: huevo, larva o ninfa y adulto. Dentro de los artrópodos que desarrollan
metamorfosis incompleta podemos encontrar: Cucarachas, piojos, chinches, acaro de la
sarna, garrapatas y arañas.
131
Ciclo Evolutivo de Metamorfosis Incompleta.
Por su parte la Metamorfosis Completa consta de cuatro etapas: huevo, larva o ninfa,
pupa y adulto. Dentro de los artrópodos que desarrollan metamorfosis completa podemos
encontrar: Moscas, mosquitos y pulgas
132
Ciclo Evolutivo de Metamorfosis Completa.
133
Parasitosis por Protozoos.
Amebiasis
Es la infección del intestino grueso del hombre por el protozoo Entamoeba histolytica.
Forma infectante  Quiste tetrágeno

Vía de infección  Oral
Mecanismo de trasmisión Fecalismo humano
Fuente de infección  Alimentos y agua contaminada con heces humanas,
Manipuladores de alimentos
Reservorio  Hombre
Ciclo  Monoxénico
Ciclo Evolutivo Entamoeba histolytica.
134
Balantidiosis
Zoonosis producida por Balantidium coli, protozoo ciliado, comensal del intestino grueso
del cerdo (hombres infectados), que afecta al hombre originando a veces un síndrome
disentérico o diarreico.
Forma infectante  Quiste

Mecanismo de trasmisión Fecalismo de cerdo (humano)
Fuente de infección  Alimentos y agua contaminada con heces de cerdos
(humanos)
Reservorio  cerdo
Ciclo  Zoonosis directa (Monoxénico)
Ciclo Evolutivo Balantidium coli.
135
Giardiasis
Infección del intestino delgado del hombre, producida por el protozoo Giardia lamblia
Forma infectante  Quiste

Reservorio  hombre
Ciclo Evolutivo Giardia lamblia.
136
Isosporiasis
Infección del intestino delgado del hombre, por Isospora belli, protozoo, coccidio que
produce un cuadro clínico caracterizado por fiebre, diarrea subaguda y Eosinofilia.
Forma infectante  Ooquiste maduro

Fuente de infección  Alimentos y agua contaminada con heces humanas
Reservorio  hombre
Ciclo Evolutivo Isospora belli.
137
Criptosporidiasis
Infección del aparato digestivo por protozoos del género Cryptosporidium sp., de los
cuales Cryptococcus muris y Cryptococcus parvum afectan a mamíferos, siendo
Cryptococcus parvum el que parasita al hombre.
Forma infectante  Ooquiste maduro

Mecanismo de trasmisión Fecalismo humano o animal
Fuente de infección  Alimentos y agua contaminada con heces humanas o
animales, Manipuladores de alimentos
Reservorio  Animales
Ciclo  Zoonosis directa (Monoxénico)
Ciclo Evolutivo Crytosporidium sp.
138
Tricomoniasis
Infección del hombre provocada por protozoos flagelados del género Trichomonas,
localizadas en la cavidad bucal, digestiva y urogenital. En el ser humano se han
demostrado 3 especies: Trichomonas tenax (comensal de la boca), Trichomonas hominis
(comensal del intestino grueso) y Trichomonas vaginalis, parasito de la vagina en la mujer
y uretra, vesículas seminales y próstata en el hombre.
Forma infectante  Trofozoito

Vía de infección  Genital
Mecanismo de trasmisión Sexual
Fuente de infección  Individuos infectados
Ciclo Evolutivo Trichomonas vaginalis.
139
Blastocistosis
Infección del intestino del hombre producida por el protozoo Blastocystis hominis, no
presenta forma quística. Es causante de diarrea y su patogenicidad depende del número
de parásitos.
Forma infectante  Trofozoito (vacuolar, granular, ameboide)

Mecanismo de trasmisión  Fecalismo humano
manipuladores de alimentos.
Ciclo Evolutivo Blastocystis hominis
140
Enfermedad de Chagas
Es la infección del hombre, de mamíferos y triatominos (vinchuca) producida por un
protozoo flagelado, Tripanosoma cruzi. En el hombre la infección puede ser congénita o
adquirida. En Chile se han identificado solo dos vectores capaces de trasmitir este
protozoo, el Triatoma infestans (hábitat domiciliario nocturno) y Triatoma spinolai (rural y
silvestre), artrópodos hematofogos conocidos popularmente como vinchuca.
Clasificación  Protozoo, flagelado con kinetoplasto

Estadio evolutivo  Tripomastigoto, epimastigoto y amastigoto
Mecanismo de trasmisión  Vectorial, transfusional, transplacentario, trasplante de
órganos.
Ciclo  Metazoonosis
Ciclo Evolutivo Tripanosoma cruzi.
141
Toxoplasmosis
Infección parasitaria del hombre y de diversas especies de mamíferos y de aves,
producida por un protozoo coccidio llamado Toxoplasma gondii.
Clasificación  Protozoo, Apicomplexo, coccidio

Estadio evolutivo  Zoito, pseudoquiste, quiste y ooquiste
Mecanismo de trasmisión  Fecalismo felino, carnivorismo, transplacentario,
transfusional y trasplante de órganos.
Ciclo  Ciclozoonosis
Ciclo Evolutivo Toxoplasma gondii.
142
Parasitosis por Helmintos.
Ascariasis
Helminto- Nematodo que afecta el intestino delgado del hombre, por Ascaris lumbricoides,
Es un geo helminto ya que sus huevos maduran en la tierra, es por esto que parasita
preferentemente a los niños.
Forma infectante  Huevo larvado

Fuente de infección  Alimentos y agua contaminada con heces humanas.
Ciclo Evolutivo Ascaris lumbricoides.
143
Tricocefalosis
Helminto -Nematodo que afecta el intestino grueso del hombre por Trichuris trichiura, a
diferencia de Ascaris lumbricoides, no efectúa migraciones (sin Ciclo de Loos)

Fuente de infección  Alimentos y agua contaminada con heces humanas.
Ciclo Evolutivo Trichuris trichiura.
144
Oxiuriasis
Infección del tipo familiar producida por el Helminto- Nematodo Enterobius vermicularis
conocido popularmente como “pidulle”. Habita en el ciego del hombre y las hembras
migran a la región perianal para depositar sus huevos.

Vía de infección  Oral, Respiratoria
Mecanismo de trasmisión  Ciclo ano-mano- boca
Fuente de infección  Ambiente oxiuriótico
Ciclo Evolutivo Enterobius vermicularis.
145
Teniasis
Infección humana producida por los Helmintos- Cestodos por los ejemplares adultos de
Taenia solium y Taenia saginata.
Taenia solium
El huésped intermediario de este parasito es el cerdo, en el que se desarrolla el estado
larval denominado Cysticercus cellulosae. El hombre al comer carne de cerdo crudo y/o
mal cocida adquiere la Taenia (huésped definitivo), infectando el intestino delgado del
hombre.
Forma infectante Cisticerco de Taenia solium (Cisticercus cellulosae)

Vía de infección Oral
Mecanismo de trasmisión Carnivorismo porcino
Fuente de infección Carne de porcino infectada con cisticercos
Hospedero definitivo Hombre
Hospedero intermediario Cerdo
Reservorio Hombre
Ciclo Heteroxénico
Ciclo Evolutivo Taenia solium.
146
Taenia saginata
El huésped intermediario de este parasito es el Vacuno, en el que se desarrolla el estado
larval denominado Cysticercus bovis. El hombre al comer carne de vacuno crudo y/o mal
cocida adquiere la Taenia (huésped definitivo), infectando el intestino delgado del hombre.
Forma infectante Cisticerco de Taenia saginata (Cisticercus bovis)

Mecanismo de trasmisión Carnivorismo porcino
Fuente de infección Carne de vacuno infectada con cisticercos
Hospedero intermediario Vacuno
Reservorio Hombre
Ciclo Heteroxénico
Ciclo Evolutivo Taenia saginata.
147
Cisticercosis
Es la localización en los tejido del hombre del Cysticercus cellulosae, forma larval de
Taenia solium que habitualmente infecta al cerdo
Forma infectante  Huevo hembrionado de Taenia solium (Cisticercus

cellulosae)
Localización  Tejido subcutáneo, musculo, Sistema nervioso central y ojo
Ciclo Evolutivo Cysticercus cellulosae.
148
Difilobotriasis
Infección del intestino delgado que afecta a hombres y animales ictiófagos del Helminto-
Cestodo Dyphyllobothrium latum.
Forma infectante  Plerocercoide

Mecanismo de trasmisión  Carnivorismo de peces
Fuente de infección  Carnes de peces infectada con plerocercoides
Hospedero definitivo  Hombre y animal ictiófago
Hospedero intermediario  Copépodo y peces
Reservorio  Animales ictiófagos
Ciclo  Heteroxénico
Ciclo Evolutivo Dyphyllobothrium latum.
149
Himenolepiasis por Hymenolepis nana

Infección del intestino delgado del hombre causada por el Helminto- Cestodo
Hymenolepis nana, siendo este la infección por cestodos más frecuente del hombre.
Forma infectante Huevo hembrionado (Cisticercoide)

Mecanismo de trasmisión Fecalismo humano (consumo de artrópodos)
Fuente de infección Alimentos y agua contaminada con heces humanas,
Manipuladores de alimentos, artrópodos infectados con
cisticercoides
Hospedero intermediario Hombres , Artrópodos
Reservorio Hombre
Ciclo Monoxénico
Ciclo Evolutivo Hymenolepis nana.
150
Himenolepiasis por Hymenolepis diminuta
Infección accidental del intestino delgado del hombre causada por el Helminto- Cestodo
Hymenolepis diminuta propia de ratas y ratones
Forma infectante Cisticercoide

Mecanismo de trasmisión Consumo de artrópodos
Fuente de infección Artrópodos infectados con cisticercoides
Hospedero definitivo Ratas (accidentalmente el hombre)
Hospedero intermediario Artrópodos
Reservorio Rata
Ciclo Heteroxénico
Ciclo Evolutivo Hymenolepis diminuta.
151
Dipilidiasis
Infección accidental del intestino delgado del hombre causada por el Helminto- Cestodo
Dipylidium caninum, propia perros, gatos, otros caninos y felinos silvestres.
Forma infectante  Cisticercoide

Mecanismo de trasmisión  Consumo de artrópodos
Fuente de infección  Artrópodos infectados con cisticercoides
Hospedero definitivo  Caninos y felinos (accidentalmente el hombre)
Hospedero intermediario  Artrópodos
Reservorio  Caninos y felinos
Ciclo Evolutivo Dipylidium caninum.
152
Hidatidosis
Es la presencia en los órganos de animales y hombre de la taenia Echinococcus

granulosus que vive en el intestino delgado del perro.
Forma infectante  Cisticercoide

Mecanismo de trasmisión  Consumo de artrópodos
Fuente de infección  Artrópodos infectados con cisticercoides
Hospedero definitivo  Caninos y felinos (accidentalmente el hombre)
Hospedero intermediario  Artrópodos
Ciclo Evolutivo Echinococcus granulosus.
153
Triquinosis
Es la presencia en la carne de cerdo de quistes tisulares del Helminto nematodo
Trichinella spiralis que vive en el intestino delgado de animales infectados.
Forma infectante  Quiste tisular

Mecanismo de trasmisión  Carnivorismo
Fuente de infección  Carne de cerdo infectada con quiste larvados
Hospedero definitivo  Animales infectados
Hospedero intermediario  Animales infectados
Reservorio  Rata
Ciclo Evolutivo Trichinella spiralis.
154
Fasciolasis
Es la presencia en los canalículos biliares del hombre y animales herbívoros del helminto
trematodo Fasciola hepática.
Forma infectante  Metacercaria

Mecanismo de trasmisión  Consumo de berros
Fuente de infección  Berros contaminados con metacercarias
Hospedero definitivo  Hombres y animales herbívoros
Hospedero intermediario  Caracol de agua dulce
Ciclo Evolutivo Fasciola hepática.
155
TRABAJO PERSONAL DEL ESTUDIANTE V.
“Microbiología: Diagnóstico Parasitológico

Procedimental”
156

relevante que es su quehacer en el proceso analítico de las
diversas muestras para el diagnóstico parasitológico, como de
las medidas de prevención y de saneamiento básico.

técnica y obtendrá un resultado exacto y confiable, como espejo
de la condición de la muestra en estudio.
157

“Técnica Examen Parasitológico Seriado de Deposiciones”.
El EPSD es el procedimiento de diagnóstico de laboratorio de mayor demanda en el área

de la Parasitología en los laboratorios clínicos del país. Para realizarlo, se describen
métodos basados principalmente en la concentración de los elementos parasitarios
mediante sedimentación por fuerza de gravedad, centrifugación o flotación, entre los más
empleados, que permiten concentrar los distintos estadios microscópicos o elementos de
desarrollo de protozoos y helmintos parásitos presentes en una muestra de deposiciones.
El procesamiento debe ser de un número de tres muestras recogidas en días alternados
(el periodo de recolección total comprende 5 días).
Materiales para la Obtención de la Muestra

 3 frascos plásticos limpios, no necesariamente estériles, con cierre hermético, de
tapa rosca, boca ancha, con etiquetas y que contengan 15 mL de solución fijadora
c/u para frascos de 30 ml. Se recomienda el uso de frascos con cucharilla
incorporada o 3 paletas de madera auxiliares.
 Hoja impresa con las instrucciones para la recolección de las muestras. La hoja
debe basarse en los aspectos generales detallados en los requisitos de la
muestra, en lenguaje sencillo y comprensible. Las etiquetas deben tener suficiente
espacio para los siguientes datos: - Nombre y apellido del paciente. - Fecha de
obtención de la muestra
Método de Burrows Modificado

Este método fue descrito por Burrows en 1967 con el nombre de Método de PAFS (Fenol
Alcohol Formalina) y modificado posteriormente por Torres y Navarrete en 1972. En Chile,
se le conoce mayoritariamente como Método de Burrows Modificado.
158
Éste es un método de concentración por sedimentación mediante centrifugación que se

caracteriza por su buen rendimiento en el diagnóstico de huevos de helmintos, quistes y
Trofozoitos de protozoos, especialmente en el diagnóstico de elementos del género
Entamoeba.
La ventaja radica en la calidad de la solución empleada como fijador, que penetra
rápidamente en el elemento parasitario permitiendo que las características morfológicas
no se alteren e inactiva las formas infectantes que pudieran estar presentes en la
muestra.
Procedimiento
1. Durante el procesamiento de las muestras, al igual que para los otros métodos
aplicados a fluidos corporales, se deben guardar las precauciones contenidas en
los manuales de bioseguridad.
2. Numerar los tres frascos del paciente con el mismo número.
3. Numerar 2 portaobjetos diferenciando la Fase “T” (Trofozoitica) de la Fase “Q”
(quística), 2 vasos y 1 tubo de centrífuga con el mismo número de los frascos.
4. Homogenizar el contenido de los frascos mediante ayuda de una paleta de
madera.
5. Vaciar todo el contenido de cada frasco en un vaso y agregar suero fisiológico
0,85% con la precaución de efectuar una buena dilución y homogenización.
6. Tamizar la emulsión a través de la malla colocada en un vaso limpio.
7. Observar el material retenido en la malla en busca de parásitos macroscópicos.
8. Colocar aproximadamente 12 ml de tamizado en el tubo de centrífuga.
9. Centrifugar por 3 minutos a 1.800 r.p.m.
10. Eliminar el sobrenadante invirtiendo el tubo. Si el sedimento es menor de 0,5 ml
agregar del tamizado hasta lograr un sedimento de 0,5 a 0,6 ml.
11. Resuspender con suero fisiológico 0,85 % y centrifugar nuevamente.
12. Resuspender el sedimento hasta 2 ml con suero fisiológico 0,85 % y agitar para
soltar el sedimento.
13. Completar a 12 ml con suero fisiológico 0,85% y centrifugar por 3 minutos a 1.800
r.p.m. aprox.
159
14. Repetir los pasos 11 y 12 entre dos y cuatro veces hasta obtener un sobrenadante
limpio o transparente.
15. Colocar una gota de tinción, en el portaobjeto marcado con la letra “T” (fase
trofosoitica).
16. Colocar una gota del sedimento, una junto a cada gota de tinción.
17. Con un ángulo del cubreobjetos mezclar el sedimento y la tinción; luego cubrir.
18. Guardar en cámara húmeda.
19. Resuspender el contenido del tubo de sedimento con suero fisiológico 0,85% hasta
10 ml.
20. Agregar 2 ml de acetato de etilo.
21. Tapar el tubo y agitar enérgicamente por 30 segundos. Destapar lentamente.
22. Centrifugar por 3 minutos a 2.000 r.p.m.
23. Vaciar todo el sobrenadante de una sola vez, en forma rápida, invirtiendo el tubo.
24. Resuspender el sedimento en 1 ml de suero fisiológico 0,85 % y homogenizar.
25. Proceder como en el punto 14 y marcar el portaobjetos con una letra “Q” (fase
quística).
26. Proceder igual que en el punto 15 y 16.
27. Colocar en cámara húmeda hasta su lectura.
Estas preparaciones se pueden conservar hasta 24 horas en la cámara húmeda
en un lugar fresco o refrigerar entre 2 y 8°C.
Desarrolle un análisis conceptual del procedimiento realizado:
160

“Test de Graham”.
Los métodos diagnósticos dirigidos a la búsqueda de formas evolutivas de Enterobius

vermicularis son de uso rutinario en los laboratorios clínicos del país y son de gran utilidad
debido al bajo porcentaje de rendimiento que posee el examen parasitológico seriado de
deposiciones en el diagnóstico de este parásito y además porque su fundamento guarda
estrecha relación con el ciclo biológico de este nematodo.
Para su realización, se describen métodos basados principalmente en la observación

microscópica de la muestra obtenida mediante técnicas estandarizadas de recolección
diaria. El test de Graham es un método descrito en 1941 por Graham que permite adherir
huevos y /o adultos de Enterobius vermicularis los que pueden ser identificados mediante
observación microscópica. Se recomienda su uso para el diagnóstico en lactantes y niños
menores de 12 años.
Materiales para la obtención de la muestra Test de Graham:

 5 portaobjetos de 75 mm x 25 mm limpios, no necesariamente estériles.
 Cinta adhesiva transparente de 12,7 mm de ancho x 9 cm de longitud.
 Contenedor plástico o de cartón prensado para proteger los portaobjetos con las
muestras. Él o los contenedores deben tener etiquetas para registrar los datos del
paciente.
 Hoja impresa con las instrucciones para la recolección de las muestras.
161
Procedimiento
Se deben recolectar 5 muestras por las mañanas en días sucesivos sin que el paciente
lave o limpie el margen anal y perianal, de la siguiente manera, a partir del primer día:
1. Despegar la cinta adhesiva transparente del portaobjeto tomándola desde su
pestaña y sin despegar el borde de fijación quedando la superficie engomada
hacia afuera.
2. Indicar al paciente que debe colocarse en decúbito ventral, se deben separar los
glúteos
3. Se debe aplicar repetidamente la superficie engomada en la región anal y
perianal.
4. Pegar la cinta adhesiva transparente sobre el portaobjetos, procurando dejarla lo
más estirada posible en toda su extensión.
5. Colocar el portaobjeto ya utilizado en el contenedor para las muestras.
6. El paciente y/o la persona que haya colaborado en la toma de muestra debe
lavarse muy bien las manos después del procedimiento.
7. Repetir los pasos anteriores los días restantes hasta completar las 5 muestras.
Describa las precauciones que debe tener presente al manipular estas muestras
recepcionadas en el Laboratorio de Parasitología:
162

“Tinción de Cryptosporidium”.
Desarrolle las actividades que se indican en el Laboratorio Clínico, conforme a

instrucciones de su docente.
Técnica a desarrollar:
Debe realizar los pasos previos indicados para un EPSD y extender un frotis del
centrifugado:
 Teñir frotis con tinción de Ziehl – Neelsen.

 Cubrir el extendido con Fucsina ácida y calentar flameando hasta la aparición
de vapor (No hervir).
 Dejar la tinción por 10 minutos.
 Lavar la lámina con agua corriente dejando escurrir.
 Decolorar con alcohol-ácido durante un minuto aproximadamente.
 Cubrir el extendido con Azul de metileno durante 7 minutos.
 Secar a temperatura ambiente.
163

“Análisis de Casos”
II Ítem: Análisis de Casos Procedimentales
“Una Atención de Urgencia de Cuidado”
La Sra. Angélica, de 62 años de edad, de contextura delgada, jubilada del Servicio de

Salud, ex funcionaria del Laboratorio Clínico del Hospital Regional sufre una caída en el
baño de su casa, la cual le deja un hematoma importante en su cara, llegando a perder el
conocimiento por algunos momentos. Con posterioridad a ello, logra recuperarse y llama
al Servicio de Urgencias, momentos más tarde concurre la ambulancia y la traslada al
Servicio de Emergencia más cercano a su domicilio.
Durante el traslado en ambulancia la Enfermera de manera amable y cordial se presenta y
le realiza preguntas para saber su condición, la Sra. Angélica menciona que vive sola, y
que en días anteriores se había sentido muy débil, desvaneciéndose en el sillón mientras
miraba su teleserie favorita, que ha tenido cuadros febriles en las tardes y que además le
duele el pecho, relacionándolo con su hábito crónico de fumar, no dándole mayor
importancia. Al llegar al Box de Atención, la Enfermera de turno sin preguntarle el nombre,
realiza la toma de muestras de sangre venosa y arterial, y sin dar explicaciones del
procedimiento le entrega un contenedor de boca ancha para recolectar la muestra de
expectoración, el que una vez obtenido deberá enviar al Laboratorio de Urgencia.
Conjuntamente con ello, el médico indicó un examen radiológico de tórax. Transcurridas 3
horas desde su ingreso al Servicio de Urgencias, la Enfermera de turno le indica que el
Laboratorio solicitó una nueva muestra para Pruebas Hematológicas y de Coagulación, y
que junto con ello, obtendrá a continuación muestra para Hemocultivo. Realizado el
procedimiento en el orden que se menciona, le señala a la Sra. Angélica que debe orinar
en la chata para realizar el Examen de Urocultivo, solicitado por el Médico.
Recolectadas las muestras en sus contenedores específicos, se verifican los rótulos de
los envases, son envueltas con la Solicitud de Examen y enviadas por Correo Neumático
al Laboratorio de Urgencia inmediatamente una vez obtenidas. Son recepcionadas y
derivadas una vez ingresadas al Sistema Informático del Laboratorio (SIL). Las muestras
para estudio bacteriológico son numeradas con números distintos a los exámenes
urgentes, según protocolo. El examen de Urocultivo es recibido por la Técnico Carolina,
en la sección de Bacteriología y dejada en bandeja sobre el mesón, mientras termina de
recepcionar todas las muestras procedentes de pacientes hospitalizados.
Las muestras para Hemocultivo, son ingresadas al SIL e incubadas de inmediato al
Incubador Automatizado de la sección. Este da alarma acústica y visual a las 2 horas de
incubada, debiendo realizar la Técnico Carolina procedimiento según protocolo de su
competencia. Durante el proceso de Tinción de Gram, aplica ambos colorantes y
decolorante respectivamente, lo cual determinó que el Tecnólogo Médico solicitara repetir
el procedimiento.
164
Al día siguiente, el Tecnólogo Médico de la sección al realizar la lectura de Urocultivo,

observa que hay dos placas de medios sembrados sin enumerar, no logrando establecer
con claridad a que pacientes corresponden estos cultivos. Las colonias que se observan
en ambas placas son de características distintas y con desarrollo abundante. Al dirigirse a
la Técnico Carolina, que se encuentra en Sala de Siembras; observa que está hablando
por celular y con todos sus elementos de protección personal para el proceso de siembra.
De acuerdo a la información contenida en el relato, responda utilizando lenguaje

técnico adecuado en las siguientes preguntas:
1. Mencione 3 (tres) tipos de contenedores, sus características y examen

relacionado de acuerdo al relato.
Tipo de Contenedor Características del Examen Relacionado

Contenedor
2.- De acuerdo al relato: ¿Por qué las muestras para estudio bacteriológico son
enumeradas en forma separada con respecto a las otras muestras recepcionadas
de la Sra. Angélica?
__________________________________________________________________
__________________________________________________________________
165
3.- En relación al Examen de Urocultivo, de acuerdo al relato, mencione:
3.1.- ¿Qué errores procedimentales pre analíticos, de competencia del Técnico se

observan?
Mencione 2 (dos)
A.-……………………………………………………………………………………
B.-……………………………………………………………………………………
3.2.- ¿Qué consecuencias o situaciones se desprenden del error detectado por el

Tecnólogo Médico en las placas sembradas sin enumerar? Mencione 3 (tres)
A.-……………………………………………………………………………………
B.-……………………………………………………………………………………
C.-……………………………………………………………………………………
3.3.- ¿Qué información técnica entrega un Informe de un Examen de Urocultivo,

que es relevante para el Médico al confirmar el diagnóstico de Infección Urinaria?
A.-……………………………………………………………………………………
B.-……………………………………………………………………………………
C.-……………………………………………………………………………………
166
4.- En relación al Examen de Hemocultivo, responda de acuerdo al caso:
4.1.- ¿Qué procedimiento de su competencia debe realizar la Técnico Carolina de

acuerdo a protocolo, al detectar positividad de Hemocultivo en el Incubador
Automatizado?
A.-……………………………………………………………………………………
B.-……………………………………………………………………………………
4.2.- ¿Qué situación procedimental en la realización de la Tinción de Gram,

determina que el Tecnólogo Médico solicite la repetición del proceso, conforme al
relato del caso?
………………………………………………………………………………………….
5.- Con respecto a Bioseguridad, responda de acuerdo al caso:

5.1.- Mencione 2 (dos) normas de bioseguridad que no se cumplen:
A.-……………………………………………………………………………………
B.-……………………………………………………………………………………
5.2.- Mencione los EPP mínimos que debe tener la Técnico Carolina para el
procedimiento que debe realizar en la sección de bacteriología al procesar el
Hemocultivo.
A.-………………………………………………………………………………………
B.-………………………………………………………………………………………
C.-………………………………………………………………………………………
5.3.- ¿Qué elemento del proceso técnico de su competencia, le da la esterilidad a

su área de trabajo?
……………………………………………………………………………………
167
“Atención de Urgencia Integral”
Don Roberto Gómez es un adulto de 38 años, que se encuentra retenido en el Centro

Penitenciario Colina 2 por vender películas piratas. Por diferencias de opinión con su
compañero de celda se origina una riña, quien toma una estaca artesanal que guarda
entre sus pertenencias y se la entierra en el muslo.
Don Roberto es llevado rápidamente al Servicio de Urgencias del Complejo Hospitalario
San José, con la estaca enterrada en la extremidad inferior. Al llegar al hospital, es
ingresado inmediatamente al box de atención. Su condición general es de cuidado,
presenta innumerables cortes y contusiones con sangrado.
La Técnico realiza las primeras atenciones de enfermería en forma inmediata aplicando
solución antiséptica, rellenando el contenedor al observar que queda muy poco y no
alcanza para realizar el proceso. Aísla la herida con apósitos estériles vencidos.
Durante el procedimiento quirúrgico, se le indica a la Enfermera tomar muestras para
estudio microbiológico de la lesión, recolectando la muestra de secreción en un tubo
estéril con medio de transporte Cary y Blair.
La muestra es recepcionada en el Laboratorio Clínico con la Solicitud de Examen, que se
adjunta directamente con el recolector con muestra. El Auxiliar del Laboratorio traslada
rápidamente la muestra por mano a la Unidad de Microbiología, la que es sembrada
inmediatamente.
La muestra es sembrada en medios selectivos y enriquecidos determinadas para este tipo
de muestra, obteniendo un desarrollo abundante en estrías. Al día siguiente, el Tecnólogo
Médico indica resembrar la muestra y al leer la Tinción de Gram realizada, solicita revisar
el procedimiento: se observan Cocaceas Gram Negativas agrupadas en racimo.
168
PREGUNTA 1: De acuerdo a la información contenida en el relato del caso y

en relación a la atención de enfermería realizada en el Servicio de Urgencia como en
Pabellón Quirúrgico, responda:
Pregunta Respuestas
1.1 Mencione una solución

- …………………………………………
antiséptica que pueda utilizarse
en el procedimiento realizado …………………………………………
por la Técnico de Enfermería
1.2 Mencione 3 errores

- ………………………………………………
procedimentales que se deducen de
las actividades realizadas por la ……………...............................................
Técnico de Enfermería y Enfermera
- ………………………………………………
respectivamente
………………………………………………
- ………………………………………………
………………………………………………
1.3 Mencione 1 barrera protectora

- ………………………………………………
que debió utilizar la Técnico para
efectuar la atención directa del ………………………………………………
paciente en el caso descrito
1.4 ¿Qué acción debió realizar antes

- ………………………………………………
de utilizar las barreras protectoras?
………………………………………………
1.5 Mencione 2 medidas efectivas

- ………………………………………………
que permita evitar los errores
cometidos en la atención de ……………...............................................
enfermería en el Servicio de Urgencia
- ………………………………………………
con Don Roberto Gómez
……………………………………………..
169
PREGUNTA 2: En relación al material utilizado en la curación, indique:
Pregunta Respuestas
2.1 De acuerdo a la Clasificación de

- …………………………………………….
Spaulding ¿Cómo se clasifica el tipo
de material utilizado en el proceso de …………………………………………….
curación?
PREGUNTA 3: En relación a los procesos realizados en el transporte y recepción de

la muestra, responda:
Pregunta Respuestas
3.1 Identifique 1 error asociado al

transporte de la muestra, observado - …………………………………………….
en el caso de análisis. …………………………………………….
PREGUNTA 4: En relación a los procesos realizados en el Laboratorio Clínico,

responda:
4.1.- Identifique el error que detectó el

Tecnólogo Médico en el proceso de - …………………………………………….
siembra
……………………………………………...
4.2.- Mencione una consecuencia del

error técnico en el proceso de - …………………………………………….
siembra
………………………………………………
4.3.- Identifique 4 probables causas

- …………………………………………….
que generaron el error en la Tinción
de Gram realizada por la Técnico …………………………………………….
- …………………………………………….
…………………………………………….
170
- …………………………………………….
…………………………………………….
- …………………………………………….
…………………………………………….
4.4.- ¿Qué debió haber observado al

microscopio el Tecnólogo Médico, si - …………………………………………….
la tinción hubiera estado
correctamente realizada? ………………………………………………
4.5.- Mencione 2 medios sólidos

- …………………………………………….
requeridos para la siembra de la
muestra definida en el caso …………………………………………….
- …………………………………………….
…………………………………………….
Colorante Base:
4.6.- Identifique el colorante base y de
contraste utilizados por la Técnico en ……………………………………………………..
el caso descrito
Colorante de Contraste:
……………………………………………………...
4.7.- Mencione el mordiente utilizado

en el procedimiento de tinción
- ……………………………………………..
4.8.- Mencione una medida de control

analítico que debió utilizar la Técnico
en el procedimiento de Tinción de
- ……………………………………………..
Gram para validar su correcta
ejecución ………………………………………………
171
BIBLIOGRAFÍA.
http://www.scfarmclin.org/docs/higiene/part2/232.pdf
http://sisbib.unmsm.edu.pe/bvrevistas/dermatologia/v15_n2/pdf/a02.pdf
Norma General Técnica sobre Esterilización y Desinfección de Elementos

Clínicos.
Montiel Fernando, Manual de Microbiología Clínica, 2001
Jawetz, Melnick y Adelberg. Microbiologia Médica, 2001
ISP, Guía de Bioseguridad Para Laboratorios Clínicos, 2013
172

Microbiologia

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